<4D6963726F736F667420576F7264202D20C72EE32ECF2ED1D6C720D5DFC820E620DDD1EDC7E120CDD3E6E4ED> الجوراني و صادق 2014 ، 100 - 89) : 1( 6 ، الزراعية للعلوم ديالى مجلة 89 PCR. تقنية تشخيص الديدان السلكية التي تصيب درنات البطاطا بأستعمال فريال حسوني صادق *رضا صكب الجوراني . redha_aljorany@yahoo.coom. جامعة بغداد –آلية الزراعة –قسم وقاية النبات -أستاذ مساعد * المستخلص للكشف وتشخيص أنواع الديدان 2009 – 2012للفترة من دراسة حقلية في وسط العراق أجريت وتصيب درنات البطاطا وللزراعتين الربيعية والخريفية Agriotes sppالسلكية التي تعود الى الجنس لبالغات ل) PCR Polymerase Chain Reaction(عفي لسلسلة الدنا بأستعمال تقانة التفاعل التضا درنات البطاطا وهذه تصيب Agriotesعن وجود خمسة أنواع تعود للجنس أظهرت النتائج . واليرقات :االنواع هي Agriotes brevis (Candeze). ، Agriotes lineatus (Linnaeus) Agriotes sputator (Linnaeus ) ،Agriotes obscurus (Linnaeus) Agriotes ustulatus (Schaller). . Agriotesتباعد وراثي بين أنواع الديدان السلكية المشخصة والتابعة للجنس وجدآذلك .دنا ، الديدان السلكية ، تقانة التفاعل التضاعفي لسلسلة ال Agriotes ،RAPD ،ISSR :مفتاحية الكلمات ال المقدمة Solanaceaeالذي يعود للعائلة الباذنجانية .Solanum tuberosum Lمحصول البطاطا يمتلك جنبًا الغذاء المناسب والذي يسهم دورًا رئيسًا في النظام االقتصادي والغذائي البشري عن طريق تأمين ين هم في ازدياد الذ للبشر ستراتيجية األخرى في تغطية المتطلبات المتزايداالالى جنب مع المحاصيل .د مشكًال ما يصطلح باالنفجار السكاني طّرسكاني م بنسبة زيادة و مليون طن 325 وصل الىرقما قياسيا 2007لقد سجل االنتاج العالمي للبطاطا عام يعد الفرد و ،مليون هكتار 20وبمساحة مزروعة تزيد عن سبقتهعن السنوات العشر التي % 4.5بلغت 2007آبر مستهلكي البطاطا في العالم ، في حين تعد المانيا من اآبر مستهلكي البطاطا لعام أ ربي مناالو تتعرض البطاطا لألصابة بعده . )FAO ،2008 (سنة على التوالي/ فرد / آغم 131وبمعدل استهالك Aphisوحشرة المن Phthorimaea operculella (Zell.)عثة درنات البطاطا :أهمهاافات حشرية spp والقفازEmpoasca spp والذبابة البيضاءBemisia tabacii لألمراضالمعروفة بنقلها . )1980العزاوي ،( الفايروسية 2004الجوراني والطويل ،( Leptinotarsa decemlineataخنفساء آولورادو البطاطا بآذلك تصاب والدودة Agriotes sppيدان السلكية وتتعرض البطاطا لألصابة ايضا بحشرات التربة منها الد .) والتي تعتبر Gryllotalpa gryllotalpaوحشرة الكاروب Agrotis ipsilonالقارضة االرضية تعد الديدان السلكية . )2007صادق،(من االفات المهمة الرئيسية على محصول البطاطا في العراق )Wireworms (التابعة لجنس األنواعاطا حيث تعد على البطوالخطرة المهمةاالفات منAgriotes A. obscurus و A. lineatus و A.sputaturعلى محصول البطاطا مثل أهمية األنواع أآثرمن )Vernon وPats،1997 ( . ــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــ . 2012/ 10/ 1 البحث استالم تاريخ . 