<4D6963726F736F667420576F7264202D20C72ECF2EDACFE4C7E420E4DAE3C920E6C7CED1E6E4> نوو آخر عبد الرضا 2013، 68 - 58) : 2( 5للعلوم الزراعية ، مجلة ديالى 58   . Pseudomonas aeruginosa المعالجة الحيوية لبقايا المبيدات الحشرية بوساطة علي آاظم أنوار هادي رحمن رشيد الطائي عدنان نعمة عبد الرضا .جامعة ديالى -آلية التربية للعلوم الصرفة –قسم علوم الحياة - أستاذ * .جامعة ديالى -آلية التربية للعلوم الصرفة –قسم علوم الحياة -تاذ مساعد أس** .جامعة ديالى -آلية التربية للعلوم الصرفة –قسم علوم الحياة -مدرس مساعد * مستخلص ال ، lambde- cyhalothrin(يالسالالت البكتيرية المقاومة لمبيد وتشخيص تضمنت الدراسة عزل fenvalerate (من ترب زراعية مختلفة في مدينة بعقوبة، وأظهرت النتائج بأن غالبية العزالت م العزل وت االختباراتشخصت بوساطة إجراء إذ Pseudomonas aeruginosaالزوائف الزنجارية إلىتعود السائل الحاوي حاألمالالمجهرية ،والكيموحياتية ،وبعدها طبعت هذه العزلة على وسط والفحوصاتالزرعية، السائل تحت ابقي بوساطة تقنية الكروموتوآرافيأظهرت نتائج قياس الترآيز المت إذعلى المبيد ات قدرة على التكيف، ذ Pseudomonas aeruginosaبأن الزوائف الزنجارية العاليHPLCالضغط .مل من المبيدين/ مكغم 200،250يزين والنمو بترآ ، وبينت النتائج احتواءها ة المحلية لزوائف الزنجارية المحتوى البالزميدي للعزل دراسة تتم وآذلك Acridin orangeأجريت عملية تحييد الدنا البالزميدي بإستخدام مادة ، على حزمة بالزميدية واحدة آبيرة انها للحزمة مل من خالل فقد/ مكغم 1024إذ نجحت هذه المادة في تحييد الحزم البالزميدية عند ترآيز ثم قيس lambde- cyhalothrinمل من /مكغم200البالزميدية ،وبعدها طبعت هذه العزلة على ترآيز المتبقي من أظهرت النتائج بأن النسبة المئوية لترآيز HPLCترآيز المبيد المزرعة بوساطة جهاز lambde- cyhalothrin ينات الرئيسة للتكسير ، ومن هذا نستنتج بأن الج% 100األخير األسبوعفي .المبيدات تقع على البالزميدات . Pseudomonas aeruginosa ، Bioremediation ،مبيدات زراعية :الكلمات المفتاحية ة المقدم انية ات اإلنس ة حاج ي وتلبي اج الزراع ادة اإلنت ي زي ر ف د آبي ى ح ة إل دات الزراعي همت المبي أس واسعة النطاق أضرار إلىالمتزايدة من المواد الغذائية، لكن يؤدي سوء االستخدام غير األمن للمبيدات حة ى ص انعل ة اإلنس ن والبيئ دة م د واح رإذ تع ي األ أآث مم ف يوعا للتس باب ش اءس ًا أنح الم جميع الع )U.S.EPA ، (1999 ل ن قب ة م ور المقاوم بب ظه ا يس رط له تعمال المف اتاآلوان االس ذلك ف ، وآ ارير ومنها منظمة حماية البيئة بأن وأثبتتظهور بقاياها في المحاصيل والتربة ، د من التق العدي .) 2009، وآخرون Helfrich(بالعديد من السرطانات اإلصابةالمبيدات هي سبب ــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــ . 2013/ 9/ 19 تاريخ استالم البحث . 