Microsoft Word - م.م.زياد طارق السدرة و آخرون 2010، 25 - 18 ) : 2 ( 2مجلة ديالى للعلوم الزراعية ، ، .بعض انواع البكتريالالمضادة ) Iraqi propolis( العكبر العراقي فعالية ∗∗ هادي رحمن رشيد الطائي ∗ طه خاطر خضير ∗زياد طارق السدرة .جامعة ديالى - كلية الزراعة - قسم الثروة الحيوانية ∗ . جامعة ديالى - كلية العلوم -قسم علوم الحياة ∗∗ الخالصة يهدف البحث الى التعرف على قابلية مستخلص العكبر العراقي على تثبيط نمو بعض انواع Agar-well(استخدمت طريقة االنتشار في الحفر البكتريا الموجبة والسالبة لتصبيغ كرام ، diffusion method( ، اقطار التثبيط لبكتريا اذ ان للمقارنة بين المستخلص المائي والكحولي للعكبر Escherichia coli وPseudomonas aeruginosa و Bacillus subtilis و Staphylococcus aureus ملم على التوالي للمستخلص الكحولي 16.7 ، 15.3 ، 9.8 ، 8.1 بلغت البكتريا ملم لنفس االنواع من 4.8 ، 3.4 ، 2.7 ، 2.1، بينما كانت اقطار التثبيط للمستخلص المائي .على التوالي طريقة باستخدامللمستخلص الكحولي للعكبر MIC المثبط األدنى زاختبار التركيثم جرى كرام المتمثلة تصبيغالبكتريا الموجبة لكانت ، حيث )Agar Dilution Method(التخفيف باألكار لها) MIC(ز المثبط االدنى التركي اذ بلغكثر تاثرا هي االB. subtilis و Staph. aureus ببكتريا مل لكال النوعين ، في حين كانت البكتريا السالبة لتصبيغ كرام اكثر مقاومة للمستخلص / ملغم4 مل لكل من بكتريا/ملغم 32 و 16 لها) MIC(الكحولي للعكبر العراقي اذ بلغ التركيز المثبط االدنى Ps. aeruginosa و E. coli على التوالي. Escherichia coli Staphylococcus aureus ، Bacillus ، تثبيطالعكبر العراقي ، : فتاحيةالكلمات الم subtilis ، Pseudomonas aeruginosa. ـــــــــــــــ . 2010 / 6 / 3تاريخ استالم البحث . 2010 / 7 / 11 تاريخ قبول النشر 18 السدرة و آخرون 2010، 25 - 18 ) : 2 ( 2مجلة ديالى للعلوم الزراعية ، المقدمة بعض الراتنجات لهو مادة شبه صمغية يصنعها نحل العسل بعد تجميعه ) Propolis( العكبر ويستخدمها الغراض عديدة منها مادة بناء لغلق الفتحات والتشققات ) Bankova ، 2000( النباتية في الخلية وايضا لتغطية الحشرات الميتة داخل الخلية والتي تكون احجامها اكبر من استطاعة النحل ) .Valafar ، 2008 و Bankova ، 2005 ; Eshraghi( على حملها الى الخارج ديمة المصرية واالغريقية لعالج االصابات الجلدية وتقرحات استخدم العكبر في الحضارات الق ) .2005 واخرون ، Kosalic( الفم ، ومازال حتى اليوم يستخدم في العالج ومستحضرات التجميل ان الفالفونويدات والمركبات الفينولية والشموع والزيوت ) 2005( واخرون Savickasاكد Alencarاالخرى هي من اهم مكونات العكبر ، كما بين المتطايرة وبعض المركبات العضوية وجود مواد اخرى مثل االلديهايدات واسترات حامض الكافييك وبعض السكريات ) 2007( واخرون .والفيتامينات والمعادن قام باحثون كثيرون بدراسة العكبر المحلي المنتج في بلدانهم ، ووجدوا ان له تاثيرات متباينة من منطقة هاليته المضادة لالحياء المجهرية وعزوا هذه االختالفات الى تباين تركيبمن ناحية فع ) .2001 واخرون ، Ota ; 2000 واخرون ، Sforcin ; 1999 واخرون ، Hayashi(الخرى لقيام بهذا البحث ونظرا ألهمية هذه المادة ولقلة الدراسات المتعلقة بها في العراق فقد ارتأينا ا .لعكبر العراقي على تثبيط نمو بعض انواع البكتريا امستخلص بلية لمعرفة قا المواد وطرائق البحث فرع ديالى ، وتم حفظ النموذج / تم الحصول على العكبر من جمعية النحالين العراقيين .