أستخلاص وتنقية أنزيم اليوريز من Proteus vulgaris المعزولة من أطفال عراقيين مصابين بالتهابات المجاري البولية الطائي 2011 ، 37 - 30 ) :1 ( 3يالى للعلوم الزراعية ، مجلة د المعزولة من أطفال Proteus vulgaris Pv12 البكترياأستخالص وتنقية أنزيم اليوريز من .في العراقمصابين بالتهابات المجاري البولية هادي رحمن رشيد الطائي جامعة ديالى- كلية العلوم- قسم علوم الحياة الخالصة Proteus vulgarisمحليـة نـزيم اليـوريز المـستخلص مـن العزلـة ال أ تنقيـة نتائجأظهرت Pv12 ملغـم بـروتين / وحـدة 3.33 كانـت الفعاليـة التوعيـة أنيوم ناستخدام كبريتات االمو ب ــضلوان ــسبة أف ــباع ن ــابين إش ــت م ــة ) %50 - 25( تراوح ــرات التنقي ــدد م وع أاليـوني التبـادل د النتـائج باسـتخدام عمـو وأشـارت , التواليلىع% 68.4 و1.91والحصيلة DEAE-Sepharoseملغـم بـروتين وبعـدد مـرات تنقيـة / وحدة 109.68الية النوعية ع الف أن ــت ــصيلة بلغ ــتخدام %60.03 و 55.3وبح ــفات دارئ وباس ــز PEM الفوس ــي م20 بتركي ل ملـي 0.15 وكـان اسـترداد اليـوريز عنـد التركيـز الملحـي 7.5موالري ورقم هيـدروجيني ملغـم بـروتين وعـدد مـرات تنقيـة / وحـدة 175.09 بينما كانت الفعاليـة النوعيـة ،موالري ح الهالمــي يباســتخدام طريقــة الترشــ علــى التــوالي% 36.55 و 90.25 إنزيميــةوحــصيلة SephacrylS-200Chromatography , ــوزن الجزيئــي لليــوريز بطريقــة ــم حــساب ال وت أن نقطـة التعـادل إلـى أشـارت النتـائج كمـا , دالتـون 215000الترشيح الهالمي وقـد بلـغ Proteus vulgaris Pv12 اليـوريز المنقـى والمـستخلص مـن العزلـة ألنزيم pIالكهربائي . 5.3 تكان الترشـح الهالمـي ، الـوزن الجزيئـي ، نقطـة التعـادل , يـوريز ,Proteus vulgaris: الكلمات المفتاحيـة .الكهربائي المقدمة نهـا تعـد أالإ األمعـاء الطبيعـي فـي من مكونات النبيـت Proteusبكتريا جنس المتقلبات تعد إحـداث القنـاة البوليـة ممـا تكـون سـببا فـي إلـى احد أهم الممرضات االنتهازية عند انتقالها لـى التهـاب حـويض الكليـة الحـاد كمـا تـسبب إالتهابات المجاري البولية والذي ربما يتطور تعـود قـدرة ) .2000 ،وآخـرون Swierzko( المكتسبة فـي المستـشفيات باإلصاباتمايعرف امتالكهـا العديـد مـن عوامـل إلـى التهابات إحداثعلى Proteus vulgarisبكتريا المتقلبات إلـى إضـافة المحللـة للبـروتين واإلنزيمـات سين ي اليوريز والهيموال إلنزيم إنتاجهامثل وة االضر ) . 1999 ،وآخرون Zunino ( األهدابقدرتها على غزو الخاليا وااللتصاق بوساطة Proteus vulgaris البكتريـا إنتـاج يـؤدي إذ عوامل الـضراوة اليوريز في مقدمةإنزيميأتي تلـف إلـى قـد يـؤدي أو تكوين الحصى لدى مرضى التهابـات المجـاري البوليـة إلى لليوريز ــة ــسيج الكلي ــر ن ــد ) Hausinger ، 1989 وMobley( ونخ ــزيميع ــوريز أن ــدى الي أح ) E. C. 3.5.1.5( ذات الـرقم التـصنيفي Hydrolases للمجموعـة المميئـة التابعـة اإلنزيمات ـ طحالـب والفطريـات والن لبـين البكتريـا وا وهو واسـع االنتـشار بالطبيعـة Tanaka( ات ب عمـل عليهـا ي التـي Substrate التفاعـل ركيـزة Ureaوتعـد اليوريـا , )2003 ،وآخـرون ينتج عن ذلك االمونيا ود الماء وليوريا بوج يقوم اليوريز بتحفيز تحلل اإذ،اليوريز ـــــــــــــــ .2010 / 12 / 27تاريخ استالم البحث . 