الخلاصـــــة عاكول وآخرون 11(1 :)1-11 ،1112، (DJAS) مجلة ديالى للعلوم الزراعية 1 www.agriculmag.uodiyala.edu.iq/ في االنقسام Terbulues terrestris الحسك نباتالقلويدية ل الكحولية مستخلصاتالسمي للتأثير ال المختبريةفي الفئران لخاليا نقي العظم واختزال الورم المايتوزي 4زينة طه عبدالحافظ 3اسماء عمار حسن 2،5ابراهيم هادي محمد 1اسراء طارق عاكول ، العراق.جامعة ديالى ،كلية العلوم ،قسم علوم الحياة ،على التوالي أستاذ مساعد ومساعد بايولوجيو مدرس مساعد 1،1،1 ، جامعة بغداد، العراق.كلية التربية ابن الهيثم قسم علوم الحياة، بايولوجي، ساعدم4 dribrahahimhadi@sciences.uodiyala.edu.iq المسؤول عن النشر: 5 المستخلص الحسك لثماروالقلويدي الخام كحوليثير المستخلصين الأالية الى اختبار تت الدراسة الحهدف Terbulues terrestris المغروس بسرطان خاليا الكبد ر االبيض فأفي انقسام خاليا نقي العظم لل ((HepG2. في الخام للثمار مع فعالية المستخلص القلويدي لثمارل كحوليقورنت فعالية المستخلص ال )وزن 1-ملغم كغم160و 80و 40و 20و 10مل االنقسام الخلوي في نقي العظم عند الجرع تثبيط معا في الطور حقق المستخلص القلويدي الخام نسب توقف .وقورن كل منهما مع الكولجسين الحيوان( ملغم 160العالية ةفي الجرع المنخفضة وفي الجرع كحولياالستوائي اعلى مما حققها المستخلص ال ثيرات أيضا التأوتضمنت الدراسة ،من فعالية الكولجسين %70قد حقق كل منهما نسبة تزيد عن و ،1-كغم ملغم 102كانت قدفي الفئران و 50LDالسمية للمستخلص الخام التي شملت الجرعة المميتة الوسطية تأثير العالجي أعطت نتائج ال والقلويدي الخام على الترتيب. كحوليللمستخلصين ال 1-كغم ملغم 89و 1-كغم للمستخلص 1-ملغم كغم (1و 0.5و 0.2)عالجية هي ثالث جرع للمستخلصين الخام في الفئران باستعمال للمستخلص القلويدي وذلك عن طريق الحقن داخل 1-كغم ملغم 0.8)و 0.4و (0.2الكحولي والجرع كل يعتمد على الجرعة اختزال حجم الورم بش ،ساعة 48يوماً بواقع جرعة واحدة كل 30الخلب لمدة هي األفضل تأثيراً من خالل 1-كغم ملغم 1الجرعة العالجية للمستخلص الكحولي وكانت ،المستخدمة منها ملغم 0.8بينما كانت الجرعة العالجية للمستخلص القلويدي ،3ملم 57.20بلغت اذ تثبيطها لحجم الورم على 3ملم 3855.80و 3ملم 3508.16 تي كانتبمعامل السيطرة القياسا 3ملم 35.12 بلغتاذ 1-كغم التوالي. .الخاليا السرطانية ،النبيبات الدقيقة ،الحسكنبات : الكلمات المفتاحية المقدمة تمتلك تلك إذ للسرطان اً زاد االهتمام بالمكونات الفعالة )مركبات االيض الثانوي( بوصفها عالج قد تكون لهذه المركبات فعالية و ،في الخلية السرطانيةي تأثيراتها المركبات خصائص عالجية تختلف ف ن ألى إ 2008 آخرونو Toshioشار وأ ،تحتويهلما ايقاف نموها تؤدي الى قتل الخلية الورمية او تثبيطية وال نزال منذ القدم وذلك لقدرتها الكبيرة على تسكين األلم والشفاء، كبيراً اً اهتمامنالت األعشاب الطبية ألن طب األعشاب يكمل العالجات التقليدية ،من االدوية كبير عدد في صناعة هذا ا حتى يومنانعتمد عليه العديد وشكلهاجانبية على أثارا أدوية مأمونة على الرغم من ان بعض النباتات قد تنتج في الغالب فيوفر تتوقف قدرة و ،شراف ممارسأستخدم بعض منها اال بيو تؤخذ أن الاألدوية، لذا فمن الضروري من لذا بدأ الباحثون ،نات الكيميائية التي يحتوي عليهاالدواء العشبي على التأثير في أنظمة الجسم على المكو علىالتركيز ازدادمن النباتات في القرن الثامن عشر ومنذ ذلك الوقت وعزلها هذه المواد باستخالص . ومن هذه ( Bastians،2007و Schmidt) هاة المكونات الفعالة التي تحتوياالعشاب وتأثيراتها بدالل من أهم وأكثر المركبات هيالقلويدات و المركبات التي اثبتت فعاليتها المثبطة لتكاثر الخاليا السرطانية 61/5/2162استالم البحث: 5/2/2162 قبول النشر: http://www.agriculmag.uodiyala.edu.iq/ http://www.agriculmag.uodiyala.edu.iq/ عاكول وآخرون 11(1 :)1-11 ،1112، (DJAS) مجلة ديالى للعلوم الزراعية 1 www.agriculmag.uodiyala.edu.iq/ عدة وب الخلية تمتاز بسميتها العالية للخاليا نتيجة تأثيرها فيوالفعالة الموجودة في المستخلصات النباتية، الخاليا السرطانية للدخول في مرحلة تحفيز وأفي مرحلة تسبق االنقسام وأسام الخلوي آليات ومنها االنق :ومن أهم هذه القلويدات .2001،وآخرون Mukherjee لذلك أشارو Apoptosis الموت المبرمج vinca alkaloid vincristine وvinblastine وcolchicine و maytansineوtaxanes ، paclitaxel وصاوخص docetaxel التي تستخدم بشكل كبير بوصفها مركبات مضادة لالنقسام من خالل عملها على ديناميكية نبيبات المغزل )خيوط المغزل( التي لها دور مهم في انفصال الكروموسومات ونظراً للدور الذي تقوم به النبيبات الدقيقة في انقسام الخلية ،(Jordan 2002) االنقسام الخيطي في أثناء ضد ( Chemotherapeutic drugs)الذي جعلها الهدف المناسب لتطور ادوية العالج الكيميائي مراال خرى أالتوجه للبحث عن انواع بعني االمر غير الطبيعي للخاليا السرطانية، لذا االنقسامالنمو السريع و الحسكحتواء نبات ال ا ونظر ،ثيرها في االنقسامأالستخالصها ومعرفة ت القلويداتمنها من المركبات عدة أسماء في اللغة العربية نبات الحسك يُطلق على .