Microsoft Word - م.م. ندى احمد وآخرون 2014، 38 - 30 ) :1( 6مجلة ديالى للعلوم الزراعية ، 30 .واط 7و3ليزر الدايود بقدرتين ب تشعيعها بعد Escherichia coli دراسة إمكانية قتل بكتريا ***ابتهال حميد نصيف ** مازن كريم مصطفى* ندى سهيل احمد Tboo_2010@yahoo.com . قسم الفيزياء -كلية العلوم -جامعة ديالى - مدرس مساعد* Mazen kaream@yahoo.com. قسم الفيزياء -كلية العلوم -جامعة ديالى - مساعدمدرس ** Ebtehal_3050@yahoo.com. علوم الحياةقسم -كلية العلوم -جامعة ديالى -مدرس مساعد*** المستخلص األول Escherichia coli ياليزر الدايود لقتل بكترن من ينوع تم في هذا البحث استخدام . )واط (7نانومتر وقدرة 1064واط والثاني بطول موجي 3نانومتر وقدرة 808ول موجي بط ةفي ثالث Escherichia coliشععت عينات من المحلول الفسيولوجي الحاوي على بكتريا النتائج أظهرت. وبفترات زمنية مختلفة 3 سم) 0.5(اختبار بحجم أنابيبفي 3سم 0.3،0.2،0.1أحجام . دقيقة 20لفترة تعرض ) واط 3 (للبكتريا بليزر الدايود % 100 قتلنسبة أعلىع حصول بعد التشعي .دقيقة 1.5لفترة تعرض )واط 7(لليزر الدايود %100نسبة قتل أعلىسجلت .ليزر الدايود ، يزر لقتل البكتريا بال: الكلمات المفتاحية لمقدمةا هأن يعقل عند غير المختصين بفيزياء الليزر صور وربما الأن تطبيقات الليزر فاقت حدود الت وأحداث شق في أحد rotational cellsفي تدوير الخاليا optical trapيستعمل كملقط بصري الخلية الحية غير DNAفي أحد الجينات في Inactivationجوانب جدار الخلية بل وأحداث تثبيط يزر في تعقيم الماء وبعض المواد الغذائية كطريقة من طرائق يستعمل الل أنوال عجب ،المرغوب فيها ألشعة فوق البنفسجية اوالموجات فوق الصوتية و والضغطالتعقيم الفيزيائية مثل استعمال الحرارة .) 1996،خرونوآ (Ben Hatit عن الطرائق الكيميائية األخرى الضوالبالزما ف المواد وإنتاجطبقت في معامل تصفية المياه ذاإتبدو مكلفة فيما هذه الطريقة أنالذهن إلىقد يتبادر وعندما يكون يةمستحقا للعنا األمرأنه بمجرد االطالع على فوائد هذا التطبيق فأنه سيبدو الغذائية أال من بأكثرمقاومة من الخاليا الخضرية أكثرالبكترية والتي هي (Spores) االبواغ لليزر قابلية قتل تستطيع قتلها بهذا الليزر قد حقق ا بالطرائق التقليدية التي الفارق كبير جدا قياس مرة وهو 40 من جزيئات مترابطة مع البيولوجيةتتكون األنظمة )1997، خرونوآ (Celesk انجازا عظيماً البيولوجيةكيميائية وتمتلك األنظمة ذرات مترابطة مع بعضها بأواصر من بعضها والجزيئات تتكون وترتبط ، وغيرها العناصر الطبيعية كالكاربون وألوكسجين والنتروجين والفوسفات العديد من ذرات Ionic األيونية واألواصر Covalent bonds التساهمية مختلفة مثل األواصر مع بعضها بأواصر bonds الهيدروجينية واألواصرHydrogen bonds . ترتبط الذرات في الجزيئات العضوية C-N ) ,( N-H )وهي تلك التي تكون بيولوجيفي أي نظام األواصربأواصر تساهمية وهي من أهم ), ( C-O ), C-H )(,( C-C ) )Chan و Chien ، ( 1998،الهيدروجينية فهي اآلصرة األواصر صرة التساهمية فهي المسؤولة عن تكوين الماء حيث تربطاألخرى ليست اقل اهمية من اال ومع يجعل الماء سائال صرآوهذا الت ة جزيئات الماء سوية لتكوين نظام تشابكي متغيرالهيدروجيني ــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــ . 2013/ 3 / 25تاريخ استالم البحث . 