2013/ 4/ 15 النشر قبول تاريخ دآتوراه للباحث الثاني أطروحةالبحث مستل من الجوراني و صادق 2014 ، 100 - 89) : 1( 6 ، الزراعية للعلوم ديالى مجلة 90 يرقات الديدان السلكية في التربة وتعد من االفات الخطرة اذ تتغذى على الجذور والبذور لمعظم تعيش آبر عند أيدة لمحصول البطاطا ويكون ضررها المحاصيل الزراعية واالعشاب وتعرف بمهاجمتها الشد تكرار زراعتها عدة مرات اذ تهاجم اليرقات درنات البطاطا ابتداء من تكونها مرورا بمراحل نموها تحدث بها انفاقا مختلفة االعماق مما يؤدي الى انخفاض القيمة التسويقية للمحصول ونضجها المختلفة . ) 2007صادق ، ( وتصبح مواضع تغذيتها محالت لالصابة بالفطريات والبكتريا ومن ثم وتقدير ضررها تشخيص االفة الحشرية يعد الخطوة االولى في دراسة حياتها وبيئتها ان من الدراسات الصعبة وذلك لصعوبة التمييز التقليدية الديدان السلكية تشخيص وتعد دراسة ،مقاومتها طح التربة ودورة حياتها سمظهريا بين االنواع سواء آانت بالغات او يرقات فضال عن معيشتها تحت تمتاز بتفردها بعده مميزات هامة آالدقة والخصوصية والحساسية العالية في PCR تقانة ان.ة الطويل في أصبحت التقانة هذه ضرورة البد منها من القطع لذلك االفمعينة ضمن DNAالكشف عن قطعة يا وسريعة خاصة عند الحاجة لتحليل فضال عن انها طريقة عمل سهلة نسب، دراسات الوراثة الجزيئية منها دراسة التنوع الوراثي وايجاد البصمة الوراثية واسعةتطبيقات اصبح لهذا التفاعل . عينات عديدة هذه التقانة لتسهيل ستعملتالحيوانات والنباتات االقتصادية اذ ا تربية وتحسين آل من وآذلك في مجال في التوصيف تعماالتهاصناف جديدة فضال عن اسأاستنباط ةنتائج التضريب والتهجين عند محاول آذلك استخدمت في مجال تحديد .الوراثي االنواع وايجاد العالقة الوراثية وتحديد البعد الوراثي بينها ايضا في مجال تشخيص ستعملتوا .الثبات الوراثي للنباتات الناتجة من زراعة االنسجة النباتية اصبحت من آما . لالنسانالمراض الوراثية والوبائية واالصابات الفيروسية االمراض المختلفة آا Forensicالتقانات التي يعتمد عليها في تحديد االبوة الشرعية ومجال التحقيق الجنائي والطب العدلي medicine . البحثمواد وطرائق ال جمع يرقات وبالغات الديدان السلكية من حقول آلية Agriotes sppبالغة والتابعة النواع الجنس ) 280( جمعت بالغات الديدان السلكية المصائد الفرمونية باستعمالوذلك 1 / 8 / 2010 إلى 1 / 3 / 2010 ابي غريب للمدة من –الزراعة )Yatlor F ( الخاصة بأصطياد بالغات أنواع الجنسAgriotes عن استعمال تسعة أنواع من فضال Csalomonشرآة والتي تم الحصول عليها من Agriotesخاصة بجذب أنواع الجنس الفرمونات ال .اعة لمعهد وقاية النبات في هنكاريالتاب (Plant protection Academy of Science / Budapest / Hungary). ابي –ة دونم في حقول آلية الزراع 1اليرقات فقد جمعت من حقل بطاطا زرع لهذا الغرض بمساحة أما وذلك من خالل اخذ نماذج اسبوعية ابتداءا من . 2010غريب للموسم الزراعي الربيعي والخريفي x 30يحيط به من تربة وآانت العينة عبارة عن نبات آامل مع ما زراعة الدرنات وحتى جني الحاصل 30 x 30 سم )Toba و Turner ،1981 (فتش بشكل دقيق توضع على قطعة من النايلون وتفتت وت للتاآد من وجود اليرقات واصابتها للدرنات ، بعد ذلك تجمع اليرقات من الدرنات المصابة بالديدان ) Lindroth ،2007 % (70السلكية ويسجل عددها وتأريخ جمعها ، وتحفظ في االيثانول بترآيز .لغرض تشخيصها فيما بعد Nucleic acid extractionاستخالص الدنا من حشرات DNAباستخالص الحامض النووي ) (2009 وآخرين Roehrdanمدت طريقة اعت الواليات المتحدة االمريكية عزل ) (Promega.الديدان السلكية واستنادا إلى توصيات الشرآة المنتجة CTAB .