موضوع الدراسةلذا تم اختيار قلويدية على مركبات وأغلب نباتات هذه لبقوليةا عائلةالضمن الحسكيصنف و ،ميروحمص األ حماض االسد والكرمة منها: ،الحدائق على جانبيتزرع لحولية العشبيةانباتات المن الحسكو .(Chakravarty، 1976)العائلة سامة في تزيين غالبا يستخدمو ،شواكأوثماره ذات ية صفراءسم وله زهور ابط 30قد يصل الساق الى وكل مناطق اوروبا بالد الشام والمغرب العربيويستوطن ،الحدائق والمتنزهات والطرق الخارجية (Boisio العراق شمالوينتشر النبات في ، لحرارة المنخفضةحساساً لدرجات ا لكونه ،1993) ،آخرونو .ويزهر في فصل الربيع تجهت أنظار الباحثين في السنوات األخيرة الى أهمية استخدام بعض األعشاب الطبية في محاولة ا ثبط عدة أنواع من الخطوط الخلوية ت ااذ وجد انه Sangumarineلعالج مرض السرطان منها مادة لخاليا لتكاثر ا االمقاومة للعقاقير المتعددة من خالل منع بلمرة النبيبات الدقيقة وتثبيطه السرطانية البشرية ، نوع نباتي 25000يقل عن يوجد في الطبيعة ما ال .(Freshney ،2001)وحثها على الموت المبرمج Taxolة ومنها استخدام ماد ،كه خواصاً فعاالة مضادة للسرطانُشخص منها أكثر من ألف نبات بإمتال أذ أُستخدمت بشكٍل فعااٍل في معالجة أنواع مختلفة ،Taxus brevifoliaالمستخلصة من نبات الطقوس ( Colchicine) كذلك استخدام مادة الكولجسينو ،من السرطانات منها سرطان الثدي والمبيض اف االنقسام يقإ وهي من المواد الشائعة االستخدام فيColchicum autumnale المستخلصة من نبات وتمنع بلمرتها وتكوين النبيبات الدقيقة ومن ( (tubulinهذه المواد مع جزيئة التيوبيولينإذ ترتبطُ الخلوي، .1995) ،وآخرون Todd)ثم منع تكوين خيوط المغزل وايقاف االنقسام الخلوي في الطور االستوائي د انه يثبط عدة أنواع من الخطوط اذ وج الحسكالمستخلص من نبات Tryptanthrinقلويد استخدم الخلوية السرطانية البشرية المقاومة للعقاقير المتعددة من خالل منع بلمرة النبيبات الدقيقة وتثبيطه لتكاثر ومن الدراسات العراقية الحديثة . 2005 خرونآو Fu حسب ما ذكرهالخاليا وحثها على الموت المبرمج السرطانية خطوط استخدام المستخلصات النباتية في تثبيط نمو التي اهتمت بهذا الجانب ونجحت في ومازالت ،(2009 ،الربيعي) Convolvulues arvensis نبات المديدخارج الجسم الحي وداخله البحوث جارية ومنها الدراسة الحالية الختبار فعالية المستخلصات النباتية سعياً ومحاولة إليجاد مواد فعالة .هذه الدراسةفي لذا اختير هذا النبات ضد مرض السرطان طرائق العملوالمواد ما اوردها حسب بالخام كحوليالتبعت طريقة في تحضير المستخلص ا :تحضير المستخلصات النباتية 1- (Harborne ،(1984، المجففة في الثمارغم من مسحوق 25المستخلص تم نقع هذا لغرض إعداد و http://www.agriculmag.uodiyala.edu.iq/ http://www.agriculmag.uodiyala.edu.iq/ عاكول وآخرون 11(1 :)1-11 ،1112، (DJAS) مجلة ديالى للعلوم الزراعية 1 www.agriculmag.uodiyala.edu.iq/ ساعة بعدها 24وزن/حجم في دورق زجاجي مغلق، وتركت لمدة 1:10مل من الكحول بنسبة 250 ، دقائق 10دورة/الدقيقة لمدة 3000الطرد المركزي وبسرعة النموذج ثم نقل بعد ذلك الى جهازرشح تركت في حاضنة للحصول على مستخلص جاف، بعد ذلك تمت و ،جمع الرائق ووزع في اطباق جافة م. جرى °4حفظ بدرجة و ،علوم من الكحول وعد هذا محلول الخزيناذابة المستخلص الناتج في حجم م حسب الطريقة بو Soxhletستخدام جهاز السكسوليت اتحضير المستخلصات القلويدية الخام للنبات ب غم من 20للحصول على مستخلص قلويدي خام إذ أخذت كمية .Cannell (1998)اوردها التيالمتبعة وأضيف إليه الهكسان إلزالة الدهون م وضع في جهاز السوكسليت، ثThimbleووضعت في الثمار م وهي درجة حرارة تبخر  60-40 ساعة في درجة حرارة 12والكلوروفيل وأجري االستخالص لمدة ولمدة ثالث ساعات، reflex في جهاز %70المذيب المستخدم، بعدها نقل المسحوق إلى كحول الميثانول دة يوم ثم تمت معاملة م تركيز المستخلص الكحولي بالحاضنة ولمبعدها توثم رشح المستخلص جزئت هذه الطبقة إلى ثم ،ولمدة نصف ساعة reflexفي جهاز %1حامض الهيدروكلوريك المستخلص ب ضافة الكلوروفورم لها في قمع الفصل مع الرج، فالطبقة العليا هي الطبقة المائية والطبقة السفلى اطبقتين ب في الحاضنة ، بعد ذلك تم التخلص من الكلوروفورم بتركه وروفورم الحاوية على القلويداتكلهي طبقة ال وُعزلت مجموعة القلويدات بوصفها ناتجاً نهائياً. المروحية