2013/ 5/ 7 ول النشر تاريخ قب احمد وآخرون 2014، 38 - 30 ) :1( 6مجلة ديالى للعلوم الزراعية ، 31 ذلك فهو ذو درجة غليان عالية نسبيا كما أن التاصر الهيدروجيني مسؤول عن خواص العديد من الهيدروجينية اضعف اآلصرةوالبروتين أن الخلية DNAالجزيئات ذات األهمية البايولوجية مثل . ) 1999 ،وآخرون Cobb(التساهمية اآلصرةبكثير من لقد عرف عن بعض المواد بأنها تظهر ملونة بسبب احتوائها على بعض المجاميع الفعالة التي لها تبدو مادة القابلية على امتصاص أشعة ذات أطوال موجية محددة عند إضاءتها بالضوء األبيض فمثالً شعة التي تقع في لوجود مجموعة فعالة لها القابلية على امتصاص األ ما زرقاء في ضوء الشمس نظراً ألواناالمنطقة المرئية من الطيف الكهرومغناطيسي وتعرف هذه المجاميع الفعالة التي تمنح المواد أن معظم هذه المجاميع الحاملة للون تحتوي ) حامل اللون( Cromophore معينة بالكروموفورات أهمية كبيرة في وهي جزيئات كبيرة نسبيا ولها N=N,C=O, C=Cعلى أواصر غير مشبعة مثل ). 2000 ، وآخرون Gutknect (عملية تخليق الطاقة للخلية : ( Bacteria )لبكتيريا ا تصنيف .تقع في مئات األجناس و آالف األنواع ب توجد واسعة االنتشار في الطبيعة كائنات صنيفها حسب حاجتها كما يمكن ت) مجموعة غرام سالبة وموجبة ( البكتيريا وفق مظهرها الخارجي ويمكن تصنيفها حسب مصادر الطـــــاقة) بكتيريا هوائية وال هوائية ( إلى األوكسجين وهناك ) بكتيريا تستخدم الضوء للطاقة وبكتيريا تستخدم الحديد والمنغنيز والكبريت وغيرها ( Airobicلضوئية الهوائية البكتيريا ا Anacrobic Photobactriaالبكتيريا الضوئية الالهوائية Photobacteria وهي ذات أشكال مختلفة منها ذات أنماط خيطية المتفرعة واألنماط الخيطية غير ، فالبكتيريا مسؤولة عن الكثير من األمراض مثل إصابات الجروح والتسمم الغذائي والحماة المتفرعة كتيريا أكثر األحياء المجهرية ضرراً الكثير من األمراض وتعد الب ووالخناق والجمرة الخبيثة .وأمرضية باالنسان من أكثر الكائنات أنهامن أشهر األمثلة المعروفة عن البكتيريا المعوية كما ) (E. Coliأن بكتيريا .سبب إلتهابات القناة البولية واالسهال وإلتهاب السحايا ت. المجهرية التي تمت دراستها بصورة شاملة Goodis) ؛ 2011، خرونوآ Gutknecht 2011 ،وآخرون.( بحثالمواد وطرائق ال .األوساط الزراعية المستعملة والمواد الكيميائية .1جدول الشركة المنشأ المواد المستعملة Oxoide إنكليزي ماكونكي أكار Oxoideإنكليزي كلوريد الصوديوم Oxoideإنكليزي كحول أثيلي Oxoideإنكليزي أكار-أكار Oxoideإنكليزي ماكونكي بروث :تهيئة العينات للتشعيع :نقل وحفظ البكتيريا المتوفرة في مختبر األحيـــــــاء Escherichi coliأستعملت بكتيريا عزلها تم ( نقلت من وسط يحتوي على البكتيريا ديالىالعلوم جامعة كلية/ المجـــــــهرية تحت ظروف معقمة وحضنت بدرجة Mackonky – Agarأكار –ماكونكي وسط إلى ) سابقا ساعة وبعد نمو وظهور المستعمرات تم حفظها في الثالجة لحين إستعمالها ) 48 – 24( م ومدة 37 احمد وآخرون 2014، 38 - 30 ) :1( 6مجلة ديالى للعلوم الزراعية ، 32 loop( للتشعيع ، أجريت عملية النقل وذلك بأخذ مسحة من سطح المزرعة البكتيرية بواسطة الشراج ). Streaking( بعد ذلك تم الزرع للبكتيريا بطريقة التخطيط ) :تحضير البكتيريا لغرض التشعيع .من المحلول الفسيولوجي المعقم في كل أنبوب من أنابيب االختبــــــار 3سم9تم سكب وذلك Escherichi coliمن المحلول الفسيولوجي في أنبوبة إختبار بالبكتيريا 3سم1تلويثأجري .