محمد وآخران 2024، 74 – 74 (:2)9مجلة ديالى للعلوم الزراعية، 74 http://www.agriculmag.uodiyala.edu.iq/ في بعض الخطوط Isatis tinctoriaدراسة التاثير السمي للمستخلصات الكحولية لنبات الوسمة الخاليا السرطانية رياض حميد نصيف خزعل ضبع وادي ابراهيم هادي محمد Bioteciraq@yahoo.comكلية العلوم ديالى –قسم علوم الحياه الخالصة اجريت هذه الدراسة لمعرفة تاثير بعض المكونات الفعالة الموجودة في اوراق نبات الوسمة اذ تم من اوراق نبات الوسمة ودراسة التأثير السمي لهذه المستخلصات استخدام مستخلصات مائية وكحولية وسرطان العضلة البشري Hela cell lineعلى نمو الخاليا الورمية المتمثلة بخط خاليا سرطان الرحم RD ومقارنتها في المختبر وقد اظهرت النتائج فروق معنوية في التاثير السام على الخطوط السرطانية ساعة. وأظهرت 48و 24تركيز ومدة التعريض حيث شملت الدراسة فترة تعريض اعتمادا على ال وذلك باستخدام تسعة لخام اعتمد على التركيز المستخدمالنتائج ان التأثير السمي لكال المستخلصين ا مايكروغرام 8000,4000,2000,1000,500)، 250، 125، 62.5، (31.5تراكيز لكل منهما وهي من تعريضها (Hella)في خط خاليا (P<0.05)كان للمستخلص المائي الخام تأثير معنوًي ،2-مل للمستخلصين أذ 2-مل مايكروغرام 8000وكانت أعلى نسبة تثبيط نمو عند التركيز ،للتراكيز المستخدمة خط وبلغت اعلى نسبة تثبيط نمو في ،ساعة 48على التوالي بعد مدة تعريض 93.09و 75.69%بلغت . وكانت نسبة تثبيط 2-مل مايكروغرام 8000عند التركيز %71.42للمستخلص المائي (RD)خاليا ساعة. 48بعد مدة حضن 77.8%هذا المستخلص لخط خاليا وللتركيزنفسه .القلويدات ،نبات الوسمة ،الخاليا السرطانيةالكلمات المفتاحية: المقدمة نالت األعشاب الطبية اهتماماُ كبيراُ منذ القدم وذلك لقدرتها الكبيرة على تسكين األلم والشفاء، وال نزال نعتمد عليها حتى يومنا هذا في صناعة عدد كبير من االدوية ألن طب األعشاب يكمل العالجات التقليدية في الغالب فيوفر أدوية مأمونة على الرغم من ان بعض النباتات قد تنتج آثار جانبية على غرار تتوقف قدرة الدواء كل األدوية، لذا فمن الضروري أال تؤخذ وتستخدم بعض منها اال باشراف ممارس. عليها لذا بدأ الباحثون العشبي على التأثير في أنظمة الجسم على المكونات الكيميائية التي يحتوي باستخالص وعزل هذه المواد من النباتات في القرن الثامن عشر ومنذ ذلك الوقت أعتدنا النظر الى (. زاد االهتمام بالمكونات الفعالة )مركبات 1) ة المكونات الفعالة التي تحتويهااالعشاب وتأثيراتها بدالل ك تلك المركبات خصائص عالجية تختلف في تأثيراتها االيض الثانوي( بوصفها عالجاُ للسرطان أذ تمتل ل الخلية الورمية او ايقاف في الخلية السرطانية اذ قد تكون لهذه المركبات فعالية تثبيطية تؤدي الى قت ومن هذه المركبات التي اثبتت فعاليتها المثبطة لتكاثر الخاليا السرطانية هي القلويدات وتعد (،2) نموها المركبات الفعالة الموجودة في المستخلصات النباتية، أذ تمتاز بسميتها العالية للخاليا من أهم وأكثر في مرحلة تسبق االنقسام او الخلية ومنها االنقسام الخلوي اوالسرطانية نتيجة تأثيرها في عدة آليات في من أهم هذه القلويدات و Apoptosis(3.) تحفيز الخاليا السرطانية للدخول في مرحلة الموت المبرمج vinca alkaloid (vincristine ،vinblastine )colchicine و maytansine(وtaxanes، paclitaxel وخاصة )docetaxel التي تستخدم بشكل كبير بوصفها مركبات مضادة لالنقسام من ال ( التي لها دور مهم في انفص)خيوط المغزل ديناميكية نبيبات المغزلخالل عملها على ( ونظراً للدور الذي تقوم به النبيبات الدقيقة في انقسام الخلية 4) كروموسومات خالل االنقسام الخيطيال http://www.agriculmag.uodiyala.edu.iq/ http://www.agriculmag.uodiyala.edu.iq/ محمد وآخران 2024، 74 – 74 (:2)9مجلة ديالى للعلوم الزراعية، 74 http://www.agriculmag.uodiyala.edu.iq/ ضد Chemotherapeutic drugsاالمرالذي جعلها الهدف المناسب لتطور ادوية العالج الكيميائي حث عن انواع اخرى من الطبيعي للخاليا السرطانية، لذا صار التوجه للبالنمو السريع والتوالد غير المركبات منها الكاليوسيدات الستخالصها ومعرفة تاثيرها في االنقسام. ونظراُ الحتواء نبات الوسمة Isatis tinctoria نبات الوسمة االسم الشائع له هو:على مركبات الكاليوسيدات لذا تم اختيار النبات. يصنف نبات الوسمة ضمن رتبة ورد النيل منها:يُطلق على هذا النبات عدة أسماء في اللغة العربية . الوسمة من نباتات الزينة تزرع في (5القرنفليات فصيلة الصليبية وأغلب نباتات هذه العائلة سامة ) ، السنة الثانية تعطي زهور جذابةالحدائق لتعطي في السنة االولى االوراق مفيدة لتصنيع االصباغ و ستوطن بالد الشام والمغرب ق والمتنزهات والطرق الخارجية. ويغالبا مايستخدم في تزيين الحدائ تشر النبات في شمال مناطق ، وكل مناطق اوروبا لكونه حساساً لدرجات الحرارة المنخفضة وينالعربي أتجهت أنظار الباحثين في السنوات األخيرة الى أهمية استخدام بعض األعشاب الطبية في (.6) العراق Iastisالمعزول من نبات الوسمة Tryptanthrinقلويد السرطان منها مادةمحاولة لعالج مرض tinctoria وجد انه يثبط عدة أنواع من الخطوط الخلوية السرطانية البشرية المقاومة للعقاقير اذ .(7)لخاليا وحثها على الموت المبرمج المتعددة من خالل منع بلمرة النبيبات الدقيقة وتثبيطه لتكاثر ا الدراسات العراقية الحديثة التي اهتمت بهذا الجانب ونجحت في استخدام المستخلصات النباتية في ومن Sonchus تثبيط نمو خطوط الخاليا السرطانية خارج الجسم الحي وداخله والتي شملت نبات المرير oleraceus (8)، ونبات المديدConvolvulues arvensis (9 إذ توصلت هذه الدراسات إلى ) ان لهذه المستخلصات تأثيرات سمية في مختلف أنواع خطوط الخاليا السرطانية، ومازالت البحوث جارية ومنها الدراسة الحالية الختبار فعالية المستخلصات النباتية سعياً ومحاولة إليجاد مواد فعالة ضد مرض السرطان. المواد وطرائق البحث Isatis tinctoriaنبات الوسمة .1 شكلال وادي تم الحصول على النبات من شمال العراق وتم تصنيف النبات من قبل الدكتور خزعل ضبع ، واجريت خطوات العمل كاآلتي:في كلية العلوم جامعة ديالى Mukherjee حسب ما ورد فيبللمستخلصات المائية الخام حضرت المستخلصات النباتية 1- ستخدام جهاز السكسوليت االكحولية الخام للنبات بستخلصات حضرت المو ،(2002وآخرون ) Soxhlet المتبعة في ، وحسب الطريقةLopus (2002). :خطوط الخاليا السرطانية اشتملت نوعين من خطوط الخاليا السرطانية 2- .250خط خاليا سرطان الرحم استعمل هذا الخط عند التمريرة -أ http://www.agriculmag.uodiyala.edu.iq/ http://www.agriculmag.uodiyala.edu.iq/ محمد وآخران 2024، 74 – 74 (:2)9مجلة ديالى للعلوم الزراعية، 79 http://www.agriculmag.uodiyala.edu.iq/ .235استعمل هذا الخط عند التمريرة البشريخط خاليا سرطان العضلة -ب مصل %10المزود RPMI1640تم الحصول على هذه الخطوط المذكورة وهي منماة على وسط Freshneyرع النسيجي تحت ظروف معقمة بحسبواجريت الخطوات الخاصة بالزالعجل البقري 3سم 50فرسين إلى وعاء الزرع النسيجي حجم –مل من محلول التربسين 2 أضيف وكاآلتي: (1994( الحاوي على الخاليا بعد تفريغه من الوسط الزرعي وغسله بمحلول ملحي المعقم، ثم حرك الوعاء برفق دقيقة لتفكيك الخاليا الملتصقة وكذلك خلخلة التصاقها 5-10 لمدة م 37وحضنت في الحاضنة بحرارة باستخدام صبغة (12)ء للحصول على خاليا مفردة. ُعدت الخاليا الحية لكل نوع على وفق بجدار الوعا ، إذ تأخذ الخاليا الميتة الصبغة ببضع ثوان مما يجعلها سهلة التمييز (Trypan blue)التريبان الزرقاء (Improved تم حساب الخاليا باستعمال شريحة العّد المجهري من الخاليا الحية ذات اللون البّراق. double neubauer rulingمل من وسط 10الحاوي على الخاليا المفككه نحو ( أضيف الى الوعاء ، وتم تحريك الوعاء جيداً وبعدها أفرغت محتوياته الى وعاء آخر جديد ((RPMI-1640نمو جديد بحيث يكون مستوى الوسط الزرعي مع الخاليا متساوياً بين الوعائين وبذلك تم الحصول على المزرعة بعد أن كتب عليها معلومات م 37. حضنت األوعية بحرارة (Subculture or Passage)الثانوية وتاريخ تكوين المزرعة الثانوية، وتمت (new passage)اليا ورقم التمريرة الجديدة كاملة عن نوع الخ متابعة األوعية يومياً للتأكد من خلوها من أي تلوث، وأن الخاليا بحالة جيدة وذلك بفحصها بوساطة . وعندما تصبح الخاليا