ليتبخر من المركز العراقي لبحوث السرطان من التمريرة HepG2 Cell lineاستخدمت في التجارب خاليا -2 225. ،Dixon ذكرهااعتمدت طريقة الصعود والنزول التي 50LDقاتلة لنصف العدد الاحتساب الجرعة -3 وبجرع معينة ثماروالقلويدي الخام لل كحوليللمستخلصين ال لتحديد الجرعة المميتة الوسطيةو ،1980 ،(interperitonial) (IP)مل داخل الخلب 0.1بحجم 1-كغم ملغمأرة واحدة بجرعة معينة فوذلك بحقن ( تؤخذ فأرة 0) يتم تقليل الجرعة المعطاة وأن بقيت حيةx) ن هلكت )اساعة، ف 24مراقبتها لمدة وتمت أخرى وتحقن بجرعة أعلى، وهكذا تكرر العملية صعوداً ونزوالً بالجرعة حتى يتم تثبيت آخر جرعة االتية: من المعادلة 50LDقيمة حسبت، وذات مقدار ثابت هاونقصانمعطاة مع مراعاة زيادة الجرع kdxFLD  50 :نا إذ إ xF :.آخر جرعة استخدمت d .مقدار الزيادة والنقصان الثابت في الجرعة المعطاة : k ن:إذ إ 1: قيمة جدولية تحسب من الجدول الملحق o ساعة من الحقن. 24: رمز لبقاء الحيوان حياً بعد x اعة من الحقن.س 24: رمز لهالك الحيوان بعد ملغم من 1.5و 1و 0.5و 0.25مل من الماء المقطر الحاوي على 0.25حقنت الحيوانات بـ -4 من وزن 1-كغم ملغم 75و 50و 25و 10 مثليوالذي سابقاالمحضر للثمارالخام كحوليالمستخلص ال يوانات السيطرة فحقنت ، أما حIntraperitoneal injectionتم الحقن عن طريق غشاء الخلب الجسم. ملغم من مادة الكولجسين وذلك للمقارنة بين تأثير المستخلص ومادة الكولجسين، وبواقع ثالثة 0.25بـ بعد مرور ساعتين تم التضحية بالحيوانات وللسيطرة .الخام كحوليمكررات لكل جرعة من المستخلص ال اشرة للحصول على كروموسومات الخاليا المحقونة بطريقة فصل النخاع الشوكي من العنق وشرحت مب ثُبت الحيوان على جهته الظهرية وقص الجلد فوق منطقة الفخذ :الجسمية )خاليا نقي العظم( وكما يأتي http://www.agriculmag.uodiyala.edu.iq/ http://www.agriculmag.uodiyala.edu.iq/ عاكول وآخرون 11(1 :)1-11 ،1112، (DJAS) مجلة ديالى للعلوم الزراعية 4 www.agriculmag.uodiyala.edu.iq/ وأزيلت العضالت حول العظم ثم قطع ارتباطه بمفصلي الحوض والركبة ونزعت االقراص المرتبطة قايا العضالت ومسك بشكل عمودي على فوهة انبوبة بالمفصلين ثم نظف العظم خارج جسم الحيوان من ب تم و (PBS)مل تحتوي على محلول دارئ الفوسفات الفسلجي 5 ر وبوساطة محقنة نبيذة معقمة حجماختبا لخلوه من محتواه الخلوي، ثم نبذت الخاليا مركزياً زل كل النقي حتى اصبح العظم أبيضغسل العظم وأن ، وبعد أن أهمل الراشح علق الراسب بمحلول واطئ التوتر مندقائق 10دورة/دقيقة لمدة 2000بسرعة اتبعت لهذا الغرض طريقة وم  37 بدرجة حرارة دقيقة 30 ، ثم حضن المزيج لمدةالبوتاسيوم كلوريد Ge دليل االنقسام الخيطي قيس .( (2003وآخرون(MI) لخاليا نقي العظم في الفئران الحاملة للورم بحسب ، أعطيت الجرعات بموت آخر فأرة من مجموعة السيطرةتنتهي التجربة ه.وغير الحاملة ل لورم مرتين في مدة التجربة تم قياس حجم ا ثناءأفي .Janardhanan (2002) و Jone نالباحثي تم إذ ،(2002)وآخرون Mengالتي اشار اليها طريقة ال، واستخرج الحجم باالعتماد على االسبوع بعد موت الحيوان واستخراج نقي تخلصين في ايقاف انقسام خاليا نقي العظم في الفئراناختبار نشاط المس .العظم والمناقشة النتائج غم من االوراق الطرية اي 70غم من 5وزنا قدره كحوليطريقة تحضير المستخلص ال اعطت ني داكن مائل الى وكان قوام المستخلص الناتج كثيفا مع لزوجة قليلة ولون ب %7.13نسبة استخالص غم من مسحوق النبات اي بنسبة 4السواد وتم الحصول على المستخلص القلويدي الخام بوزن قدره يحتوي .لون بني مصفر يائل الى اللزوجة ذذا قوام كثيف م اتجوكان المستخلص الن 10%استخالص نت النتائج ان بي .(1998) خرونآو Okamuraكده أوهذا ما على المركبات القلويدية حسكلنبات ا 1 ادى الى ايقاف انقسام الخاليا وبنسب مختلفة كما في الجدول الحسكنبات لثمار كحوليالمستخلص ال ركيز وكان الفرق معنويا بين نسب الخاليا المتوقفة في جميع الجرع تالنسبة مع ازدياد ال تدزداوا عند 1-ملغم كغم 160و 80وبين 80و 40و 40و 20 والسيطرة ولم يكن الفرق معنويا بين الجرعتين ت الى دزدااو ،من السيطرة %38.6بلغت نسبة الخاليا المتوقفة ذ إ 1-ملغم كغم 10لجرعالمعاملة با والختبار فعالية المستخلص القلويدي في انقسام الخاليا ومقارنة ،1-ملغم كغم160عند الجرعة %71.5 عن طريق غشاء الخلب اً رأف 21اذ حقن ،1- كغم ملغم 10 لجسين ابتداء بالجرعة التي تعطيوبالك هثيرأت من الكولجسين وعدت 1-كغم ملغم10ـبينما حقنت بمكررات لكل جرعة ةمن المستخلص وبواقع ثالث دى الى ايقاف انقسام أبينت النتائج ان المستخلص القلويدي .