2011/ 3 / 14 تاريخ قبول النشر 30 الطائي 2011 ، 37 - 30 ) :1 ( 3يالى للعلوم الزراعية ، مجلة د Ammonia وجزيئة الكارباميت Carbomate من أخرى جزيئهمنتجة تلقائيا التي بدورها تتحلل , )Hausinger، 2003وMobley، 2001; Mulrooneyو Heimer (مونيا وحامض الكاربونيكاال الذي Ammonium hydroxide األمونيومونتيجة للتوازن بين االمونيا والماء ينتج هيدروكسيد ).Belas ،1995 ; Mobley ،1992 و Mobley(الهيدروجيني للرقما سريعايسبب ارتفاع ة يــلطريقــة التركيباأو ب Inducible بطريقــة الحــث إمــا اليــوريز أنــزيمتنــتج البكتريــا Constitutive وذلك حـسب نـوع البكتريـا وحـسب الظـروف المحيطـة بهـا ) Mobley ــين ) 1995 (Belas و Mobleyأشــار . )Belas ،1995و ــة ب ــاجالــى العالق ــزيم إنت اإلن نمـو الخاليـا البكتيريـة حيـث لـوحظ مـثال أثنـاء Differential stagesيةحل التمايزاوالمر Proteus لبكتريـا Swarming Cells اليـوريز فـي الخاليـا التموجيـة أنـزيم عاليـة فارتفاع . Non swarming cellsعنه في الخاليا غير التموجية تعني فصله عن بقية المكونـات الخلويـة التـي تتواجـد معـه وقـد قـام أإلنزيمأن عملية تنقية حـصل المجهريـة المنتجـة لـه فقـد األحيـاء اليـوريز مـن أنـزيم العديد من الباحثين بتنقيـة Breitenbach وHausinger ) 1988 ( ــى ــزيمعل ــا أن ــن بكتري ــوريز م Proteus الي mirabilis األيـوني باسـتخدام المبـادل DEAE – Sephrose واسـتخدم الترشـيح الهالمـي Phenyl – Sepharose فقـد جـاءت هـذه الدراسـة للتعـرف علـى اإلنـزيم هـذا وألهميـة وتنقيتـه ودراسـة وزنـه رضـية عـزالت الم ل مـن خـالل استخالصـه مـن ا نزيماألخصائص .ونقطة التعادل الكهربائيالجزيئي البحثالمواد وطرائق Proteus vulgarisPv12 تنشيط العزلة ــة ــت طريق ــة ) Hausinger) 1988وBreitenbach أتبع ــشيط العزل ــث لتن ــت حي زرع Proteus vulgarisPv12 ـ فـي ال مـصابين بالتهـاب المجـاري البوليـة المعزولـة مـن أطف حـضنت ،يوريـا % 0.15يوريـا ذات التركيـز فـي وسـط مـرق ال مستشفيات مدينة بغداد ـ 6م لمدة º 37المزرعة بدرجة ثـم دقيقـة / دورة 120ة الهـزازة بـسرعة ن ساعات فـي الحاض ـ 90روع الى هذا المز أضيف لـى أن إ بقة ان بـنفس الظـروف الـس ض مل من مرق اليوريـا وح . نانوميتر660 عند 1.5 االمتصاصية أصبحت Proteus vulgarisPv12 قياس فعالية اليوريز في عزالت ــة ــاس فعالي ــستخدمة لقي ــل الم ــضرت المحالي ــزيمح ــوريز بأن ــة أ الي ــاع طريق تب Weatherburn)1967( Mobley; وJones)1987 ( ، حــسب اإلنزيميــةقيــست الفعاليــة نحنـي القياسـي م، حيـث رسـم ال )Weatherburn)1967 التـي ذكرهـا طريقة