ذات نمو جيد متمثل بتكوين (Inverted microscope)المجهر مقلوب الطور تكون الخاليا جاهزة لالستعمال في فحص (Confluent monolayers)طبقة احادية كاملة من الخاليا السمية الخلوية. اختبار السمية الخلوية للمستخلصين الخام في نمو الخطوط الخلوية السرطانية النسيجي ( الى وعاء الزرع فرسين –ق أضافة محلول )التربسين ُجهز عالق الخاليا عن طري مل من الوسط الزرعي المزود بالمصل وقد تم مزج عالق الخاليا جيداً 20، ثم أضيف لهمل 50حجم -96)مل بعد كل مزجة الى كل حفرة من حفر طبق الزرع النسيجي ذي القعر المسطح 0.2وأخذ منه Microtiter plates) حاضنة بحرارة وذلك باستعمال ماصة أوتوماتيكية دقيقة، تركت األطباق في ال ساعة الى حين التصاق الخاليا في الحفرة، وبعدها تّم التخلص من 12-18لمدة تراوحت بين م 37 مل من التراكيز المحضرة آنياً لكل من المستخلص 0.2الوسط الزرعي القديم في الحفر، وأضيف وهي Serum Free Media (SFM)المائي والكحولي باستعمال الوسط الزرعي الخالي من المصل ، وبواقع اربعة 2-مل ( مايكروغرام8000 ،4000 ،2000 ،1000، 500، 250 ،125، 31.5، 62.5( DMSO (dimethal slfoxid)ل اربعة مكررات للسيطرة باستخداممكررات لكل تركيز. كما تم عم مل من الوسط الزرعي الخالي من 0.2 والتي أضيف لها PBSواربعة مكررات للسيطرة اضيف اليها بعد مرور مدة التعريض نصف ساعة وبحسب طريقة .م 37المصل، حضنت األطباق بدرجة حرارة Hoesel ( ،2999). 50أخرج الطبق من الحاضنة وأضيف l من صبغة البنفسج البلوري لكل حفرة دقيقة، بعدها اخرج الطبق وأزيلت محتوياته وغسلت 20وأعيد الطبق الى الحاضنة ليحضن لمدة لحين زوال الصبغة الزائدة وتركت الخاليا لتجف )إذ ان الخاليا الميتة تأخذ الصبغة أما (PBS)بمحلول الحية فال تأخذها، قُرأت النتائج باستخدام جهاز المطياف الضوئي الخاص باطباق المعايرة الدقيقة بطول تم تحديد معدل تثبيط النمو للخاليا السرطانية على وفق المعادلة المشار اليها في نانوميتر. 492موجي Honda, و Tostirisuk، (2949 ) من خالل تحويل قيم التأثير السمي للمستخلصين المائي والكحولي :الخلوية السرطانية الى نسب مئؤيةلنبات المديد في الخطوط http://www.agriculmag.uodiyala.edu.iq/ http://www.agriculmag.uodiyala.edu.iq/ محمد وآخران 2024، 74 – 74 (:2)9مجلة ديالى للعلوم الزراعية، 70 http://www.agriculmag.uodiyala.edu.iq/ B/A) x 100-= (A Inhibition Rate (IR)%. ج والمناقشةالنتائ Hellaالخط الخلوي السرطاني ساعة 24المستخلص المائي والكحولي لنبات الوسمة لمدة تعريض Hellaتأثيراً مثبطاً في نمو الخط الخلوي السرطاني المائي إن لهذا المستخلص 1يبين الجدول وبفرق معنوي عن السيطرة إذ بلغت 2-مل مايكروغرام 62.25بدأ بالتركيز ،ساعة 24ولمدة تعريض عند إستخدام %72.69و %50.00وأزدادت إلى 2-مل مكغم 62.25عند التركيز %7.9نسبة التثبيط وكانت الفروق معنوية بين جميع التراكيز ،على التوالي 2-مل مكغم 8000و 4000التركيزين 500وبين التركيزين 2-مل مكغم 31.25و 15.625 المستخدمة والسيطرة ما عدا أقل تركيزين وهما معنوي بين كافة التراكيز على التوالي وهناك فرق 2-مكغم مل 2000و 1000وبين التركيزين 1000و Hellaإن للمستخلص الكحولي تأثيراً مثبطاً في نمو الخط الخلوي السرطاني 1يبين الجدول .االخرى وبفرق معنوي عن السيطرة إذ بلغت 2-مل مايكروغرام 15.6بدءاً بالتركيز ،ساعة 24ولمدة تعريض وتدريجيا إلى 2-مل مكغم 1000 عند التركيز %61.62وإزدادت النسبة إلى ،%14.70نسبة التثبيط . وكان هناك فرق معنوٌي بين التراكيز المستخدمة والسيطرة 2-مل مكغم 8000عند التركيز 91.87% بين كافة وهناك فرق معنوي 2-مايكروغرام مل 125و 62.5ولم يكن الفرق معنوياً بين التركيزين . التراكيز االخرى التثبيط في الخط تاثير تراكيز مختلفة من المستخلص المائي والكحولي الخام الوراق الوسمة على نسب .1جدول ال الخطا القياسي(± ساعة )المتوسط 24لمدة تعريض Hellaالسرطاني التركيز µg ml-2 المستخلص الكحولي الخام المستخلص المائي الخام الخطأ القياسي± نسبة التثبيط الخطأ القياسي ±نسبة التثبيط h 0.00±1.15 j 0.00± 1.17 السيطرة 15.625 h 0.64± 1.48 i 0.24± 5.40 *31.25 h 0.79± 4.09 h 