2013/ 11/ 13تاريخ قبول النشر نوو آخر عبد الرضا 2013، 68 - 58) : 2( 5للعلوم الزراعية ، مجلة ديالى 59   هذه المبيدات في المحاصيل الغذائية، راآمبسبب هذه المشاآل وبسبب القلق البيئي المرتبط مع ت اه، جاءت د من الطرائق األهميةومصادر المي لمعالجة المواقع الملوثة بهذه الملوثات، وهناك العدي ادات بسبب ينها المعالجة الكيمالمختلفة للمعالجة بضم د من االنتق ائية، والفيزيائية التي واجهت العدي ببها ي تس رة الت اآل الكبي اجالمش د، آإنت وامض، والقواع عاعاتالح امة واإلش ن الس ال ع ذه أن فض ه 2010،وآخرون Nyakundi (الطرائق غير اقتصادية وغير آفوءة ، وال تتناسب والمساحات الكبيرة ذلك آان ) وير ل ة لتط وءة ت الحاج ق آف ةطرائ رق وآمن ي الط ات وه ذه الملوث ة ه ادية لمعالج واقتص ة اء المجهري تخدام األحي من اس ي تتض ة الت ا ( البايولوجي ات أوالبكتري ًا او ) الفطري وافرة طبيعي المت .)Magan ،2005 (سميتها أوالمقدمة لتحطيم أو تكسير المبيدات لتكيف مع هذه للمثل هذه المرآبات فإنها سوف تطور ميكانيكيات المجهرية األحياءعندما تتعرض روريًا ون ض ات يك ذه الميكانيكي ور ه روف ، وان تط االظ الت وأساس ل ب ذا يتمث حطيموه ايولوجي المسوؤلة عن تكسير اإلنزيماتبوساطة أماالتحطيم سيكون إن، إذ Biodegradationالب من المرآبات اآلخر جابة للمواد آيميائية طبيعية، لكن القسم تستحث است اإلنزيماتمواد طبيعية ،وهذه (فترة التطبع للكائن أو Lag،وان هذا الوقت يعكس طول فترة اإلنزيمات الستحثاثاوقت إلىيحتاج Davis 1980،وآخرون( ة ف الزنجاري نس الزوائ ن ج ة م زارع نقي ايولوجي م ير الب ة التكس ي دراس تخدم ف ٌأس Pseudomonas aeruginosa البكتريا السالبة للصبغة آرام شيوعا في التربة والتي أآثروهي من متطلبات غذائية خاصة للنمو إذ تمتاز بقابليتها الكبيرة على التطبع ، واستهالك مدى من إلىتحتاج ال ي تحط ًا ف ب دورًا مهم ذلك تلع ة ،وب ات االروماتي ى الحلق وي عل التي تحت ة آ ات الكاربوني يم المرآب اطة ير بوس اوم التكس ي تق ناعية الت ة، والص ات الطبيعي اءالمرآب ة أحي رىمجهري Robert( أخ .) 1997،وآخرون ذه ةه اطة القابلي ون بوس ان تك ب األحي ي اغل اتف ث أن اإلنزيم دات حي ا البالزمي فر له ي تش الت ـ يري ويعد من البكت DNAالبالزميد هو عبارة عن ترآيب حلقي يتكون من خيطين حلزونيين من ال االعتماد والبالزميدات لها القابلية على التضاعف الذاتي بدون العناصر الوراثية خارج الكروموسومية آذلك يتميز البالزميد ، Repliconعلى منشأ تضاعف يدعى الحتوائها على آروموسوم المضيف مثل Prokaryotesالنواة جين ويوجد في بدائية ) 300-1(بأنه مستقر وراثيًا ويحتوي على جينات من ا وآذلك في حقيقية النواة مثل الخمائر والفطريات وتكون الجينات المحمولة Eukaryotesالبكتري Prescott ؛ 1999،وآخرون Lu(على البالزميد غير ضرورية لحياة وتكاثر الخلية البكتيرية .) 2005 وآخرون، ا الفاقدة للبالزميد تكون طبيعية إن ما وجدت فأنها تمنح صفات إذاولكن في وظائفها البكتري افية ا إض وم به ي تق ائف الت ن الوظ د م اك العدي ذلك هن تثنائية ، ل روف اس ت ظ يش تح ن الع ا م تمكنه اء راوة، والبق امًال للض فه ع ة وبوص ادن الثقيل ة المع ه مقاوم د من وع البالزمي ب ن دات وبحس البالزمي البايولوجي للمواد حطيم مغذيات مختلفة آالت باستهالكتي تسمح ،والتطبع البيئي، ووظائف التأييض ال ويمكن للخاليا البكتيرية ان تفقد البالزميدات تلقائيا، السامة ،والهيدروآاربونات العضوية، والمبيدات زيادة تردد وباإلمكان spontaneouslyولكن بترددات واطئة وهذه الظاهرة تسمى بالتحييد التلقائي نوو آخر عبد الرضا 2013، 68 - 58) : 2( 5للعلوم الزراعية ، مجلة ديالى 60   ا فقدان ا وبشكل خاص DNAمرآبات تحشر نفسها بين قواعد إلىلبالزميدات عند تعرض الخالي الي ردين البرتق ل االآ ات مث ديوم Acridine Orangeاالآردين د االثي Ethidium،وبرومي bromide مثل أخرى ،أو استخدام موادSodium dodecyl sulfate)SDS) ( Mickelsen ية العظمى من البالزميدات تكون مستقرة بدرجة آبيرة والتي تتطلب الغالب أنأال ،)1985،وآخرون .