Microsoft Word - - 58- د.كريم عبيد حسن- 12- حسن 2013، 245 - 240) : 2( 5مجلة ديالى للعلوم الزراعية ، 240 .ملحية أوساطالبكتريا المتحملة للملوحة ومقدرتها في تثبيت النتروجين الجوي في دراسة نمو آريم عبيد حسن kareemaubaid@yahoo.com .جمهورية العراق -جامعة بغداد -آلية الزراعة -قسم علوم التربة والموارد المائية -مدرس * المستخلص عزلت ونقيت على الوسط الزرعي . لوحة من عينات ترب متأثرة بالملوحة عزلت البكتريا المتحملة للم Ashby . شخصت العزالت البكتيرية المعزولة اعتمادا على الصفات المظهرية واالختبارات البايوآيميائية . Azotobacterخمسة عزالت بكتيرية متحملة للملوحة تعود للجنس البكتيري نتائج التشخيص وجود أظهرت Spp. 4.5، % 1.5، % 0.0 :ذات تراآيز أوساطفي النتروجينوتثبيت اختبرت قدرتها في النمو % ، العزالت البكتيرية جميعها استطاعت النمو في أنالنتائج أظهرت. NaCl% 10.0و % 7.5، % 6.0 الترآيز استطاعتا النمو في A4و A1العزلتين إنلوحظ . NaCl% 3.0 -%0.0ذات التراآيز األوساط 4.5 %NaCl وان العزلة األخرىمقارنة بالعزالتA1 6.0استطاعت النمو في الترآيز %NaCl . قدر النتروجين المثبت في . لم يالحظ أي نمو بكتيري فيها NaCl% 10.0و % 7.5ذات التراآيز األوساط مقارنة 1-غم Nملغم 6.70وجين في تثبيت اآبر آمية من النتر A1وتفوقت العزلة أعالهالملحية األوساط هذا إن. 1-غم Nملغم 1.98هي A3 في حين آانت اقل آمية النتروجين المثبت للعزلة مع معاملة المقارنة، عليه نوصي باستعمال . تحمل الملوحة التباين في الكمية المثبتة من النتروجين له عالقة بمقدرة البكتريا على وتحسين النمو وزيادة حاصل النبات نملة للملوحة آسماد حيوي لزيادة النتروجيالمتح Azotobacterبكتريا . في الترب الملحية . بكتريا التربة تحمل الملوحة تثبيت النتروجين : الكلمات المفتاحية المقدمة العديد من مناطق المحاصيل في وإنتاجتعد ملوحة التربة من المشاآل الرئيسة التي تعاني منها الزراعة في المنطقة الجذرية للنبات ومن ثم تؤثر في األمالحتتجمع إذالعالم والسيما في المناطق الجافة وشبه الجافة عجز في إلىغط االزموزي الذي يؤدي ضالتأثير المباشر للملوحة على النبات يتمثل بال إن، وإنتاجهنموه الزيادة السكانية الحاصلة في العالم تستدعي زيادة إن. في التربة امتصاص الماء والتأثير في التوازن الغذائي إن .البايلوجية األسمدةقنيات العلمية الحديثة المستخدمة مع صيل الزراعية باستخدام مختلف التالمحا إنتاجية تعاني إذالمالحة تتواجد في مناطق المدارات االستوائية والمناطق المحيطة بالبحر المتوسط األراضيمعظم بسبب الظروف الملحية التي تقلل الزراعي اإلنتاجمن مشكلة التملح وانعكاس ذلك على تردي األراضيهذه امتصاص الماء من قبل النبات مما يترتب على ذلك حدوث بعض التغيرات في الجانب االيضي إمكانيةمن بكتيرية متعايشة مع أجناس توجد Epstein،(1980( المائي اإلجهادمسببا انخفاض في سرعة النمو بسبب اسعوبكتريا االزوتوبكتر وهي حرة المعيشة ومثبتة للنتروجين الجوي بشكل حر أجناسالملوحة مثل في أسبقيةالتحمل الملحي ضرورة ملحة وله إن، االنتشار في مختلف البيئات آالتربة والماء والرسوبيات بسبب التملح وعدم األراضية من رترك مساحات آبي إلىدي روف التي تؤظلمستقبل الزراعة للتغلب على ا ) . 2000، وآخرون Gisbert( ازراعته إمكانية ــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــ . 2013/ 8/ 19 تاريخ استالم البحث . 2013/ 10 / 30 تاريخ قبول النشر حسن 2013، 245 - 240) : 2( 5مجلة ديالى للعلوم الزراعية ، 241 تعزل أنوسفير والتي يمكن زات مختلفة منها ترب الرايئة المتحملة للملوحة توجد في بيالمجهري ءااألحي إن المجهرية المتحملة األحياء إن .