0.79±14.70 *62.5 f 0.81±7.86 g 0.81± 18.61 *125 f 0.30± 13.16 g 0.30±20.95 250 e 0.23±24.89 f 0.23±34.90 *500 d 0.33± 31.28 e 0.33±47.73 *1000 dc 1.12± 36.21 d 1.12± 61.62 *2000 c 0.37± 41.28 c 0.37± 70.46 *4000 b 0.60±50.50 b 0.60± 75.08 *8000 a 3.93± 72.69 a 3.93± 91.87  ( الحروف المختلفة في العمود الواحد تدل على وجود فروق معنوية عند مستوىP<0.05). ساعة 48المستخلص المائي والكحولي لنبات الوسمة ولمدة تعريض من خالل تجارب إختبار سمية المستخلص المائي الخام لنبات الوسمة في 2جدول اللوحظ من 24ساعة بأن الفعالية التثبيطية كانت أعلى مما كانت عليه عند التعريض لمدة 48لمدة Hellaخاليا ظهرفرق 2-مل مكغم 62.5. وبدءاً بالتركيز المستخلصات مع الخاليا لم تتغير ، إال أن سلوكية تلكساعة عند %75.69و % 50.93وأزدادت إلى %8.83معنوي بالمقارنة مع السيطرة إذ بلغت نسبة التثبيط http://www.agriculmag.uodiyala.edu.iq/ http://www.agriculmag.uodiyala.edu.iq/ محمد وآخران 2024، 74 – 74 (:2)9مجلة ديالى للعلوم الزراعية، 72 http://www.agriculmag.uodiyala.edu.iq/ كانت الفروق معنوية بين جميع التراكيز .على التوالي 2-مل مكغم 8000و 4000إستخدام التركيزين لم تكن 2-مل مكغم 2000و 1000و بين التركيز 125و 62.5المستخدمة والسيطرة ما عد بين التركيز إن للمستخلص الكحولي تأثيراً مثبطاً في نمو الخط الخلوي 2يبين الجدول ،هناك فروق معنوية وبفرق معنوي عن السيطرة إذ بلغت نسبة 2-مل مايكروغرام 15.6بدءاً بالتركيز Hellaالسرطاني وتدريجيا إلى 2-مل مكغ 1000 عند التركيز %62.28وإزدادت النسبة إلى ،%15.42التثبيط . وكان هناك فرق معنوٌي بين التراكيز المستخدمة والسيطرة 2-مل مكغم 8000عند التركيز 93.09% وهناك فرق معنوي بين كافة 2-مايكروغرام مل 125و 62.5كن الفرق معنوياً بين التركيزين ولم ي .التراكيز االخرى تاثير تراكيز مختلفة من المستخلص المائي والكحولي الخام الوراق الوسمة على نسب التثبيط في الخط .2جدول ال الخطا القياسي(± ساعة )المتوسط 48لمدة تعريض Hellaالسرطاني التركيز 1-ml µg المستخلص الكحولي الخام المستخلص المائي الخام الخطأ القياسي± نسبة التثبيط الخطأ القياسي ±نسبة التثبيط h 0.00±1.17 j 0.00± 1.18 السيطرة 15.625 h 0.11± 1.74 i 0.62± 5.58 *31.25 h 0.16± 4.61 h 0.65±15.24 *62.5 f 0.28±8.38 g 1.12± 19.17 *125 f 3.88± 13.81 g 0.26±21.74 250 e 0.55±23.73 f 0.70±35.76 *500 d 0.33± 32.40 e 0.64±48.72 *1000 dc 0.32± 37.12 d 1.12± 62.28 *2000 c 4.40± 41.92 c 0.43± 72.31 *4000 b 0.39±50.93 b 0.33± 76.61 *8000 a 1.17± 75.69 a 3.70± 93.09 .(P≤0.05مستوى ) الحروف المختلفة في العمود الواحد تدل على وجود فروق معنوية عند* بتأثير المستخلصين المائي والكحولي لنبات الوسمة Hellaمقارنة التأثير السمي على الخط للمستخلصين المائي Hellaلم يكن هناك أي فرق معنوي في نسبة التثبيط للخاليا السرطانية 250و 62.5و 15.5والكحولي الخام وبعد مدة تعريض اربعة وعشرين ساعة وعند التراكيز بالنسبة للتثبيط ما ( P≤0.05في حين اظهرت التراكيز االخرى وجود فروق معنوية ) 2-مايكرغرام مل ،الخامجميعها لصالح المستخلص الكحولي بين المستخلصين المائي الخام والكحولي الخام وكانت .2الجدول A B C ساعة للمستخلص المائي والكحولي 48بعد 1-مل مكغم 8000عند تركيز Hellaمقارنة بين خاليا . 2شكلال http://www.agriculmag.uodiyala.edu.iq/ http://www.agriculmag.uodiyala.edu.iq/ محمد وآخران 2024، 74 – 74 (:2)9مجلة ديالى للعلوم الزراعية، 72 http://www.agriculmag.uodiyala.edu.iq/ (A الخط الخلوي السرطاني )Hella ( الذي يمثل السيطرةB الخط الخلوي )Hella المعامل بالمستخلص المائي عند المعامل بالمستخلص الكحولي عند تركيز Hellaالخط (C. )الفراغات بين الخاليا ويوضح 2-مل مكغم 8000تركيز .