العوامل الكيميائية لغرض زيادة تردد االنعزال التقائي ،أو Curing Agentsاستعمال عوامل محيدة عملية وإجراء آفاءة في عملية تحليل المبيدات األآثر دراسة المحتوى البالزميدي للعزلة توتم ،واستخدمت تقنية الكروماتوغرافي Curing plasmid processيدات للعزالت المختارة طرد البالزم لدراسة High Performance Liquid Chromatography (HPLC)عالية األداء السائل تحليل والمعتمدة عالميًا إذ أنها تتميز لتعٌد من الطرق الحديثة ل إذالبايلوجي تحطيمالقابلية العزالت على كانية التحديد الكمي والكيفي في الوقت نفسه وإمكانية تحليل أآثر من مرآب ضمن العينة الواحدة بـإم وألهمية هذا ) Scott،2003( )جزء من مليون ( ppm،وآذلك الكشف الكمي حتى تراآيز تصل إلى الموضوع فقد جاءت الدراسة بهدف الحصول على عزالت محلية مفككة للمبيدات الزراعية المتبقية البحثطرائق المواد و العزل وتشخيص العزالت البكتيرية ا من ترب زراعية مستخدمة للمبيدات في مدينة بعقوبة . حضر إذاشتملت مصادر عزل البكتري ُحضر المحلول الملحي ( Normal Salineمل من 100غم من التربة ويذوب في عالق التربة بأخذ ، )مل 100 إلى مل ماء مقطر، ثم أآمل الحجم 90وديوم في غم من آلوريد الص0.85 بإذابةالفسلجي زج م م ازج ث ح Vortexبالم م رش ائق ث ر دق دة عش اطة ولم يح أوراقبوس No Watman ترش ط 0.1 تخدم وس دات M9وأس ة للمبي ا المحلل زل البكتري ن ةالمتكونلع ات K2HPO4 : م آبريت NaCLغم ، ) 3( KH2PO4ئية الهيدروجين فوسفات البوتاسيوم ثنا غم، )6(البوتاسيوم الحامضية م ضبط )1( NH4CL،) غم0.5( دروجيني على األسغم لكل لتر من الماء المقطر وت م 7.2الهي ث ،وبعد التعقيم تم 2)انج / باوند 15(دقيقة وبضغط 15لمدة ° م121عند درجة حرارة تعقيمه بالموصدة افة يوم إض ات المغنيس ول آبريت والري ) M 1(محل دار م ل و 2بمق د 0.1م ول آلوري ن محل ل م م يوم م) 1M(الكالس يح المعق ة بالترش دات البيروثيدي دها المبي اف بع ,fenvalerate(،وتض cyhalothrin-cyhalothrin ( ين زين مختلف ط وبترآي ل وس ل لك كل منفص يح بش ة بالترش المعقم 100في وسط مل من الراشح وزرع 1،وبعدها اخذ Saqib ،(2004 (مل /مكغم )250(و) 200( دقيقة /دورة 80في الحاضنة الهزازة بسرعة ° م37حضن بدرجة حرارة يمل الحاوي على المبيد و .أسابيع ةولمدة ثالث نوو آخر عبد الرضا 2013، 68 - 58) : 2( 5للعلوم الزراعية ، مجلة ديالى 61   على )2004وآخرون، Holt (شخصت المستعمرات مبدئيًا اعتمادًا وٌشخصت العزالت البكتيرية ها، وقوامها، ورائحتها، وحجمها على وسط الصفات المظهرية ،وتضمنت شكل المستعمرات، ولون االختبارات أيضا لتشخيص العزالت واستخدمت أآار الماآونكي وبحسب تفاعلها مع صبغة آرام ، ة ة المختلف دةالبايوآيميائي و آاألآس ة ،والنم زال، والحرآ تهالك ،واالخت اآونكي ،واس ط الم ى وس عل .وتخمر السكريات واليوريا األحمرالسترات واالندول وفوآس بروسكاور و مثيل HPLCجهاز باستخدامقياس الترآيز المتبقي : اختيار الطور المتحرك : يأتي من الحضن وآما أسبوعقيست التراآيز المتبقية من المبيدات بعد آل وبنسب ) hexane:dichloromethane:propanol اآلتيُأستخدم الطور المتحرك المؤلف من المزيج .