خلف وناجي 9102، 10-92(: 0)01ديالى للعلوم الزراعية، مجلة
92 http://www.agriculmag.uodiyala.edu.iq/
الذرة من أصناففي خمسة لعاب االنسان أميليز -الظروف المثلى الستخالص مثبطات الفادراسة
الصفراء
إيثار زكي ناجي انوار احمد خلف
anwar.ahmad235@yahoo.com etze-957@yhoo.com
العراق - جامعة تكريت–كلية الزراعة –قسم علوم االغذية
المستخلص
Monargو Vetoشملت الذرة الصفراءبعض أصناف أميليز من -استخلصت مثبطات االلفا
Rohnaldinia وDaredh و May-70موالر دارئ خالت الصوديوم برقم هيدروجيني 0.2 باستعمال
طة الطريقة ابوس أميليز لعاب االنسانصناف الذرة الصفراء تجاه ا علجمي نسب التثبيطوتم تحديد 6
في نسب Rohnaldinioتميز الصنف إذ تباين هذه النسب بإختالف الصنف أظهرت النتائج .المستخدمة
والبالغة Vetoو Monargبالمقارنة مع الصنفين %40.26بلغت إذ التثبيط تجاه أميليز اللعاب
تجاه قليلة فعالية Daredhو May-70فانالصنحين أظهر في ،تابععلى الت 16.47%و %23.60
، االميليز من أصناف الذرة الصفراء-تحديد النسبة المثالية الستخالص مثبطات االلفااما ، نفسهاالميليز
كانت الفعالية النوعيةقد اظهرت ان ف ،(حجم:وزن) 10:1و 5:1و 2.5:1نسب مختلفة اشتملت على وعند
نوعية الفعالية بلغت الف 5:1بنسبة خلط Rohnaldinia من الصنف في اقصاها عند استخالص المثبط
لمثبطات االمثل نتائج تحديد وقت االستخالص وبينت .مقارنة ببقية االصناف ،بروتين ¹-وحدة ملغم6.32
الفعالية النوعية ، ان ساعة 2.0و 1.5و1.0أميليز من أصناف الذرة الصفراء وبوقت استخالص -االلفا
وحدة 5.66 بلغتساعة 1.5 بوقتRohnaldinia من الصنف كانت في اقصاها عند استخالص المثبط
قابلية في وجود تأثير للرقم الهيدروجيني أيضا اظهرت النتائجو. مقارنة ببقية االصناف ،بروتين ¹-ملغم
مع اميليز Rohnaldinia من الصنفالرقم االمثل الرتباط المثبط وكان تداخل المثبط مع اميليزاللعاب
من بين ارتباط المثبط و، 7عند رقم هيدروجيني Monargفي حين كان لمثبط الصنف ، 6اللعاب بحدود
عند رقم هيدروجيني Daredhمن الصنف المثبطو 5 هيدروجينيباالميليز نفسه عند رقم Veto الصنف
تم تحديد درجة و .6باالميليزعند رقم هيدروجيني May-70 من الصنف ، وأخيرا جاء ارتباط المثبط 8
وتبين حصول زيادة واضحة م˚ 80 – 30بين الحرارة المثلى لفعالية المثبط بدرجات حرارية تراوحت
م الى نسبة ˚80م حتى وصلت بدرجة ˚ 80إلى م˚ 60من في فعالية التثبيط بارتفاع درجات الحرارة
.باميليز اللعابRohnaldinia عند ارتباط المثبط من الصنف %40.66تثبيط
.، اصناف الذرة الصفراء، اميليز لعاب االنساناميليز-مثبطات الفا الكلمات المفتاحية:
المقدمة
أحد أنواع الحبوب المهمة، وتزرع في مساحات واسعة في دول .Zea mays Lالذرة الصفراء
(Vivek العالم النامية، وذلك العتماد الماليين من الناس عليها واستعمالها في الصناعات المختلفة
وعلى المستوى العالمي تعد الذرة الصفراء ثالث محصول من بعد الحنطة والرز ،(2008، واَخرون
المساحة المزروعة كانت و، 2012مليون طن عام 960ويبلغ متوسط االنتاج العالمي من هذا المحصول
( ويعد هذا 2009، واَخرون John-Roney) 0-هكتار كغم 2700متوسط انتاج بو هكتارمليون 113
المحصول من الناحية االقتصادية من أهم المحاصيل المزروعة في بعض مناطق العالم، ففي الواليات
يعد أعلى المحاصيل من ناحية القيمة النقدية والمتحدة األمريكية يشغل هذا المحصول اكبر مساحة زراعية
(. 2006ساحة المزروعة )يوسف، من الم % 25وتصل نسبة االراضي المزروعة به سنوياَ الى أكثر من
الذرة الصفراء للغذاء هي األكثر في العالم، ولقد حلت الذرة الصفراء حبوب والشك في ان استعماالت
72/9/7102حث: الباستالم
02/5/7102النشر: قبول
http://www.agriculmag.uodiyala.edu.iq/