وُرج المحلول جيداً لضمان توزيع البكتيريا بشكل متجانس وهو جاهز للتشعيع بواسطة الشراج ضع في أول وومن المحلول الفسيولوجي في أنبوب االختبار الذي تم نقل البكتيريا فيه 3سم1أخذ وُرج أيضاً 3سم 10يصبح الحجم ل من المحلول الفسيولوجي 3سم9تحوي على ختبار التي اإلأنبوبة .لكل االنابيب وتستمر العملية Nutrientويتم زرعه في أطباق الوسط المغذي أحيانامن األنبوب األخير والذي قبله 3مس0.2اخذ Agar وذلك لحساب أعداد البكتيريا الحية قبل التشعيع وقد حسب عدد البكتيريا في األنبوب األصلي .شعيع العينات بالليزر أجري تثم وفي كل تجربة تشعيع ليزرية في اطباق الوسط المغذي الصلب ونشر جيداً على السطح ثم تم حساب 3سم0.2بعد التشعيع سكب ساعة في الحاضنة وذلك لغرض حساب أعداد البكتيريا التي بقيت حية بعد 24أعداد المستعمرات بعد .التشعيع ) :واط3 (التشعيع بالليزر ثنائي الوصلة بفولطية ال ةرة بسيطديعمل بمجهز ق الذي ليزرات أشباه الموصالت من زر الدايودلي يصنف .نانومتر 810فولت يبعث بطول موجي 4تتجاوز .) 1(تم تركيب الجهاز عمودياً وذلك ليسقط الشعاع مباشرة على العينة كما هو واضح في الشكل والعينة وضعت قريباً جداً من فتحة خروج اًألن قطر االشعاع كان صغير آلمةلم يتم إستعمال عدسة . الليزر عرضت العينات ثم سم 0.1 ، 0.2 ، 0.3أحجام من المحلول الفسيولوجي الملوث ةأستعملت ثالث .دقيقة 5 ، 10 ، 15 ، 20 فترات للللتشعيع بالليزر من المؤثرات تم وضع أنابيب االختبار داخل قطعة من الفلين تستعمل كماسك جيد وحفظ العينة .الخارجية كالحرارة ساعة 24تم زرع العينات في الوسط المغذي الصلب وحضنت في الحاضنة مدة ربالليزالتشعيع بعد .م 37تحت درجة حرارة .واحدة بكتيرية تم حساب المستعمرات البكتيرية في األطباق حيث تمثل كل مستعمرة . .)واط3(التشعيع بليزر الدايود ذي القدرة .1شكل احمد وآخرون 2014، 38 - 30 ) :1( 6مجلة ديالى للعلوم الزراعية ، 33 ) :واط7(التشعيع بالليزر ثنائي الوصلة وهو من ليزرات أشباه الموصالت يبعث في المنطقة تحت الحمراء من الطيف مجهز بمجهز .نانومتر 1065قدرة خاص به ذي طول موجي لكن بفترات مختلفة حيث شععت في )اطو3(أستعملت األحجام السابقة نفسها في ليزر ثنائي الوصلة .دقيقة 0.5 )، 1 ، (1.5 فترات سم ألن األشعة 20سم ثم أستعملت عدسة بعدها البؤري 15ذات بعد بؤري آلمةأستعملت عدسة كما في .كانت ذات قطر كبير كذلك تم إستعمال مرآة عاكسة بحيث يسقط االشعاع عمودياً على العينة . ) واط3(مال التشعيع كمــــــــا في ليزر ثنائي الوصلة ثم تم إك )2(الشكل . )واط7(التشعيع بليزر الدايود ذي القدرة .2شكل النتائج والمناقشة :)واط3(نتائج التشعيع بليزر ثنائي الوصلة أعداد الخاليا الحية في ير بانخفاض كعن ) واط3(أسفرت نتائج التشعيع بليزر ثنائي الوصلة في حين كانت األعداد الحية قبل 3سم/خلية 121-0حيث تراوحت األعداد بعد المعاملة بليزر مابين تناقص األعداد الحية مع زيادة مدة التشعيع أو مع )2( ويظهر الشكل 3 سم/ خلية 9×510المعاملة بعد االعدد الحي المتبقي من البكترييبين (3)زيادة الجرعة وتقليص حجم الوسط الفسيولوجي والشكل .)واط3(التعرض لليزر ثنائي الوصلة جهاز ليزر واط 7الدايود احمد وآخرون 2014، 38 - 30 ) :1( 6مجلة ديالى للعلوم الزراعية ، 34 0 20 40 60 80 100 120 140 0.10.20.3 حجم الوسط (سم3) (2 سم ة/ خلي ) لة ام مع ال عد ا ب ري بكت لل حي دال عد ال 5(m),3057.3(J/cm2) 10(m),6114.6(J/cm2) 15(m),9171.9(J/cm2) 20(m),12229.2(J/cm2) .)