<4D6963726F736F667420576F7264202D20CF2EC7C8D1C7E5EDE320E5C7CFED20E3CDE3CF> محمد 2011، 12 - 1: ) 1( 3مجلة ديالى للعلوم الزراعية ، السرطانية على النبيبات الدقيقة لخاليا Nerium oleanderتأثير مستخلصات نبات الدفلة )H22(Hepatic cell المختبرية للفئران والموت الخلوي المبرمج في الورم. محمد هادي إبراهيم جامعة ديالى-كلية العلوم -قسم علوم الحياة واالحياء الجمهرية الخالصة نبات الدفلة على النبيبـات ألوراق الكحوليالمائي و مستخلصال دراسة تأثيراجريت تجربة ل , طور االستوائيالثيرها على وقف االنقسام الخلوي في ألدراسة تالسرطانية H22 cellالدقيقة لخاليا مكغم 10 الىمل /مكغم 0.01 بالتراكيز لنبات الدفلة لمائياظهرت نتائج المعاملة االولى بالمستخلص أو وكـذلك قدرة المستخلص على وقف االنقسام الخلوي في الطور االسـتوائي عدم دقيقة 60لمدة مل / ذاتهـا بـالتراكيز الكحوليبالمستخلص في حين أظهرت المعاملة الثانية التاثير على النبيبات الدقيقة مـل /مكغم l لفاريلخاليا الكبد االقدرة على وقف االنقسام الخلوي في الطور االستوائي دقيقة 60لمدة تم تحديد و immunofluroresenceوذلك باستخدام مجهر وكذلك التاثير على وقف النبيبات الدقيقة إعتماداً علـى قيمـة الجرعـة المميتـة لالوراق والمائيالكحولي الجرع العالجية من المستخلصين إختزال حجم الـورم بشـكل وأثبتت التجارب العالجية فعالية عالية لهذين المستخلصين في. النصفية وكانت الجرعـة العالجيـة األعلـى لكـل مـن . يعتمد على الجرعة المستخدمة منها ومدة التجريع هي األفضـل تـأثيراً مـن خـالل ) كغم من وزن الفأرة على الترتيب/غم 20، 16.5(المستخلصين مـوت الخلـوي ثمومن .على الترتيب% 86.7، % 09.84إختزالها لحجم الورم في الفئران بنسبة .السرطانيةالمبرمج للخاليا المقدمة نالت األعشاب الطبية اهتماماُ كبيراُ منذ القدم وذلك لقدرتها الكبيرة على تسكين األلـم والشـفاء، وال نزال نعتمد عليها حتى يومنا هذا في صناعة عدد كبير من االدوية ألن طـب األعشـاب يكمـل يوفرأدوية مأمونة على الرغم من ان بعض النباتات قد تنتج آثاراُ جانبية العالجات التقليدية في الغالب ف .على غرار كل األدوية، لذا فمن الضروري أال تؤخذ وتستخدم في بعض منها اال باشراف ممارس تتوقف قدرة الدواء العشبي على التأثير في أنظمة الجسم على المكونات الكيميائية التي يحتـوي احثون باستخالص وعزل هذه المواد من النباتات في القرن الثامن عشر ومنـذ ذلـك عليها لذا بدأ الب كمـا اشـار الوقت أعتدنا النظر الى االعشاب وتأثيراتها بداللـة المكونـات الفعالـة التـي تحتويها Toshioبوصفها عالجاُ ) مركبات االيض الثانوي(زاد االهتمام بالمكونات الفعالة ).2008( وآخرون تمتلك تلك المركبات خصائص عالجية تختلف في تأثيراتها في الخلية السـرطانية اذ قـد إذ للسرطان Schmidtنموهـا إيقـاف أوقتـل الخليـة الورميـة إلىتكون لهذه المركبات فعالية تثبيطية تؤدي فعاليتها المثبطة لتكاثر الخاليا السـرطانية هـي أثبتت،ومن هذه المركبات التي )Bastians )2007و تمتاز بسـميتها إذالقلويدات وتعد من أهم وأكثر المركبات الفعالة الموجودة في المستخلصات النباتية، فـي مرحلـة تسـبق أوالعالية للخاليا نتيجة تأثيرها في عدة آليات في الخلية ومنها االنقسام الخلوي أشـار كمـا Apoptosis تحفيز الخاليا السرطانية للدخول في مرحلة الموت المبـرمج أواالنقسام Mukherjee 2001( وآخرون.