http://www.agriculmag.uodiyala.edu.iq/
mailto:anwar.ahmad235@yahoo.com
mailto:anwar.ahmad235@yahoo.com
mailto:.957@yhoo
خلف وناجي 9102، 10-92(: 0)01ديالى للعلوم الزراعية، مجلة
01 http://www.agriculmag.uodiyala.edu.iq/
محل الدخن والذرة البيضاء في الكثير من المناطق لغرض الغذاء وذلك لسهولة زراعة المحصول وخزنة
إذ يقدر محتواها وعلى أساس الوزن الجاف من ،احبوبهولكثرة االغذية التي يمكن تصنيعها من طحين
، فضال عن 4%والرماد 2.0%واأللياف 4.9%والدهن 9.8%والبروتين 63.6%الكربوهيدرات
وعلى Cوفيتامين Perodexinوالبيريدوكسين احتوائها على بعض الفيتامينات مثل الرايبوفالفين
.(2009 ،واَخرون Kaur ؛ 1989، واَخرون (Bressanil (Carotenoids) الكاروتينويدات
ان محتوى الحبوب من العناصر الغذائية جعلها عرضة لالصابة بالعديد من الحشرات والطفليات
مقاومة هذه الحشرات والطفيليات السيما الثانوي للنباتات لذا تخزن مواد لها دور مهم في ونتيجة االيض
والتي قد تصل الى المعتمدة منها على المواد النشوية مصدراً للطاقه الرتفاع نسبة النشا في الحبوب،
تقريبا عن طريق تثبيط اميليز هذه الحشرات التي تعتمد عليه في تحليل النشا وتحويله الى سكريات %83
Francoالنجاز الفعاليات الحيوية ) ا واالفاده منها في تحرير الطاقهبسيطة يمكنها امتصاصها وتمثيله
. ( 2005،واَخرون
اميليز والتي تعد من مركبات األيض -تحتوي الحبوب ومنها الذرة الصفراء على مثبطات االلفا
يصنعها النبات Cystineبالـ هي عبارة عن بروتينات غنيةو( 2007 ،واَخرون Fontaniniالثانوي )
وقد اظهرت معظم هذه البروتينات فعالية في حماية النبات من االصابة ،بصورة طبيـعية الغراض دفاعية
المثبطات البروتينية بصورة تنتشر .(2008، واَخرون Pelegriniبالعديد من الحشرات والممرضات )
من البروتينات الكلية % 1-10( وتمثل تقريباJakowski، 2010واسعة في المملكة النباتية )
(Buonocore 1977 ،واَخرون)، لكنها لتعدد مجاالت االفادة منهانالت هذه المثبطات بعض االهتمام و ،
( Beckord ,1946و Sandstedt) 1946تعرف على وجودها في الحبوب عام العدت في بداية
امتالكها القدرة على تثبيط ؛ بسبب (1999 ،واَخرون Burgos-Hernàndesكمكونات الغذائية )
بعد ان الحظ بعض 1980ولكن في عام ،(Friedman) ،1987 اللبائن ومنها اميليز االنسان اميليزات
باحثي مجموعة مايو الطبية للبحوث الدوائية ان لهذه المثبطات القدرة على خفض نسبة السكر في الدم عند
هدفت هذه لذا ،المرضى المصابين بالسكري واالشخاص االصحاء بعد تناولهم وجبة غنية بالمواد النشوية
الظروف المثلى دراسةو أميليز لعاب االنسان-الفاالكشف عن قابلية هذه المثبطات في تثبيط الدراسة الى
.مثبطاتهذه الالستخالص
بحثالمواد وطرائق ال
مصادر الذرة الصفراء
بعض الفالحين في قبل من والمزروعة أصناف من الذرة الصفراء المعتمدة خمسة تم الحصول على
Monargو Vetoوهيصالح الدين \من الهيئة العامة للبحوث الزراعيةمنطقة الحويجة
Rohnaldinio وDaredh وMay-70 نظفت الحبوب يدويا من ،2011من ناتج الموسم الزراعي
المواد الغريبة وحبوب المحاصيل األخرى واألتربة.
اميليز-استخالص مثبطات االلفا
طحنها وذلك بعدالذرة الصفراء جميع اصناف ـأميليز من حبوب -استخلصت مثبطات األلفا
حسب الطريقة التي بباستخدام المطحنة الكهربائية للحصول على طحين ناعم ومتجانس
موالر ورقم 0.2 الصوديوم خالتاستخلصت باستعمال دارئ ثم ، (2005 واخرون، (Haidariاعتمدها
دقيقة في درجة 60باستعمال التحريك المغناطيسي لمدة و)وزن:حجم( 10:1وبنسبة خلط 6هيدروجيني
اخذ ثم م، ˚4دقيقة ودرجة حرارة 20لمدة 30000xgنبذ الخليط مركزيا بسرعة بعدها حرارة الغرفة،
الرائق الحاوي على المثبط وهو المستخلص الخام لتقدير فعالية التثبيط.
