دراسة طبعة النواة لطيورالدجاج المحلى و اللكهورن الابيض األنباري و آخرون2009 ، 32 - 22 ( : 1 ) 1مجلة دٌالى للعلوم الزراعٌة ، 22 المحلً واللكهورن األبٌض جدراسة الهٌئة الكروموسومٌة لطٌور الدجا إٌمان حسن هادي األنبارى عٌسى حسٌن المشهدانى إسماعٌل كاظم شبر وزارة العلوم والتكنولوجٌا قسم الثروة الحٌوانٌة، كلٌة الزراعة، جامعة بغداد الخالصة قسـم الثروة الحٌوانــٌة كلٌة الزراعة جامعة بغداد / أجرى البحث فً حقل الطــٌور الداجــنة وأكمل فً مختبرات المواد الخطرة وبحـوث البٌئة فً وزارة العلوم والتكنولوجٌا للمــدة من ونظرا لعدم وجود دراسات ســابقة فً العراق حول موضوع 2005/9/30 لغاٌة2004/10/15 طبعة النواة فً الطٌور الداجنة، فقد هدفت هذه الدراسة إلى وضع اللبنة األولى فً دراســة طبعة النــواة فً طٌــور الدجاج المحلً ودجاج اللكهــورن األبٌض إذ استخدمت مجموعتٌن من الطٌور ، لقحت طٌور . بعمر النضج الجنسً بعدد أربعة لكل منهما٬دجاج محلى ولكهورن ابٌض مقتول Staphyloccocus aureas (S.aureas) لجرثومة (AG)المجموعتٌن بمستضد . بالفــورمالـٌن قد حّضـر لهذا الغرض وباستخدام تقانة زرع الخالٌا اللمفاوٌة لتلك الطٌور المحفزة حصلنا على صور لطبعة النواة ألنثى دجاج لكهورن مع كروموسومات فً الطور االستوائً ألنثى دجاج محلً رتبت حسب . أطوالها أزواجا من األول ولغاٌة الثامن ومن ضمنها الخامس كروموسوم الجنس المقدمة إن التقدم العلمً الكبٌر الذي حصل فً علم الوراثة،وبشكل خاص فً حقل وراثة الخلٌة قد ارتبط بشكل مباشر باالهتمام بالكروموسومات حول أهمٌة فصلها عزلها وتصبٌغها فقد إن علم الوراثة ٌهتم بدراسة تركٌب وتضاعف و استنساخ (1976 ) وآخرون، Riegerأوضح المادة الوراثٌة وتورٌثها، أما الوراثة الخلوٌة فقد اهتمت بدراسة الخالٌا من حٌث وضٌفتها، تطورها ، نتاجها وتوالدها، لذا أصبحت دراسة الكروموسوم إضافة إلى وضع طبعة النواة (Karyotype) أو الهٌئة الكروموسومٌة من األمور التً البد من إجرائها . ، لقد قدم مجال دراسة الكروموسومات الكثٌر من المعلومات إذ أشار البلداوي و آخرون إلى أن لخالٌا أفراد النوع الواحد عدد ثابت من الكروموسومات ٌكون مختلفا أو مساوٌا (1987) إلى إن الكروموسومات (2005) ، و آخرونMusaكما أشار . لعدده فً خالٌا األنواع األخرى داخل نواة الخلٌة الواحدة للنوع تكون بأشكال وأطوال مختلفة أو متشابه فً الطول وفً موقع وإنه ال ٌوجد ارتباط بٌن عدد الكروموسومات للنوع وحجم centromer الجسم المركزي من هنا تتضح أهمٌة إجراء هذه الدراسات على الطٌور مثل أهمٌتها على اللبائن إال ، الكائن الحً األنباري و آخرون2009 ، 32 - 22 ( : 1 ) 1مجلة دٌالى للعلوم الزراعٌة ، 23 إن هناك بعض الصعوبات والمعوقات التً تعتبر عامال محددا وغٌر مشجع إلكمالها، منها ما أشار بوجود العدد الكبٌر من الكروموسومات المتباٌنة الحجم و الشكل وإن Newcomer، (1957) لها العدد الكثٌر من الكروموسومات الصغٌرة ٌعد عائقا مباشرا أمام الوصول للعدد الفعلً . زوجا من الكروموسومات 2n =12لكروموسومات الطٌور وأضاف إن للدجاج 2n =39من وضع العدد الصحٌح لكروموسومات الدجاج وحددها Owen، (1962)وتمكن إن صعوبة Jaffe (1966) و Fechheimerثم أضاف. ماٌكرون0.2 و9متفاوتة فً الطول بٌن تحضٌر الكروموسومات من الطٌور