بالتجميد لحين اجراء عملية االستخالص مع التحريك ساعة 72مدة الماء لنقع فيسحق نموذج العكبر جيدا ثم : للعكبرالمائياالستخالص حفظ المحلول في الثالجة ثم ، 1باستخدام ورق ترشيح واتمان رقم بعدها عدة مرات يوميا ، رشح ، وتم بعد ذلك التخلص من 50ح باستخدام ورق ترشيح واتمان رقم يرشتلتها عملية ت ساعة 24لمدة . ادة صمغية كثيفة الماء عن طريق التبخير حتى الحصول على العكبر بشكل م نموذج العكبر الى قطع صغيرة جدا وسحقت جيدا ثم استخلـصت قطع :االستخالص الكحولي للعكبر حجم ، ووضع في دورق مغلـق فـي درجـة / وزن 10:1بنسبة % 80باضافتها الى الكحول االثيلي ام ورق ترشيح ساعة مع الرج بين فترة واخرى ، رشح بعدها المحلول باستخد 48حرارة الغرفة لمدة .مقة اللون كثيفة جدا هي خالصة العكبرا ثم بخر الراشح حتى الحصول على مادة غ41واتمان رقم 19 السدرة و آخرون 2010، 25 - 18 ) : 2 ( 2مجلة ديالى للعلوم الزراعية ، و Staphylococcus aureus و Escherichia coliتم الحصول على بكتريا : بكتريا االختبار Bacillus subtilis و Pseudomonas aeruginosa وجرى جامعة بغداد ، – من كلية الزراعة واخرون Konemanالمزرعية والكيميوحيوية لها حسب ماجاء في المورفولوجية والتأكد من الصفات ) .2000 (MacFaddinو ) 1997( مل من 0.5مزج بحضر المحلول ) : محلول ماكفرالند ( تحضير محلول ثابت العكرة القياسي و Baron ( الكبريتيكحامض% 1 مل من 9.5كلوريد الباريوم المائي مع % 1.175محلول Fingold ،1994 ( . 150 مل من محلول الملح الفسلجي بـ 5لقحت انابيب اختبار حاوية على : تحضير العالق البكتيري ساعة ، ثم قورنت عكارة 18مايكرولتر من مزارع بكتيرية منماة في الوسط المغذي السائل بعمر نانومتر 450 الكثافة الضوئية على طول موجي النمو بعكارة محلول مكفرالند عن طريق قراءة وبذلك تم تحضير عالق بكتيري بتركيز تقريبي وانتقيت العزالت المتوافقة مع محلول مكفرالند ، ) 1995 واخرون ، Atlas(مل / x 108 1.5 للخاليا في الحفر ت طريقة االنتشار تخدماس :فحص تأثير مستخلصات العكبر في فعالية البكتريا االختبارية )Agar-well Diffusion Method ( التي ذكرهاCrespo واخرون )وذلك بتلقيح سطح ) 1990 من ) Sterile swab(الوسط المغذي الصلب بالبكتريا االختبارية كل على حدة بوساطة قطيلة معقمة يز ووضعت التراك، ملم 6العالق البكتيري المحضر في الخطوة السابقة ، ثم عملت حفر بقطر مل كال على انفراد /ملغم 1،10،20،30،40،50وهي المحضرة للمستخلص المائي والكحولي للعكبر للمقارنة ) Control( مل في كل حفرة مع بقاء حفرة واحده تحوي الماء المقطر المعقم 0.1وبمقدار تخلص للمقارنة مع المس% 80مع المستخلص المائي ، وحفرة تحتوي على كحول أثيلي معقم بتركيز ساعة ، بعدها قرئت النتائج باستخدام 24م لمدة 37ºالكحولي ، وحضنت األطباق بدرجة حرارة ) . باخذ قطرين متعامدين ( المسطرة عن طريق قياس قطر منطقة التثبيط ) Agar Dilution Method( اتبعت طريقة التخفيف باألكار : MIC المثبط األدنى زاختبار التركي - National Committee for Clinical Laboratory Standards -NCCLSالواردة في هنتون الصلب- نسب مختلفة من المستخلص الكحولي للعكبر الى وسط مولرباضافة، وذلك ) 2000( )Mueller-Hinton agar ( 50بدرجة حرارةº2 ،1للحصول على التراكيز المطلوبة وهي م ، ، الذي اليحتوي على اي مستخلص مقارنة طبق الفضال عن ، لم/ ، ملغم64 ، 32 ، 16 ، 8 ، 4 زرع العالق البكتيري المحضر في الفقرة السابقة على األوساط اعاله ثم تركت بضع دقائق لتجف ، و 20 السدرة و آخرون 2010، 25 - 18 ) : 2 ( 2مجلة ديالى للعلوم الزراعية ، ، ، وسجلت النتيجة على أساس وجود او عدم وجود نمو ساعة24م لمدة 37οبدرجة حرارة وحضنت .