واط3(بعد تعرضها الى ليزر ثنائي الوصلة E.coliبكتريا العدد الحي لليمثل .3شكل نسبة قتل وقد تم الحصول على فيبين نسبة القتل البكتيري بعد التعرض لليزر ) 4(في الشكل أما دقيقة حيث قتلت 20 كان عند المدة الزمنية أعالها نأ أال % 100و% 99.98تراوحت مابين (100%) .نهائياً البكتريا 99.97 99.975 99.98 99.985 99.99 99.995 100 100.005 0.10.20.3 حجم الوسط (سم3) % ي ير كت الب ل قت ة لل وي مئ ة ال سب الن 5(m).3057.3(J/cm2) 10(m),6114.6(J/cm2) 15(m0,9171.9(J/cm2) 20(m),12229.2(J/cm2) ).واط3(بعد تعرضها الى ليزر ثنائي الوصلة E.coliيمثل نسبة القتل البكتريا .4شكل حراري بالدرجة األولى حيث يبعث هذا الليزر طول هو قتل )واط3(آلية القتل بليزر ثنائي الوصلة نإ نانومتر وهذا الطول الموجي واقع في المنطقة تحت الحمـراء القريبـة حيـث تمـتص 810 اًموجي الكروموفورات هذا الطول الموجي ولكن بشكل قليل حيث تسبب الشدة العالية لليزر أكسـدة ضـوئية photo-oxidant وكسجين األحادي وهو يسـبب تحطـم شطة كاألبوجود األوكسجين منتجة جذور ن الخلية DNAبنفاذية ومهاجمة األنزيمات وتلف البروتينات و واإلخاللجدران الخلية Harris) وLoomer ، 2003 ؛ Hardee أن العامل الممـتص األكثـر فـي 2002 ) ،وآخرون DNA الخلية هو الماء الموجود داخل وخارجDNA حتوي الخلية الخضـرية الخلية البكترية حيث ت حيث يمتص األشعة تحت الحمراء بشـدة , 2004) ،واخرون(linke من محتوياتها ماء % 70على تتحول الطاقة الممتصـة ، و2008) ،واخرونLin( خاصة األشعة تحت الحمراء المتوسطة والبعيدة احمد وآخرون 2014، 38 - 30 ) :1( 6مجلة ديالى للعلوم الزراعية ، 35 وي واألخـالل الخلية يتسبب في تحطم الحـامض النـو DNAالى حرارة أن ارتفاع درجة حرارة تصيب االيض الخلوي وذلك بتثبيط األنزيمات في درجات الحـرارة بوظيفة الغشاء البالزمي وأضرار الخليـة DNAتحطـم إن ، 2009 ) ، واخـرون Moritz (الخلية DNAتصيب العالية واضرار رج ان التـد . 2011 ) ، وآخـرون Moritz ( م 52بعد حضنها في درجة حرارة E.coli ةرييبكتال مرحلـة نموهـا تكـون الحاصل في نسبة القتل هو ان البكتريا ليس لها نفس المقاومة ضدالقتل ففي ، Trombergو (Ramskold متحسسة للتأثيرات الحرارية وكلما كانت مستقرة كانت اكثر مقاومـة (2010 . ):واط(7التشعيع بليزر ثنائي الوصلة الخاليا الحية أعدادعن انخفاض في (5) الشكلفي )واط(7عبرت نتائج التشعيع بليزر ثنائي الوصلة . )واط(7بعد تعرضها لليزر الدايود ألحجام مختلفة من الوسط E.coliالبكتريا 0 500 1000 1500 2000 2500 3000 3500 4000 4500 5000 0.10.20.3 حجم الوسط (سم3) (3 سم ة / خلي ) لة ام مع ال عد ا ب ري بكت لل حي د ال لعد ا 0.5(m),764.3(J/cm2) 1(m),1528.6(J/cm2) 1.5(m),2292.9(J/cm2) .) واط(7يمثل العدد الحي للبكتريا بعد تعرضها الى ليزر ثنائي الوصلة .5شكل عند 100%تيري حيث تم الحصول على نسبة قتل ارتفاع نسبة القتل البك)6(نتائج الشكل أظهرت )واط(7الطول الموجي لليزر ثنائي الوصلة إن، دقيقة 1،5.1التعرض هما في فترتي 3سم 1.0حجم ما ينتميان الى األشعة تحت الحمراء القريبة ولهما نفس فكاله )واط(مقارب لليزر ثنائي الوصلة ال )واط(7قتل البكتيري ان آلية القتل بليزر الثنائي الوصلة التأثيرات الحرارية ولهذا لهما نفس آلية ال قصر من ليزر ثنائي أللتشعيع ةان المدة الزمنية المستغرق أال)واط(3تختلف عن ليزر ثنائي الوصلة بمدة قصيرة وهي دقيقة واحدة بالمقارنة مع % 100فقد تم الحصول على نسبة قتل .)