من هذه الترب لالستفادة منها في دراسات متعلقة بالتحمل الملحي األحياءهذه ور في زيادة خصوبة وي وهذه الصفة لها دجال نتراآيز مختلفة من الملوحة قادرة على تثبيت النتروجيل . التربة في تراآيز ومقدرتها في تثبيت النتروجين الهدف من هذا البحث هو دراسة نمو البكتريا المتحملة للملوحة إن .مختلفة ملحية البحثالمواد وطرائق ق العينات من عم أخذتواحيها ضبالملوحة من مناطق متعددة من مدينة بغداد و متأثرةجمعت عينات ترب .المختبر إلىبالستيكية معقمة وجلبت بة وضعت في علب رمن سطح الت سم 5-10 ةالزرعية المستخدم األوساطتحضير ): 2008 وآخرون، Islam ( ماء مقطر مكوناته غرام لكل لتر Ashby رعيالوسط الز ، K2HPO4 :0.2 ،MgSO4.7H2O :0.2 ،NaCl :0.2 ،K2SO4 :0.1، 20: مانيتول CaCO3 :5.0 ،Agar :15 مللتر 1000، ماء مقطر. مكوناته غرام في )2010،وآخرون Nitrogen- free )L G (semi- solid ) Girishالوسط الزرعي FeSO4.7H2O :0.1 ،MgSO4.7H2O :0.2 ،K2HPO4 :1.0: لتر ماء مقطر CaCO3 :1.0 ،Na2MoO4.2H2O :5 ،Sucrose :5 ومحلولbromophenol blue : ).N-KOH 0.2مللتر من 100 إلى bromophenol blueغرام من 5تضاف ( مللتر 5 Isolation and Identification: العزل والتشخيص مللتر من التخافيف على 0.5رنش، 5-10لغاية لعينات الترب حضرت سلسلة من التخافيف العشرية ظهور بعد أيام أربعةم لمدة 28حرارة درجةبتري وحضنت في أطباقفي Ashbyسطح الوسط الزرعيِ إلىجرى تشخيصها وتنقيتها بطريقة التخطيط على وسط العزل عدة مرات ثم نقلت المستعمرات البكتيرية تشخيص العزالت جرى .ووضعت في الثالجة لحين استعمالها في التجارب Slantالوسط الصلب المائل : اآلتية األوليةالفحوصات المجهرية بإجراءية بعد عزلها البكتير ثم اجري اختبار . الصبغات ، تكوين السبورات إفراز، صبغة آرام ، ) الصبغة البسيطة(شكل المستعمرة Deep glucose agar البايوآيميائية االختبارات أجريت. األوآسجينلمعرفة متطلبات الكائن المجهري من ).Palleroni )1984 إلىا استناد: اآلتية .الكاتليز ، االوآسيديز ، اختزال النترات وتحلل النشا Salt Tolerance: تحمل الملوحة علىمنها آل حتويي إذ، Slant ةمائل أوساط على شكل) Nutrient( ةالصلب ةالمغذي األوساط تحظر استخدم إذ .% 10.0و % NaCl :0.0 % ،1.5% ، 3.0 % ،4,5 % ،6.0 % ،7.5تراآيز ملح احد ساعة 48م لمدة 30في درجة حرارة توحضنالبكتريا ب المائلة األوساطت لقحللمقارنة، % 0.0الترآيز . تعيين العزالت المتحملة والمقاومة للملوحة لغرض :تقدير النتروجين المثبت تقدير آمية النتروجين التراآمي لمدة سبعة ب قدر النتروجين المثبت من قبل عزالت بكتريا االزوتوبكتر قدر النتروجين في المزارع إذ، الشبه صلب ) LG( الملحي مللتر من الوسط الزرعي25باستعمال أيام . البكتيرية باستعمال جهاز آلدال حسن 2013، 245 - 240) : 2( 5مجلة ديالى للعلوم الزراعية ، 242 النتائج والمناقشة عدد أعلى أن إذ) 1(ت متباينة الجدول البكتيرية المعزولة من التربة آان راتعدد المستعم إنبينت النتائج إلىاستنادا . تربة جافة -1غرام 1×105في حين اقل عدد للبكتريا آان تربة جافة -1غرام 4×105آان الجنس إلىتعود بكتيرية عزالت خمسة الفحوصات المجهرية و االختبارات البايوآيميائية شخصت Azotobacter Spp. الرموز وأعطيتA5،A4،A3،A2،A1 ظهرت البكتريا ذات شكل عصوي وسالبة و لجميع إجباريةهوائية أنهاالصبغات وآذلك ظهرت إفرازلصبغة آرام وغير مكونة لسبورات وقادرة على ، تحلل سيديزموجبة الختبار الكاتليز ، االوآ كانتف آيميائيةنتائج االختبارات البايو أما. العزالت البكتيرية . ات النشا و اختزال النتر .