(Cetyl trimethyl ammonium bromide(وفقا لطريقة DNAالحامض النووي ). (2001وآخرين Schulenburgوالموصوفة من لدن : قياس آمية الدنا مايكروليتر من 5 ليهاإووضع في أنابيب جديدة وأضيف ) ddH20(مايكروليتر من 495اخذ الذي يعتمد Spectrophotometer الطيف الضوئي استخدام جهاز) . DNA stock( المحلول القياسي الموجود عن طريق امتصاص األشعة فوق البنفسجية عند في عمله على قياس آمية الحامض النووي الجوراني و صادق 2014 ، 100 - 89) : 1( 6 ، الزراعية للعلوم ديالى مجلة 91 من الكثافة واحدنانوميتر لحساب ترآيز الحامض النووي في العينة إذ إن آل 260الطول الموجي DNA(مل من سالسل / مايكرو غرام ds DNA ) ( 50يقابل) Optical Density )O.Dالضوئية وسالسل RNAلل ) مل/ مايكرو غرام 40(ونحو ) double strand DNA( dsDNA المضاعفة ) )( DNA المفردةssDNA )single strand DNA ( وحوالي)للسالسل ) مل / مايكرو غرام 20 500(مع مراعاة تصفير الجهاز باستخدام ) Oligonucleotides(المفردة من قليالت النيوآليوتيدات إذ إن النسبة بين قراءة الموجة ، ترآيزها اسعند بداية آل عينة يتم قي) ddH2O(من ) مايكروليتر تساعد على تقييم نقاوة الحامض ) OD 280\OD 260) . (نانوميتر 280)(إلى ) نانوميتر 260( فقدرت على وفق النقي اما آمية الدنا ) DNA(لل ) 1.8 – 2.0(النووي ، وتتراوح هذه النسبة بين -:المعادلة اآلتية DNA concentration (µg / µl) = O.D. 260 × 100 ×50 µg / ml 1000 260(تمثل الكثافة الضوئية المتصاص الحامض النووي مايكروغرام عند الموجة ) O.D 260(إذ إن حملت إذ.لتحويل المليلتر إلى مايكروليتر =1000، ثابت = 50، معامل التخفيف = 100 ).نانوميتر وللتأآد من عدم تقطيعها إذ آمية من الدنا المستخلص في هالم االآاروز لتحديد نوعية الدنا المستخلص .على هالم االآاروز ) Bands(يجب إن يظهر الدنا على شكل حزم Polymerase Chain Reaction التفاعل التضاعفي لسلسلة الدنا وفقا primers تم في هذه الدراسة استخدام مؤشرات عدة باستعمال ثمانية أنواع من البادئات .االمريكيةPromegaوالتي تم الحصول عليها من شرآة للنظام الحراري لكل بادئة من هذه البادئات فكانت استعمالهاالمؤشرات التي تم ما أ. هذا البحثيبين أنواع البادئات التي استعملت في ) 1(والجدول :آاآلتي Random Amplified .مختلفة االحجام DNAالتضاعف العشوائي لقطع - 1 Polymorphic RAPD ISSR .Internal Simple Sequence Repeatالمواقع البسيطة المتكررة -2 الجوراني و صادق 2014 ، 100 - 89) : 1( 6 ، الزراعية للعلوم ديالى مجلة 92 .ضاعفي لسلسلة الدناالبادئات التي استعملت في التفاعل الت. 1جدول مختلفة االحجام DNAالتضاعف العشوائي لقطع ال RAPD-PCR :-Random Amplified Polymorphic نها ذات تتابع مكمل لتتابع البادئات أالتي يصادف DNAأستعملت هذه التقانة لتضاعف قطع DNAف العشوائي لقطع وعلى هذا األساس سميت هذه التقانة بالتضاع ،العشوائية المستخدمة . ) Gupta ،2007(مختلفة األحجام -:عدد من البادئات العشوائية منها البادئ تعملفي هذه التقانة اسو OP-G14 : TTA CCG CCT AAT TCA GCC A .عينة 14وآان عدد العينات التي استعملت .