على التوالي لمدة ساعتين v/v 96.8:3:0.2 قدرها أوراقالطور العضوي تم فصله بوساطة قمع فصل وبعدها المحلول الناتج تم ترشيحه بوساطة فصل مل من آل عينة 100غير الذائبة اخذ األخرىوالمواد األلياف إلزالة 0.5بحجم Whatmanترشيح , lambde-cyhalothrin(لول العياري للمبيدين المح .مل من الطور المتحرك 50واستخالصها ب fenvalerate ( تم فصلهما بوساطة عمودFast Liquid Chromatographic )FLC ( تحت ظروف ،تم مالحظة النتائج HPLCمايكروليتر من المحلول المرشح المائي ويحقن بعمود 20أخذمثالية وبعدها ، وتم حساب التراآيز نانومير 236طول الموجي البنفسجية على ال قالفو األشعةبوساطة آاشف : اآلتيالقانون باستخدامالمتبقية وموازنة النتائج مع المواد القياسية لكل مبيد وذلك عدد مرات التخفيف× ترآيز القياس ×مساحة حزمة النموذج = ترآيز العينة المحقونة مساحة حزمة القياس Extraction DNA Plasmidوالترحيل الدنا البالزميدي استخالص بأستخدام )Promega U.S.A(على تعليمات الشرآة المجهزة اعتماداالدنا البالزميدي استخالصتم نبوبة أ إلى مايكروليتر من المزروع البكتيري 600نقل إذ المواد والمحاليل المجهزة لهذا الغرض ، ومزج Cell Lysis Bufferالمحلل للخاليا الدارئمايكروليتر من 100 أضيف )مل1.5(ابندروف -4(مايكروليتر من محلول التعادل المبرد 350 وأضيفمرات 6 األنبوبةالخليط عن طريق قلب 8C°(Cold Neutralization Solution ة ومزجت المحتويات بالقلب مرات عدة ونبذ المزيج بوساط . دقائق 3دقيقة لمدة / دورة 1300المنبذة الصغيرة بسرعة وأهملت الحبيبة Pure Yield Minicolumnعمود تنقية إلىمايكروليتر 900نقل الراشح تقريبًا 1300ونبذ المزيج بسرعة Collection Tubeالجمع أنبوبةاللزجة المتكونة، وضع عمود التنقية داخل . الراسب المتكون في أنبوبة الجمع ، وإرجاع عمود التنقية داخلها إزالةثانية تم 15دقيقة لمدة / دورة الى عمود التنقية Endotoxin Removal Washمايكروليتر من محلول 200أضيف Minicolumn مايكروليتر من 400ثانية اضيف 15دقيقة لمدة / دورة 1300ونبذ المزيج بسرعة 1300ونبذ المزيج بسرعة Mincolumnعمود التنقية إلى Column Wash Solutionمحلول . ثانية 30دقيقة بالمنبذة الصغيرة لمدة / دورة نوو آخر عبد الرضا 2013، 68 - 58) : 2( 5للعلوم الزراعية ، مجلة ديالى 62   30مل ، ثم أضيف 1.5أنبوبة إبندروف نظيفة سعة إلى Minicolumnنقل عمود التنقية ك المزيج لمدة دقيقة أنبوبة عمود التنقية وتر إلىمباشرة Elution Bufferمايكروليتر من محلول . واحدة بدرجة حرارة الغرفة أجريت عملية الترحيل الكهربائي لفصل ° درجة مئوية20-وحفظ الدنا البالزميدي المستخلص بدرجة 20سم وبمعدل مرور للتيار /فولت 75تم الترحيل تحت فرق جهد قدرة إذخليط الدنا المستخلص وفحصه بطول UV-Transilluminatorا تم فحص الهالم بوساطة جهاز دقيقة وبعده 90ولمدة أمبيرملي . )Oconnell ،1984(ثم صور بوساطة الكاميرا نانوميتر 336موجي مقداره Curing of Plasmid DNAتحييد الدنا البالزميدي الي ردين البرتق ادة االآ تخدم م ة بُأس ف الزنجاري ا الزوائ د لبكتري د البالزمي م تحيي Acridin orangeت حيث ُحضر محلول خزين للمادة االآردين ،) Trevors، 1986(بوصفها مادة محيدة وباالعتماد على مل وُحضرت تخافيف مختلفة من هذا المحلول الخزين للحصول على /مكغم 1000البرتقالي بترآيز نابيب ، ُلقحت األ)مل/مكغم256،128،64،32،16، 512، 3000 ، 2500 ، 1024،2000(التراآيز ـ ا المنماة في المرق المغذي بعمر ) 0.1(الحاوية على هذه التراآيز ب ساعة حضنت 18مل من البكتيري .