هو التركيز المثبط األدنى ) -(ركيز لم يظهر فيه النمو اقل تدعلى التوالي وع) -(، (+) النتائج والمناقشة :دراسة فعالية مستخلصات العكبر تجاه بكتريا االختبار اربعة باستخدام ) Agar-well Diffusion Method( طريقة االنتشار في الحفر استعملت و Escherichia coliام هي انواع مختلفة من البكتريا ، اثنتان منها سالبة لتصبيغ كر Pseudomonas aeruginosa واثنتان موجبة لتصبيغ كرام هي ، Bacillus subtilis ، وقد وقع االختيار على هذه االحياء المجهرية لكونها من المسببات Staphylococcus aureusو كما انها ) 1986 واخرون ، Pelazar(الشائعة لبعض االمراض التي يتعرض لها االنسان والحيوان ) .Miladi 1997 و Musaiges(تعد من الملوثات التي تسبب التلف لبعض االغذية اظهرت النتائج ان للعكبر العراقي المنتج في مناحل محافظة ديالى تاثيرا مثبطا للبكتريا المائي مع تاشير افضلية كبيرة للمستخلص الكحولي على المستخلص الموجبة والسالبة لتصبيغ كرام ، اقطار التثبيط لبكتريا ان ) 1( مالحظة الجدول رقم اذ يتضح منللبكتريا ، من ناحية التاثير المثبط Escherichia coli وPseudomonas aeruginosa و Bacillus subtilis و Staphylococcus aureus ملم على التوالي للمستخلص الكحولي 16.7 ، 15.3 ، 9.8 ، 8.1بلغت . ملم على التوالي للمستخلص المائي 4.8 ، 3.4 ، 2.7 ، 2.1ين بلغت ، في ح ويالحظ من النتائج اعاله ان البكتريا السالبة لتصبيغ كرام كانت اكثر مقاومة لمستخلصات ملم 2.7 و2.1 بلغت Ps. aeruginosaو E. coliالعكبر اذ ان اقطار التثبيط لكل من بكتريا ملم للمستخلص الكحولي ، في حين كانت البكتريا الموجبة لتصبيغ 9.8 و 8.1 وللمستخلص المائي 3.4بلغت Staph. aureusو B. subtilisكرام اقل مقاومة اذ ان اقطار التثبيط لكل من بكتريا . ملم للمستخلص الكحولي16.7 و 15.3 ملم للمستخلص المائي و 4.8و ) 2005( واخرون Kosalicو ) 2002(ن واخروKooتتفق النتائج اعاله مع ماذكره كل من الذين اكدوا ان ) 2006( Mercan وKatirciogluو ) 2005( واخرون ، Boyanova و Yaghoubiختلف عما ذكره ها تللعكبر تاثيرا مثبطا للبكتريا الموجبة والسالبة لتصبيغ كرام ، اال ان يا الموجبة لتصبيغ كرام وليس له تاثير من ان للعكبر تاثيرا تثبيطيا على البكتر ) 2007( واخرون .على البكتريا السالبة لتصبيغ كرام 21 السدرة و آخرون 2010، 25 - 18 ) : 2 ( 2مجلة ديالى للعلوم الزراعية ، . تأثير مستخلصات العكبر تجاه البكتريا االختبارية .1جدول * )ملم( التثبيط ةقطر منطق البكتريا المستخلص المائي للعكبر المستخلص الكحولي للعكبر E.coli 2.1 8.1 Pseu. aeruginosa 2.7 9.8 B. subtilis 3.4 15.3 Staph. aureus 4.8 16.7 ) ملم 6( قطر الحفرة التثبيط مطروح منهمنطقةقطر * : الكحولي للعكبر العراقي لمستخلصل ) MIC ( تحديد التركيز المثبط االدنى فعالية مضادة للبكتريا المستخلص الكحولي للعكبر يمتلك على ضوء النتائج اعاله اتضح ان ) MIC( ، لذلك تم اجراء تجربة لتحديد التركيز المثبط االدنى اقوى من تاثير المستخلص المائي طريقة باستعمالتجاه بعض انواع البكتريا الموجبة والسالبة لتصبيغ كراملمستخلص الكحولي ل . ) Agar Dilution Method( التخفيف باالكار طريقة لما تم التوصل اليه فيمؤكدة جاءت النتائج يتضح ان ) 2( رقم من مالحظة الجدول البكتريا السالبة لتصبيغ ، اذ اتضح ان )Agar-well diffusion method( االنتشار في الحفر و MIC ( 32( اذ كان التركيز المثبط االدنى كانت اكثر مقاومة للمستخلص الكحولي للعكبر كرام جبة وا المي ، فيما كانت البكتر على التواليPs. aeruginosa و E. coliتريا مل لبك / ملغم16 التركيز المثبط هي االقل مقاومة اذ كان Staph. aureus و B. subtilisالمتمثلة بـ لتصبيغ كرام .مل / ملغم 4 متشابها وبلغلها ) MIC(االدنى تثبيطي للعكبر يعود الى احتواءه على تراكيز عالية من الراتنجات والفالفونويدات ان الفعل ال واخرون ، Garcia-Viguera ، 1992 ; Marcucci ; 1991 واخرون ، Ikeno(والفينوالت 2001 ; Savickas ، 2005 واخرون ( . يولوجية للعكبر فضال عن المركبات اعاله يمكن ان تلعب مكونات اخرى دورا في الفعالية البا ) .1997 واخرون ، Park( مثل حامض الكافييك وحامض السيناميك واستراته 22 السدرة و آخرون 2010، 25 - 18 ) : 2 ( 2مجلة ديالى للعلوم الزراعية ، .