عدد بكتريا التربة ونتائج االختبارات التشخيصية للعزالت البكتيرية .1جدول رمز لهالعز CFU × 105 -1غرام تربة جافة االختبارات الشكلية والمجهرية االختبارات البايوآيميائية الصبغة البسيطة صبغة آرام صبغة السبورات إفراز الصبغة متطلب األوآسجين يزالكاتل تحلل النشا االوآسيديز اختزال النترات A1 4 هوائيه + _ _ عصوية مجبرة + + + + A2 2 هوائية + _ _ عصوية مجبرة + + + + A3 3 هوائية + _ _ عصوية مجبرة + + + + A4 1 هوائية _ _ _ عصوية مجبرة + + + + A5 2 هوائية + _ _ عصوية مجبرة + + + + Salt Tolerance: الملحي التحمل نمو إنلوحظ إذ )2(الجدول بلية التحمل الملحي للبكتريا آانت متباينة للعزالت البكتيريةاق إنالنتائج أظهرت بمعاملة المقارنةآان واضحا ولكنه اقل مقارنة % 3.0و % NaCl 1.5البكتريا في التراآيز المنخفضة من قليل جدا عند الترآيز استطاعت أن تنمو بشكل A1ة ، وقد لوحظ بان العزل NaCl% 0.0ذات الترآيز 6.0 %NaCl مقارنة بالعزالت األخرى التي لم تستطع النمو بالترآيز نفسه لذا يمكن القول بان العزلةA1 من العزالت المتحملة للملوحة ااعتبرت A4و A1هي عزلة بكتيرية مقاومة للملوحة في حين إن العزلتين ولم يالحظ أي نمو ولجميع العزالت البكتيرية في . NaCl% 4.5النمو في الترآيز وذلك الستطاعتهما من ت متطابقة مع ما ذآره وان هذه النتائج جاء. NaCl% 10.0، % 7.5التراآيز الملحية العالية Tippannavar الذين الحظوا إن بكتريا االزوتوبكتر تستطيع ان تتحمل التراآيز الملحية) 1989( وآخرون . NaCl% 1.5األعلى من حسن 2013، 245 - 240) : 2( 5مجلة ديالى للعلوم الزراعية ، 243 .الملحية األوساطمقدرة العزالت البكتيرية في النمو وتثبيت النتروجين في .2جدول رمز العزلة %NaClترآيز آمية النتروجين ة ملغم تالمثب N من المادة1-غم 0.0 1.5 3.0 4.5 6.0 7.5 10.0 A1 ++++ +++ ++ ++ + _ _ 6.70 A2 +++ ++ + _ _ _ _ 3.85 A3 +++ ++ + _ _ _ _ 1.98 A4 ++++ +++ ++ + _ _ _ 5.69 A5 +++ ++ + _ _ _ _ 4.35 عدم وجود نمو بكتيري: -آثافة نمو البكتريا +: :تثبيت النتروجين فيمقدرة العزالت البكتيرية ذات التراآيز الملحية األوساطة للنتروجين في تآمية مثب أعلىحققت A1العزلة إنأظهرت النتائج للنتروجين اقل آمية مثبتة A3في حين حققت العزلة من المادة 1-مغ Nمملغ 6.70والتي آانت المنخفضة Azotobacterبكتريا إنوجد ) 2009( Kizilkyaوفي دراسة .)2(الجدول 1-مغ N غممل 1.98 في الوسط الزرعي 1-مللتر N غراممايكرو 29.35 – 3.50ثبت النتروجين بمعدل ت أن تاستطاع Ashby.لها صفة التحمل الملحي التي مكنتها من التواجد في الترب بكتريا االزوتوبكتر أجناسبعض إن لبكتريا أخرىوفي دراسة الترب ، هذهالمالحة والقيام بدور التثبيت النايتروجيني لتحسين خصوبة لمتحملة للملوحة ا Azotobacterالبكتريا إن) 2008( وآخرون Islam ،وجدوتوبكتر المتحملة للملوحةاالز Nملغرام 1.18 – 0.69يتها للنتروجين آان بومعدل تث NaCl% 10.0تنمو في وسط يحتوي أناستطاعت ي تثبيت النتروجين تباين في مقدرة البكتريا ف يالحظ من خالل النتائج مللتر من الوسط الزرعي ، 25لكل لملحي لكل عزلة بكتيرية ، لذا نالحظ آلما آانت البكتريا قادرة على تحمل اصفة التحمل اعتمادا على الترب إدارة إنالسيما . مستويات عالية من الملوحة ينعكس ذلك على زيادة قدرتها في تثبيت النتروجين Hamdiحث اذآر الب إذفي تثبيت النتروجين ، كتريحسن من قابلية بكتريا االزوتوبالمالحة وغير المالحة آان إذقابلية تثبيت النتروجين من قبل البكتريا يمكن تحسينها بتحسين ظروف التربة الملحية إن) 1982( االستفادة من قبل آثير من الباحثين اآلنالتوجه إن.