ساعة ، بعدها سجل الترآيز المؤثر على نمو البكتريا 24ولمدة ° م37بدرجة األنابيب ا للمادة المحّيدة من خالل تحديد اقل ترآيز له عم األدنىتم تحديد الترآيز المثبط ل على تثبيط نمو البكتيري استمرتوبعدها عملت تخافيف عشرية لألنبوب الحاوي على أعلى ترآيز للعامل المحيد الذي عنده )Subminimal inhibitory concentration األنبوبيسمى هذا ( البكتيريا بالنمو لى وسط األآار المغذي وحضنت بدرجة ع إلى )8-10(الى ) 4-10() مل من أنابيب التخفيف) 0.1(زرع ساعة وتم التحري عن فقدان الحزم البالزميدية بإالعتماد على تعليمات الشرآة 24ولمدة ° م37حرارة .Promega USAالمجهزة ةوالحضن لمدة ثالث M9تم اختبار العزالت الفاقدة للبالزميد من خالل تنميتها على وسط المبيد السائل .قياس الترآيز المتبقي وبعدها أسابيع نوو آخر عبد الرضا 2013، 68 - 58) : 2( 5للعلوم الزراعية ، مجلة ديالى 63   النتائج والمناقشة ا باالعتمادٌشخصت المستعمرات على خصائصها المظهرية إذ ظهرت العزالت على أنها خالي عصوية قصيرة سالبة للصبغة آرام غير مكونة للسبورات ومكونة لمستعمرات آبيرة شاحبة اللون عند ها غير مخمرة للسكر الالآتوز ،وتفرز صبغة خضراء مزرقة الماآونكي ألن أآارتنميتها على وسط ،وتمتاز بأن King mediaعند تنميتها على وسط اَالآار المغذي الصلب وعلى وسط أنتاج الصبغات االختبارات البايوآيميائية فأظهرت نتائج سالبة أما لها القدرة على النمو في درجات حرارية مختلفة، و دول وف ص االن ص فح ا يخ ل فيم كاور والمثي رآس بروس ا األحم ص والنش ة لفح ترات وموجب والس بورات إذ ة للس ر مكون ة وغي اليز والحرآ دة والكات ين واالآس ع الجيالت ا وتميي رتاليوري ذه أظه ه وقد تم Pseudomonas aeruginosaالفحوصات بأن هذه العزالت تابعة لجنس الزوائف الزنجارية .في حساب الترآيز المتبقي للمبيدات األداءافي العالي استخدام طريقة الفصل الكروماتوغر .لمبيدين وفي تجربتين ايوم 21بعد يوضح النسب المئوية للتراآيز المتبقية . 1جدول ترآيز المبيد النسبة المئوية للترآيز المتبقي في التجربة األولى النسبة المئوية للترآيز المتبقي في التجربة الثانية L 200 µg / ml 2.86 3.9 L 250 µg / ml 12.4 2.84 F 200 µg / m 2.63 3.57 F 250 µg / ml 23.8 2.22 Lambde-Cyhalothrin=L F Fenvalerate. وجي ذات آفاءة في التكسير البايول P. aeruginosaالساللة البكتيرية إنوجد من خالل النتائج مل وبذلك / مكغم 200،250بترآيز ) (fenvalerate,lambde-cyhalothrinللمبيدات البروثيدية تتفق هذه النتائج مع العديد إذ.للملوثات Bioremedationاستخدامها في المعالجة الحيوية إمكانية ا وفطريات (المجهرية األحياءقدرة أآدت من الدراسات والبحوث التي استهالك مدى على ) بكتري الحاالت قابليتها على استهالك مرآب واحد أو أآثر بوصفها مصدرًا أآثر واسع من المبيدات وفي وقد تم )2011،وآخرونAbrusci؛ 1989 ، وآخرون Hayase ؛Magan، 2005(للكاربون والطاقة ي ت ات الت ن الدراس د م اك العدي ن هن ة لك ف الزنجاري نس الزوائ ن ج ة م زارع نقي تخدام م د اس إنؤآ االئتالفاتبكتيرية مؤثرة في التكسير البايولوجي موازنة بالمزارع النقية إذ تسهم هذه ائتالفاتاستخدام األنواعبالتحليل الجزئي للمرآب وتقوم األنواعمع بعضها البعض في إزالة سمية