للمستخلص الكحولي للعكبر تجاه بعض انواع البكتريا ) MIC( التركيز المثبط األدنى . 2جدول مل / تركيز المستخلص ملغم البكتريا 1 2 4 8 16 32 E. coli + + + + + + + + + + + + + + + - - - Ps. aeruginosa + + + + + + + - + + + - - - - - - - B. subtilis + + + + + + + - - - - - - - - - - - Staph. aureus + + + + + + - - - - - - - - - - - - وجود نمو( + ) عدم وجود نمو ) -( المصادر Alencar, S.M., T.L.C. Oldoni, M.L. Castro, I.S.R. Cabral, C.M. Costa-Neto, J.A. Cury, P.L. Rosalen and M. Ikegaki. 2007. Chemical composition and biological activity of a new type of Brazilian propolis: Red propolis. J. Ethnopharmacology. 114: 311-316. Atlas, R.M., A.E. Brown and L.C. Parks. 1995. Laboratory Manual of Experimental Microbiology. Mosby Company Inc. U.S.A. Bankova, V. 2000. Determining quality in propolis samples. J. American Apitherapy Soc. 7: 161-164. Bankova, V. 2005. Chemical diversity of propolis and the problem of standardization. J. Ethnopharmacology. 100: 114-117. Baron , E. T. and S.M. Fingold. 1994. Diagnostic Microbiology. 9th ed. Mosby Company Inc. U.S.A. Boyanova, L., G. Gergova, R. Nikolov, S. Derejian, E. Lazarova, N. Katsarov, I. Mitov and Z. Krastev. 2005. Activity of Bulgarian propolis against 94 Helicobacter pyiori strains in vitro by agar-well diffusion, agar dilution and disc diffusion methods. J. Med. Microbiol. 54: 481-483. Crespo, M. E., J. Jimenez, E. Gomis and C. Nararro. 1990. Antimicrobial activity of essential oil of Tymus scrpylloides subspecies gadrensis. Micro. Bios. 61: 181-184. Eshraghi, S. and S. Valafar. 2008. Evaluation inhibitory effects of Iranian propolis against filamentous bacteria. Pak. J. Med. Sci. 24: 56-60. Garcia-Viguera, C. 1992. Composition of propolis from two different Spanish regions. Z. Naturforsch. 47c: 634-637. 23 السدرة و آخرون 2010، 25 - 18 ) : 2 ( 2مجلة ديالى للعلوم الزراعية ، Hayashi, K., S. Komura, N. Isaji, N. Ohishi and K. Yagi. 1999. Isolation of antioxidative compounds from Brazilian propolis: 3,4-dihydroxy-5- prenylcinnamic acid, a novel potent antioxidant. Chem. Pharm. Bull. 47: 1521-1524. Ikeno, K., T. Ikeno and C. Miyazawa. 1991. Effects of propolis on dental caries in rats. Carries Res. 25: 347-351. Katircioglu, H. and N. Mercan. 2006. Antimicrobial activity and chemical compositions of Turkish propolis from different region. African J. Biotechnol. 5: 1151-1153. Koneman, E., S. Allen, W. Janda, P. Schrechenberger and W. Winn. 1997. Color Atlas and Textbook of Diagnostic Microbiology. 5th ed. Lippincott, Williams & Wilkins Co. Philadelphia. Koo, H., P.L. Rosalen, J.A. Cury, Y.K. Park and W.H. Bowen. 2002. Effects of compounds found in propolis on Streptococcuc mutans growth and on glucosyltransferase activity. Antimicro. Agents Chemotherapy. 46: 1302- 1309. Kosalic, I., S. Pepeljnjak, M. Bakmaz and S.V. Knezevic. 2005. Flavonoid analysis and antimicrobial activity of commercially available propolis products. Acta Pharma. 55: 423-430. MacFaddin, J.F. 2000. Biochemical Tests for the Identification of Medical Bacteria. 