http://www.agriculmag.uodiyala.edu.iq/
http://www.agriculmag.uodiyala.edu.iq/
خلف وناجي 9102، 10-92(: 0)01ديالى للعلوم الزراعية، مجلة
00 http://www.agriculmag.uodiyala.edu.iq/
تقدير الفعالية التثبيطية
( واعتمادا 1972) BernaedوWhitaker قدرت الفعالية االنزيمية على وفق الطريقة التي وصفها
مليلتر 0.1على السكريات المختزلة المتحررة نتيجة التحلل المائي للنشا بفعل االنزيم عن طريق حضن
مليلتر من محلول المادة األساس 0.9، مع االنسان اميليز لعابعليه من المتحصل أميليز-لفااالمن محلول
مليلتر من كاشف 1.0، بعدها أوقف التفاعل بإضافة م˚ 37دقيقة بدرجة حرارة 20نشا( لمدة %2)
DNSA دقائق ثم بردت بصورة مباشرة واضيف اليها 5وسخنت المحتويات في حمام مائي مغلي لمدة
بالمقارنة ،انانوميتر 540الطول الموجي عند مل من الماء المقطر تالها المزج وقراءة االمتصاصية 10
لمنع DNSAينة الكفء المحضرة بالطريقة نفسها ما عدا إضافة محلول االنزيم بعد إضافة كاشف مع الع
اما الفعالية التثبيطية للمستخلص الخام فقد قدرت حسب الطريقة الموضحة من قبل ، حدوث التفاعل
Kokiladevi) عن طريق تقدير الفعالية االنزيمية المتبقية بعد حضن االنزيم مع ( وذلك 1972 ،واخرون
م تقدير ، ثدقيقة التمام تفاعل التثبيط 30ولمدة م˚ 37بدرجة حرارة 1:1مستخلصات المثبطات وبنسبة
.فعالية االنزيم المتبقية
المثبطفعالية االميليز بدون مثبط ــ فعالية االميليز مع
100× ـــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــ نسبة التثبيط % =
فعالية االميليز بدون مثبط
ت حسب، ثم Bradford ((1977من قبل حسب الطريقة المقترحة بفي محلول المثبط الخام البروتينقدر
حسببوالتي تعبر عن وحدات الفعالية لكل ملغم بروتين Specific activity الفعالية النوعية للمثبط
(:Whitaker ،1972و Bernaed) المعادلة االتية
(¹-مل الفعالية )وحدة
ــــــــــــــــــــــــــــبروتين( = ــــــــــــــ ¹-ملغم فعالية النوعية )وحدةال
مليلتر( تركيز البروتين )ملغم
تعيين الظروف المثلى الستخالص المثبط
المثلى االستخالص ةتحديد نسبـــ
ف الذرة الصفراء وباعتماد نسب استخالص عدة اصناأميليز من -األلفا اتمثبط تاستخلص
)وزن:حجم (، ثم قدرت الفعالية التثبيطية لتحديد نسب االستخالص 10:1و 5:1و 2.5:1اشتملت على
.(1972، واَخرون Kokiladeviحسب الطريقة التي اعتمدها ) ب، االميليز اتاألمثل لمثبط
تحديد مدة االستخالص المثلى ــ
ف الذرة الصفراء وبالنسبة المثلى المنتخبة في مدد زمنية اصناأميليزمن -األلفا اتمثبط تاستخلص
بعدها قدرت الفعالية التثبيطية لتحديد الزمن االمثل الستخالص ، ساعة 2و 1.5و 1مختلفة اشتملت على
.(1972) واَخرون Kokiladeviحسب الطريقة التي اعتمدها ب اتالمثبط
تعيين الظروف المثلى لفعالية المثبط
تحديد الرقم الهيدروجيني االمثل ــ
( في تعيين الرقم الهيدروجيني األمثل 2003b ،واَخرون Figueiraاعتمدت الطريقة التي اقترحها
لىإ 9و 4بين بارقام هيدروجينية تراوحت مليلتر من محاليل الدوارئ 1.0وذلك باضافة لفعالية المثبط
في درجة العيناتبعدها حضنت جميع ،مليلتر من محلول االنزيم 0.5محلول المثبط و مليلتر من 0.5
.المثبطاتلفعالية التثبيطية لتحديد الرقم االمثل قدرت الفعاليةثم ،دقيقة 30ولمدة م˚ 30حرارة
http://www.agriculmag.uodiyala.edu.iq/
http://www.agriculmag.uodiyala.edu.iq/
خلف وناجي 9102، 10-92(: 0)01ديالى للعلوم الزراعية، مجلة
09 http://www.agriculmag.uodiyala.edu.iq/
ـــ تحديد درجة الحرارة المثلى
حسب الطريقة التي اعتمدها ب ، قدرت الفعالية التثبيطيةلفعالية المثبطة الحرارة المثلى لتحديد درج
Kokiladevi حجم:حجم( مع 1:1بعد حضن مثبط االميليز وبنسب متساوية ) (1972) واَخرون( )
دقيقة ثم رسمت العالقة 30ولمدة م˚ 30- 80في مدى من درجات الحرارة تراوحت بين اللعاب أميليز
.بين درجات الحرارة والفعالية التثبيطية
النتائج والمناقشة
أميليز في بعض أصناف الذرة الصفراء-التحري عن مثبطات األلفا
-تجاه ألفا صناف مختلفة من الذرة الصفراء اختيرت لهذه الدراسةنسب التثبيط أل 1يوضح الشكل
Rohnaldinioتميز الصنف فقد ،تباين هذه النسب بإختالف الصنفيظهر فيه و ،االنسان أميليز لعاب
والبالغة Veto و Monargبالمقارنة مع الصنفين % 40.26قدرهابنسبة تثبيط في تجاه أميليز اللعاب
دنى نسبة تثبيطأDaredh و May-70 انظهر الصنفأفي حين ، تابععلى الت%16.47و %23.60
.نفسه تجاه االميليز تابععلى الت 4.04%و 5.14%بلغت
االنسان لعاب أميليز-الفا أميليز المستخلصة من أصناف الذرة الصفراء تجاه-نسب التثبيط لمثبطات الفا .1الشكل