الملوثات إذ تقوم احد رى تخداماألخ دراً باس فه مص ه بوص ة عن ية الناتج واد االيض ة الم اربون والطاق ؛ Clark،1979( للك Deslpa،2003(. نوو آخر عبد الرضا 2013، 68 - 58) : 2( 5للعلوم الزراعية ، مجلة ديالى 64   أن استخدام الوسط إذ بّينت الدراسات األمالحاستخدم في هذه الدراسة الوسط السائل الحاوي على دات، وعلى ه دور مؤثر في استهالك المبي ة تختلف بالترحال فإن الظروف البيئية في أيالسائل ل ي ا ة ف ة المطبع ن المزرع رة ع ة آبي ائل بدرج ط الس رون Hernandez (لوس ؛ 2010 ،وآخ Boopathy ،2000( مثل هذه المواد يسبب زيادة إضافةيكون أنمواد مغذية خارجية للوسط لكن يمكن أي إضافةلم يتم نتج عنها ت مفاجئة في النشاط المايكروبي رغم أّن الزيادة في النشاطات المايكروبية الكلية لوحدها قد ال . )Gouma ،2009 (ض الملوثاتحاال زيادة اي دي دنا البالزمي د ال ة تحيي راء تجرب م إج وى Plasmids curingت ربط المحت ة ل ي محاول ف البالزميدي بقدرة بكتريا الزوائف الزنجارية على تحليل المبيدات والتطبع عليها،واستخدامها بوصفه ادة تخدام م م اس ة إذ ت اربون والطاق درًا للك دت Acridine orangeمص دة إذ فق ادة محّي فها م بوص مل، وتم اختبار قدرتها على استهالك المبيد من /مكغم 1024عزالتها الحزمة البالزميدية عند الترآيز ط ي وس ه ف الل تنميت د M9خ ي للمبي ز المتبق اس الترآي م قي دها ت د وبع ى المبي اوي عل تخدامالح باس على بالزميد آبير الحجم نسبيًا P. aeruginosaبينت النتائج أحتواء العزلة المحلية إذ HPLCجهاز كل ح الش دات ويوض ير المبي فة تكس د ص ذا البالزمي ل ه دي ) 1(إذ يحم وى البالزمي .Pالمحت aeruginosa م دول رق دها ، والج د وبع ة التحّي ل عملي د ) 2(قب ي للمبي ز المتبق ح الترآي يوض Lambde-Cyhalothrin ة حيث بينت النتائج عدم قدرة البكتريا على في التجربة الثانية للعزلة المحّيد ة فة محمول ذه الص أن ه د ب ا يؤآ د مم ة التحيي راء عملي د أج ير بع التكس .)1978،وآخرون Serdar؛1982،وآخرونFisher ؛Sevastsyanovich،2008(بالزميديا نوو آخر عبد الرضا 2013، 68 - 58) : 2( 5للعلوم الزراعية ، مجلة ديالى 65   المسار الثاني Mالمسار األول ↓ ↓ ↓ ، %0.7، ترآيز الهالم قبل عملية التحّيد وبعدها P.aeruginosaالمحتوى البالزميدي .1شكل . دقيقة 90سم لمدة / فولت 75 محّيدةالغير P.aeruginosa يمثل المحتوى البالزميدي للعزلة : المسار األول M :1000( دليل الحجمي يمثل ال bp . ( . المحّيدة P.aeruginosaيمثل المحتوى البالزميدي للعزلة :المسار الثاني في التجربة الثانية للعزلة المحيدة Lambde-Cyhalothrinيوضح الترآيز المتبقي للمبيد .2جدول تسلسل األسابيع النسبة المئوية للترآيز المتبقي ترآيز المبيد 1 200 µg / ml 100 االستنتاجات ذات آفاءة في التكسير البايولوجي للمبيدات البروثيدية P. aeruginosaالساللة البكتيرية إنوجد -1 fenvalerate,lambde-cyhalothrin ز م 200،250بترآي ذلك / مكغ ل وب ةم ي إمكاني تخدامها ف اس .للملوثات Bioremedationالمعالجة الحيوية على بالزميد آبير الحجم نسبيًا إذ يحمل هذا البالزميد صفة P.aeruginosaة المحلية احتواء العزل-2 ز اس الترآي ائج قي ه نت ا اظهرت ذا م ة وه اربون والطاق درًا للك فه مص تخدمة بوص دات المس ير المبي تكس .P.aeruginosaعامل محيد جيد لبكتريا Acridin orangeإن مادة . المتبقي للعزلة المحيدة بالزميد نوو آخر عبد الرضا 2013، 68 - 58) : 2( 5للعلوم الزراعية ، مجلة ديالى 66   المصادر ALbrusci , C . J . L. Pablos , T. Corrales , J. Lopez- Marin , I .Marin and . F.Catalina. 