الفراغات بين الخالياويوضح 2-مل مكغم8000 RDالخط الخلوي ساعة 24المستخلص المائي والكحولي لنبات الوسمة لمدة تعريض RDتاثيرا معنويا مثبطا لخاليا السرطان ان للمستخلص المائي لنبات الوسمة 3يتبين من الجدول مايكروغرام 8000ولجميع التراكيز ومن جانب تفوق التركيز ( P≤0.05مقارنة مع مجموعة السيطرة ) 62.5و 125و 250و 500و1000و 20000و 4000ثم تاله التراكيز) على بقية التراكيز االخرى 2-مل معنوية بين ناحية اخرى لم تكن هناك اي فروق . ومن2-مكغم مل 15.5( واخيرا التركيز 31.5و .2-مل مايكروغرام 2000و 1000وبين التركيزين 2-ملمكغم 1000و 500التركيزين تاثير تراكيز مختلفة من المستخلص المائي والكحولي الخام الوراق الوسمة على نسب التثبيط في الخط .3جدول ال الخطا القياسي(± ساعة )المتوسط 24لمدة تعريض RDالسرطاني التركيز µg 2-ml المستخلص الكحولي الخام المستخلص المائي الخام الخطأ القياسي± نسبة التثبيط الخطأ القياسي ±نسبة التثبيط J 0.00±1.14 j 0.00± 1.15 السيطرة 15.625 i 0.014± 1.50 i 0.17± 5.40 31.25 h 0.45± 5.41 i 0.49±6.75 *62.5 f 0.33±8.98 h 0.36± 10.48 *125 f 0.33± 9.99 g 0.31±13.13 *250 e 1.40±12.53 f 0.79±17.08 500 d 0.33± 17.53 e 0.63±21.35 1000 dc 3.18± 23.82 d 1.36± 32.81 *2000 c 0.48± 31.71 c 1.20±52.86 *4000 b 1.99±40.15 b 0.59± 67.75 *8000 a 0.86± 68.86 a 0.58±76.31 .(P≤0.05وجود فروق معنوية عند مستوى ) مختلفة في العمود الواحد تدل علىالحروف ال* ساعة 48المستخلص المائي والكحولي ولمدة تعريض ساعة أظهر 48بالمستخلصات المائي الخام للوسمة بجميع تراكيزها لمدة RDإن تعريض خاليا فعاليات تثبيطية تفوق تلك التي أظهرتها مثيالتها من المستخلص ذاته والتركيز ذاته عندما كانت مدة عند %68.86، 31.71، فقد أعطى المستخلص المائي الخام فعالية تثبيطية بلغت ساعة 24التعريض ، بينما ساعة 24لتعريض على التوالي عندما كانت مدة ا 2-مل مايكروغرام 8000، 2000التركيزين ، هذه النتائج ساعة 48عند التركيزين ذاتهما على التوالي عند مدة التعريض %71.24، 33.22بلغت بدءاً RD. إن للمستخلص الكحولي تأثيراً مثبطاً في نمو الخط الخلوي السرطاني 4يوضحها الجدول وازدادت النسبة .% 5.36وبفرق معنوي عن السيطرة بنسبة تثبيط ،2-مايكروغرام مل 15.62بالتركيز عند التركيز %77.85وإزدادت حتى بلغت 2-مل مايكروغرام 4000عند التركيز %68.57 اذ بلغت ينما لم يظهر وجود فرق معنوي هناك الفرق معنوياً بين التراكيز كافة والسيطرة ب .2-مل مكغم 8000 .لم يظهرا اي فرق معنوي بينهما 2-مايكروغرام مل 31.25و 15.62التركيزين بين المعاملة بالمستخلص المائي والمستخ Hella(: نسبة التثبيط في خط 7-3الشكل) لص القلويدي الخام http://www.agriculmag.uodiyala.edu.iq/ http://www.agriculmag.uodiyala.edu.iq/ محمد وآخران 2024، 74 – 74 (:2)9مجلة ديالى للعلوم الزراعية، 75 http://www.agriculmag.uodiyala.edu.iq/ تاثير تراكيز مختلفة من المستخلص المائي والكحولي الخام الوراق الوسمة على نسب التثبيط في الخط .4جدول ال الخطا القياسي(± ساعة )المتوسط 48لمدة تعريض RDالسرطاني التركيز 1-ml µg المستخلص الكحولي الخام المستخلص المائي الخام الخطأ القياسي± نسبة التثبيط الخطأ القياسي ±نسبة التثبيط i 0.00±1.15 j 0.00± 1.15 السيطرة 15.625 i 0.00± 1.16 i 0.22± 5.36 31.25 h 0.34± 6.29 i 0.15±6.98 *62.5 fh 0.25±9.60 h 0.36± 11.48 *125 gf 0.60± 10.55 g 0.56±14.17 *250 f 0.18±13.78 f 0.62±18.08 *500 e 0.78± 18.61 e 1.31±23.32 1000 d 3.37± 25.25 d 1.36± 33.52 *2000 c 0.58± 33.22 c 0.92±54.92 *4000 b 2.60±45.41 b 0.88± 68.75 8000 a 2.46± 71.42 a 0.93±77.85 متعدد ال( بحسب اختبار دنكن P>0.05الحروف المختلفة في العمود الواحد تدل على وجود فروق معنوية عند مستوى )* الحدود. لمستخلصين المائي والكحولي الخامبتأثير ا RDمقارنة التأثير السمي على الخط السرطاني ان هناك اختالف في سمية RD وجد من النتائج التي اعتمدت على نسب تثبيط الخاليا السرطانية تقاربت نسب التثبيط لكال 62.5ساعة وجد ان التراكيز االقل من 24 المستخلصين . عند فترة تعريض كانت هذه الخاليا اكثر 2-مايكروغرام مل 250و 62.5 ن وعند التراكيز التي تراوحت بينالمستخلصي قد اظهرت فرقا .%17.07 13.13و 10.48حساسية للمستخلص القلويدي الخام وكانت نسب التثبيط عند .