االنـدوفينول وذلك برسم العالقـة بـين تركيـز االمونيـا واالمتـصاصية علـى طـول نزيمية األ لقياس الفعالية باالسـتناد ) Bradford )1976 طريقـة بأتبـاع البـروتين قدر تركيـز . نانوميتر 625موجي ـ ألبومينالى منحى ي ورسـم المنحـى القياسـي بالعالقـة بـين التركيـز المصل البقـري القياس األنـزيم وحـدة فعاليـة وتم قيـاس الفعاليـة وفـق نانوميتر 595واالمتصاصية على طول موجي )Enzyme unit( الالزمـة لتحويـل مـايكرومول مـن اليوريـا اإلنـزيم كمية بأنهاتعرف التي .مº 37دقيقة واحدة عند درجة حرارة الى االمونيا في :تنقية انزيم اليوريز متدرجـة إشـباع بنـسب اليوريز باستخدام طريقة الترسـيب بكبريتـات االمونيـوم أنزيمتم تنقية حيـث حـضر المبـادل أاليـوني وطريقـة كروموتوغرافيـا التبـادل % ) 100-0( تراوحت 31 الطائي 2011 ، 37 - 30 ) :1 ( 3يالى للعلوم الزراعية ، مجلة د ــو ــل امينـ ــائي اثيـ ــيفاروز –ثنـ ــل سـ ــة DEAE –Sepharose اثيـ بطريقـ WhitakerوBernhard)1972 (ــئ ــصبح م الوعب ــادل لت ــادهب ــم 15 × 1.5 أبع ــت س وتم وكـذلك اسـتخدام كـدارىء 7.5 مللـي مـوالر ورقـم هيـدروجيني PEM20 بـدارئ موازنته قيـست فعاليـة اليـوريز لجميـع القمـم . موالري 0.5- 0استرداد مع متدرج ملح البوتاسيوم من بدايـة ارتفـاع ونهايـة هبـوط القمـم جزاء التي توجد عند البروتينية كما قيست فعالية اليوريز لأل .بطريقة االندوفينول ، جمعت االجزاء التي تحتوي فعالية لليوريز ثم جفدت لليوريز -Sروموتوغرافيـا الترشـيح الهالمـي بهـالم الـسيفاكريل ك باستخدام طريقة ال األنزيم تنقيةكما تم , .Pharmacia fine chemحيــث حــضر الهــالم طبقــا لتعليمــات الــشركة المجهــزة 200 PEM سـم وتمـت موازنتـه باسـتخدام دارىء الفوسـفات 75×2عبىء الهالم لتكـون ابعـاده قيـست الفعاليـة لليـوريز لجميـع القمـم . 7.5مللي مـوالري ورقـم هيـدروجيني 20بتركيز البروتينية بطريقة االندوفينول :ن الوزن الجزيئي يتعي -Sephacryl Sسـتعمال عمـود هـالم الـسيفاكريل مـن خـالل ا أتبعت تقنية الترشيح الهالمي ، كمـا أسـتخدمت 2000أسـتعمل الدكـستران االزرق ) Vo( ولمعرفـة حجـم الفـراغ 200 ــية ــات قياس ــة بروتين ــة مختلف ;Bovin Serum albumin, 67000(ذات اوزان جزيئ Aldolase, 15900; Catalase, 232000; Ferritin ,440000; Thyroglobulin, رسمت العالقة الخطية بين نسبة حجـم االسـترداد لكـل بـروتين قياسـي وحجـم و )600000 ـ مقابـل لوغـاريتم الـوزن الجزيئـي واسـتخدم المنح Ve /Voاسترداد الدكـستران االزرق ى ن .