2011. Biodegradation of photodegraded mulching films based on polyethylenesand stearates of calcium and iron as prooxidant . International bio deterioration and Biodegradation. 65 : 451 – 459. Boopathy, R. 2000. Bioremediation of explosives contaminated soil. International Biodeterioration and Biodegradation .46 29-36. Clark , R . R . E . S . Chian , and R . A . Griffin . 1979 . Degradation of polychlorinated biphenyls by Mixed Microbial cultures.Applied and Environmental Microbiology. Vol 37 (4) : 680-685. Davis , B . D . R .Dulbeco , . N Eisen and H.S. Ginsberg .1980. Microbiology . third edition .United Stated. Deslpa, S. 2003. Studies on the degradation of insecticide Endosulfan by indigenous bacterial strains .Doctoral Research. Fisher, P. R. Appletion and J.M. Pemberton.1978. Isolation and Characterization of the Pesticide-Degrading Plasmid pJP1 from Alcaligenes paradoxus Jourmal of Bacteriology. Vol. 135(3): 798-804. Hayase , N . K . Taira , and K .Furukawa .1989. Pseudomonas putida kF 715 b phABCD oprn encoding biphenyl and polychlorinated biphenyl degradation cloning , analysis , and expression in soil bacteria . Journal of bacteriology, Vol .172 ( 2): 1160 -1164 . Helfrich, L. A. D. L. Weigmann, P.Hipkins and E. R. Stinson 2009. Pesticides and Aquatic Animals: A Guide to Reducing Impacts on Aquatic Systems. Virginia Cooperative Extension.Virginia State University. Hernandez,M.L. and E.Sanchez- Salinas.2010.Biodegradat- ion of the. Organophosphate pesticides tetrachlorvinphos by Bacteria isolation from agricultural soil in Mexico. Rev. Int. Contam. Holt,J.G. N.R. Krieg, P.H.A. Sneath, J.A. Staley, and S.T.Williams.2004. Bergy s Manual Of Derminative Bacteriology. (9th) ed. Gouma,S. 2009. Biodegrdation of Mixtures of pesticides by bacteria and White rot. Thesis of Doctor of Philosophy Crnfield University School of Health. Lu , Y . N.G. Love , and C.P. Grady . 1999. Microscopic methods for distinguishing among three ceil types in Tol plasmid – Carring pseudo monas putida cultures . Vol. 173.: 195 – 201. Magan, N. 2005.Use of Fungi in Bioremediation of pesticides . Applied Mycology Group Institute of Bioscience and Technology Cranfield University. نوو آخر عبد الرضا 2013، 68 - 58) : 2( 5للعلوم الزراعية ، مجلة ديالى 67   Mickelsen, P.A. J.J. Plorde, K.P. Gordon, C.Hargisis and J.Muclure. 1985. Instability of antibiotics resistance in a strain of Staphylococcus epidermidis isolated from an outbreak of prosthetic valve endocarditis. J. Infect. Dis. Vol152: 50–58. Nyakundi,W.O G. Magoma, J.Ochora, and A. B. Nyende 2010.Biodegradation of diazinon and methomyl pesticides by white rot fungi from selected horticultural farms in rift valley and central provinces Kenya. University of Agriculture and Technology, Nairobi, Kenya: 639-653 Prescott, L. M. J. P. Harley, and D. A. Klein .2005. Microbiology. 