من المادة1-غرام Nملغرام 10.0معدل تثبيت النتروجين الفسفور وتيسير البوتاسيوم وإذابةيرية النافعة السيما المتحملة للملوحة في تثبيت النتروجين البكت األجناسمن الحظ آمية النتروجين إذ إنتاجهفي نمو النبات وزيادة PGPRفي دراسته لدور) Nakade )2013آر ذ . المجهرية استعمالها لقاحات األحياءالمهم في هذه إن وأآدهي السائدة المثبة لبكتريا االزوتوبكتر آروآوآم .الحيوية األسمدة إنتاجيكون لها دور في أنحيوية للترب المالحة ومن الممكن حسن 2013، 245 - 240) : 2( 5مجلة ديالى للعلوم الزراعية ، 244 المصادر Epstein, E. 1980 .Response of plants to saline environments. In:Rains DW, Valeintine RC, Hollaender A(eds) , Genetic Engineering of Osmor- Egulation, Plenum Press,New York, 7-21. Girish , J.,S.S. Dipti,P.N. Devidas and K.B,Rama. 2010. Isolation and chara- Cterization of salt tolerant nitrogen fixing microorganisms from food. Eur Asia J. Bio Sci. 4,33-40. Gisbert, C.,A.M. Rus, M. Carmen and J.M. Isabel. 2000.TheYeast HAL1 Gene improves salt tolerance of Tomato.Plant Physiology 123,393-402. Hamdi YA. 1982. Application of Nitrogen fixing systems in soil impro- Vement and management. FAO Soil Bull. 49: 45-82. Islam, M.Z.,D.I. Sharif and M.A. Hossain. 2008. Acomparative study of Azotobacter Spp. from different soil samples .J.Soil Nature. 2(3): 16-19. Kizilkya, R.2009.Nitrogen fixation capacity of Azotobacter Spp. strains Isolated from soils in different ecosystems and relationship between them and the microbiological properties of soils.J.Environ.Biol. 30(1):73-82. Nakade D. B. 2013 .Bacteria Diversity in Sugarcane(saccharum officina- Rum) Rhizosphere of salinesoil.J.Biological Sci.Vol.2(2),60-64. Palleroni N.J. 1984.Gram negative aerobic rods and cocci. In: Krieg, N.R., (Ed). Bergeys manual of systematic bacteriology.vol.I,II,III,Iv,pp.140-199. Tippannavar, C.M., M.N.Rddy and E. Rajashekara, 1989. Tolerance of Azotobacter chroococcum strains to different salt concentration and pH Levels .Farming systems, 5:1 and 2, 24-48. حسن 2013، 245 - 240) : 2( 5مجلة ديالى للعلوم الزراعية ، 245 STUDY GROWTH SALINITY TOLERANT BACTERIA AND ITS CAPABILITY IN FREE NITROGEN FIXATION IN SALINTY MEDIUMS. Kareem U. Hasan *Lecturer- Dept. of Soil And Water Res.-College of Agric. –Univ. of Baghdad- Republic of Iraq. kareemaubaid@yahoo.com ABSTRACT Salinity tolerant bacteria were isolated from salinity affected soil samples by Ashby's medium. The isolates were purified and identified based on morphology and biochemical's tests. Results showed five isolates related to, Azotobacter Spp. Their salt tolerance capability tested in growth and nitrogen fixation with mediums content 0.0%, 1.5% , 3.0% , 4.5% , 6% , 7.5% and 10.0% NaCl,. Results showed all isolates could grow in 0.0% - 3.0% NaCl ,and A1 , A4 isolates could grow in 4.5% NaCl. While only A1 isolate can grow in 6.0 % NaCl .The isolate A1 was superior in Nitrogen fixation (6.70 mg N gm-1) whereas the lowest amount of nitrogen fixation (1.98mg N gm-1 )was with A3 isolate. Salinity tolerant Azotobacter Spp. has attracted the attention of agriculturists as soil inoculums to improve the plant growth and yield in salinity soils. Key words: Soil bacteria Salinity tolerant Nitrogen fixation