المهداوي ومطشر 1101، 001 – 001(: 0)01مجلة ديالى للعلوم الزراعية، 001 http://www.agriculmag.uodiyala.edu.iq/ المزارع النسيجية لكالس نبات كرز االرض وتشخيص الفايسلين المعزول من االوراق Physalis angulata L. سارة مطشر حاتم 1المهداويمثنى محمد ، العراقجامعة ديالى -كلية التربية للعلوم الصرفة -قسم علوم الحياة sadeh1970@gmail.comالمسؤول عن النشر: 0 المستخلص أُجريت الدراسة الحالية في مختبر زراعة الخاليا واألنسجة النباتية التابع لقسم علوم الحياة في كلية بهدف تقدير .1102ولغاية أيار/ 1102التربية للعلوم الصرفة بجامعة ديالى خالل المدة من تشرين األول/ في اوراق النبات .Physalis angulata Lمركب الفايسلين احد نواتج االيض الثانوية لنبات كرز االرض المفصولة من بادرات معقمة بعمر ثالث Hypocotyl ومزارع الكالس المشتقة من السويقة تحت الفلقية متداخال مع D-2,4 0-ملغم لتر 1.0المدعم بتركيز MSموراشيج وسكوج اسابيع والمستحث على وسط BA اعتمدت نتائج كروماتوكرافيا السائل عالي األداء 0-ملغم لتر 1.12بتركيز .HPLC في تشخيص Bوفايسلين Aلكل من فايسلين %022.20و 010.12غت الفايسلين المعزول وتقدير نسبة تواجده والتي بل 00.00 يوماً إذ بلغت 01م في كالس بعمر وعلى التوالي في اوراق النباتات البذرية. وتقارب نسبة تواجده يوماً فقد بلغ نسب 52ولوحظ زيادة مركب الفايسلين بزيادة عمر المزرعة الى ،على التوالي %01.12و وان هذه القيم بدأت ،Bلفايسلين % 121.21و Aلفايسلين %01.11الى تواجده في هذه المزارع يوماً. 21على التوالي عند عمر %222.2و 1.2باالنخفاض مع تقدم عمر المزرعة اذ وصلت قيمهما الى وعموما تؤشر هذه البيانات ان هذه المزارع تمثل مصادر مستديمة مفضلة للحصول على الفايسلين. Physalin, Physalis angulata, Callus induction , Micropropagationالمفتاحية:الكلمات المقدمة Physalis alkekengiويعد النوع Solanaceaeالى العائلة الباذنجانية Physalisينتمي الجنس Physalis( وقد سجل النوع0810 ،)السامرائي اهم االنواع المنتشرة في مقاطعات معدودة من العراق angulata (. ان اصل 1112 ،قيد الدراسة ألول مرة ضمن الموسوعة النباتية العراقية من قبل )العالق التيني بمعنى زوايا دالله على شكل الساق ويسمى النوع المدروس باإلنكليزية عدة angulata تسميه النوع Ballon, Cutleaf Ground - cherry, Goosberry, Hogweed cherryتسميات هي (Anonymous, 0828 وKarthikeyani وJanardhanan ,1110)، والنبات حولي صيفي له قيمه Silva) طبيه للشفاء من االمراض المختلفة حيث يعتبر مدر للبول وملين ويستخدم في عالج لدغات االفاعي وقد استخدم عصير االوراق ،وتستعمل ثمار هذا النبات لعالج اضطرابات الطحال(. 1112 ،آخرونو نبات وكيميائيا يحتوي ال ،)1101 ،آخرونو Osho) بخلطه مع زيت الخردل والماء كعالج لوجع االذن االحماض األمينية. ،االحماض الدهنية ،السترويدات ،بصورة رئيسيه على القلويدات النباتات الطبية مصدراً متجدداً للدواء والغذاء، وفي الوقت الحاضر هناك تناقص كبير في مصادر تعد النباتات الطبية ناشئ عن تدخل اإلنسان في البيئة الطبيعية، لذلك اتجه العلماء إلى طريقة جديدة للتغلب على لنباتات مة عن طريق تقانة اإلكثار الدقيق لهذه الصعوبة باستخدام تقانة الزراعة النسيجية إلنتاج النباتات المه G. Haberlandtالذي اشار الية العالم Totipotency التي تقوم على مبدأ الطاقة الكامنة للخلية (Sarin ,1112 ) تتميز