وفق التراآيز والتسلسل اآلتي لكل انبوبة على PCRاضيفت مكونات الجوراني و صادق 2014 ، 100 - 89) : 1( 6 ، الزراعية للعلوم ديالى مجلة 93 ISSR-PCR:-Iternal Simple Sequence تمتاز هذه التقانة Terminalهذه التقانة عبارة عن تتابعات قصيرة ومتكررة تقع في مناطق .)2001،وآخرون Polymorphic ( ) Randes(متضاعفة وعالية التغاير DNAبانها تنتج قطع : استخدامها في هذه التقانة آانتبادئات الذي تم ال HB15(F) : CCC GGT AAAA TTA AAA TAT AAA CTT C HA18(R) :ATT TCT GGT TCT ATT CTT GGT GCT 17899A(F) : GGT CAA CAA ATC AT AAA GAT ATTGG 17878A(R) :GGC ATC TCC TCCC GCC . عينا ت 9كانت فما عدد العينات أ -:أجريت هذه التقانة على وفق الخطوات التالية .آل انبوبة على وفق التراآيز والتسلسل اآلتيإلى PCR اضيفت مكونات الجوراني و صادق 2014 ، 100 - 89) : 1( 6 ، الزراعية للعلوم ديالى مجلة 94 :هي إتباعهاك خطوات أساسية يجب ا ذآر آان هناّمفضال عو .تكون موجودة في الثلج DNAا وعينات المواد الكيمياوية آله - 1 .يجب إن تمزج جيدا قبل االستخدام DNAالمواد الكيمياوية آلها وعينات إل - 2 . PCR إلى العينات قبل وضعها في جهاز ال Mineral oil زيت معدني توضع قطرة من - 3 :في هالم االآاروز PCRفصل نواتج تفاعالت ال وبعد انتهاء عملية الترحيل يتم تصبيغ % 0.8هالم االآاروز بترآيز في PCRترحل نواتج تفاعالت UV Transilluminatorويوضع الهالم في جهاز األشعة فوق البنفسجية ، الهالم ببروميد االثيديوم . وتصوير الحزم الناتجة واخذ الصور النتائج والمناقشة DNA Nucleic acid Extractionنتائج استخالص الحامض النووي آانت ناجحة ومميزة لعزل CTABان طريقة DNAأظهرت نتائج استخالص الحامض النووي ولكنها في الوقت نفسه لم Agriotesمن بالغات الديدان السلكية النواع الجنس DNAالحامض النووي من اليرقات ، وربما مع بعض DNAتكن ناجحة بالمستوى نفسه في استخالص الحامض النووي .التعديالت يمكن ان يتم االستخالص بالمستوى نفسه للعينات DNAانه تم الحصول على آمية جيدة من الحامض النووي ) 1صورة(آما أوضحت نتائج Agriotesالتي تمثل بالغات الديدان السلكية ألنواع الجنس ) 2،3،4،5،6،7،11،12، 1(الحشرية رقم وربما يعزى .قليلة ليرقات الديدان السلكية النواع الجنس DNAبينما آانت آمية الحامض النووي لم تكن طازجة اذ جمعت هذه Agriotesالسبب في ذلك الى ان يرقات الديدان السلكية ألنواع الجنس الجوراني و صادق 2014 ، 100 - 89) : 1( 6 ، الزراعية للعلوم ديالى مجلة 95 ) 2009(وأخرون Ellisوهذا يتفق مع ما ذآره . %70وحفظت في االيثانول بترآيز مدةاليرقات قبل استخدام األفضلونيف الجزيئي يكون من الضروري يرقات في دراسات التصبأنه عند استخدام ال . اليرقات الطازجة 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 البالغات مثل العينات رقم من الديدان السلكية المستخلصة DNAعينات الحامض النووي .1صورة . ) 8، 9، 10( واليرقات تمثل العينات رقم) 1,2,3,4,5,6,7,11,12( : RAPDنتائج تقانة لتضخيم RAPDمختلفة االحجام DNAف العشوائي لقطع عتقانة التضانتائج استخدام أعطت إذ ) نوع معين ( OPG14 بادئ الحامض النووي التي اجريت باستخدام بادئات عشوائية عدة منها ال وبعد حساب النسبة المئوية للبعد RAPDتغايرات واضحة وبينت نتائج التحليل الوراثي بمؤشرات تالفات اخ )2صورة( RAPDاذ بينت نتائج .الوراثي بين االنواع المنتخبة وجود تغايرات وراثية فيها دئ المستخدم والناتجة من االختالف في عدد الجزيئية باختالف البا وزانهاأفي عدد الحزم المتضاعفة و باستخدام الحاسوب ضمن برنامج ) Lei )1979 و Nei المواقع المكملة والمقدرة استنادا الى TREECON . المسار OPGI 4باستعمال البادىء RAPDنواتج التفاعل التضاعفي لسلسلة الدنا على هالم االآاروز تقانة .2صورة )1 (Marker مسار ، ال)2 (A. doscures المسار ،)3 (A. sputator المسار ،)4 (A. lineatus المسار ،)5 ( A. ustaltus 6(، المسار (A. brevis المسار ،)10و 8، 7 (A. obscurus المسار ،)9 (larvae . 