( ـــــــــــــــ . 2010/ 10/ 20تاريخ استالم البحث . 2011/ 1/ 9تاريخ قبول النشر محمد 2011، 12 - 1: ) 1( 3مجلة ديالى للعلوم الزراعية ، و vinca alkaloid )vincristine ،vinblastine (colchicineالقلويـدات و من أهم هذه maytansine و) taxanes ،paclitaxel ( وخاصةdocetaxel التي تستخدم بشكل كبير بوصـفها التي لها دور ) خيوط المغزل (مركبات مضادة لالنقسام من خالل عملها على ديناميكية نبيبات المغزل pandaو Lopus كمـا اوضـح الباحثـان مهم في انفصال الكروموسومات خالل االنقسام الخيطـي قة في انقسام الخلية االمرالذي جعلها الهدف المناسب ونظراً للدور الذي تقوم به النبيبات الدقي )2006( ضد النمو السريع والتوالد غير الطبيعي Chemotherapeutic drugsلتطور ادوية العالج الكيميائي منهـا الكاليوسـيدات المركبـات للخاليا السرطانية، لذا صار التوجه للبحث عن انواع اخرى مـن الكاليوسيدات لذا مركباتعلى الدفلةونظراُ الحتواء نبات . قسامالستخالصها ومعرفة تاثيرها في االن . تم اختيار النبات يطلق على هذا النبات عدة أسماء فـي اللغـة .Nerium oleander :االسم الشائع الدفلة نبات وأغلب نباتات هذه العائلة Apocyuaceaeالدفلياتيصنف الدفلة ضمن عائلة رسم الحما:العربية منها Magnoliophiytaمـن شـعبة Nangaliposidaصـنف Gentianalesسامة وهي تابعة لرتبة Chakravarty )1976( . الدفلة من نباتات الزينة دائمة الخضرة والمزهرة طيلة أيام السنة ، غالبا ويستوطن حوض البحر األبيض المتوسط . مايستخدم في تزيين الحدائق والمتنزهات والطرق الخارجية وب وشرق أسيا ، وقلما نجده في وسط وغرب أوربا لكونه حساساً لدرجات الحرارة المنخفضـة وجن وينتشر النبات في أغلب مناطق العراق ، وينمو بريا في المناطق الشمالية ، كما نجده منتشرا في أكثر أنظـار البـاحثين فـي السـنوات اتجهت. 1993)( وآخرون Boisio الباحثكما اشار شوارع بغداد األخيرة الى أهمية استخدام بعض األعشاب الطبية في محاولة لعالج مرض السـرطان منهـا مـادة Sangumarine اذ وجد انه يثبط عدة أنواع من الخطوط الخلوية السرطانية البشرية المقاومة للعقاقير كمـا ت المبرمج المتعددة من خالل منع بلمرة النبيبات الدقيقة وتثبيطه لتكاثر الخاليا وحثها على المو ومن الدراسات العراقية الحديثة التي اهتمت بهذا الجانب ونجحـت . )Jordan )2002 اشار الباحث في استخدام المستخلصات النباتية في تثبيط نمو خطوط الخاليا السرطانية خارج الجسم الحي وداخلـه Convolvuluesونبـات المديـد , )2009( زغيـر Sonchus oleraceusالمريـر وشملت نبات arvensis إذ توصلت هذه الدراسات إلى ان لهذه المستخلصات تأثيرات سمية فـي ) 2009(الربيعي مختلف أنواع خطوط الخاليا السرطانية، ومازالت البحوث جارية ومنها الدراسة الحالية الختبار فعالية .