النباتات الطبية عن غيرها باحتوائها مركبات وعناصر كيميائية ذات تأثير طبي 42/11/4112استالم البحث: 11/2/4112قبول النشر: http://www.agriculmag.uodiyala.edu.iq/ mailto:sadeh1970@gmail.com المهداوي ومطشر 1101، 001 – 001(: 0)01مجلة ديالى للعلوم الزراعية، 000 http://www.agriculmag.uodiyala.edu.iq/ ان في حالة المرض والتي تستعمل بالمقادير المحددة علميا والموصوفة طبيا والتي وفسلجي نافع لجسم اإلنس اغلبها مواد ايض ثانوي وتصنف المواد الفعالة على أساس خصائصها الكيميائية وصفاتها الطبيعية إلى بصورة رئيسيه في Physalin. يتراكم (1118القلويدات والكاليكوسيدات والفينوالت وغيرها )العرقاوي، ن حيث م النباتات المكتملة النضج حيث نالحظه في النباتات المثمرة والنباتات المزهرة وتختلف األنسجة في االوراق الناضجة Physalin B ،في الفواكه الناضجة Physalin Aحيث يتراكم Physalin تراكم Azlan ي االوراق الناضجة )ف Physalin F، في براعم االزهار Physalin D ،وبراعم االزهار ( عند دراسة الجذور الشعرية المستحثة على اجزاء 1111) آخرونو Azlan(. وقد اشار 1112، آخرونو Agrobacterium rhizogenesعند تلقيحها ببكتريا .Physalis minima Lنباتية مختلفة من نباتات ان اعلى محتوى ،روف الضوء والظالمد تنميتها في ظفي اوساط غذائية مختلفة وعن LBA9402ساللة قد سجلت عند تنمية الجذور الشعرية في ظروف الظالم في Physalin Fو Physalin B من مادة في حين سجلت ،وزن جاف وعلى التوالي 0-غم ملغم 5.02و 0.10إذ بلغت Gamborg (B5)وسط لـ 0.12 -0.01و Physalin B وزن جاف لـ 0-غم ملغم 0.21-0.21الجذور االعتيادية قيم بلغت Physalin F ولم تكن القيم معنوية عند تنمية الجذور في ظروف الضوء. ،عند تنميتها تحت نفس الظروف باختالف المراحل التطورية ألجزاء Physalin( عند دراسة تراكم مادة 1112) آخرونو Azlanوذكر ت الخلوية بان اعلى نسبة بلغت في تراكمها في النباتاتالنبات الكامل ومقارنتها مع تواجده في مزارع المعلقا وان محتوى هذه االنسجة في النبات ،المثمرة ثم النباتات عند االزهار وتليها النباتات في مرحلة الحداثة وزن جاف في حين انخفضت هذه القيم في مزارع المعلقات 0-غم ملغم 8.18-1.11الكامل تراوحت بين مرة عن القيم السابقة. 00.2 – 1.1الخلوية من ي محتوى ومقارنتها ف تهدف الدراسة الحالية الى معرفة تأثير عمر مزارع الكالس في مستوى الفايسلين .االوراق الحقيقي من المركب بحثالمواد وطرائق ال ()بذور نبات المادة النباتية سطحياً بغمرها في محلول هايبوكلورايت الصوديوم .Physalin angulata L عقمت بذور نبات NaOCl مع التحريك للتخلص حجم ماء معقم لمدة خمس دقائق 1 حجم مادة معقمة: 0بنسبة %2بتركيز ، إلزالة أثار المادة المعقمة 0-ومن ثَم غسلت بالماء المعقم ثالث مرات بمعدل ثالث دقائق مرة ،من الفقاعات ( Skoog ,0821و Murashige) MSمل من وسط 11زرعت البذور المعقمة بوضعها على سطح . حفظت 0-مل وبمعدل خمسة بذور قنينة 121الصلب الخالي من منظمات النمو في قناٍن زجاجية حجم لضوء م وفي نظام ا 1ْ± 12وحين إنباتها نقلت إلى غرفة النمو بدرجة ،العينات في الظالم لمدة ثالثة أيام لوكس. 1111 ظالم( وشدة إضاءة 0-ساعة 1ساعة ضوء 02والظالم المتعاقب ) استحثاث الكالس من السويقة تحت الفلقية ونقلت الى قناٍن ادرات المعقمة بعمر ثالثة اسابيعمن الب Hypocotylالسيقان تحت الفلقية فصلت ،الصلب الخالي من منظمات النمو كمعاملة