تلت الفئران بعد ساعتين من الحقنق سيطرة ت النسبة مع ازدياد التركيز. وكان الفرق معنويا بين نسب دوازدا 1 جدولخاليا نقي العظم كما في ال الخاليا المتوقفة في جميع الجرع والسيطرة ما عدا الجرعة االخيرة التي لم يكن الفرق معنويا بينها وبين 1-كغم ملغم160و 80و 40وبين 40و 20وبين 20و 10السيطرة ولم يكن الفرق معنويا بين الجرعتين عند %77.8وازدادت الى ، 1-ملغم كغم 20من السيطرة عند الجرعة %54.2 التوقف نت نسبةوكا حقق المستخلص القلويدي نسبة توقف الخاليا في الطور االستوائي تصل .1-ملغم كغم 160الجرعة هذه النسبة عند الخام كحوليبينما حقق المستخلص ال 1-ملغم كغم 80من السيطرة عند الجرعة 72.9% ويعزى هذا االختالف الى احتمال تاثير المضاد لبعض المواد 1-ملغم كغم 160مضاعفة الجرعة الى ان وزن المستخلص الخام يمثل وزن القلويد ووزن مواد وأ ،ليها المستخلص لفعالية القلويداتالحاوية ع (Okamuraمن القلويدات بعد شهرين من الخزن %50تفقد Anitireha putminosa اخرى فمثال الحسك ان المستخلص الخام والقلويدي لنبات (2000) خرونآو Pathake بينو ،(1998، وآخرون Terbulues terrestris اما القلويد المعزول ،دا للسرطان في داخل الجسم وخارجهمضايمتلك نشاطا http://www.agriculmag.uodiyala.edu.iq/ http://www.agriculmag.uodiyala.edu.iq/ عاكول وآخرون 11(1 :)1-11 ،1112، (DJAS) مجلة ديالى للعلوم الزراعية 5 www.agriculmag.uodiyala.edu.iq/ مرحلة االنتقال بين فيعمل على ازالة البلمرة وبالتالي ايقاف االنقسام الخلوي الخيطي في الحسكمن نبات روموسومات في خط االستواء الي الذي يصاحبه عدم انتظام اصطفاف الكصي واالنفائالطور االستو . 1شكلكما موضحة بال المغزل A B خاليا متوقفة في الطور االستوائي لنقي العظم للفئران المختبرية معامل بالمستخلص الكحولي الخام توضح A.1 شكلال خاليا متوقفة في الطور االستوائي لنقي العظم للفئران المختبرية معامل B.1-مغك ملغم 80لثمار الحسك التركيز بالجرعة 50LDالجرعة المميتة النصفية حددت .1-مغملغم ك 80بالجرعة بالمستخلص القلويدي الخام لثمارالحسك التركيز للمستخلصين الخام لثمار نبات الحسك الخام والمستخلص الكحولي نسبة خاليا نقي عظم الفئران في الطور اإلستوائي عند حقنها بالمستخلص .1جدول ال كولجسين(املة بالوالنسبة المئوية من السيطرة )المعلثمار نبات الحسك القلويدي الخام الجرع 1-ملغم كغم المستخلص الكحولي الخام لثمار النبات النسبة المئوية من السيطرة المستخلص القلويدي لثمارالنبات النسبة المئوية من السيطرة نسبة الخاليا في الطور اإلستوائي نسبة الخاليا في الطور اإلستوائي السيطرة* 0.16±3.78 a 48.74 0.27±4.61 A 46.42 10* 0.11±1.46 e 38.62 0.11±1.97 F 42.27 20* 0.20±1.71 de 45.23 0.13±2.58 Ef 54.29 40* 0.50±2.21 cd 58.46 0.049±3.15 Ef 67.59 80* 0.13±2.54 cd 67.19 0.01±3.44 Cd 72.96 160 0.14±2.71 be 71.69 0.44±3.63 Bcd 77.89 متعدد الحدود.ال( بحسب اختبار دنكن P>0.05ة في العمود الواحد تعني وجود فروق معنوية عند مستوى )الحروف المختلف ( بحسب P<0.05االختالف بين معدل دليل االنقسام كال المستخلصين معنويا عند مستوى ) أن وجود العالمة )*( على الجرعة يعني اختبار دنكن متعدد الحدود. الخطأ القياسي.± من 1-كغم ملغم 102للوراق بلغت الكحوليان الجرعة المميتة النصفية للمستخلص 2 ظ من الجدولويالح من 1-كغم ملغم 89وزن الحيوان وهي اعلى من الجرعة المميتة النصفية للمستخلص القلويدي التي بلغت .وزن الحيوان http://www.agriculmag.uodiyala.edu.iq/ http://www.agriculmag.uodiyala.edu.iq/ عاكول وآخرون 11(1 :)1-11 ،1112، (DJAS) مجلة ديالى للعلوم الزراعية 6 www.agriculmag.uodiyala.edu.iq/ في الفئران الحسكنبات لثمار قلويدي الخام وال كحوليللمستخلص ال 50LDتحديد الجرعة المميتة النصفية . 2 جدولال المختبرية بطريقة الصعود والنزول نوع المستخلص مقدار الزيادة او النقصان (dفي الجرعة ) موت الحيوان او بقاؤه ساعة 24حيا بعد الجدولية Kقيمة المميتة الجرعة 50LDالنصفية 1-كغم مملغ Xoxo 0.741 102 1-كغم ملغم 25 المستخلص الكحولي 1-كغم ملغم Xoxx 0.181 98 1-كغم ملغم 25 المستخلص القلويدي ساعة من المعاملة بالمستخلص. 24( تعني بقاء الحيوان على قيد الحياة خالل Oعالمة ) ساعة بعد المعاملة بالمستخلص. 