%12.77و 9.99و 8.98معنوي بينهما وبين نسب التثبيط للمستخلص المائي الخام التي كانت لمسخلصين متقاربا وعند كانت نسب التثبيط ل 2-مل مكغم 1000و 500التراكيز التي تراوحت بين التراكيز االعلى اصبح تاثير المستخلص الكحولي اكثر حساسية وبفارق معنوي عن المستخلص المائي للمستخلص 2-مكغم مل 8000و 4000عند التركيزين %76.31و 67.75الخام وكانت نسب التثبيط عند مدة .على التوالي %68.86و 31.5الكحولي الخام وبين نسب تثبيط المستخلص المائي التي كانت تقاربت نسب التثبيط لكال 2-مايكروغرام مل 62.5ساعة وجد ان التراكيز االقل من 48تعريض كانت هذه الخاليا اكثر 2-مايكروغرام مل 500و 62.5المستخلصين وعند التراكيز التي تراوحت بين قد 18.61)%و13.87و10.55 و(9.60 حساسية للمستخلص الكحولي الخام وكانت نسب التثبيط. 9.60اظهرت فرقا معنوي بينهما وبين نسب التثبيط للمستخلص المائي الخام التي كانت ) كانت نسب التثبيط 2-مل مكغم 1000 التركيز على التوالي. عند 18.61)%و 13.78و10.55و للمسخلصين متقاربا وعند التراكيز االعلى اصبح تاثير المستخلص الكحولي اكثر حساسية وبفارق 2000عند التركيزين %68.75و54.92 معنوي عن المستخلص المائي الخام وكانت نسب التثبيط 33.22التي كانت للمستخلص الكحولي الخام وبين نسب تثبيط المستخلص المائي 2-مكغم مل 4000و على التوالي. %45.41و http://www.agriculmag.uodiyala.edu.iq/ http://www.agriculmag.uodiyala.edu.iq/ محمد وآخران 2024، 74 – 74 (:2)9مجلة ديالى للعلوم الزراعية، 77 http://www.agriculmag.uodiyala.edu.iq/ A B C ين المائي والكحولي للمستخلص تعرض ساعة 48مل بعد مكغم 8000عند تركيز RDخاليا مقارنة بين .3الشكل لنبات الوسمة (A الخط الخلوي )RD ( .الذي يمثل السيطرة ويوضح خاليا الخط الكثيفةB) الخط الخلوي RD المعامل بالمستخلص المعامل بالمستخلص الكحولي RDالخط الخلوي (C. )ويوضح الفراغات بين الخاليا 2-مل مكغم 8000المائي عند تركيز .ويوضح الفراغات بين الخاليا 2-مل مكغم 8000عند تركيز دراسات محلية حول امتالك عززت نتائج هذه الدراسة ما توصَل إليه العديد من الباحثين في المستخلصات النباتية فعالية مضادة للخاليا السرطانية، وتعتمد هذه الفعالية بشكل أساس على التركيز وجَد تبايٌن بين تأثير المستخدم من هذه المركبات ونوع المستخلص ومدى حساسية الخاليا السرطانية. يعود إلى طبيعة المركبات الموجودة في كل المستخلصات الخام في خطوط الخاليا المدروسة، قد (، كما يعزى التباين في استجابة 14مستخلص وتفاعلها مع الطبيعة االيضية لكل نوع من الخاليا ) طح الخاليا الخاليا السرطانية تجاه المستخلصات المستخدمة إلى تباين المستقبالت الموجودة على س هرت المستخلصات الخام بشكل عام تأثيرات تثبيطية في . أظ15)) المستخلصات لالنواع المختلفة من تنخفـض بشـكل ، فقد كانت حيوية هذه الخـاليا معتمدة التركيزوعلى مدة التعـريض RDو Hellaخاليا ، وهذا كان مع زيادة تراكيز تلك المستخلصات ، يرافقها ارتفاع الفعالية التثبيطية للمستخلصاتمعنوي المستخلص المائي في هذه المستخلص الكحولي الذي أبدى فعالية أعلى منواضحاً وال سيما في حالة في الحالة الفسلجية لهذه يرجع سبب ذلك إلى احتواء هذه المستخلصات على مركبات تؤثر . والخاليا عند Arrest cell cycleدورة الخاليا السرطانية ات تعمل على إيقاف، واحتوائها على مركبالخاليا الموت كبات تحفز الخاليا السرطانية على، أو احتوائها على مر( (16نعها من التكاثرطور معين وتم عند 86.7%كانت Hep-2( على أعلى نسبة تثبيط لخاليا 17) حصل .(Apoptosis)المبرمج ساعة 48من المستخلص المائي لبذور نبات الكتان لمدة 2-مايكروغرام مل 1000معاملتها بالتركيز ، وجد ذلك التباين ايضا في %86.2كانت RDوفي خط خاليا %89.8كانت AMN-3وفي خاليا RDو Hep-2( في تأثير مستخلصات نبات السعد على الخطوط الخلوية السرطانية (18دراسة . تنفرد الخاليا السرطانية بصفات تفتقر لها مثيالتها الطبيعية، Refوالخط الخلوي الطبيعي AMN-3و ازية والقابلية على الغزو واالنتشار وفرط الحاجة، فضال عن حدوث تغيرات في إذ تتميز باالنته بروتيناتها ومستضداتها السطحية، كذلك تتميز الخاليا السرطانية بنفاذية أغشيتها وهذه الصفة تسهل عملية دخول المركبات إلى