القياسي لتقدير الوزن الجزيئي لالنزيم ) : Isoelectric point )pI نقطة التعادل الكهربائيتعين ـ لألنـزيم ) Isoelectric Focusing(دل الـشحنة تم تبئيـر تعـا )Wrigley)1971لطريقـة ا وفق ) .9.5 -3.5(وباستخدام محلول االمفواليت النتائج والمناقشة تركيز االنزيم الخام باسـتخدام كبريتـات االمونيـوم للحـصول علـى فعاليـة إشـباع فضل نسبة أ إن النتائج أظهرت ـ ألنزيم اليوريز أعلىنوعية النوعيـة حيـث كانـت الفعاليـة , % ) 50 -25 ( مـابين تتراوح 1.74نـزيم المـستخلص الخـام والبالغـة لأل مقارنة بالفعالية النوعيـة ملغم بروتين / وحدة 3.33 علـى % 68.4 و 1.91أما عدد مـرات التنقيـة والحـصيلة فقـد بلغـت , ملغم بروتين /وحدة ة مـن المـاء وللحـصول علـى درجـة نقـاوة للتخلص من نسبة كبيـر األمالحتستخدم . التوالي أولـى سـتخدم كبريتـات االمونيـوم كخطـوة أ إلـى ) 2000( وآخرون Hirayama أشارحيث وقـد الحـظ ازديـاد الفعاليـة Mulberry أوراق اليوريز المـستخلص مـن أنزيموذلك في تنقية للملـح بلغـت اعإشـب والي عنـد نـسبة على الت % 68.3لة ي حص 14.7عدد مرات تنقية بالنوعية ) .1 ( جدول 25-50% 32 الطائي 2011 ، 37 - 30 ) :1 ( 3يالى للعلوم الزراعية ، مجلة د Pv12 . Proteus vulgarisلعزلة المحلية ا المستخلص من زتنقية اليوري. 1جدول الحجم خطوة التنقية )مليلتر( الفعالية / وحدة ( )مليلتر البروتين ملغم ( )مليلتر/ الفعالية لنوعيةا ملغم /وحدة ( )وتينبر عالية الكلية فال )وحدة( الحصيلة (%) عدد مرات التنقية 1 100 542380 1.7 31139.1 5423.8 100 المستخلص الخام التركيز بكبريتات % 50-25(االمونيوم بعد الديلزة) 90 4124.2 1238.2 3.33 371241 68.4 1.91 كروموتوغرافيا التبادل -DEAE األيوني Cellulose 85 3533.1 32.21 109.68 300313.5 55.36 63.03 كروموتوغرافيا الترشيح الهالمي Sepharose 4-B 75 2643.2 25.10 175.05 198240 36.55 90.25 . الكرموتوغرافيا التبادل االيوني دتنقية اليوريز باستخدام عمو وهـو مـن المبـادالت األنـزيم لتنقيـة DEAE -Sepharose األيـوني التبادلداستخدم عمو وقد أدى ذلك الى زيـادة الفعاليـة النوعيـة حيـث بلغـت , )Anion exchange(السالبة الشحنة %60.03 و 55.3ملغم بـروتين بعـدد مـرات للتنقيـة والحـصيلة وكانـت / وحدة 109.68 ـ . على التوالي ات يعود سبب زياد الفعالية النوعية الى التخلص مـن نـسبة كبيـرة مـن البروتين إلـى باإلضـافة البروتينات التي شحنتها معاكـسة لـشحنة اليـوريز أيغير ذات العالقة باليوريز إذمشحونة و تعد هذه الطريقة من الطرائـق المالئمـة والحـساسة فـي الفـصل الغير البروتينات واحـد أمينـي يمكن بواسطتها التميـز بـين نـوعين مـن البروتينـات الفـرق بينهـا حـامض )Pharmacia،1980( اليوريز تـرتبط شـحناته الـسالبة بالـشحنات الموجبـة أنزيم عند مرور للهالم بينما تمر البروتينات والتي تحمل شـحنة مغـايرة لليـوريز خـالل العمـود غير المشحونة ـ متـدرج ملحـي فين علـى ه يضاف داري االسترداد المناسـب والـذي يحتـوي دوالستردا صل ف أو مـع زيـاد شـحناته أي االسـترداد دارئد زيـاد تركيـز الملـح فـي عن الهالم عن األنزيم ) . Rossomando،1990 ( أاليونيمايسمى بالتركيز .Sephacryl S- 200تنقية اليوريز باستخدام عمود هالم وحـدة 175.04 استخدام هذا الهالم الى زيادة نقاوة االنزيم حيـث كانـت الفعاليـة النوعيـة أدى علـى %36.55 و 90.25يلة االنزيميـة تين وكانت عدد مـرات التنقيـة والحـص ملغم برو / ليـة تنقيـة