مقارنة MSمل من وسط 11مل تحوي 011زجاجية حجم 0-لتر ملغم 0.1, 1.2, 1.0, 1.0بتركيز D-2,4ط االستحثاث التي اعدت لدراسة تأثير افضال عن اوس في طبيعة استجابة الزروعات الستحثاث الكالس. حفظت العينات 0-لتر ملغم 1.12بتركيز BAمتداخال مع . قدر الوزن الطري ونسبة االستجابة الستحثاث الكالس لعينات السيقان تحت بالظروف المشار أليها سابقاً 21, 52, 01 عدب وحصد الكالس المستحث على العينات النباتية ألفضل استجابة ،الفلقية للتراكيز السابقة يوماً من الزراعة بغية تقدير مركب الفايسلين. http://www.agriculmag.uodiyala.edu.iq/ المهداوي ومطشر 1101، 001 – 001(: 0)01مجلة ديالى للعلوم الزراعية، 001 http://www.agriculmag.uodiyala.edu.iq/ استخالص وفصل الفايسلين ( والتي ذكرها مع بعض 0881) آخرونو Chiangالموصوفة من قبلاعتمدت الطريقة 121غرام من مسحوق العينة الجافة في 1( في عزل الفايسلين إذ نقع 1111) آخرونو Azlanالتحوير ثم رشح المستخلص من خالل ،ظالمالمل من الميثانول لمدة اسبوعين في درجة حرارة المختبر وظروف ُركز ،( لفصل المستخلص عن بقايا العينةWhatman No.1ورق الترشيح )أمراره خالل طبقة من , ثم خفف المستخلص Rotary evaporatorمل من خالل تبخيره بالمبخر الدوار 21المستخلص حتى Hexaneمل وفصل الفايسلين باستخدام 121ببعض الماء المقطر ونقل المستخلص إلى قمع فصل حجم ق لكل مرة للتخلص من صبغة الكلوروفيل والصبغات الخرى والحوامض ( لمدة خمس دقائ1× مل 01) ( لمدة خمس دقائق لكل 1× مل 01) 3CHClالدهنية غسلت بعدها مستخلصات الكحولية بالكلوروفورم ُركز مستخلص الكلوروفورم الحاوي على الفايسلين والمشتقات االخرى حتى الجفاف التام من خالل ،مرة عندها أصبحت الميثانولمل من 0.1أذيب الراسب في ،م ْ 51( عند RE-52Aدوار )تبخيره بالمبخر ال العينة جاهزة لعملية تشخيص وتقدير محتواها من الفايسلين. HPLCالتشخيص والتقدير الكمي للفايسلين بتقنية الكروماتوكرافيا السائل عالي الكفاءة قانة تأجريت عملية الفصل والتشخيص لمركب الفايسلين المستخلص من العينات باستعمال نوع (HPLCجهاز كروماتوغرافيا السائل ذي األداء العالي )كروموتوغرافيا الغاز وباستخدام (Shimadzu 10AV-LC Japan )باستخدام عمود فصل وcolumn اآلتية معدني ذي المواصفات: ملم 21مود ..... طول الع Phenomenex C-8الطور الثابت..... امايكرومتر 0قطر حبيبات الحشوة..... ملم 1.1القطر الداخلي للعمود .... (.0وأجريت عملية التشخيص وفق الظروف المحددة لكل مركب )الجدول ات المفصولة من العينات المنتخبةظروف تشخيص النموذج القياسي من الفايسلين والمركب .1الجدول لنماذج ا نفذت عملية تشخيص الفايسلين للعينات قيد الدراسة في وزارة العلوم والتكنلوجيا اعتماداً على مل من الميثانول إذابة تامة. 01ملغم من مسحوق الفايسلين القياسي في 1.11القياسية بإذابة ومن خاللها Retention time تؤخذ القراءات المناسبة متضمنة مساحة المنحني وزمن االحتباس تشخيص المركب المعزول من العينات مقارنةً مع زمن احتباس العينة القياسية وحساب نسبته المئوية: يمكن =النسبة المئوية للمركب T ×011 S إذ أّن: T .