المستخلصات النباتية سعياً ومحاولة إليجاد مواد فعالة ضد مرض السرطان البحثالمواد وطرائق الخام حسـب مائيالوأتبعت طريقة في تحضير المستخلص ات النباتيةتحضير المستخلص 1- جرى تحضير المستخلصات الكحولية الخام للنبات بأستخدام جهاز .Harborne )(1984 هاورداما . ) Cannell )1998من قبل وحسب الطريقة المتبعة ، Soxhlet السكسوليت واعتمدت طريقة الصعود والنزول التي ذكرهـا LD50 حتساب الجرعة القاتلة لنصف العدد ا2- Dixon (1980) لتحديد الجرعة المميتة الوسطية . تم تجهيز فأرة مصابة بسرطان الخاليا الكبدي.تهيئة الحيوانات المختبرية الحاملة للورم -3 H22)( Hepatic cell من في جامعة خواكون) (24)على اذ استخلص الورم ووزع) الصين ، تنتهي التجربة بموت آخـر فـأرة مـن ) (Freshney 2001 فأرة سليمة في منطقة الساق بحسب خـالل . ) Janardhanan (2002 و Jone الباحثان مجموعة السيطرة ، أعطيت الجرعات بحسب ـ الطـول (اس وأخـذ قياسـا مدة التجربة تم قياس حجم الورم مرتين في االسبوع باستعمال آلة القي ) . (2003 وآخرون Ge ، واستخرج الحجم باالعتماد على طريقة) والعرض محمد 2011، 12 - 1: ) 1( 3مجلة ديالى للعلوم الزراعية ، )GFP tubulin)H22 cellالخط الخلوي السرطاني المعلم -4 ، وهو سرطان الكبـد ) الصين( تم استالم هذا الخط من مستشفى تونجي في جامعة خواكون نية حيث اجريت الخطوات الخاصة بالزرع النسيجي تحت ظـروف وتهيئة خط الخاليا السرطا.الفاري في زراعة خطوط الخاليـا السـرطانية وتنميتهـا RPMI-1640(معقمة و استعمل الوسط الزرعي .1995)( وآخرونTodd أشاركما Complete Growth ويدعى بوسط النمو الكامل يبات الدقيقة للخط الخلوي السرطانيختبار السمية الخلوية للمستخلصين الخام في وقف النبا 5- وأضـيف . 1995)( وآخـرون Todd كما أشـار جهز عالق الخاليا عن طريق أضافة محاليل باستعمال الوسط الزرعي والمائيالكحولي مل من التراكيز المحضرة آنياً لكل من المستخلص (0.2) مل، /مكغم) ,0.01,0.1,1 (10,100,1,100وهي Serum Free Media (SFM)الخالي من المصل كما تم عمل اربعة مكررات للسيطرة بدون اي مستخلصات بعـد . وبواقع اربعة مكررات لكل تركيز أخرج الطبق 1995)( وآخرونTodd كما أشار ساعة و (Exposure time)مرور مدة التعريض . Immunofluroresence ة النتائج من خالل مجهر ظمن الحاضنة وتمت مالح والمناقشة ائجالنت بأستخدام جهاز السوكسليت المجهز بالماء كأحد المذيبات المستخدمة في أستخالص أوراق النبات صلباً وبلون بنـي المستخلصات قوام ، وكان غم4.58وزن تّم الحصول على مستخلص خام جاف ب دام جهـاز بأسـتخ طريقة تحضير المستخلصات الكحولية الخام أعطتمصفر لمستخلصي األوراق ، السوكسليت المجهز بالميثانول كأحد المذيبات المستخدمة في أستخالص وأوراق النبات مستخلص خام تـم اسـتخدام .وبلون بني داكن المستخلصات الناتجة ذات قوام صلبجميع وكانغم 1.445وزن ب .