واط(3الوصلة يتمتع بها ليزر ثنائي ليةة ويعود السبب الى معدل قدرة عادقيق20بمدة )طوا(3ليزر ثنائي الوصلة .) 2011، واخرون (Rooney الخليةDNAالوصلة يتسبب في تثبيط احمد وآخرون 2014، 38 - 30 ) :1( 6مجلة ديالى للعلوم الزراعية ، 36 94 95 96 97 98 99 100 101 0.10.20.3 حجم الوسط (سم3) % ي ــير بكت ال ــل لقت ة ا ســب ن 0.5(m),764.3(J/cm2) 1(m),1528.6(J/cm2) 1.5(m),2292.9(J/cm2) .)واط(7بعد تعرضها الى ليزر ثنائي الوصلة E.coliيمثل نسبة القتل لبكتريا .6شكل الحراري والضغط المتولد التأثيرالى واط 7 ،3ات المختلفة يعزى قتل البكتريا بليزر الدايود ذي القدر تحت الحمراء مما لألشعةداخل الخلية البكتيرية نتيجة ارتفاع درجة الحرارة بسبب امتصاص الماء .2010 ) ، وآخرونMoritz ؛ 2004 ،خرونوآ (Klinke يؤدي الى تمزق الخاليا الحية للبكتريا : االستنتاجات من خالل التناقص البكتيري مع زيادة الليزرات المستعملة كفاءة أكدت نتائج عمليات التشعيع 1. . مدة التعرض بالقدرة )واط(3على ليزر الدايودذي القدرة العالية )واط(7تفوق ليـــــزر الدايود . 2 . خالل القتل البكتيريبجرعة اقل وزمن اقل الواطئة ).واط3 ،7(بليزري الدايود % 100صول نسبة القتل إمكانية ح. 3 المصادر Ben Hatit Y, R. Blum,C. Severin, M.Maquin and M.H Jabro .1996. The effects of a pulsed diode laser on subgingival bacterial flora and on cementum. laser. B. Dent J. 176:61-64. Celesk R.A,R.M. McCabe and J. London. 1997. Colonization of the cementum surface of teeth by oral Gram-negative bacteria. SPIE Proc. 2973:221- 226. Chan Y and R. Chien .1998. Bactericidal action of diode laser radiation in periodontal pockets. Laser Med. Surg .17.161–164. Cobb,C.M, T.K.McCawley and W.J. Killoy .1999. A preliminary study on the effects of the diode laser on root surfaces and microflora In Vivo. Singapore:185- 190. Gutknect N,J. Fischer,G. Conrads and F. Lampert .2000. Bactericidal effects of the diode lasers in laser supported curettage. Microbiol Mol Biol Rev. 62(4):1244-63. احمد وآخرون 2014، 38 - 30 ) :1( 6مجلة ديالى للعلوم الزراعية ، 37 Goodis H.E, J.M.Withe and S.J. Marshall. 2011. Evaluation of the diode laser in the root canal sterilisation. J. Dent. Res. 71- 77. Gutknecht N, A.Moritz and G. Conrads,. 2011. The diode laser and its bactericidal effect in the root canal. An in vitro study.Endodontics: 3:217–222. Hardee M.W, L.J.Miserendino,W. Kos and H.Walia .2002. Evaluation of the antibacterial effects of intracanal diode laser irradiation . J.Endodont. 30(8): 377-380. Harris D.M.P and M .Loomer .2003. Ablation of Porphyromonas gingivalis in vitro with dental lasers. Laser.Med. Surg. 14, 77–80. Hardee, M.W, L.J.Miserendino and W.Kos.2011. Evaluation of the antibacterial effects of the intracanal Nd:YAG laser irradiation.J. Endodont. 