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 الجوراني و صادق 2014 ، 100 - 89) : 1( 6 ، الزراعية للعلوم ديالى مجلة 96 التي تعتمد على بين االنواع المدروسة و) Genetic Distance(الوراثي ثم قدرت النسبة المئوية للبعد :الوراثي وفقا للمعادلة االتية التشابه Genetic Distance = 1-(2xy/nx+ny)×100 مثل عدد الحزم المشترآة بين النموذجيني= Genetic Distance ، Nxy= البعد الوراثي :اذ ان x، y. Nx =مثل عدد الحزم الكلية في النموذج يx ، Ny =المشترآة في النموذج مثل عدد الحزم يy . حقق نتائج ) OPG14(الذي هوواحدًا ئًابادئات عشوائية متعددة ولكن باد هذه الدراسة تم استخدامفي ان العديد من و غلب النتائج المنشورة في هذا المجال أوهذا يتفق مع .بقية البادئات االخرى واهملتجيدة ذلك الى لسبب فيا من مرة وربما يعود عادة استعمالها اآثرأالبادئات لم يعط اي نتيجة على الرغم من .غياب المواقع المكملة لتسلسالت تلك البادئات العشوائية المستخدمة : ISSRشرات نتائج مؤ اختالفات في عدد الحزم المتضاعفة باختالف ISSR المواقع البسيطة المتكررة أآدت نتائج مؤشرات تجة ايضا من االختالف في عدد المواقع المكملة لذلك البادئ في مجين آل نوع من البادئ المستخدم والنا HB15مع البادئين ISSRان استخدام تقانة الدراسةاذ بينت .االنواع المستخدمة في هذه الدراسة ويتضح من ،في هذه التقانة عمالهانتائج واضحة عكس بقية البادئات االخرى التي تم است 17899Aو الوراثية اظهرت تباعدا وراثيا بين انواع الديدان السلكية ISSRان مؤشرات ) 5(و ) 4( ورتينالص واوجد نالذي ) 2008(وأخرون Staudacherوهذا يتفق مع ما ذآره . Agriotesالجنس التابعة RCR .تقانة عمالباست نفسه الجنس تغايرات وراثية في االنواع التي تعود الى ) 1(المسار . A 17899مع البادىء ISSRنواتج التفاعل التضاعفي لسلسلة الدنا على هالم االآاروز تقانة .3 صورة Marker 2(، المسار (A. obscurus المسار ،)3 (A. lineatus المسار ،)4 (A. sputator ، ) 8(، المسار A. obscurus) 7(، المسار A. brevis) 6(، المسار A. ustaltus) 5(المسار Larva 9(، المسار (A. ustaltus الجوراني و صادق 2014 ، 100 - 89) : 1( 6 ، الزراعية للعلوم ديالى مجلة 97 HB15مع البادىء ISSRنواتج التفاعل التضاعفي لسلسلة الدنا على هالم االآاروز تقانة .4صورة ) 4(، المسار A. lineatus) 3(، المسار A. ustaltus) 2(، المسار A. ustaltus) 1(المسار . A. obscurus 5(، المسار (A. brevis المسار ،)6 (A. sputator المسار ،)7 (A. sputator 8(، المسار (Larva المسار ،)9 (A. sputator. :اثية تحليل النتائج الور اعتمدت طريقة تحليل نتائج دراسة العالقة الوراثية على وجود الحزم الناتجة او غيابها من تضاعف لمستخدمة وعلى األوزان الجزيئية لتلك الحزم التي تعتمد على العدد قطع معينة من جينوم االنواع ا القالب وبعد ادخال البيانات الناتجة في البرنامج DNAوالمواقع المكملة لتسلسالت البادئات على شريط إذ) 1( شكلالمعد خصيصا لهذا الغرض تم أيجاد البعد الوراثي بين األنواع المدروسة وآما موضح في النتائج التي تم الحصول عليها الى وجود اختالفات بين أنواع الديدان السلكية التابعة للجنس تشير Agriotes الديدان السلكية التابعة للجنس أنواعوتم حساب البعد الوراثي بينAgriotes spp واالختالف بين بهالتشاالنتائج مدى أظهرت ذإ .) 