البروتينـات فيـه علـى آمـد تيمتاز هذا الهالم بقدرته العالية في الفـصل وتع . التوالي تحصل حالة اتزان بين جزيئـات البروتينـات الـصغيرة وحجـم الفـراغ بـين إذالوزن الجزيئي لترشــيح ا1987) (Todd وHausingerاســتخدم . ) Stellwagen، 1990 (حبيبــات الهــالم نقيــة اليــوريز المــستخلص مــن البكتريــا ت وذلــك ل Suprose -6الهالمــي علــى عمــود Klebsiella aerugenosa وقـد كانـت عـدد مـرات التنقيـة األيـوني بعد التنقية بالمبـادل .ملغم بروتين / وحدة 2200وفعالية نوعية % 24.5 مقدارها إنزيمية وبحصيلة 1070 : اليوريزألنزيمجزيئي لين الوزن ايتع تم حساب الوزن الجزيئي لليوريز بطريقة الترشيح الهالمـي باسـتخدام عمـود هـالم الـسيفاكريل Lee إليـه مـع توصـل تقتـرب هـذه النتيجـة . دالتـون 215000وقد بلغ الـوزن الجزيئـي 33 الطائي 2011 ، 37 - 30 ) :1 ( 3يالى للعلوم الزراعية ، مجلة د زيئــي لليــوريز المــستخلص والمنقــى مــن بــان الــوزن الجأشــاروا إذ )1990( وآخــرون Klebsiella aerugenosa ــان ــون 224000ك ــادالت ــع م ــل وم ــهتوص Mobley إلي Proteus مـن المـستخلص اليـوريز الـوزن الجزيئـي الذين وجـدوا بـأن ) 1988 (وآخرون mirabilis 212000 1 ( دالتون شكل . ( Bovine serum albumi V e / V o د ردا ست اإل م حج / اغ فر ال جم ح Aldolas Ure Catalas Thyro (Log MW)تم الوزن الجزيئي لبكتريا Pv12منقى المستخلص من العزلة المحليةيم اليوريز الألنز P بطريقة الترشيح الهالمي باستخدام عمود هــالم السيفاكريل .ساعة/ مليلتر 30سم وســـرعة جريان) 75 × 2(اد لتعـين نقطـة التعـادل ) IEF) Isoelectric Focusingحنة 5.3 قيمـة ات وجود حزمـة واحـدة علـى الهـالم ذ ت النتائج شـكل Pv12 Proteus vulgarisريز مـن العزلـة المحليـة صـفرا األنـزيم ي تكون فيه محصلة الـشحنة التـي يحملهـا الذ ـروتين ممـا يـسبب توقـف حركتـه فـي هـالم الترحيـل أن ظهـور . )Wrigley ،1971( واحـدة فـي ذلـك الموقـع الهـالم بـصبغة البـروتين يعـد عند تـصبيغ 5.3لهيدروجيني نـستنج ممـا سـبق أن . ي خـضع لخطـوات التنقيـة الـسابقة Pr المعزولة مـن أطفـال عـراقيين ذات قابليـة علـى انتـاج ـ كبيـرا فـي ا دورلهـذه البكتريـا نأ حصى الكلية مما يـشير ب ـ المجتمـع العراقـي أفـراد ـين ا يتطلـب أجـراء دراسـة مم .امل الضرواة االخرى التي تمتلكها 34 n as Ferriti globuli لوغاري جزيئي roteu Sepبأبع : ائي ـر الـش وأظهر اليـوم وجيني ـدها الب حزمـة د الرقم ا الـذيم oteus بتكوين بولية ب اصة عو n وزن ال vul s hac الكهرب ية تبئ p ( , ألنـزي الهيدر سب عن لشك الم عن األنز vulg الكبيرة ري ال ريا وخ n e e e تعيين ال. 1شكل garis المتقلبات ryl S-200 التعادل ةتحديد نقط طريقـاسـتخدمت I (الكهربائي للشحنة للرقم الهيدروجيني ، وهو الرقم ) 2( النقطة التي يترأي الكهربائي ويظهر ب حزمة واحدة في اله دليال أخر على نقاوة aris Pv12بكتريا االهمية واليوريز ذ وبائية التهابات المجا البكتهمستفيضة