24( تعني موت الحيوان خالل Xعالمة ) فروقا 1-ملغم كغم 0.25ولي الخام بالجرعة أظهر حقن الفئران المصابة بالورم بالمستخلص الكح ، فقد بينت النتائج ان بالمقارنة مع السيطرة (P≤0.05)معنوية في حجم الورم عند مستوى احتمالية معدالت حجم الورم للمجموعة المعاملة استمرت بالزيادة الحجمية البطيئة بمرور الوقت ولكنها كانت أقل ستمر نمو الورم فيها من دون توقف حتى موت الحيوان اطرة التي من الزيادة الحجمية لمجموعة السي 713.47و 730.47و 607.83بعد الغرس كانت معدالت الحجم 30و 27و 24 ، ففي األيام5 صورةال الجدول)على التوالي 3ملم 3508.16)و 2530.84و (1234.19 لى التوالي بالمقارنة مع السيطرةع 3ملم 3). الحاملة في الفئران ا 3لحسك على حجم الورم ململثمار امختلفة من المستخلص الكحولي الخام تأثير جرع .3جدول ال لسرطان الكبد الجرعة اليوم 1-ملغم كغم 1 1-ملغم كغم 0.5 1-ملغم كغم 0.25 السيطرة الخطأ ± المعدل القياسي الخطأ ± المعدل القياسي الخطأ± المعدل القياسي الخطأ ± المعدل القياسي 0 gA1.15±222.36 dA1.18± 222.32 bA1.07±220.28 aA0.49 ±221.28 9 gA2.87±235.29 dA5.77 ± 220.23 bA5.96 ± 220.26 aA5.76± 220.34 12 fA2.84± 475.21 dB3.44 ±223.16 bC5.77 ± 220.14 bC0.64 ± 210.40 15 efA5.89± 650.88 dB5.18 ±226.14 aC17.35 ±250.19 cC 1.79± 193.26 18 edA23.10±840.54 dB20.30± 276.83 bC0.69 ±220.33 dC0.11 ±183.33 21 dA10.95±921.80 cB2.31±344.11 cC1.69 ± 193.69 eD14.44±144.48 24 Ac8.99± 1234.19 Bb2.27±607.83 dC1.73 ±163.32 fD5.76 ±120.25 27 aA17.38± 2530.84 aB17.36± 730.47 eC2.94 ±125.18 gD2.84± 80.47 30 aA14.38± 3508.16 aB17.26± 713.47 eC2.34 ±96.26 gD2.81± 57.20 .(P≤0.05)األحرف الصغيرة المختلفة ضمن العمود تدل على وجود فروق معنوية عند مستوى احتمالية .(P≤0.05)تمالية األحرف الكبيرة المختلفة ضمن الصف تدل على وجود فروق معنوية عند مستوى اح فقد أظهرت النتائج وجود فروق معنوية في حجم الورم باحتمالية 1-0.5أما بالنسبة للجرعة (P≤0.05) فقد كانت هناك زيادة بطيئة أيضاً في حجم الورم بشكل واضح بالمقارنة مع السيطرة وظهرت على 3ملم 96.26و 8125.1و163.322 وهي 30و 27و 24أعلى زيادة في معدالت الحجم في األيام االنخفاض واضحاً في كان ف 1-ملغم كغم 1 مجموعة الثالثة المعاملة بالجرعةاما ال .3 الجدولالتوالي 3ممل 57.20, ففي اليوم االخير كان معدل حجم الورم 30وحتى اليوم 21معدالت حجم الورم منذ اليوم بين المجموعة المعالجة والسيطرة. (P≤0.05)فقد أوضحت نتائج التحليل االحصائي وجود فروق معنوية بالمقارنة للمجاميع المعاملة بالجرع الثالثتشير النتائج الى وجود فروق معنوية بين معدالت حجم الورم ، وكانت أفضل جرعة التي سببت انخفاضاً ملحوظاً في معدالت الحجم (P≤0.05)مع السيطرة باحتمالية بالمقارنة مع الجرعتين األولى 3ملم 57.20حجم الورم في اليوم األخير فقد كان معدل 1-ملغم كغم 1 هي http://www.agriculmag.uodiyala.edu.iq/ http://www.agriculmag.uodiyala.edu.iq/ عاكول وآخرون 11(1 :)1-11 ،1112، (DJAS) مجلة ديالى للعلوم الزراعية 7 www.agriculmag.uodiyala.edu.iq/ . وعند 3ملم 35008.16 لى التوالي بالمقارنة مع السيطرةع 3ملم 96.26و 713.47والثانية فقد كانت املة باستخدام المستخلص الكحولي الخام وجد انه يزداد تدريجياً بالرغم من المع حجم الورم النسبيحساب الزمنية ولكن هذه الزيادة أقل بكثير مما في مجموعة السيطرة التي ازداد فيها الحجم النسبي مدةتقدم المع .4)الجدول )بشكل كبير وبصورة مستمرة حتى موت الحيوان والمجموعة لثمار الحسك في المجاميع المجّرعة بالمستخلص الكحولي (% RTV)تأثير حجم الورم النسبي . 4جدول ال )مجموعة السيطرة( DMSOعة المجرّ الجرعة اليوم 1-ملغم كغم 1 1-ملغم كغم 0.5 1-ملغم كغم 0.25 السيطرة الخطأ القياسي± المعدل الخطأ القياسي± المعدل الخطأ القياسي± المعدل الخطأ ± المعدل القياسي 0 aA0.00± 100 eA0.00± 100 aA0.00± 100 aA0.00 ±100 9 hA2.88± 105.81 eB0.00± 99.05 bB0.57± 99.90 aB2.68± 99.57 12 gA7.50±213.70 eB2.12± 100.37 bB7.50±99.95 aB1.54 ±95.08 15 fA1.15±292.71 eB0.50±101.71 bB2.88±113.58 bB1.15 ± 82.32 18 eA5.77± 378.00 dB2.30±124.50 bB1.73±100.02 bB1.15 ± 87.32 21 dA8.08± 419.55 cB5.77± 145.78 cB0.08± 87.93 cD2.88 ±65.29 24 bA2.88±555.02 bB5.77±271.16 dB3.46±74.14 dD2.30 ±54.34 27 aA8.81± 1179.83 aB16.30±328.56 eB1.73±56.82 eD7.30 ± 36.36 30 aA8.11± 1577.55 aB16.31±321.15 eB1.23±43.69 fC1.73 ±25.84 .(P≤0.05)تدل على وجود فروق معنوية عند مستوى احتمالية األحرف الصغيرة المختلفة ضمن العمود .P≤0.05)األحرف الكبيرة المختلفة ضمن الصف تدل على وجود فروق معنوية عند مستوى احتمالية في حجم (P≤0.05)أظهر نقصاناً معنوياً باحتمالية 1-كغم ملغم1ن استخدام المستخلص بجرعةإ بعد الغرس حتى نهاية التجربة أي بعد اعطاء الحيوانات 30اليوم الورم النسبي وكان هذا واضحاً في 1577.69بالمقارنة مع السيطرة 3ملم 25.84احدى عشرة جرعة حيث كان المعدل في اليوم األخير بعد الغرس. أما 27حتى يوم ءفقد أخذ المعدل يزداد ببط 1-كغم ملغم 0.25 و 0.5ن ا. أما الجرعت3ملم .