المستخلصات لغرض تعريض الخاليا لها غير المعاملة بالمستخلص H22 cellالسرطانية الخاليا ) 1( صورةوضحت النتائج من خالل الأ الخام لنبات الدفلة حيث يالحظ شكل النبيبات الدقيقة المنتظمة والموزعة على طول محتـوى الخليـة السرطانية ا H22 النبيبات الدقيقة المعلمة1. صورة معاملة بالمستخلص الغير GFP-tubulin لخالي مظبشكل منت وترتيبها يقةيالحظ عدم تأثر النبيبات الدق وقف النبيبات الدقيقة في تأثير مثبطله ليسلنبات الدفلة المستخلص المائي الخامإن بينت النتائج دقيقة من 60عند كافة التراكيز المستخدمة ولمدة cell H22السرطانيخط الخلوي لل محمد 2011، 12 - 1: ) 1( 3مجلة ديالى للعلوم الزراعية ، يط النبيبات الدقيقة عنـد لوحظ تثباما عند استخدام المستخلص الكحولي لنبات الدفلة . التعريض تثبيط النبيبات الدقيقة للخاليا وتصبح زيادة في وعند ازدياد التركيز حيث يالحظ مل /مكغم 1التركيز وتركيـز المسـتخلص فعنـد كلما زدات مدة التعريض ر منتظم ويبدا ظهور الضرر عليها بشكل غي ـ مل /ملغم 10 التركيز دا النبيبـات الدقيقـة بالتقصـر تظهر على الخلية الموت الخلوي حيـث تب كما موضح بالشكل في الشـرائح ,واالضمحالل وتصبح الخلية بشكل كرات صغيرة سرعان ما تختفي ويمكن ان نحصل على خلية متوقفة في الطور االسـتوائي )3(و (2)المحضرة كما هو مبين بالصورة .)4(كما هو مبين بالصورة بالترآيز GFP-tubulin المعلمـة H22علـى خاليـا تأثير المسـتخلص الكحـولي 2. صورة .واضمحاللهادقيقة حيث يالحظ تقصر النبيبات الدقيقة 60لمدة مل/مكغم0.1 مل/مكغم100السرطانية المعاملة بالمستخلص الكحولي لنبات الدفلة بالتركيز H22خاليا  3.صورة دقيقة يالحظ دخول الخاليا بالموت الخلوي 60لمدة محمد 2011، 12 - 1: ) 1( 3مجلة ديالى للعلوم الزراعية ،  صورة مل/مكغم100السرطانية المعاملة بالمستخلص الكحولي لنبات الدفلة بالتركيز H22خاليا 4. . وقف الخاليا في الطور االستوائيدقيقة يالحظ 60لمدة مـا والفالفونـات وهـذا كاليكوسـيدية والسـكريات يحتوي على المركبات الالدفلة إن نبات توي المستخلصات الخام على خليط من المركبات الفعالة والتـي تحو .) Chakravarty )1976أكده الفعاليـة المحفـزة ألنـزيم ى تعطيل نفاذية الخلية من خالل تعطيل يؤدي أستخدام التراكيز العالية ال NaKATPase مما يعطل من عمل مضخة صوديوم بوتاسيوم األمر الذي يؤدي الى فقـدان نفاذيـة ,oleandrin, digitoxigeninه أغلب الكاليكوسيدات القلبيـة كالــ الغشاء البالزمي وهذا ما تفعل gitoxin الذي ثبت أحتواء ( األمر الذي يؤدي الى السماح للمركبات األخرى ومنها مركب األولندرين الى داخل الخلية والعمل على أحداث التشـوهات فـي تسلسـل القواعـد ) المستخلصات الخام عليه Sister chromatid exchange(SCE).زيادة في معدل النايتروجينية مما يحدث أن كال من المستخلص المائي الخـام ألوراق الدفلـة ومركـب )2005( واخرون Fuوقد ذكر وأنخفاض فـي مسـتويات عامـل DNAفي الـ telomere األولندرين تؤدي الى فقدان للتيلومير TRF2 ا يؤديان الى تثبيط دورة الخلية عند الطـور ،كما أنهم. مما يحفز على موت الخاليا المبرمج G2/M 2006(رغد وهذا ما اكدته دراسة ومنعها من التقدم(. للمستخلصين الخام الوراق نبات الدفلة أن الجرعـة (LD50)تم تحديد الجرعة المميتة النصفية مـن وطأهي أكغم من وزن الحيوان ، و/غممل 165المميتة النصفية للمستخلص المائي لالوراق بلغت .