أشار فقد ،وقد شخصها العديد من الباحثين اً امراً طبيعييعد االختالف في فعالية التثبيط بين االصناف ن إ
،واَخرون Barley(Jarrett عدد من الباحثين الى وجود إختالفات في فعالية التثبيط بين أنواع الشعير
اختالفاً Supriya (1993a )و Mulimaniووجد (. 1997،واَخرون Taufel) Rye( والشيلم1997
لعاب تثبيط اميليزمن الحبوب في عندما تَحريا عن فعالية مستخلصات اربعة انواعفي فعالية التثبيط
.االنسان
تحديد الظروف المثلى الستخالص مثبطات االميليز
اميليز-لمثبطات االلفانسبة االستخالص المثلى ــــ
من ان فعالية التثبيط كانت في اقصاها عند استخالص المثبط 2 اظهرت النتائج المبينة في الشكل
وحدة مليلتر 3.19، حيث بلغت فعالية التثبيط 2.5:1بنسبة خلط Rohnaldiniaصنف الذرة الصفراء
الفعالية في حين بلغت ،مقارنة مع بقية االصنافبروتين ¹-وحدة ملغم 4.09 وبفعالية نوعية مقدارها
عند ¹-وحدة ملغم 0.74وبلغت ،Vetoمن الصنف عند استخالص المثبط ¹-ملغم وحدة 3.24النوعية
وبلغت للمثبط المستخلص من الصنفين ،نسبة نفسهاوبال Daredh من الصنف استخالص المثبط
http://www.agriculmag.uodiyala.edu.iq/
http://www.agriculmag.uodiyala.edu.iq/
خلف وناجي 9102، 10-92(: 0)01ديالى للعلوم الزراعية، مجلة
00 http://www.agriculmag.uodiyala.edu.iq/
Monarg وMay-703.22 عدد من توقد أشار ،التتابععلى ¹-ملغم وحدة 2.16 و وحدة ملغم
الدراسات الى ان نسبة االستخالص تتباين بتباين نوع المثبط ونوع الدارئ المستعمل وكفاءته في
Blanco-Labra االستخالص ولكن بصورة عامة فان نسبة االستخالص لهذه الدراسة تتفق مع ماذكره
عند 2.5:1 اشاروا الى ان نسبة التثبيط االمثل كانت عند نسبة استخالصاذ (1980) واخرون
. ثبطات االميليز من الذرة الصفراءاستخالصهم لم
المستخلصة من اللعاب اميليز-لفاافي فعالية التثبيط والفعالية النوعية لمثبطات 2.5:1 تأثير نسبة االستخالص . 2شكل
قيد الدراسة ف الذرة الصفراءاصنا
من صنف الذرة ان فعالية التثبيط كانت في اقصاها عند استخالص المثبط 3أظهرت النتائج في الشكل و
وحدة 4.51بلغت فعالية التثبيط ومع بقية االصناف بالمقارنة ، 5:1بنسبة خلط Rohnaldiniaالصفراء
وحدة 4.12الفعالية النوعية في حين كانت بروتين، ¹-ملغم وحدة6.32 مليلتر وبفعالية نوعية مقدارها
عند استخالص ¹-وحدة ملغم2.17 ووصلت الى ، Monargمن الصنف عند استخالص المثبط ملغم
Vetoو May-70وبلغت للمثبط المستخلص من الصنفين ،5:1 بنسبة Daredh من الصنف المثبط
على التوالي.¹-وحدة ملغم 3.17و ¹-وحدة ملغم 2.26
المستخلصة من اللعاب أميليز-لفاافي فعالية التثبيط والفعالية النوعية لمثبطات 5:1 تأثير نسبة االستخالص .3الشكل
قيد الدراسةف الذرة الصفراء اصنا
اشاروا الى ان نسبة التثبيط االمثل كانت عند الذين (2003aواَخرون )Figueira وهذا يتفق مع ماذكره
.ثبطات االميليز من الذرة الصفراءتجاه اميليز لعاب االنسان عند استخالصهم لم 5:1 نسبة استخالص
Rohnaldinia من الصنف ان فعالية التثبيط كانت في اقصاها عند استخالص المثبط 4بين الشكل يو
¹-ملغموحدة 5.67 وحدة مليلتر وبفعالية نوعية مقدارها 3.92حيث بلغت فعالية التثبيط 10:1بنسبة خلط
http://www.agriculmag.uodiyala.edu.iq/
http://www.agriculmag.uodiyala.edu.iq/
خلف وناجي 9102، 10-92(: 0)01ديالى للعلوم الزراعية، مجلة
01 http://www.agriculmag.uodiyala.edu.iq/
Monargمن الصنف عند استخالص المثبط ¹-وحدة ملغم 4.03الفعالية النوعية في حين كانت بروتين،
وبلغت بالنسبة نفسها May-70من الصنف المثبط عند استخالص ¹-وحدة ملغم 1.25ووصلت الى
تابععلى الت ¹-وحدة ملغم 3.91و ¹-وحدة ملغم Veto 1.83 و Daredhللمثبط المستخلص من الصنفين
-Silvaو ( 2003bواَخرون ) Figueira( و 2001واَخرون ) Rebeccaوهذا يتفق مع ماذكره
Sanchez واخرون((و 2004Heidari 2005واخرون) .)
المستخلصة من اللعاب أميليز-والفعالية النوعية لمثبطات الفا فعالية التثبيطفي 10:1تأثير نسبة االستخالص. 4شكل
قيد الدراسةف الذرة الصفراء اصنا
اميليز-وقت االستخالص االمثل لمثبطات االلفا
قيد الدراسة لمدة ساعة ف الذرة الصفراءاصنامن لمثبطاالعالقة بين وقت استخالص 5يمثل الشكل
بامتالكه Monargتميز الصنف النتائج بينت لهذه المثبطات . التثبيط والفعالية النوعيةواحدة وفعالية
، في حين بروتين ¹-وحدة ملغم4.52 فعالية نوعية مقدارها ووحدة مليلتر 3.63 بلغتفعالية تثبيط اعلى
من االصناف عند استخالص المثبط¹-ملغم وحدة 1.21و 1.52و 2.11و 3.84النوعية الفعالية بلغت
Rohnaldinia وVeto وMay-70 وDaredh تابعالت على.