1979( Leiو Neiمعادلة إلىاستنادا ) 2(الجدول آانت ) )0.07(قل بعد وراثي أعلى نسبة من التشابه التي تقابل أ أنآما أوضحت .أنواع الديدان السلكية من التشابه الوراثي قل نسبةأال مجموعة صغيرة ، في حين وجدت شك إذ) F6 ،F7(مابين النوعين ومن خالل الجدول نفسه نلحظ النوع .) F1 ، F3(مابين النوعين ) 0.63(آبر بعد وراثي أالتي تقابل )F1 ( األنواع بعدا عن بقية األنواع األخرى أآثرآان. الجوراني و صادق 2014 ، 100 - 89) : 1( 6 ، الزراعية للعلوم ديالى مجلة 98 . Agriotes sppقيم البعد الوراثي ألنواع الديدان السلكية التابعة للجنس . 2جدول variable 1 2 3 4 5 6 7 1 0.00 0.30 0.57 0.43 0.57 0.20 0.13 2 0.30 0.00 0.47 0.60 0.60 0.30 0.30 3 0.57 0.47 0.00 0.27 0.40 0.57 0.50 4 0.43 0.60 0.27 0.00 0.33 0.57 0.50 5 0.57 0.60 0.40 0.33 0.00 0.63 0.63 6 0.20 0.30 0.57 0.57 0.63 0.00 0.07 7 0.13 0.30 0.50 0.50 0.63 0.07 0.00 المعتمد على قيم البعد الوراثي بأستخدام طريقة Dendogramيظهر مخطط الشجرة للعالقة الوراثية UPGMA والمنشأ اعتمادا على مؤشراتISSR بأن أنواع الديدان السلكية قد توزعت في مجموعتين أربعة ) B( بينما تضمن العنقود.) F7،F6 ،F1(ثالثة أنواع ) A(تضمن العنقود .)Bو A(رئيسيتين ) F6 ،F7، (F5اما .وآانتا اآثر قربا من بعضهما ) F3 ،F4(اذ نجد ) F5،F4، F3، F2(أنواع .ا مقارنة بأنواع المجموعة فكانت األآثر قربا من بعضه .ونستنتج من ذلك ان الدراسة الجزيئية أظهرت احتواء أنواع الديدان السلكية على تنوع وراثي عال .) 2010(واخرون Staudacherاثلة لما وجده ووجدت النتائج مم Tree Diagram for 7 Variables Unweighted pair-group average Percent disagreement 0.0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 Linkage Distance F5 F4 F3 F2 F7 F6 F1 مخطط الشجرة للعالقات الوراثية بين انواع الديدان السلكية التابعة للجنس. 1شكل Agriotes spp اعتمادا على تحليل مؤشراتISSR . A B الجوراني و صادق 2014 ، 100 - 89) : 1( 6 ، الزراعية للعلوم ديالى مجلة 99 المصادر Leptinotarsa (آولورادو ءاول تسجيل لخنفسا . 2004 .رضا صكب وسداد الطويل ،الجوراني decemla, Neata (Chrysomelidae:Coleoptera مجلة .على البطاطا في العراق 35 : (4)105-106 .العلوم الزراعية العراقية وزارة التعليم العالي والبحث العلمي .علم الحشرات العام والتطبيقي . 1980 .العزاوي ، عبد اهللا فليح .صفحة 540 .بغداد . مطبعة الزهراء .نية مؤسسة المعاهد الف. دراسة اهمية بعض حشرات التربة في احداث اضرار لدرنات . 2007 .فريال حسوني ،صادق 103 .جامعة بغداد .آلية الزراعة .رسالة ماجستير .لبطاطا ومكافحتها آيمياويا .صفحة Ellis , J.S R. Blackshow , W. Parker , H. Hicks and M.E.Knight. 2009. Genetic Identification of morphologically cryptic agricultural pests. Agr 11, 115 – 121. FAO . 2008. UN Food and Agriculture Organization http : // faostat FAO .org /sita / 340 / defalt Aspx . Roma 2008 . Gupta, P. K. 2007. Cytogenetics. Rajjons printers, New Delhi,India, pp 348. Hinomoto, N.,M. Muraji, S. Noda, T. Shimizu.and K. Kawasaki. 