لهذ الطائي 2011 ، 37 - 30 ) :1 ( 3يالى للعلوم الزراعية ، مجلة د 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 0 0.01 0.02 0.03 .04 .05 .06 .07 0 0 0 0 0.08 0.09 الرقم الهيدروجيني الفعالية االنزيمية ة الي فع ال ية يم نز اإل ) دة وح / تر ليل م ( ني جي رو يد له م ا رق ال )سم(رقم القطعة Proteus المحليةالعزلة من والمنقى المستخلصUreaseنقطة التعادل الكهربائي ألنزيم . 2شكل vulgaris Pv12تعادل الشحنة بطريقة تبئير )Isoelectric focusing(. المصادر Bradford, M.M.1976. A rapid and sensitive method for the quanta ion of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein-dye binding. Analyt. Biochem. 72: 248-55. Breitenbach, J.M. and , R.P.Hausinger. 1988. Proteus mirabilis urease. Partial purification and inhibition by boric acid and boronic acids. Biochem.J. 250: 917-20. Heimer, S.R. and H.L.T. Mobley. 2001. Interaction of Proteus mirabilis urease apoenzyme and accessory identified with yeast two-hybrid technology. Journal of Bacteriology. Feb. 183(4): 1423-1433. Hirayama, C. Sugimura, M. Saito, H. and M. Nakamura. 2000. Purification and properties of urease from the leaf of mulberry, Morus alba. Phytochemistry. Feb. 53(3): 325-30. Lee, M.H. Mulrooney, S.B.and R.P. Hausinger. 1990. Purification, Characterization and in vivo reconstitution of Klebsiella aerogenes urease apoenzyme. Journal of Bacteriology. Aug. 172(8): 4427-4431. 35 الطائي 2011 ، 37 - 30 ) :1 ( 3يالى للعلوم الزراعية ، مجلة د Mobley, H.L.T. and B.D. Jones. 1987. Genetic and biochemical diversity of urease of Proteus, Providencia, and Morganella species isolated from urinary tract infection. Infection and Immunity. Sep. 55(9): 2198-21203 . Mobley, H.L.T., Cortesia, M.J., Rosenthal, L.E.and B.D .Jones. 1988. Characterization of urease from Campylobacter pylori. Journal of Clinical Microbiology. 26(5): 831-836. Mobley, H.L.T. and R.P. Hausinger. 1989. Microbial Urease: Significance, Regulation & Molecular Characterization. Microbiological Reviews. 53(1): 85-108. Mobley, H.L.T. 1992. Microbial Ureases. Encyclopedia Of Microbiology. 4: 327-335. Mobley, H.L.T. and R. Belas. 1995. Swarming and pathogenicity of Proteus mirabilis in the urinary tract. Trends in Microbiology. Jul. 3(7): 280-284. Mulrooney, S.B. and , R.P .Hausinger. 2003. Nickel uptake and utilization by microorganisms. FEMS Microbiology Reviews. 27:239- 261. Pharmacia Fine Chemicals AB Publications. 