اللعاب اميليز-في فعالية التثبيط والفعالية النوعية لمثبطات الفا ساعة 1.0لمدة وقت االستخالصتاثير . 5شكل
المستخلصة من أصناف الذرة الصفراء قيد الدراسة
http://www.agriculmag.uodiyala.edu.iq/
http://www.agriculmag.uodiyala.edu.iq/
خلف وناجي 9102، 10-92(: 0)01ديالى للعلوم الزراعية، مجلة
03 http://www.agriculmag.uodiyala.edu.iq/
مدة ساعة في عمال( في است2000واَخرون ) Titarenkoاليه وقت االستخالص هذا يتفق مع ماأشار ن إ
عمل الوقت نفسه في استخالص مثبطات االميليز ست وااستخالص مثبطات االميليز من الذرة الصفراء ،
واختلف الوقت الذي استعمل في هذه (1999 ،واَخرون (Burgos-Hernandezوالتريتيكيل من الشيلم
وقتاً اقل الغراض االستخالص عمالشير فيها الى استإذ أالدراسة مع بعض ما ورد في البحوث العلمية
دقيقة في استخالص 20 الخلط لمدة Pattabiraman ((1985و Nagaraj من الحبوب فمثال استخدم
.Prosoالمثبط من دخن الـ
تثبيطية كانت عند استخالص المثبط من صنف الذرة الصفراء ان أعلى فعالية 6يبين الشكل
Rohnaldinio وحدة مليلتر وبفعالية نوعية 4.32ساعة حيث بلغت فعالية التثبيط 1.5بوقت استخالص
بفعالية نوعية بلغت Monargتالها المثبط المستخلص من الصنف بروتين، ¹-ملغم وحدة 5.66مقدارها
للمثبطات ¹-وحدة ملغم 0.37و 1.95و 3.01، في حين بلغت الفعالية النوعية بروتين ¹-وحدة ملغم4.21
واختلف الوقت الذي استعمل في ،على التتابع Daredhو May-70و Vetoالمستخلصة من االصناف
إشير فيها الى استخدام وقتاً أطول الغراض إذهذه الدراسة مع بعض ما ورد في البحوث العلمية
ساعات في استخالص Supriya (1993) 6و Mulimaniاستعمل فقداالستخالص من الحبوب،
( المثبط من الذرة الصفراء لمدة خلط 1995واَخرون ) Mirandaالمثبطات من الذرة البيضاء واستخلص
.ساعة 2
اميليزاللعاب -في فعالية التثبيط والفعالية النوعية لمثبطات الفا ساعة 1.5تاثير وقت االستخالص لمدة. 6شكل
قيد الدراسةالمستخلصة من اصناف الذرة الصفراء
ان فعالية التثبيط كانت في اقصاها عند استخالص المثبط من صنف الذرة الصفراء 7يبين الشكل
Rohnaldinio وحدة مليلتر وبفعالية نوعية 4.12بلغت فعالية التثبيط فقدساعة، 2.0بوقت استخالص
4.21 بفعالية نوعية Monargبروتين، تالها المثبط المستخلص من الصنف ¹-وحدة ملغم5.43 مقدارها
Daredh، ثم مثبط الصنف ¹-وحدة ملغم2.87 بفعالية نوعية Veto، ثم مثبط الصنف ¹-وحدة ملغم
وقد اتفقت هذه النتيجة مع بعض الدراسات في هذا على التتابع. 1.36و 1.95بفعالية نوعية May-70و
، ساعة 2( المثبط من الذرة الصفراء بمدة خلط بلغت 1995واَخرون ) Mirandaاستخلص المجال، فقد
واخرون Francoفقد أشار ، اعتمد العديد من الدارسين وقتا اطول من الوقت المحدد في هذه الدراسةو
في موالر كلوريد الصوديوم 0.15ساعات باستعمال 5( الى استخالص المثبط بالخلط لمدة2002)
ان وقت االستخالص يتحدد بعدة عوامل منها مصدر المثبط وصنفه، من ذلك يتضحو ،ظروف مبردة
ونوع المثبط ونسبة االستخالص وكذلك نوع الدارئ المستعمل وظروفه وكفاءته في استخالص المثبط
المطلوب.
http://www.agriculmag.uodiyala.edu.iq/
http://www.agriculmag.uodiyala.edu.iq/
خلف وناجي 9102، 10-92(: 0)01ديالى للعلوم الزراعية، مجلة
03 http://www.agriculmag.uodiyala.edu.iq/
ساعة، 2.0 و 1.5كان Rohnaldinioمما سبق يتضح ان افضل وقت الستخالص المثبط من الصنف
.ساعة 1.0بوقت Monargثم الصنف
اللعاب اميليز -في فعالية التثبيط والفعالية النوعية لمثبطات الفا ساعة 2.0 تاثير وقت االستخالص لمدة. 7شكل
قيد الدراسةالمستخلصة من اصناف الذرة الصفراء
تعيين الظروف المثلى لفعالية المثبط
أميليز-ـــ الرقم الهيدروجيني االمثل لفعالية مثبطات االلفا
أميليز-في فعالية التثبيط لمثبطات االلفا 9–4درس تأثير ارقام هيدروجينية مختلفة تراوحت بين
لجميع أصناف الذرة الصفراء قيد الدراسة لتحديد الرقم الهيدروجيني االمثل الرتباط هذه المثبطات مع
وتظهر النتائج المبينة في ،دقيقه 30م ولمدة ˚30اميليز لعاب االنسان عند حضنهما معا عند درجة حرارة
يالحظ من و ،ليز لعاب االنسانقابلية تداخل المثبط مع امي فيوجود تأثير للرقم الهيدروجيني 8الشكل
وبنسبة تثبيط 5باميليز اللعاب عند رقم هيدروجيني Veto الشكل المذكور ارتباط المثبط من الصنف
بأميليز اللعاب عند رقم Monarg المثبط من الصنف ، في حين كانت افضل قابلية الرتباط %22
Rohnaldinioتبين ان الرقم االمثل الرتباط المثبط من الصنف ، و 30%وبنسبة تثبيط 7هيدروجيني
ظهرالشكل ايضا45% وبنسبة تثبيط 6مع اميليز اللعاب هو بحدود عند ارتباط %5نسبة تثبيط بلغت ويـ
، وأخيرا جاء ارتباط المثبط من 8نفسه عند رقم هيدروجيني باالميليز Daredhالمثبط من الصنف
اميليز لعاب االنسان تتثبط فعالية %5وبنسبة تثبيط 6 باالميليز عند رقم هيدروجينيMay-70 الصنف
الن االميليز هو نفسه يتثبط في هذه االوساط ويعود ذلك الى الدنترة في االرقام الهيدروجينية الحامضية
التي تسببها هذه االرقام لالميليز.