كغم من وزن الحيوان /غممل 201الجـرعة المميتة النصفية للمستخلص الكحولي التي بلغـت و 8.2و 16.5أظهر حقن الفئران المصابة بالورم بالمستخلص المـائي الخـام بـالجرع رة بالمقارنة مع السـيط (P<0.01)فروقا معنوية في حجم الورم عند مستوى احتمالية كغم /ملغم 4.1 فقد كان معدل اليوم كغم /ملغم 16.5وكانت أفضل جرعة التي سببت انخفاضاً في معدالت الحجم هي 2059.26) و (145.57بالمقارنة مع الجرعتين األولى والثانية فقد كانت 3ملم 860هو 36األخير . 3ملم 4033.05على التوالي بالمقارنة مع السيطرة 3ملم كغم /ملغم 5و 10و 20 أظهر حقن الفئران الحاملة للورم بالمستخلص الكحولي الخام وبالجرع عند مقارنة معدالت حجم الورم للمجموعة المعاملـة مـع (P<0.01)وجود فروق معنوية باحتمالية يلة بالمقارنة مع السيطرة ، بالرغم من الزيادة في الحجم مع تقدم الفترة الزمنية للمعاملة ولكنها زيادة قل محمد 2011، 12 - 1: ) 1( 3مجلة ديالى للعلوم الزراعية ، بعـد الغـرس كانـت معـدالت الحجـم 36الزيادة الحاصلة في مجموعة السـيطرة، ففـي اليـوم التـي أزداد 3ملم 4047.54)( ، في حين كانت السيطرة 3ملم (1188.2,1432.74,2276.36) وكانت الجرعة األكثر تأثيراً في معدل حجم الورم لأليام األخيرة .معدل حجم الورم فيها بصورة كبيرة في حين كـان المعـدل 3ملم 1188.28فقد كان الحجم في اليوم األخير كغم /ملغم 20 خاصة هو رنة بالسيطرة التي أعطت على التوالي، مقا 3ملم 2276.63)و (1432.74للجرعتين الثانية والثالثة تم استعمال مقياس لتقييم التغيير بحجم الورم في مجاميع الفئـران المجرّعـة . 3ملم 5547.45معدل ، بينت النتائج التأثير التثبيطي الواضح )مجموعة السيطرة( PBSبالمستخلصين والمجموعة المجرعة كمـا أشـارت . تخدمة ومدة التجريعلكال المستخلصين في حجم الورم بشكل يعتمد على الجرعة المس الفـأري هـو H22النتائج الى أن افضل جرعة للمستخلص المائي الخام المستخدم في عالج سرطان أما بالنسبة للمسـتخلص (84.09)%كغم وذلك ألنه أظهر تثبيطا لنمو الورم بنسبة بلغت /ملغم 16.5 20بيط نمو الورم كانـت فـي الجرعـة الكحولي الخام فقد أظهرت نتائج الدراسة أن أفضل نسبة لتث لقد بينت نتائج هذه الدراسة قابلية المستخلصات الخام للدفلة فـي , )% (86.07كغم حيث بلغت /ملغم اعطاء فعل مضاد للورم بداللة االختزال الحاصل في حجم الورم في الفئران المغروسة بـالورم فقـد ك هذه المستخلصات بعض المركبات الفعالة القادره يكون السبب في هذا التأثير مباشرا من خالل امتال تقترح ) 2002( وآخرون Mengكما اشار على حث الية الموت الخلوي المبرمج في الخاليا الورمية هذه الدراسة تأثيرا مباشر اخر لهذه المستخلصات في قدرتها على اختزال حجم الورم بسبب احتوائهـا وآخرون Okamura كما اشار عل مضاد لتخليق االوعية الدمويةعلى المركبات القادرة على اظهار ف )1998 .( متابعة حجم الورم في الفئران الحاملة لورم سرطانة الكبد الفأري المعاملة بجرع مختلفة .1شكل . من المستخلص المائي الخام طيلة فترة التجربة 0 500 1000 2500 3000 3500 4000 9 12 15 18 21 24 27 30 33 36 األيام بعد الغرس حجم ورمال 3م السيطرة 16.5 mg/kg 8.1 mg/kg 4.1 mg/kg محمد 2011، 12 - 1: ) 1( 3مجلة ديالى للعلوم الزراعية ، م الورم في الفئران الحاملة لورم سرطانة الكبد الفأري المعاملة بجرع مختلفة متابعة حج .2شكل . من المستخلص القلويدي الخام طيلة فترة التجربة . تأثير