تمثل مساحة المنحنى للمركب المعزول من العينات المختبرة : S المقارنة(. : تمثل مساحة المنحني للمركب القياسي( مركب الفايسلين الظروف ماء مزال االيونات %01اسيتونتريل و 81% (v:v) الطور المتحرك 0-دقيقة مل 0.0 سرعة جريان الطور المتحرك مايكروليتر 11 حجم العينة المحقونة م 02ْ درجة حرارة الفصل UV –Vis 10A –SPD spectrophotometer نوع الكاشف نانوميتر 101عند الطول الموجي (1111 ،آخرونو Azlan) حسب المصدر http://www.agriculmag.uodiyala.edu.iq/ المهداوي ومطشر 1101، 001 – 001(: 0)01مجلة ديالى للعلوم الزراعية، 000 http://www.agriculmag.uodiyala.edu.iq/ النتائج والمناقشة استحثاث الكالس من السيقان تحت الفلقية في استحداث الكالس من السويقة تحت الفلقية لنبات D-2,4تأثير تراكيز مختلفة من 1يبين الجدول والذي تفوق ،غم 5.2غ بلأعلى وزن طري للكالس D-2,4 0-ملغم لتر 1.0كرز االرض اذ أعطى التركيز ( بينما اعطت معامله المقارنة اقل نسبه من وزن الكالس اذ C:0معنويا على باقي التراكيز المدروسة )شكل في حين تكون ،(A:0لوحظ فيها انتفاخ في منطقه التاج وتمايز الجذور منها ولم تعط اي نسبة استجابة )شكل عطت أ بينما ،(B:0)شكل D-2,4 0-ملغم لتر 0.1ملة الكالس في مناطق القطع ولم تفقد القطع شكلها في المعا 1.21وبوزن طري بلغ (Eو D:0)شكل %011نسبة استجابة 0-ملغم لتر 0.1و 1.2كل من المعاملة المدعم MS وسط على زرعت التي الفلقية تحت السويقة عينات بعض ان ويالحظ ،غم على التوالي 1.00و الكالس بمرحلة المرور دون مباشرةً عرضية أفرع إلى تمايزت قد D-2,4 0-لتر ملغم 1.0 بتركيز (. ان قدرة تكوين الكالس تعتمد على وجود العضو وتأثره بنوع منظم النمو من حيث تركيزها F:00شكل) حسب متطلباتها من الهرمونات بان استجابة االعضاء المختلفة تختلف إذوتجميعها في وسط النمو وكذلك فان الوسط الذي يحوي تراكيز عالية من االوكسين مع تراكيز منخفضة من السايتوكاينين ،وتركيزها (.1100 ،آخرونو Sheebaالخاليا مما يؤدي الى تكوين الكالس ) قساميعزز ان Physalis الوزن الطري للكالس )غم( الناتج من زراعة السويقة تحت الفلقية من نبات كرز االرض .4الجدول angulata على وسطMS 2,4 ـالمجهز ب-D بعد اربعة اسابيع من الزراعة تركيز D-2,4 (0-)ملغم لتر مقياس تكوين الكالس الوزن الطري )غم( نسبة نشوء الكالس - ج 0.35 1 0.0 + ج 0.66 33.3 0.1 +++ أ 4.65 011 0.3 +++ ب 2.50 011 0.5 +++ ب 2.13 011 1.0 . 0.05األرقام ذات األحرف المتشابهة ضمن العمود الواحد ال تختلف معنويا فيما بينها حسب اختبار دنكن متعدد الحدود عند مستوى احتمال http://www.agriculmag.uodiyala.edu.iq/ المهداوي ومطشر 1101، 001 – 001(: 0)01مجلة ديالى للعلوم الزراعية، 005 http://www.agriculmag.uodiyala.edu.iq/ 0.1( تركيز B( معاملة المقارنة )A) Physalis angulateاستحثاث الكالس من السيقان تحت الفلقية لنبات .1شكل ال 1-ملغم لتر 0.3( تركيز F) 1-ملغم لتر 1.0( تركيز E) 1-ملغم لتر 0.5( تركيز D) 1-لتر ملغم 0.3( تركيز C) 1-لتر ملغم تمايز قطع الكالس بشكل مباشر التشخيص والتقدير الكمي لمركب الفايسلين وتقدير نسبة وجوده في اوراق نبات كرز االرض البذرية ومزارع الكالس Physalin Aتشخيص HPLCطة ابوس ن حقن العينات المختلفة في كروماتوكرافيا السائل عالي االداء احتوائها ععبّرت المنحنيات الناتجة بداللة زمن االحتباس المسجل لكل منها مع زمن احتباس العينة القياسية الفايسلين )شكلPhysalin ستيرويد 1: A:وعلى النحو االتي ) النباتات البذرية Physalin Aعن احتواء مستخلص عينات االوراق HPLCبوساطة أوضحت المنحنيات المسجلة دقيقة مقاربةً مع قيم زمن احتباس عينة 0.80والبالغة Retention timeاعتماداً على قيم زمن