1980. Ion exchange chromatography - Principles and methods. Uppsala. Rossomando, E.F. 1990 . Ion exchange chromatography. P. 309-317. In: Deutscher, M.P. (ed). Methods in enzymology. Vol. 182. Guide to protein purification process. San Diego. Stellwagen, E. 1990. Gel filtration. P:317-28. In: Deutscher (ed). Methodes in enzymology. Vol. 182. Guide to protein purification. Academic Press. San Diego. Swierzko, A.S. Kirikae, T. Kirikae, F. Hirata, M. Cedzynsk, M. Ziolkowski, A. Hirai, Y.; Kusumoto, S.;and T.Yokochi. 2000. Biological Activities Of Lipopolysaccharides Of Proteus Species & Their Interactions With Tanaka, T.; Kawase and M. S. Tani. 2003. Urease inhibitory activity of simple α,β- unsaturated ketenes. Life Sciences. 73: 2985-2990. Todd, M.J. and R.P. Hausinger. 1987. Purification and characterization of the nickel-containing multicomponent urease from Klebsiella aerugenes. The Journal of Biological Chemistry. 262(13) May pp: 5963-5967 . Weatherburn, M.W. 1967. Phenol-Hypochlorite Reaction For Determination Of Ammonia. Analytical Biochemistry. 39(8): 971-974. 36 الطائي 2011 ، 37 - 30 ) :1 ( 3يالى للعلوم الزراعية ، مجلة د Whitaker, J.R. and R.A. Bernhard. 1972. Experiments for: An Introduction to Enzymology. The Whiber Press. Wrigley, C.W. 1971. Electrofocusing. In: Methods in Enzymology (ed). Jokoby, W.B.) Vol.22.pp: 559-565. Academic Press. New York. Zunino, P. Piccini, C. and C. Legnani-Fajard. 1999. Groth, Cellular Differentiation And Virulance Factor Expression By Proteus mirabilis In Vitro And In Vivo. J.Med.Microbiol. 48 : 527-534. EXTRACTION AND PURIFICATION OF URASE FROM Proteus vulgaris Pv12 ISOLATED FROM CHILDREN INFECTED WITH URINARY TRACT INFECTION IN IRAQ . Hadi R. R. Al –Taai Biology Dept. / College of Science/ Diyala University ABSTRACT The results of purification of urease was extracted from local isolates Proteus vulgaris Pv12 showed the specific activity 33.33 unit / mg protein by ammonium sulfate with ( 25- 50 ) % percentage of saturated , and specific activity 109 . 68 unit / mg protein , purified 60.03 fold and 55.3% of yield by DEAE sepharose , While the results indicated the specific activity 175.09 of unit / mg protein , purified 90.25 fold and 36.55% of yield by sephacyl S- 200chromatograghieles . Using buffer (PEM) 20mM With 7.5 pH. Molecular weight of enzyme was about 215000 Dalton determined by gel filtration. The results indicated the isoelectric point of purified urease that extracted from Proteus vulgaris Pv12 was 5.3. Key words : Proteus vulgaris , urease , gel filtration , molecular weight , Isoelectric point 37