داخلها بشكل عشوائي غير منتظم مما يؤثر سلباً في تلك الخاليا ويسهل من صين المائي (. في هذه الدراسة حقق كل من المستخل19ستجابتها للمواد المضادة التي تتعرض لها )ا إذ كانت 2-مل مكغم 8000عند التركيز Hellaأعلى نسبة تثبيط في خاليا ،الخام والكحولي الخام %77.85و RD 71.42بينما كانت نسبة التثبيط في الخط الخلوي ،على التوالي %93.09و 75.69 على التوالي لمدة يومين. وكان الفرق بينهما معنويا في الجرعات األدنى من ذلك فقد حقق المستخلص الكحولي الخام نسبة تثبيط أعلى من المائي الخام ويعزى ذلك إلى اختالف كمية المكونات الموجود في يعود إلى مركبات أخرى وحدة الحجم في كل منهما، كما إن تقارب المستخلصين في الجرعات العالية http://www.agriculmag.uodiyala.edu.iq/ http://www.agriculmag.uodiyala.edu.iq/ محمد وآخران 2024، 74 – 74 (:2)9مجلة ديالى للعلوم الزراعية، 77 http://www.agriculmag.uodiyala.edu.iq/ تعمل تآزرياً مع القلويدات عند تلك الجرعات وهذا يشير إلى إن فضل المستخلص قد يعود إلى القلويدات ونتيجة للخلل Bcl-2أيضاً. تؤثر هذه المركبات كذلك في اآللية السرطانية من خالل تثبيط فعالية الجين حلة الموت المبرمج مثلما هو في العديد من الخطوط الحاصل في هذا الجين تدخل الخلية السرطانية مر إلى إن ( 21(. إذ توصل )20) Human Leukemic cell linesالخلوية لسرطان الدم البشري humanلها دور تثبيطي على الخط الخلوي السرطاني Dophn nucronataالتربينات المعزولة من Myelogenous leukemia لدورة الخلوية عند طور من خالل عملها على إيقاف اG1 أما التانينات ، DNAمن خالل تجزئة شريط HL-60فإنها تؤثر في الخاليا السرطانية للخط الخلوي السرطاني (. ان الميزة المهمة في أدوية العالج الكيميائي هي تهديفها 22وحث الخاليا نحو الموت المبرمج ) ففي دراستنا الحالية، وجدنا إن مستخلصات نبات الوسمة لذا ،السرطانية دون الخاليا الطبيعية الخاليا RDو Hellaكما إنها تؤثر في الخاليا السرطانية من نوع ،رة انقسام الخلية وبأكثر من آليةتؤثر في دو وتؤثر بنسبة اقل في نمو الخاليا الطبيعية عند التراكيز العالية مما يجعل هذا النبات واعداً في عالج عن توافره وسهولة الحصول عليه. السرطان، فضال المصادر Convolvulus. تأثير المستخلص المائي والقلويدي الخام للمديد 2009. محمد ابراهيم هادي ،الربيعي arvensis L. ،رسالة دكتوراه، كلية العلوم في تثبيط الخاليا السرطانية داخل وخارج الجسم .للبنات، جامعة بغداد . onchus olevaceuالمرير اسة تاثير مستخلصات الخام لنبات. دراسة در2009. زينب رزاق، زغير بغداد. جامعة .كلية الطب البيطري .رسالة دكتوراه Allen, J. C. Shuler and S. A. Latt. 1977. A simplified Technique for In vivo analysis of SCE using 5-Brdu tablets. Cyto. Cell. Genet. 18: 231-234. Cannell, R. J. P. 1998. Natural product isolation. Humana Press. New. Jersey. U. K. Chakravarty, H. L. 1976. Plant wealth of Iraq (A dictionary of economic plants) 1. Botany Directorate. Ministry of Agriculture and Agrarian reform, Baghdad, Iraq. Dixon, W. J. 1980. Efficient Analysis of Experimental Observations. Ann. Rev. Pharmacol. Toxicol. 20: 441-62. Harborne, J. B. 1984. Phytochemical Methods. (2nd ed.) Chapman & Hall. London. P. 5. Hoi, L. H. Chan. K. Nai and N. Kwork. 2009. Modulatory effect and action mechanisms of try ptanthrin on murine myloid leukemia cells. Cellular andolecular immunology. 6(5): 335- Freshney, R. I. 2001. Application of cell culture to toxicology. Cell Biology and Toxicology. 17: 213-230. Mukherjee, A. B. Sourar. S. Nabainta and C. Anil. 2001. Advance in anser therapy with plant based natural product. Curent medicinal chem. 1467- 1486. http://www.agriculmag.uodiyala.edu.iq/ http://www.agriculmag.uodiyala.edu.iq/ محمد وآخران 2024، 74 – 74 (:2)9مجلة ديالى للعلوم الزراعية، 72 http://www.agriculmag.uodiyala.edu.iq/ Lopus, M. D. panda. 