االحتباس Physalin 3 الجدول ،القياسية. القياسي مع نسب مساحة Physalinوكشفت النتائج عن اختالفات واضحة في نسبة مساحة منحني ( واكدت البيانات وجود B:1 المعزول من عينات النباتات البذرية )شكل Physalin Aالمنحنيات المسجلة Physalin A 2.02البذرية بنسبة بلغت في اوراق النباتات% . المزارع النسيجية في مستخلصات مزارع الكالس بعمر Physalin Aوجود HPLCطة ااظهرت نتائج التشخيص بوس جدول )المعزول منها Aالمشتق من السويقة تحت الفلقية بداللة زمن االحتباس للفايسلين ايوم 21و 52و 01 عن النسبة المئوية لمساحة المنحني المسجل ملحوظاارتفاعا ايوم 01قد سجل الكالس المستحث بعمر ، و( 0 http://www.agriculmag.uodiyala.edu.iq/ المهداوي ومطشر 1101، 001 – 001(: 0)01مجلة ديالى للعلوم الزراعية، 002 http://www.agriculmag.uodiyala.edu.iq/ ( ثم بدأت باالنخفاض بتقدم B:1 يوما )شكل 52النسبة عند العمر وازدادت هذه ،( A:1 ) شكل لألوراق (. C:1 يوما ) شكل 21عمر المزرعة الى البذرية Physalis angulataنبات المعزول ونسب وجوده في أوراق Physalin Aقيم زمن االحتجاز .3 الجدول ومزارع الكالس بأعمارها المختلفة مصدر الفايسلين زمن االحتجاز )دقيقة( وجود الفايسلين )%( مساحة المنحني )%( 011 21.11 0.10 )المقارنة( القياسي Aفايسلين 2.02 52.51 0.80 اوراق النباتات البذرية الكالس المستحث من السيقان تحت الفلقية 00.00 21.10 0.80 يوماً 01 01.11 00.00 0.12 يوماً 52 1.21 1.22 0.20 يوماً 21 وتقدير نسبة وجوده في اوراق نبات كرز االرض البذرية ومزارع الكالس Physalin Bتشخيص HPLCطة ابوس ن حقن العينات المختلفة في كروماتوكرافيا السائل عالي االداء احتوائها ععبّرت المنحنيات الناتجة ين وعلى يسلالقياسية الفابداللة زمن االحتباس المسجل لكل منها مع زمن احتباس العينة Physalin ستيرويد النحو االتي: النباتات البذرية Physalin( عن احتواء مستخلص عينات االوراق HPLCأوضحت المنحنيات المسجلة بوساطة ) B اعتماداً على قيم زمن االحتباسRetention time دقيقة مقاربة مع قيم زمن احتباس 2.11والبالغة .5جدول ،القياسية Physalinعينة القياسي مع نسب مساحة Physalinوكشفت النتائج عن اختالفات واضحة في نسبة مساحة منحني ( واكدت البيانات وجود A:1 المعزول من عينات النباتات البذرية )شكلPhysalin B المنحنيات المسجلة Physalin B 0.1في اوراق النباتات البذرية بنسبة وجود بلغت%. المزارع النسيجية في مستخلصات مزارع الكالس بعمر Physalin B وجود HPLCطة اظهرت نتائج التشخيص بوسأ جدول )المعزول منها Bالمشتق من السويقة تحت الفلقية بداللة زمن االحتباس للفايسلين ايوم 21و 52و 01 لألوراقمسجل يوما عن النسبة المئوية لمساحة المنحني ال 01ارتفاعا ملحوظا في مزارع الكالس بعمر (5 بتقدم عمر ( ثم بدأت باالنخفاض B :1 يوما )شكل 52وازدادت هذه النسبة عند العمر ،( A:1 )شكل (. C:1 شكليوما ) 21المزرعة الى البذرية Physalis angulataنبات المعزول ونسب وجوده في أوراق Physalin Bقيم زمن االحتجاز .2 الجدول المختلفة بأعمارهاومزارع الكالس وجود الفايسلين )%( مساحة المنحني )%( زمن االحتجاز )دقيقة( مصدر الفايسلين 011 00.18 2.10 )المقارنة( القياسي Bفايسلين 0.1 01.01 5.00 اوراق النباتات البذرية الكالس المستحث من السيقان تحت الفلقية 01.12 02.51 2.11 يوماً 01 121.21 10.11 2.10 يوماً 52 22.21 51.51 2.02 يوماً 21 