على التوالي 3ملم 43.69و 321.15ي لليومين األخيرين للجرعتين فهو معدل الحجم النسب الى أن المعاملة بالمستخلص الكحولي الخام قد ادت الى 2 شكلالموضحة في الو أيضاً تشير النتائج ازدادت نسبة اذة التجربة مدطيلة (P≤0.05)تثبيط نمو الورم لكل الجرع المستخدمة بمستوى احتمالية الذي أظهرت وقد كانت أفضل جرعة للمستخلص الكحولي بمرور الوقت واستمرار المعاملة.التثبيط لليوم األخير من التجربة ثم 86.09%بنسبة بلغت 1-كغم ملغم1الورم هي أعلى نسبة تثبيط لنمو .على التوالي %75.98و 79.54اللتان اعطتا نسبة تثبيط هي 1-كغم ملغم 0.5و 0.25الجرعتان للفئران الحاملة %(GI)تأثير جرع مختلفة من المستخلص الكحولي الخام لثمار الحسك في معدل تثبيط الورم .2 شكلال لسرطان الكبد في نهاية التجربة http://www.agriculmag.uodiyala.edu.iq/ http://www.agriculmag.uodiyala.edu.iq/ عاكول وآخرون 11(1 :)1-11 ،1112، (DJAS) مجلة ديالى للعلوم الزراعية 8 www.agriculmag.uodiyala.edu.iq/ وجود فروق 1-ملغم كغم 0.2أظهر حقن الفئران الحاملة للورم بالمستخلص القلويدي الخام وبالجرعة ، وكان تأثير رم للمجموعة المعاملة مع السيطرةمعدالت حجم الو عند مقارنة (P≤0.05)معنوية باحتمالية مدةالزيادة في الحجم مع تقدم ال المعاملة في حجم الورم واضحاً منذ البدء وحتى اليوم األخير بالرغم من و 24الزمنية للمعاملة ولكنها زيادة قليلة بالمقارنة مع الزيادة الحاصلة في مجموعة السيطرة، ففي األيام على التوالي، في حين 3ملم 240.15و 243.21و 250.25بعد الغرس كانت معدالت الحجم 30و 27 زداد معدل حجم الورم فيها اعلى التوالي التي 3ملم 3855.80و 2551.70و 1250.34كانت السيطرة .3 شكلبصورة كبيرة كما موضح في ال للفئران الحملة % GIحسك في معدل تثبيط الورم لثمار اللقلويدي الخام تأثير جرع مختلفة من المستخلص ا .3شكل ال لسرطان الكبد في نهاية التجربة أدت الى تقليل حجم الورم 1-ملغم كغم 0.4 ن المعاملة بالجرعةالى إيل االحصائي نتائج التحلوتشير 156.23عة المعاملة في المجمو 30و 27و 24، وكان معدل حجم الورم لأليام (P≤0.05)باحتمالية 0.8على التوالي بالمقارنة مع السيطرة. أما الحقن بالمستخلص القلويدي بجرعة 3ملم 91.24و 125.27و ة المعاملة نقصاناً معنوياً وباحتمالية مدان حجم الورم في الفئران طيلة فقد أدى الى نقص 1-ملغم كغم (P≤0.05) 51.87و 92.89كانت معدالت حجم الورم 30و 27و 24 المقارنة مع السيطرة، ففي األيامب للمجاميع المعاملة اما االختالف بين معدالت حجم الورم ،على التوالي بالمقارنة مع السيطرة 3ملم 35.12و لكل األيام بالمقارنة مع السيطرة، (P≤0.05)فقد بينت النتائج وجود فروق معنوية باحتمالية بالجرع الثالث فقد كان الحجم 1-ملغم كغم 0.8خاصة هو بتأثيراً في معدل حجم الورم لأليام األخيرة وكانت الجرعة األكثر على 3ملم 91.24و 240.15في حين كان المعدل للجرعتين الثانية والثالثة 3ملم 35.12 رفي اليوم األخي ورم أظهر حقن الفئران الحاملة للو. 3ملم 3855.80التوالي، مقارنة بالسيطرة التي أعطت معدل الزمنية للمعاملة المدةيزداد تدريجياً مع تقدم أن حجم الورم النسبيف أيضاً بالمستخلص القلويدي الخام . ان استخدام المستخلص القلويدي بالجرعتين )3 شكلال)ولكنها زيادة أقل بكثير مما في مجموعة السيطرة بعد 27لكنها زيادة بطيئة حتى اليوم أدى الى زيادة معدل حجم الورم النسبي و 1-كغم ملغم 0.4و 0.25 الغرس، فقد انخفض معدله انخفاضاً واضحاً حتى نهاية التجربة أي بعد اعطاء عشر جرع، فقد كان المعدل التي استمر 1234.73على التوالي بالمقارنة مع السيطرة 41.34و 109.00لليوم األخير من التجربة هو فقد ادى الى نمو الورم ببطء 1-كغم ملغم 0.8أما الجرعة الحيوان. دون توقف حتى موتمن نمو الورم فيها يوما من الغرس أي بعد إعطاء عشر جرع فقد قل حجم الورم النسبي زيادة واضحة 27في البداية ولكن بعد ولكنها أقل بكثير من الزيادة الحاصلة في مجموعة السيطرة، وقد بينت نتائج التحليل 15.88كان المعدل فقد بين الجرع (P≤0.05)حصائي لمقارنة معدالت الحجم النسبي للورم وجود فروق معنوية باحتمالية اال إذ، GI%الورم تم بحساب نسبة التثبيط ان تقدير تثبيط نمو 6الجدولوبين الثالثة وبالمقارنة مع السيطرة. فقد كانت ، الجرع المستخدمة بمرور الوقت لكل (P≤0.05)الورم معنوياً باحتمالية تزداد نسبة تثبيط نمو 87.06بنسبة تثبيط مقدارها 1-كغم ملغم 0.4و 0.8القيمة األعلى لتثبيط نمو الورم بعد المعاملة بالجرعتين http://www.agriculmag.uodiyala.edu.iq/ http://www.agriculmag.uodiyala.edu.iq/ عاكول وآخرون 11(1 :)1-11 ،1112، (DJAS) مجلة ديالى للعلوم الزراعية 2 www.agriculmag.uodiyala.edu.iq/ فقد كانت النسبة المئوية 1-كغم ملغم 0.2على التوالي لليوم األخير من التجربة، أما الجرعة 83.91%و .