2006. the enzophenanthridine alkaloid sanguinarine perturbs microtubule assembly dynamic through tubulin binding. A possible mechanism for its ntiproliferative activity. J. FEBS. 273 (10): 2139-50. Hoesel, J. Rand Endicott. 1999. indirubin the active constituent of Chinese antileukemia medicine inhbits cyclin-dependt Kinase Nat. cell boil. 1:60-67. Honda, G., V. Tostirisuk. 1980. Isolation of an antidermatophytic ptanthrin from indigo plants polgonum tinctorium and isatis tinctoria. Planta Medica. 38(3): 275. Jordan, M. A. 2002. Mechanism of action of anti tumor drugs that interact with microtubules and tubulin, Curr. Med. Chem. Anti-Canc. Agents, 2: 1-17. Jone, S. and K. K. Janardhanan. 2000. Antioxidant and Antitumor activity of Ganoderma lucidum (Curtifr.) P. Karstreishi (Apyllophoromycetideae) from south India. Int. J. Med. Mushr., 2: 195- 200. Ge, N. L., S. Ye. N. Zheng. R. Sun. Y. Lin. and Z. Tang. 2003. Prevention of hepatocellular carcinoma in mice by IL-2 137-1 genes co-transfected liver cancer cell vaccines. World J. Gastroenterol. 9: 2182-5. Toshio, N., K. Akiko, M. Yuasa and O. David. 2008. Mechanism of growth of inhibitory effect of blume.Biochem.772(5): 1183-1189. Todd, F. G. F. F. Stermitz. P. Schultheis. A. P. Knight and S. Dargatz. 1995. Tropane alkaloids and toxicity of Convolvulus arvensis; phytochem., 39: 301-3. Sasan, M., N. Leila. and A. Zahra. 2009. Cytotoxic activity of isatis campylocarpa. aniranian endemic plant on human cancer cell lines. j. cell and molecular research. 65: 55-63. Schmidt, M. and H. Bastians. 2007. Mitotic drug target and development of novel anti-mitotic anticancer drugs. Drug Resistance Updates. 10: 162- 181. Sajedi, C., F. Sharifinia and M. Asadi. 2005. A studay of the genus isatis in Iran. rostaniha. 6: 47-66. Wu, G., J. Liu and F. Fang. 1982. Studies on the mechanism of indirubin action in the treatment of chronic granuloytic. Sci. Sin. 25(10): 1071-9. http://www.agriculmag.uodiyala.edu.iq/ http://www.agriculmag.uodiyala.edu.iq/ محمد وآخران 2024، 74 – 74 (:2)9مجلة ديالى للعلوم الزراعية، 74 http://www.agriculmag.uodiyala.edu.iq/ Study toxic effect for extraction alcoholic and aqueous to plant Isatis tinctoria in same cell line Ibraheem H. Mouhammed Khazal D. Wadi Riyad H. Nesief Dept. of Biology-college of Science –Diyala Univ. Bioteciraq@yahoo.com ABSTRACT This study aimed to investigate the effect of the aqueous and crude alcohol extracted from the leaves of Isatis tinctoria on two malignant cell lines Hela and RD. Also this study included evaluation of the effect of these extracts on several cytogenetic parameters. The cytotoxicity of the aqueous extract and crude alcohol extract was investigated on the cancer cells line, Hella and RD. Toxic effect for both extracts was indicated by rate of proliferation inhibition. The alcohol extract showed the inhibition of Hela cell line at percentage (19.17% - 93.03%) more than the aqueous extract (8.95% - 75.69%) at concentrations: 62.5-8000 g ml-1. The rate inhibition of alcohol extract for RD cell line (11.48% - 77.87%) was higher than that of the aqueous extract (9.60%-71.14%) at the concentrations 62.5 and 8000 g ml-1. Both extracts (alcohol extract and aqueous extract) showed almost the same effect at the concentration 8000 g ml-1. Keyword: Cell line, Isatis Tinctoria, Alkaloides. http://www.agriculmag.uodiyala.edu.iq/ http://www.agriculmag.uodiyala.edu.iq/