http://www.agriculmag.uodiyala.edu.iq/ المهداوي ومطشر 1101، 001 – 001(: 0)01مجلة ديالى للعلوم الزراعية، 002 http://www.agriculmag.uodiyala.edu.iq/ مع تقدم عمر المزرعة في النتائج المشار اليها انفا Bو Aفي نسب تواجد مركب الفايسلين ةان الزياد طور :يمر بثالثة اطوار هي Sيأخذ شكل الحرف الذي قد يكون بسبب ان منحني نمو المزارع النباتية ة نواتج األيض االولي خاللهالطور االسي الذي تزداد ويتبعه،التباطؤ والذي خالله ينعدم النمو تقريبا صل بعدها وت، ويتضاعف النسيج بسرعة مستهلكا مغذيات الوسط وبالنتيجة قلة مركبات األيض الثانوية تسجل ارتفاعا في نواتج األيض المزارع الى الطور الثالث المتمثل بطور االستقرار وهي المرحلة التي الثانوي نتيجة لتوقف معدل األيض االولي واستغالل المخزون من النواتج االيضية االولية لبناء النواتج (.Ramawat ،1111االيضية الثانوية ) اسابيع ربما يعود الى 1ان سبب انخفاض كمية مواد األيض الثانوي مع كبر عمر الكالس وصوال الى لمزرعة وحاجتها الى اعادة الزراعة وتحولها الى المرحلة االخيرة وهي مرحلة عدم القدرة على كبر عمر ا وما هفيالمواد الغذائية في الوسط وزيادة تراكيز المواد السامة دنتيجة لنفا unviability cultureالتطور يادة المواد الفينولية.يميز هذه المرحلة تحول لون المزارع واالوساط الى اللون البني الناتج عن ز يوم 31( وكالس السيقان تحت الفلقية بعمر B) ( والمعزول من اوراقA) منحنيات الفاسلين للعينة القياسية .4 شكلال (C والكالس بعمر )يوم 24 (D والكالس بعمر )يوم 21 (E لنباتات )Physalis angulata L. بوساطةHPLC A B D E C http://www.agriculmag.uodiyala.edu.iq/ المهداوي ومطشر 1101، 001 – 001(: 0)01مجلة ديالى للعلوم الزراعية، 001 http://www.agriculmag.uodiyala.edu.iq/ المصادر . توزيع القلويدات في بعض االنواع البرية من العائلة الباذنجانية 0810خلود وهيب عبود. ،السامرائي Solanoceae كلية العلوم. .جامعة بغداد .ق. رسالة ماجستيرفي العرا .الناشرين السوريين . موسوعة النباتات الطبية المصورة. الطبعة األولى. اتحاد1118العرقاوي، نبيل. . دراسة مظهريه وتشريحيه ألنواع بريه مختارة من العائلة الباذنجانية1112 سناريا عباس جعفر. ،العالق (Solanaceae) كليه العلوم للنبات. .جامعه بغداد .في العراق. رساله ماجستير Anonymous, 1969. The welth of India. Publication and information directorate. Vol. 8. CSIR, New Delhi. Azlan, G. J., M. Marziah, M. Radzali and R. Johari. 2005. Accumulation of physalin in cell and tissues of Physalis minima L. Acta. Hort., 2: 53-59. Azlan, G. J., M. Marziah, M. Radzali and R. Johari. 2002. Establishment of Physalis minima hairy roots culture for the production of physalins. Plant Cell Tiss. Org. Cult., 69: 271-278. Chiang, H. C., S. M. Jaw and P. M. Chen. 1992. Inhibitory effects of physalin B and physalin F on various human leukemia cells in vitro. Anticancer Research, 12: 1155-1162. Karthikeyani, T. P. and K. Janardhanan. 2003. Ethno-Medico-Botanical studies of the tribals of lower palani hills, south India. Asi. J. Microbiol. Biotechnol. Environ. Sci., 5: 467 - 497. Murashige, T. and F. Skoog. 