ي االمثل لفعالية المثبط نوعا ما تبعا لمصدره وردت دراسات اشارت الى اختالف الرقم الهيدروجين
ونوعه ذكر ان الرقم االمثل لفعالية المثبط المعزول من الشعيرفي تثبيط االميليزات الداخلية للشعير
Torronen؛ 1983 ،واخرون Weslake) 8والشيلم هو بحدود االرقام القاعدية وفي االرقام اعلى من
الى ان اعلى نسبة تثبيط كانت عند رقم أيضاً (1995واَخرون ) Blancoاشار و ،(1992 ،واَخرون
دقائق من المثبط المستخلص من الذرة الصفراء تجاه 10م وبوقت ˚ 80بدرجة حرارة 6.8هيدروجيني
وهو اعلى نسبة تثبيط مقارنة بالمثبط المعزول من الذرة الصفراء والذي Sitophilus zeamiasاميليز
لتثبيط االنزيم نفسه. 7ني بحدود كان عند رقم هيدروجي
http://www.agriculmag.uodiyala.edu.iq/
http://www.agriculmag.uodiyala.edu.iq/
خلف وناجي 9102، 10-92(: 0)01ديالى للعلوم الزراعية، مجلة
03 http://www.agriculmag.uodiyala.edu.iq/
اصناف الذرة المستخلصة من لعاب االنسان اميليز-تاثير الرقم الهيدروجيني في نسبة التثبيط لمثبطات الفا. 8شكل
الصفراء
اميليز-ـــ درجة الحرارة المثلى لفعالية مثبطات االلفا
المثبطات مع أميليز اللعاب الخام في حضنت هذه تحديد درجة الحرارة المثلى لفعالية المثبطات ل
وجود زيادة بسيطة في فعالية التثبيط 9يالحظ من الشكل و دقيقة، 30م لمدة ˚ 30- 80بين ةدرجات حرار
حصول زيادة واضحة في فعالية يالحظ ايضا من الشكل ذاته و م،˚60بارتفاع درجة الحرارة ولغاية
باميليز Vetoيالحظ ارتباط المثبط من الصنف إذم، ˚ 80إلى 60لتثبيط بارتفاع درجة الحرارة منا
، في حين كانت افضل قابلية الرتباط المثبط من 19.54%م وبنسبة تثبيط ˚80اللعاب عند درجة حرارة
تبين ان درجة الحرارة المثلى و ،م˚80عند درجة حرارة %24.66بنسبة تثبيط Monargالصنف
،40.66%م وبنسبة تثبيط ˚80عند هي مع اميليز اللعاب Rohnldiniaالرتباط المثبط من الصنف
االميليز والتسبب في دنترته فيظهر المثبط كأنما فيتأثير درجات الحرارة العالية بويمكن تفسير ذلك
اعطى زيادة في نسبة التثبيط، في حين قد يعود تاثير التثبيط االضافي للحرارة المستعملة وليس للمثبط
العديد من البحوث العلمية أن المثبطات المختلفة تتباين في درجات الحرارة المطلوبة في فقد ورد ،نفسه
2003))ن واَخروEdson تبعاً لمصدرها ونوعها وكذلك مصدر ونوع االميليز الذي يتم تثبيطه فقد أشار
جات في فعالية المثبط المنقى من الذرة الصفراء عند حضنه بمدى من در %47.6الى زيادة مقدارها
.دقيقة 60ولمدة Fusarium verticillioidesم مع أميليز الفطر ˚ 94-0الحرارة بين
المستخلصة لعاب االنسان اميليز-تاثير درجة الحرارة المثلى في فعالية التثبيط والفعالية النوعية لمثبطات الفا . 9شكل
الصفراء من اصناف الذرة
http://www.agriculmag.uodiyala.edu.iq/
http://www.agriculmag.uodiyala.edu.iq/
خلف وناجي 9102، 10-92(: 0)01ديالى للعلوم الزراعية، مجلة
02 http://www.agriculmag.uodiyala.edu.iq/
المصادر
. إنتاج 2006 .سعيد نعوم وعباس خضير عباس ولمياء إسماعيل محمدضياء بطرس وموفق ،يوسف
33(2):.العلوم الزراعية -مجلة دراساتوتقييم بعض الهجن الزوجية الفردية المدخلة من الذرة الصفراء.
59–70.
Blanco-Labra, A., F. A. Iturbe-Chiñas. 1980. Purification and characterization of
an α-amylase inhibitor from maize (Zea maize). J. Food Biochem. 5: 1–17.