(7الجدول ) 71.91 %لتثبيطها هي للفئران الحاملة لسرطان 3حسك على حجم الورم ململثمار نبات التأثير جرع مختلفة من المستخلص القلويدي .6جدول ال الكبد الجرعة اليوم 1-ملغم كغم 0.8 1-ملغم كغم 0.4 1-ملغم كغم 0.2 السيطرة الخطأ القياسي± المعدل الخطأ القياسي± المعدل الخطأ القياسي± المعدل الخطأ ± المعدل القياسي 0 gA1.44± 220.88 bA2.28± 220.06 aA5.81± 220.38 aA2.37 ±221.12 9 gA4.33± 237.65 bB5.79± 220.12 aA5.81± 220.16 aB1.03± 222.33 12 fA31.87±477.86 bA22.82± 210.11 aB5.81± 210.02 bB0.06± 211.34 15 eA1.00± 682.15 aB2.54± 295.23 abB5.84±191.13 cC0.01± 184.33 18 dA0.65± 963.81 aB5.95±291.93 bC8.52± 186.22 dD 2.30±144.15 21 dA11.41±981.53 bB5.75± 250.96 cC2.32± 174.82 eD3.18 ±114.45 24 cA28.86± 1250.34 Bb28.81±250.25 dcC2.78± 156.23 fC1.86 ± 92.89 27 bA28.92± 2550.70 Bb0.05±243.21 dC0.03±125.27 f D0.92± 51.87 30 bA28.92± 3855.80 Bb0.05±240.15 eC17.35±91.24 f D0.92± 35.12 .(P≤0.05)األحرف الصغيرة المختلفة ضمن العمود تدل على وجود فروق معنوية عند مستوى احتمالية .(P≤0.05) األحرف الكبيرة المختلفة ضمن الصف تدل على وجود فروق معنوية عند مستوى احتمالية لثمار النبات في المجاميع المجّرعة بالمستخلص القلويدي الخام (% RTV)تأثير حجم الورم النسبي .7جدولال )مجموعة السيطرة( DMSOوالمجموعة المجّرعة الجرعة اليوم 1-ملغم كغم 0.8 1-ملغم كغم 0.4 1-ملغم كغم 0.2 السيطرة الخطأ القياسي± المعدل الخطأ القياسي± المعدل الخطأ القياسي± المعدل الخطأ ± المعدل القياسي 0 gA1.15± 100 cA0.00± 100 aA0.00± 100 aA0.00 ±100 9 gA4.04± 107.59 cAB0.00±99.96 aB2.30± 99.96 aB1.45±100.00 12 fA5.77±222.40 cB7.44± 95.44 aB1.15±95.16 aB1.15 ±97.31 15 eA4.61±280.00 aC5.00±134.09 bC2.88±86.60 bC1.73 ± 83.38 18 dA5.77±436.00 aC2.30±29.85 bC1.15±84.38 cD2.88 ±65.29 21 dA2.30±444.39 bC1.73± 113.47 cC2.88± 79.21 dD0.75 ±51.77 24 cA2.30±566.09 bC1.73±113.65 dC2.30±70.79 eD1.15 ± 42.47 27 bA2.88± 1155.34 bC1.15±110.45 eC0.5±56.76 fD1.73 ±23.45 30 bA2.7 8± 1734 bC1.16±109.00 eC0.4±41.34 fD1.53 ±15.88 .(P≤0.05)األحرف الصغيرة المختلفة ضمن العمود تدل على وجود فروق معنوية عند مستوى احتمالية .P≤0.05)األحرف الكبيرة المختلفة ضمن الصف تدل على وجود فروق معنوية عند مستوى احتمالية http://www.agriculmag.uodiyala.edu.iq/ http://www.agriculmag.uodiyala.edu.iq/ عاكول وآخرون 11(1 :)1-11 ،1112، (DJAS) مجلة ديالى للعلوم الزراعية 11 www.agriculmag.uodiyala.edu.iq/ A B فارة معالجة بالمستخلص ( معكبد الفاري لمجموعة السيطرة )غيرمعالجة( فأرة حاملة لسرطان ال(Aتمثل .4 شكلال كحوليمعاملة بالمستخلص ال سرطان الكبد الفاري مع فارة )غيرمعاملة(نة فارة حاملة لمقار ((B القلويدي المصادر Convolvulus. تأثير المستخلص المائي والقلويدي الخام للمديد 2009، إبراهيم هادي محمد. الربيعي arvensis L. لية العلوم في تثبيط الخاليا السرطانية داخل وخارج الجسم، اطروحة دكتوراه، ك للبنات، جامعة بغداد. Allen, J., C. Shuler and S. A. Latt. 1977. A simplified Technique for In vivo analysis of SCE using 5- Brdu tablets. Cyto. Cell. Genet., 18: 231-234. Boisio, M. L., M. Esposito and F. Merlo. 1993. Separation and identifying features of the cardiac aglycones and glycosides of Nerium oleander L. flowers by thin-layer chromatography. Miner. Mid., 84: 627-632. Cannell, R. J. P. 1998. Natural Product Isolation. Humana Press, New Jersey, USA. Chakravarty, H., L. 1976. Plant Wealth of Iraq (A dictionary of economic plants). Botany Directorate, Ministry of Agriculture and Agrarian Reform, Baghdad, Iraq. Dixon, W. J. 1980. Efficient analysis of experimental observations. Ann. Rev. Pharmacol. Toxicol., 20: 441-62. Freshney, R. I. 2001. Application of cell culture to toxicology. Cell Biology and Toxicology, 17: 213-230. Zhang, Fu. L. S. and N. Li and M. Ando. 2005. Three new triterpenes from Nerium oleander and biological activity of the isolated compounds. J. Nat. Prod., 68: 198-206. Ge, N., L. Ye, R. Zheng, L. Y. Sun and Z. Tang. 2003. Prevention of hepatocellular carcinoma in mice by IL-2 137-1 genes co-transfected liver cancer cell vaccines. World J. Gastroenterol, 9(10): 2182-2185. http://www.agriculmag.uodiyala.edu.iq/ http://www.agriculmag.uodiyala.edu.iq/ عاكول وآخرون 11(1 :)1-11 ،1112، (DJAS) مجلة ديالى للعلوم الزراعية 11 www.agriculmag.uodiyala.edu.iq/ Gupta, S., D. Yi. Zhang and J. Shao. 2004. Anticancer activities of Oldenlandia diffusa. J. Herbal Pharmacotherapy, 4: 21-33. Harborne, J. B. 1984. Phytochemical Methods. (2nd ed.), Chapman & Hall, London, P.5. Jone, S. and K. K. Janardhanan. 