جرع مختلفة من المستخلصين الخام للدفلة في الموت الخلوي المبرمج في الحي في معدل الخاليا التي عانت موتاً الى وجود زيادة معنوية (1)تشير النتائج الموضحة في الشكل ، فقـد كانـت بالنسبة للمستخلص المائيمع السيطرة (P < 005)خلوياً مبرمجاً عند مستوى احتمالية ، 26.70، (27.21كغم وهـي \ملغم ) 16.5, 8.2 ,4.1( ت الخاليا متقاربة للجرع الثالث معدال ).4 الصورة( 19.32%جموعة السيطرة على التوالي ولكنها أعلى من معدل الخاليا لم 25.34)% الخام في معـدل الكحوليوجود تأثير ايجابي للمستخلص (2)بينت النتائج الموضحة في الشكل , عـن السـيطرة (P < 005)الخاليا التي عانت موتاً مبرمجاً لجميع الجرع المستخدمة بشكل معنوي يا التي عانت مـوت الخلـوي المبـرمج كغم وكانت نسبة الخال\ملغم (20, 10 ,5 ) كانت الجرع ) . 4صورة ( 18.30%على التوالي بالمقارنة مع السيطرة 24.53)%، 25.06، (28.16 0 500 1000 1500 2000 2500 3000 3500 4000 9 12 15 18 21 24 27 30 33 36 بعد الغرسااليام ) حجم لورمم م3 السيطرة 20 mg/kg 10 mg/kg 5 mg/kg محمد 2011، 12 - 1: ) 1( 3مجلة ديالى للعلوم الزراعية ، 0 5 10 15 20 25 30 cont r ol 16. 5 8. 2 4. 1 كغم/ملغم الجرع تأثير جرع مختلفة من المستخلص المائي الخام للدفلة في معدل الموت الخلوي المبـرمج أ -3شكل .لحاملة لسرطانة الكبد الفأريللفئران ا(%) 0 5 10 15 20 25 30 control 20 10 5 كغم\الجرع ملغم أثير جرع مختلفة من المستخلص الكحولي الخام للدفلة في معدل الموت الخلوي المبرمج ب -3شكل للفئران الحاملة لسرطانة الكبد الفأري(%) محمد 2011، 12 - 1: ) 1( 3مجلة ديالى للعلوم الزراعية ، 1 2 3 مقطع نسيجي لسرطانة الكبد الفأري تظهر فيه الخاليا التي عانت من الموت 4.صورة ) 2(الخام مصطبغة باللون البني بالمستخلص المائي) 1: (الخلوي المبرمج في الفئران المعالجة بالمقارنة مع (DAB Chromogen 400X)بالمستخلص الكحولي الخام مصطبغة باللون البني . )3(السيطرة محمد 2011، 12 - 1: ) 1( 3مجلة ديالى للعلوم الزراعية ، وقد بينت النتائج أن أفضل المستخلصين المستخدمة في عـالج سـرطان الكبـد الفـأري هـو عنـد أسـتخدام % 86.7ثبيط بلغت للورم بنسبة ت االمستخلص الكحولي الخام وذلك ألنه أظهر تثبيط وربما يرجع السبب في الفعالية التثبيطية العالية للمستخلصات الخـام الـى أحتـواء .الجرعة العالية المستخلصات الخام ألوراق نبات الدفلة على عدد كبير من المركبات الفعالة األخـرى وأغلبهـا مـن , ursolic acidهـي ي أوراق نبـات الدفلـة الكاليكوسيدات القلبية ومن هذه المركبات الموجودة ف Oleanolic acid والتي ثبت أن لها فعالية مضادة لعدة أنواع من الخاليـا السـرطانيةOkamura وليس بالضرورة أن تعمل هذه المركبات كمضادات للورم فقط وأنما قد تؤثر على 1998) .(واخرون ومن األمور التي يجب أن تؤخذ بنظر مناعية ، أداء الجهاز المناعي فتنشطه وبذلك تعمل كمنشطات االعتبار بجانب الفعالية الحالة للسرطان ، ظاهرة الموت المبرمج التي قد تستحثهـــا المستخلصات وقد ذكرت دراسـات أخـرى . الخام حيث تحصل إزالة سريعة للخاليا المعانية من الموت المبرمج دفلة لهما تأثير كابح على عدد من العوامل التـي أدت الـى والمستخلص المائي الخام ألوراق نبات ال لعدد من الجينات التي gene expressionوالتي تنظم التعبير الجيني AP-1و NFĸBتثبيط عاملي . 