1962. A revised medium for rapid growth and bioassays with tobacco cultures. Physiol. Plant., 15: 473-497. Osho, A., T. Adetunji, S. O. Fayemi and D. O. Moronkola. 2010. Antimicrobial activity of essential oils of Physalis angulate L. Afr. J. Tradit. Complement Altern. Med., 7(4): 303-306. Ramawat, K. G. 2008. Plant Biotechnology. S. Chand and Company Ltd. 3rd edition, New Delhi, India. Sarin, R. 2005. Useful metabolites from plant tissue cultures. Biotech., 4: 79-93. Sheeba, E., S. Palanivel and S. Parvathi. 2013. Effect of plant growth regulators on callus induction in Physalis minima L. Intern. J. of Innovative Res. in Sci. Engineering and Technology, 2(9):4847-4851. Silva, M. T., S. M. Simas, T. G. Batista, P. Cardarelli and T. C. Tomassini. 2005. Studies on antimicrobial activity In vitro of Physalis angulata L. (Solanaceae) fraction and physalin B bringing out the importance of assay determination. Mem. Inst. Oswaldo Cruz., Rio de Janeiro, 100(7): 779-782. http://www.agriculmag.uodiyala.edu.iq/ المهداوي ومطشر 1101، 001 – 001(: 0)01مجلة ديالى للعلوم الزراعية، 001 http://www.agriculmag.uodiyala.edu.iq/ IDENTIFICATION OF PHYSALIN ISOLATED FROM LEAVES AND CALLUS TISSUES CULTURES OF Physalis angulata L Muthana M. I. Al-Mahdawe1, 3 Sarah. M. Hatam2 Dept. of Biology-College of Education for Pure Sciences-Univ. of Diyala, Iraq. 1 Corresponding author: sadeh1970@gmail.com ABSTRACT This study was conducted in the plant tissue and cell culture laboratory department of Biology at the College of Education for Pure Sciences, University of Diyala, during the period October 2015 – 2016 May. The aim was to estimate of physalin one of the secondary metabolic product in Physalis angulata L. plants from leaves and callus culture derived from hypocotyl of sterile three weeks old seedlings and induction on MS medium supplemented with 0.3 mg l -1 2,4-D +0.25 mg.l-1BA . Chromatography adopted the results of high performance liquid HPLC in the diagnosis of isolated physalin and estimate the proportion of its presence amounting to 181.25, and 155.53% for each of the physalin A and B respectively and leaves of seed plants. The convergence of their presence ratio in callus age of 30 days, amounting to 11.33 and 12.25%, respectively. Increasing of physalin was observed with increasing the age of culture to 45 days, and its presence ratios reached in these culture 18.77% for physalin A and 250.6% for physalin B. It was observed that these values began to decline with advancing age of the culture which reached their values to 7.6 and 66.5%, respectively, at the age of 60 days. Overall, these data indicate that these cultures represent a sustainable favorite sources for physalin. Key words: Physalin, Physalis angulata, Callus induction, Micropropagation. http://www.agriculmag.uodiyala.edu.iq/ mailto:sadeh1970@gmail.com