Blanco-Labra, A. A., N. Chagolla-Lopez, Mart.nez-Gallardo and S. Valdes-
Rodrigues. 1995. Further characterization of the 12 kD protease alpha-
amylase inhibitor present in maize seeds. J. Food Biochem. 19: 27-41.
Bradford, M. 1977. A rapid and sensitive method for the quantitation of
macroorganisms quantities of protein using the principles of protein dye
binding. Anal. Biochem. 72: 248-254.
Bressanil, R. A. Breuner and Ortiz, 1989. Contenidodfibraacidoy neutron-
detergenteyde minerals menores maize sutortilla. Arch. Latinoam. Nutr.,
39: 282-391.
Edson, Z., D. G. White and G. A. Payne. 2003. Corn seed proteins inhibitory to
Fusarium verticillioides and aflatoxin biosynthesis. Phytopathology, 87:
622-627.
Figueira, E. L. Z., A. Blanco-Labra, E. Y. S. Gerage, E. Ono, Y. Mendiola-
Olaya, E. Y. Ueno and E. Y. Hirooka. 2003a. New amylase inhibitor
present in corn seeds active in vitro against amylase from Fusarium
verticillioides. Plant Dis. 87: 233-240.
Figueira, E. L. Z., A. Blanco-Labra, E. Y. S. Gerage, E. Ono, Y. Mendiola-
Olaya, E. Y. Ueno and E. Y. Hirooka. 2003b. Amylase inhibitor present in
corn seeds active in vitro against amylase from Fusariumverticillioides.
Plant Dis. 87: 233-240.
Buonocore, V., T. Petrucci and V. Silano. 1977. Wheat protein inhibitors of α-
amylase. Phytochemistry, 16: 811-820.
Burgos-Hernández, A., C. Rosas-Burgos, B. Ramírez, Wong, A. A. Carbonell-
Barrachina and F. J. Cinco-Moroyoqui. 1999. Identification of α-amylase
inhibitors in triticale grain. J. Sci. Food Agric., 79: 1671-1675.
Fontanini, D., Capocchi , V. Muccilli, F. Saviozzi, V. Cunsolo, R. Saletti, S.
Foti and L. Galleschi. 2007. Dimeric inhibitors of human salivary alpha-
amylase from emmer (TriticumdicocconSchrank) seeds. J. Agric. Food
Chem. 55(25): 10452-60.
Franco, O. L., R. M. Francislete, A. M. Paulo, N. S. Paes, M. Yokoyama, M. V.
Coutinho, C. Jr. Bloch and M. F. Grossi-de–Sá. 2005. Characterization of
http://www.agriculmag.uodiyala.edu.iq/
http://www.agriculmag.uodiyala.edu.iq/
خلف وناجي 9102، 10-92(: 0)01ديالى للعلوم الزراعية، مجلة
02 http://www.agriculmag.uodiyala.edu.iq/
two Acanthoscelidesobtectus alpha-amylases and their inactivation by
wheat inhibitors. Comp. Biochem. Physiol. Biochem. Mol. Biol. 140: 313-9.
Franco, O. L., D. J. Rigden, F. R. Melo, and Grossi-de-Sá. 2002. Plant α-
amylase inhibitors and their interaction with insect α-amylases structure,
functionand potential for crop protection. Eur. J. Biochem., 269: 397-412.
Friedman, M. 1987. Nutritional and toxicological significance of enzyme
inhibitors in foods, Advances in Experimental Medicine and Biology,
Plenum Press, New York. Pp: 199-483.
Heidari, R., S. Zareae and M. Heidarizadeh. 2005. Extraction, purification and
inhibitory effect of alpha- amylase inhibitor from Wheat (Triticum
aestivum Var. Zarrin). Pakistan Journal of Nutrition, 4(2): 101-105.
Jakbowski, H. 2010. Personal communication. Online study. Chapter 6-
Transport and Kinetics. C. Models of Enzyme Inhibition and D. More
complicated Enzymes. Biol. (Paris)., 29(4): 223-228.
Jarrett, S. J., R. J. Marschke, M. H. Symons, C. E. Gibson, G. P. Fox and R. J.
Henry. 1997. Alpha-amylase/subtilisin inhibitor levels in Australian
barleys. Journal of Cereal Science, 25: 261-266.
Kaur, R. A., P. Poonam Sahota and A. Kaur. 2009. Changes in mircoflora of
steeped and cured baby corn (Zea mays L.). J. Horti. Forestry, 1(3): 32–37.
Kokiladevi, E., A. Manickam and B. Thayumanavan. 1972. Characterization of
Alpha-amylase inhibitor in Vignasublobata. Bott. Bull. Acad. Sun., 46: 186-
189.
Miranda, M. M. M. Picanco, F. G. Faleiro and A. T. Machado. 1995. Detecc. o
deno-preferenciaaandSitophiluszeamais Mots. Emespigas gr. Os de 49
populac. es de milho. Rev. Bras. Armaz., 20: 21-25.
Mulimani, V. H. and D. Supriya. 1993. Effect of heat treatments on alpha-
amylase inhibitor activity in sorghum (Sorghum bicolor L.). Plant Foods
Hum. Nut., 44: 181-6.
Nagaraj, R. H. and T. N. Pattabiraman. 1985. Purification and properties of an
α-amylase inhibitor specific for human pancreatic amylase from proso
(Paniciummiliaceum) seeds. J. Bio. sci., 7(3& 4): 257-268.
Pelegrini, P. B., F. T. Lay, A. M. Murad, M. A. Anderson and O. L. Franco.