2004. Identification of five Orius species in Japan by multiplex Polymerase chain reaction. Biological Control 31 : 276 – 279. Lindroth, E. 2007. Molecular diagnostics of economically important wireworm species (Coleoptera:Elateridae) in the Midwestern United State. Msc. Thesis. Grauate School. University of Missouri – Columbia. Pp. 60. Nei, M. and W.H. Lei. 1979. Mathematical model for studying geneticvariation in terms of restriction endonucleases. Proc. Natl. Acad. Sci. USA., 76 : 5269 – 5273. Randes, S. A., F. Nuzhat, B. Esha, and V. Anjali. 2001. Gene Tagging with random ampliffed polymorphic DNA (RAPD) Markers for molecular breeding in plants. Critical Reviews In Plant Sciences. 20 (3) : 251 – 275. Roehrdan Z., R.D. Olson, G. Fauske, R. Bourchier, G.,A. Cortilet, andS. Sears. 2009. New DNA markers reveal Presense of Aphthona species (Coleoptera:Chrysomelidae) believed to have failed to established after release into leafy spurge. Biological Control 49, 1 – 5. Schulenburg, G. H. M.J.A. Honcock, J.J. Pagnamenta,E.N.Stoggett,.G.D. Majerus, and G.D.Hurst. 2001. Extermel length and spacer of ladybird beetles (Coleoptera:Coccinellidae). Mol. Boil. Evol., 18 (4) : 648 – 660. Staudacher, K.L. Furlan,. and M.Traugott. 2008. DNA- Based Identification of Agriotes wireworms. Innsbruck. Austria. Staudacher, K.P., Pitter, L., Furlan, P.C. Cate, and M.,Traugott. 2010. PCR – based species identification of Agriotes larvae. Bulletin of Entomological Research 101 : 201-210. الجوراني و صادق 2014 ، 100 - 89) : 1( 6 ، الزراعية للعلوم ديالى مجلة 100 Toba, H. H., and Turner, J. E. 1981. Seed piece examinations a methode for sampling wireworms on potatoes J. Econ. Entomol. 74 : 718 – 720. Vernon, R. S., and Pats. 1997. Distribution of two European wireworms Agriotes lineatus and A. obscurus in British Columbia. Jour. Entomol. Soci.Brit. Colum. 94 : 59 – 61. DIAGNOSTIC OF WIREWORM THAT ATTAK POTATO TUBERS BY USING PCR . Redha S. AL – Jorany* Feryal H. Sadik *Dept. of Plant Protection - College of Agriculture - University of Baghdad -IRAQ ABSTRACT Field studies were carried out in the middle of Iraq during 2009 - 2012 to detect and identify the species of genus Agriotes spp that infest Potato tubers (Solanum tubersum L. ) by using Molecular diagnosis Polymerase Chain Reaction (PCR) for both adults and larvae . The results showed that there are five species of Agriotes infest Potato tubers in Spring and Autumn cultivation . These species are : Agriotes brevis (Candeze) , Agriotes lineatus(Linnaeus) Agriotes obscurus (Linnaeus) , Agriotes sputator(Linnaeus) Agriotes ustulatus (Schaller). A genetic diversity within the species of the genus Agriotes was found . Key words : Agriotes , RAPD , ISSR , Wireworms , Elateridea , Polymerase Chain Reaction Part of Ph.D. Thesis for second author .