6th ed. McGraw. Hill companies Inc. New York. Robert , E . P .Anderson and E . W. Nester . 1997. Microbiology (Human perspective) .Second edition. Published by Brown (William C.) Co ,U.S.1 -848. Saqib,Z.A. 2004.Studies on insecticides degrading bacteria .Thesis to department of Zoology , University of Punjab, Lahore. Scott, R.P. W. 2003. Liquid Chromatography. Chrom-Ed Book Series. law and International Treaties. 1-102. Serdar, C.M، D.T .Gaibson, K.M. Munnecke, and J.H. Lancaster. 1982.Plasmid involvement in parathion hydrolysis by Pseudomonas diminuta’, Appl. Environ. Microbiol، Vol. 44:246-249. Sevastsyanovich ,Y .R, R.Krasowiak. L. E., Bingle, A.S. Haines, S.L. Sokolov, I.A. Kosheleva, A.A. Leuchuk, M.A Titok and K.Smalla,2008. Diversity Of IncP-9 plasmids of Pseudomonas .Microbiology, 154: 2929– 2941. Trevorse, J.T. 1986 . Plasmid curing in bacteria . FEMS. Microbiol . Rev . Vol(32) : 149–157. U.S EPA .1999. recognition and management of pesticide poisoning . fifth edition . U.S. Environmental Protection Agency. Washington. نوو آخر عبد الرضا 2013، 68 - 58) : 2( 5للعلوم الزراعية ، مجلة ديالى 68   BIOREMEDIATION OF PESTICIDE RESIDUES BY Pseudomonas aeruginosa. Adnan Neama Al- Azawy Hadi Rahman Rasheed Anwar Ali Khadam *Dept. of Biology – College of Pure Sciences – Univ. of Diyala. ABSTRACT The study was included isolation and identification of bacterial strains resistant of pyrethoid pesticides (lambde-cyhalothrin, fenvalerate)from agricultural soils in Baquba city. The results appeared that the most of bacteria strain are Pseudomonas aeruginosa .All bacterial isolates were identified by the biochemical, cultural and microbial characteristic and then isolated adapted to mineral salt media containing pesticides .The research findings of residue concentration by use HPLC technique that Pseudomonas aeruginosa was adapted and growth to concentration Viz. 250µg/ml , 200 µg /ml of (lambde-cyhalothrin, fenvalerate). The plasmid content of the local isolates was studied and the results showed isolates contain single large plasmid Band, curing was conducted by use of Acridin orange. The plasmids were lost at concentration 1024µg/ml and then isolated adapted to concentration 200µg/ml lambde-cyhalothrin thereafter the culture was assessed by HPLC and results showed the rate of residue concentration in last week was 100 ,it was concluded that the major gene for pesticides degradation was located on plasmid. Key words: Pesticide , Pseudomonas aeruginosa , Bioremediation