2008. Novel insights on the mechanism of action of alpha- amylase
inhibitors from the plant defensinfamily. Proteins, 22.
Rebecca, L. O. Schimoler, S. Rourke, Z. Michael Richardson, and P.
Selitrennikoff. 2001. Zeamatin inhibits Trypsin and α-amylase Activities,
Appl. Environ. Microbiol., 67(5): 2365-2366.
http://www.agriculmag.uodiyala.edu.iq/
http://www.agriculmag.uodiyala.edu.iq/
خلف وناجي 9102، 10-92(: 0)01ديالى للعلوم الزراعية، مجلة
11 http://www.agriculmag.uodiyala.edu.iq/
Roney-John, C. 2009. The Beginnings of Maize Agriculture Archaeology. South
West, 1: 23-45.
Sandstedt, R. M. and O. C. Beckord. 1946. Photomicrographic studies of wheat
starch. II. Amylolytic enzymes and the amylase inhibitor of the developing
wheat kernel. Cereal Chem., 23: 548-558.
Silva-Sanchez, J., A. Gonzalez–Castaneda, De Len-Rodriguez and A. P.
Barba De La Rosa. 2004. Functional and rheological properties of
amaranth albumins extracted from two Mexican varieties. Plant Foods for
Human Nutrition, 59(4): 169-174.
Taufel, A., H. Böhm and W. Flamme. 1997. Protein inhibitors of alpha-amylase
in mature and germinating grain of rye (Secalecereale). J. of Cereal Sci.,
25(3): 267-273.
Titarenko, E. and M. J. Chrispeels. 2000. cDNA Cloning, bioche-mical
characterization and inhibition by plant inhibitors of the α- amylases of the
western corn root worm, Diabroticavirgiferavirgifera. Insect. Biochem.
Mol. Biol., 30: 979-990.
Torronen, A. Mattileisola and S. Haarasilta. 1992. Inhibition of rye α-amylase
activity by barley α-amylase inhibitor. Cereal Chem., 69(4): 355-358.
Whitaker, J. R. and R. A. Bernard. 1972. Experiment for Introduction to
Enzymology. The Wiber Press Davis.
Vivek, B. S., A. F. Krivanik, N. A. Palacios-Rojas, Afriyie S. Twnmasi and A.
O. Diallo. 2008. Breeding quality protein maize protocols for developing
QPM cultivars. International Maize and wheat Improvement center
(CIMMYT), printed in Mexico. 75(3): 231–229.
Weselake, R. J., A. W. McGregor, R. D. Hill and H. W. Duckworth. 1983b.
Purification and characteristics of an endogenous α-amylase inhibitor from
barely kernels. Plant Physiol., 73: 1008-1012.
http://www.agriculmag.uodiyala.edu.iq/
http://www.agriculmag.uodiyala.edu.iq/
http://www.sciencedirect.com/science/journal/07335210
http://www.sciencedirect.com/science/journal/07335210
خلف وناجي 9102، 10-92(: 0)01ديالى للعلوم الزراعية، مجلة
10 http://www.agriculmag.uodiyala.edu.iq/
DETERMINATION OF THE OPTIMAL CONDITIONS FOR
EXTRACTING ALPHA-AMYLASE INHIBITORS OF HUMAN SALIVA
FROM FIVE MAIZE VARIETIES
Anwer Ahmed Khalaf Ethar Zeki Naji
anwar.Ahmad235@yahoo.com etze-957@yahoo.com
College of Agriculture-University of Tikrit, Iraq
ABSTRACT
Alpha-amylase inhibitors were extracted from some maize varieties including
Veto, Monarg Rohnaldinia, Daredh and May-70, using 0.2 M buffer solution of
sodium acetate, pH 6. Inhibition of all maize cultivars towards human saliva
amylase was determined by the method used.
The results showed that inhibition percentages varied by different species.
Rohnaldinio variety was characterized by amylase inhibition ratio of 40.26%
compared to the Monarg and Veto of 23.60% and 16.47%, respectively. May-70
and Daredh showed little efficacy towards amylase. The optimal ratio for alpha-
amylase inhibitors extraction from maize varieties, and at different proportions
including 2.5: 1, 5: 1 and 10: 1 (weight: volume), showed that the specific
efficacy was the greatest when extracting the inhibitor from Rohnaldinio variety
by using 1:5 (w: v) mixing proportion. The specific efficacy was 6.32 unit mg-1
protein, compared to the other varieties.
Determination the optimal extraction time for alpha-amylase inhibitors from
maize varieties at 1.0, 1.5 and 2.0 hours extraction time showed that the specific
efficacy was the highest when the inhibitor was extracted from Rohnaldinio
variety in 1.5 hour. It was 5.66 unit mg-1 protein compared to the rest of the
varieties. The results also showed a pH effect on the interaction of the inhibitor
with amylase saliva. The optimal pH for bindings the inhibitor from Rohnaldinia
variety with amylase saliva was 6, whereas 7, 5, 8 and 6 for inhibitors from
Monarg, Veto, Daredh and May-70, respectively. The optimum temperature for
inhibitor activity was examined between 30 – 80 ˚C. A significant increase in
the effectiveness of inhibition was shown with increasing temperature from 60
to 80 ˚C. Inhibition at 80 ˚C was 40.66% when the inhibitor from Rohnaldinia
linked with amylase saliva.
Key words: Alpha-amylase inhibitors, human saliva amylase, varieties of maize.
http://www.agriculmag.uodiyala.edu.iq/
http://www.agriculmag.uodiyala.edu.iq/
mailto:anwar.Ahmad235@yahoo.com
mailto:-957@yahoo.com