3rd ed., Lippincott, Williams & Wilkins Co., Philadelphia. Marcucci, M.C., F. Ferreres, C. Garcia-Viguera, V. Bankova, S.L. de Castro, A.P. Dantas, P.H.M. Valente and N. Paulino. 2001. Phenolic compounds from Brazilian propolis with pharmacological activities. J. Ethnopharmacology. 74: 105-112. Musaiges, A.O. and S.S. Miladi. 1997. The state of food and nutrition in the near–east countries. FAO regional office for the near–east. Cairo. Egypt. FAO. Rome. National Committee for Clinical Laboratory Standards (NCCLS). 2000. Methods for dilution antimicrobial susceptibility test for bacteria that grown aerobically. Approved Standards. NCCLS publication no. M7– A5. Wayne. Pa. Ota, C., C. Unterkircher, V. Fantinato and M.T. Shimuzu. 2001. Antifungal activity of propolis on different species of Candida. Mycoses. 44: 375- 378. Park, Y.K., M.H. Koo, M. Ikegaki and J.L. Contado. 1997. Investigation of the flavonoid aglycones of propolis collected by Apis mellifera in Brazil. Arq. Boil. Technol. 40: 97-106. Pelazar , M.J., E.C.S. Chan and N.R Krieg. 1986. Microbiology. 5th ed. McGraw–Hill. New York. 24 السدرة و آخرون 2010، 25 - 18 ) : 2 ( 2مجلة ديالى للعلوم الزراعية ، Savickas, A., D. Majiene, K. Ramanauskiene, A. Pavilones, J. Muselik, R. Masteikova and Z. Chalupova. 2005. Chemical composition and antimicrobial activity of Lithuanian and Czech propolis. Biologija.4: 59- 63. Sforcin, J.M., J. Fernandes, C.A.M. Lopes, V. Bankova and S.R.C. Funari. 2000. Seasonal effect on Brazilian propolis antibacterial activity. J. Ethnopharmacology. 73: 243-249. Yaghoubi, S.M.J., G.R. Ghorbani, S. Soleimanian Zad and R. Satari. 2007. Antimicrobial activity of Iranian propolis and its chemical composition. DARU. 15: 45-49. ANTIBACTERIAL EFFECT OF IRAQI PROPOLIS . Ziad T. Sedrah ∗ Taha K. Khudhair ∗ Hadi R.R. Al-Taai ∗∗ ∗ College of Agriculture - Diyala University . ∗∗ College of Science - Diyala University . ABSTRACT The objective of this study was to investigate the antibacterial activity of Iraqi propolis on some Gram positive and Gram negative bacteria . The results of agar – well diffusion method showed that the Iraqi propolis exhibited antibacterial effects against Gram-positive bacteria much greater than that against Gram-negative bacteria, the mean diameters of bacterial growth inhibited by different concentrations of water extract of Iraqi propolis are 2.1, 2.7, 3.4 and 4.8 mm for Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, Bacillus subtilis and Staphylococcus aureus respectively, while the mean diameters of bacterial growth inhibited by different concentrations of ethanolic extract of Iraqi propolis are 8.1, 9.8, 15.3 and 16.7mm respectively. The Agar Dilution Method results showed that MIC of ethanolic extract of Iraqi propolis for Staphylococcus aureus and Bacillus subtilis was 4 mg/ml and MIC for Ps. aeruginosa , E. coli was 16 and 32 mg / ml respectively. Key words: Iraqi propolis , inhibition , Staphylococcus aureus ، Bacillus subtilis, Escherichia coli , Pseudomonas aeruginosa. 25