40:300-301. Klinke T,W. Klimm and N. Gutknecht .2004. Antibacterial effects of diode laser irradiation within root canal dentin. J Clin Laser .Med Surg. 40(1):30. Lin P,S. Rosen, F.M. Beck, M.Matsue and J.M. Horton .2008. A comparitive effect of the diode laser with root planing on subgingival anaerobes in periodontal pockets. J. Dent Res. 71:299. Moritz A, N.Gutknecht, O.Doertbudak,K. Goharkhay, U.Schoop, P.Schauer and W.Sperr .2008. Bacterial reduction in periodontal pockets through irradiation with a diode laser. A pilot study. J Clin Laser. Med. Surg. 100(25):33-37. Moritz A. S.Jakolitsch,K. Goharkhay, U.Schoop, W.Kluger,R. Malinger, W.Sperr and A.eorgopoulos .2009. Morphologic changes correlating todifferent sensitivities of Escherichia coli and Enterococcus faecalis to diode laser irradiation through dentin. Lasers .Surg. Med. 82: 250-261. Moritz A,U. Schoop, K.Goharkhay, P.Schauer, O.Doertbudak,J. Wernisch and W.Sperr .2010. Treatment of periodontal pockets with a diode laser. Lasers. Surg. Med. 55:302-311. Moritz A., U.Schoop and K.oharkhay.2011. The bactericidal effect of diode laser irradiation in the root canal: An in vitro comparison. J. Clin. Laser Med. Surg. 50,161–164. Ramskold L.O,C.Dng and T.Tromberg .2010. Thermal effects and antibacterial properties of energy levels required to sterilize stained root canals with an diode laser. J. Endodont 23(2):96-100. Rooney J. M.Middaand J.Leeming.2011. A laboratory investigation of the bactericidal effect of a diode laser. B. Dent. J.176:61-64. احمد وآخرون 2014، 38 - 30 ) :1( 6مجلة ديالى للعلوم الزراعية ، 38 STUDY THE POSSIBILITY KILLING OF Escherichia coli AFTER IRRADIATION BY DIODE WITH TWO POWER (3,7)W LASER. Nada Suheel Ahmad* MAZEN KAREAM** EBTEHAL HAMED NSAYF*** * Dept. of Physical Sciences-College of Sciences -University of Diyala. Tboo_2010@yahoo.com. ** Dept. of Laser Science- College of Sciences -University of Diyala. Mazen kaream@yahoo.com. *** Dept. of Biology- College of Sciences -University of Diyala. Ebtehal_3050@yahoo.com ABSTRACT In this study was used diode lasers to kill Escherichia coli.Two types of diode laser have been used. The first one 3-watt 810 nm wavelength and the second 7 watt wavelength 1064 nm. Irradiation of samples was taken place from the physiological saline containing the Escherichia coli in three sizes 0.3,0.2, 0.1 cm ³ in test tubes of size 0.5 cm³. Samples were irradiated at different periods of time for each laser. The results showed that after each irradiation a highest kill of 100% of the bacteria occurred by used laser diode (3 W) through a period of 20 minutes. In the diode laser (7 W) a recording of the highest kill rate of 100% has been obtained in 1.5 min period. words: laser diode ,kill bacteria . Key