2000)( واخرون Pathakeكما اشار apoptosis في الموت المبرمج للخاليا امهم اتلعب دور المصادر Convolvulusتأثير المستخلص المائي والقلويدي الخام للمديد . 2009. محمد هادي الربيعي ، إبراهيم arvensis L. في تثبيط الخاليا السرطانية داخل وخارج الجسم، اطروحة دكتوراه، كلية العلوم .للبنات، جامعة بغداد فيالخام والنقية Nerium oleander فلةنبات الد أوراق تاثير مستخلصاتدراسة . 2006.رغد، الشيباني الجامعة . الفئران البيضاءوفي زجاجالخاليا الطبيعية وخطوط الخاليا السرطانية النامية في ال .اطروحة دكتوراة. المستنصرية . onchus olevaceuدراسة دراسة تاثير مستخلصات الخام لنبات المري. 2009.زغير، زينب رزاق .اطروحة دكتوراه، كلية الطب البيطري، جامعة بغداد Allen, J., C. Shuler and S. A. Latt . 1977. A simplified Technique for In vivo analysis of SCE using 5- Brdu tablets. Cyto. Cell. Genet., 18: 231-234. Boisio, M.L., M. Esposito, F. Merlo. 1993. Separation and identifying features of the cardiac aglycones and glycosides of Nerium oleander L. flowers by thin-layer chromatography. Minera Mid., 84: 627-32. Cannell, R.J.P. 1998. Natural product isolation, Humana Press, New Jersey, U.K. Chakravarty, H.L. 1976.Plant wealth of Iraq (A dictionary of economic plants), 1, Botany Directorate, Ministry of Agriculture and Agrarian reform, Baghdad, Iraq. Dixon, W.J. 1980. Efficient Analysis of Experimental Observations. Ann. Rev. Pharmacol. Toxicol., 20: 441-62. محمد 2011، 12 - 1: ) 1( 3مجلة ديالى للعلوم الزراعية ، Freshney, R.I. 2001. Application of cell culture to toxicology. Cell Biology and Toxicology, 17: 213-230. Fu,L.,S.Zhang ,N.Li,M.Ando.2005. Three new triterpenes from Nerium oleander and biological activity of the isolated compounds. J. Nat. Prod., 68: 198-206. Ge, N.L., S. Ye, N. R .Zheng,.Sun, L. Y. and Z. Tang. 2003. Prevention of hepatocellular carcinoma in mice by IL-2 137-1 genes co-transfected liver cancer cell vaccines. World J. Gastroenterol, 9 2182-5. Gupta, S., D. Zhang, J. Yi, Shao, J. 2004. Anticancer activities of Oldenlandia diffusa. J. Herbal Pharmacotherapy, 4: 21-33. Harborne, J.B. 1984. Phytochemical Methods. (2nd ed.), Chapman & Hall, London, P.5 . Jone, S. and K.K. Janardhanan, 2000. Antioxidant and Antitumor activity of Ganoderma lucidum (Curtifr.) P. Karstreishi (Apyllophoromycetideae) from south India. Int. J. Med. Mushr., 2: 195-200. Jordan, M.A. 2002. Mechanism of action of anti tumor drugs that interact with microtubules and tubulin, Curr. Med. Chem. Anti-Canc. Agents, 2: 1-17. Lopus, M., D. panda. 