2000. Antioxidant and Antitumor activity of Ganoderma lucidum (Curtifr.) P. Karstreishi (Apyllophoromycetideae) from south India. Int. J. Med. Mushr., 2: 195-200. Jordan, M. A. 2002. Mechanism of action of anti tumor drugs that interact with microtubules and tubulin. Curr. Med. Chem. Anti-Canc. Agents, 2: 1-17. Lopus, M. and D. Panda. 2006. The enzophenanthridine alkaloid sanguinarine perturbs microtubule assembly dynamic through tubulin bindin. A possible mechanism for its antiproliferative activity. J. FEBS. 273(10): 2139-50. Meng, X. L., N. H. Riordan, J. J. Casciari, Y. Zhu, J. Zhong, M. J. González, J. R. Miranda-Massari, and H. D. Riordan. 2002. Effect of a high molecular Mass Convolvulus arvensis extract on tumor growth and angiogenesis. PR Health Sci. J. 21: 323-328. Mukherjee, A., B. Sourar, S. Nabainta, and R. A. Anil. 2001. Advance in canser therapy with plant based natural product. Curent Medicinal Chem., 8(12): 1467-1486. Okamura, H., S. Kashiwamura, and K. Nakanishi. 1998. Regulation of interferon- production by IL-12 and IL-18. Curr. Opin. Immunol., 10: 259- 264. Pathake, S., A. S. Multani, S. Narayan, V. Kumar and R. A. Newman. 2000. Anvirzel ™, an extract of Nerium oleander, induces cell death in human but not murine cancer cells. Anticancer drags, 11(6): 455-463. Todd, F. G., F. R. Stermitz, P. Schultheis, A. P. Knight, and T. Dargatz. 1995. Tropane alkaloids and toxicity of Convolvulus arvensis. phytochem., 39(2): 301-3. Toshio, N., K. Akiko, M. Yuasa, and O. David. 2008. Mechanism of growth of inhibitory effect of blume. Biochem. 772(5): 1183-1189. Schmidt, M. and H. Bastians. 2007. Mitotic drug target and development of novel anti-mitotic anticancer drugs. Drug Resistance Updates. 10: 162-181. http://www.agriculmag.uodiyala.edu.iq/ http://www.agriculmag.uodiyala.edu.iq/ عاكول وآخرون 11(1 :)1-11 ،1112، (DJAS) مجلة ديالى للعلوم الزراعية 11 www.agriculmag.uodiyala.edu.iq/ TOXIC EFFECT OF ALCOHOLIC AND ALKALINE EXTRACT OF Terbulues terrestris PLANT ON MITOCHONDIRAL DIVISIONS OF BONE MARROW CELLS AND TUMOR SIZE REDUCTION IN LABORATORY MICE Israa T. AAkool 1 Ibrahim H. Muhammed2,5 Asma A. Hasan3 Zina Abdul Hafaz4 1,2,3 Dept. of Biology, College of Science, Univ. of Diyala; 4Dept. of Biology, College of Education, Univ. of Baghdad, Iraq. 5 Corresponding author: dribrahahimhadi@ sciences uodiyala.edu.iq ABSTRACT This study was aimed to evaluate the effect of Terbulues terrestris fruit extraction on mitotic index and tumor HepG2 cell line (Hepatic cell line) inhibition in mice in different doses of alcoholic and alkaloids extraction (10, 20, 40, 80, 160) mg kg1- compared with colchicines methods by used injection methods. The results showed that alcohol and alkaloids relatively that a significant inhibition in mitotic index was recorded at dose (160 mg ml-1) which was the best in alkaloids extraction and in alcoholic extraction, increased 70% with colchicines and acute toxic effect in mice in respect to Lethal dose LD50 in mice (102 mg kg-1 and 98 mg kg-1), respectively in alcoholic and alkaloids extraction. The results of dose in alcoholic extraction (0.2, 0.4, 0.8 mg ml-1) which was injection intra peritoneum in 30 day, one dose every 48 hours in mice reduced the tumor 57.20 m3 in 1 mg ml-1 dose, but the alkaloids reduced the tumor 35.12 m3 in 0.8 mg ml1- compared with control 3508.16 m3 and 3855.80 m3, respectively. However the chronic toxicity of water extract at three different concentration and alkaloids reduced the tumor depend the time and concentration. Key words: Terbulues terrestris plant, Microtubules, Tumor. http://www.agriculmag.uodiyala.edu.iq/ http://www.agriculmag.uodiyala.edu.iq/