2006.The enzophenanthridine alkaloid sanguinarine perturbs microtubule assembly dynamic through tubulin binding .A possible mechanism for its antiproliferative activity. J. FEBS. 273 (10): 2139-50. Meng, X.L., N.H. Riordan, J.J. Casciari, Y. Zhu, Zhong, J. Gonzalez, M.J. Miranda-Massari, J.R. and H.D. Riordan. 2002.Effect of a high molecular Mass Convolvulus arvensis extract on tumor growth and angiogenesis, PRHS. J.; 21: 323-328. Mukherjee ,A. B .Sourar,. Nabainta,S. and C.Anil, 2001.Advance in canser therapy with plant based natural product.curent medicinal chem..1467-1486. Okamura , H. S. Kashiwamura, Tsutsui, H. T. Yoshimoto, and K. Nakanishi 1998. Regulation of interferon-γ production by IL-12 and IL-18. Curr. Opin. Immunol., 10: 259-64. Pathake, S., A.S. Multani, S. Narayan, V.Kumar, R.A. Newman.2000. Anvirzel ™, an extract of Nerium oleander, induced cell death in human and mouse cancer cells. Anticancer drag, 11: 455-463. Todd, F. G., F. F . Stermitz, P. Schultheis , A. P. Knight, and T. Dargatz. 1995. Tropane alkaloids a nd toxicity of Convolvulus arvensis; phytochem., 39: 301-3. محمد 2011، 12 - 1: ) 1( 3مجلة ديالى للعلوم الزراعية ، Toshio, N., K. Akiko, M. Yuasa, and O. David. 2008 . Mechanism of growth of inhibitory effect of blume.Biochem.772(5)1183-1189. Schmidt, M. and H. Bastians. 2007. Mitotic drug target and development of novel anti-mitotic anticancer drugs. Drug Resistance Updates .10: 162-181. WATERY EXTRACT AND METHONOLIC EXTRACTION OF NERIUM OLEANDER EFFECT ON MICROTUBULES OFH22 CELL AND PROGRAMMED CELL DEATH . Ibrahim hade Muhamed Dept. of Biology - College of Science - Diyala Univ. ABSTRACT The study evaluated the effect of selected Oleandrin and methonolic extraction of Nerium oleander on the microtubule network of H22 cells line (hepatic cell) GFP tubulin labeled . Cells were treated with watery extract and methonolic extraction at various concentration from 0.01 µ/ml to 10m/ml for 60 min , , microtubules were detected by mean of indirect immunfluorescence. the damage was examined in afluorescnce microscope . Therapeutic effect of both extracts was studied in tumor-bearing mice after (I.P) administration of watery extract at concentrations of methonolic (16.5 , 8.1, 4.1mg/kg) and methonoloic extract at concentrations (20, 10, 5 mg/kg) for 30 days alternatively. The results revealed significant reduction in the tumor volume weather in those treated with watery extract 84.09%, or those treated with alcoholic extract 86.07%, particularly at the concentration of 16.5 mg/kg and 20 mg/kg respectively .