وصعوبة تورٌثها ٌعتبر عامال غٌر مشجع لدراستها هذا باإلضافة إلى وجود الطفٌلٌات التً تتكاثر فً األوساط الزرعٌة المعدة لالستخدامات البحثٌة ثم من وضع خطوات وطرٌقة للحصول على طبعة نواة (1976) وآخرون، Shoffnerاستطاع صنفت فٌها الكروموسومات حسب الحجم Gallus domesticus لكروموسومات الدجاج وقسمت إلى سبعة مجامٌع اعتمادا على موضع السنترومٌر فٌها كان الكروموسوم األول والثانً وسطٌا المرتكز فً المجموعة األولى، الكروموسوم الثالث نهائً السنترومٌر فً المجموعة الثانٌة ،الرابع وهو شبه وسطى المرتكز فً المجموعة الثالثة، أما المجموعة الرابعة فقد شملت على كروموسومى الجنس الذكرى و األنثوي وهما وسطٌا المرتكز، المجموعة الخامسة وٌقع فٌها الكروموسومان السادس والسابع وهما نهائٌا المرتكز، السادسة تضم الكروموسومان الثامن والتاسع وسطٌا المرتكز والمجموعة األخٌرة السابعة وهذه تشمل جمٌع الكروموسومات من الكروموسوم وقد اتفق على إن هذه الكروموسومات صغٌرة الحجم ولها 39العاشر ولغاٌة الكروموسوم . سنترومٌر نهائً إلى إن دراسة الكروموسومات فً الدجاج تستغرق وقتا (1971) و آخرون، Millerوأشار أطول من دراستها على اللبائن بالرغم من اعتماد تلك الدراسات على الكروموسومات الكبٌرة الحجم فٌها فقط والتً غالبا ما تكون محصورة بٌن الكروموسوم األول و التاسع أو األول والرابع عشر . منها إن كروموسومات الطٌور باإلمكان الحصول علٌها وتحضٌرها Bloom ،(1981) ثم أضاف فً مراحل عمرٌة مختلفة من دورة حٌاة الطٌر و قد تكون بطرٌقة مباشرة ٌعتمد فٌها على األنسجة ( (Thymus التوثةالنامٌة مثل األنسجة الجنٌنٌة، حوٌصالت الرٌش، نخاع العظم، غدة فابرٌشٌا و أو غٌر مباشرة إذ تعتمد على زرع خالٌا الدم اللمفاوٌة بوجود احد المشطرات المٌوتجٌن مثل Pekeweed ومادة PHA.P( Phytohaemagglutinin.P) . كما أشارSheldonو Nichols ،(1981) كروموسوم غٌر إن دراسات التحلٌالت 78 إلى انه رغم امتالك الدجاج الكروموسومٌة تتفاوت فً إعتمادها على أعداد الكروموسومات الكبٌرة األنباري و آخرون2009 ، 32 - 22 ( : 1 ) 1مجلة دٌالى للعلوم الزراعٌة ، 24 (Mac.)Macrochromosomes من 16 أو 11، 9، 5 التً تتم دراستها فقد ٌكون إلى حد عدد فً بحثها على (1999 )،يالكروموسومات بضمنها كروموسوم الجنس فٌما إعتمدت األنبا ر . الدجاج المحلً فً العراق لدراسة عدد كروموسوماته من األول إلى رقم عشره منها 6 عند مقارنتـهم لكروموسـومات الطـٌور بــٌن (2000) ، و آخرونSmithوقد أوضــح زوجـا مـن الكروموسـومات الصغٌرة 33 مـع (.Mac)أزواج من الكروموســومات الكبٌرة (Mic.) Microchromosome إن األخٌرة تكـون فٌهـا الكثافة الجٌنٌــة أكثــر شدة من األولى إذ إنه باستخدام الخرائط الفٌزٌائٌــة الرتباط الجٌنــات بدراســـة تتــابع الدنا بالكلونة فقد اتضح إن وأضــاف . بنسبة مرتٌن (.Mac)أكثر كثافة جٌنٌا من الكبٌرة (Mic.)الكروموسومات الصغٌرة McPherson، عنــد وصــفه لجٌنـــوم الدجاج إن هناك تباٌــنا واسـعا فـً )2002) و آخرون قٌاســات أحجــام كروموســـومات الطــٌور على العكــس مــن قٌاساتها فً اللبائن، وإن كروموسـوم Mb( Morgan 200-50 ٌحتوي على centi morgans(600 cM)رقم واحد فً الدجاج ٌبلغ bas) 20-5 كروموسوم تعتبر جسمٌه صغٌرة وتتراوح أطوالها بٌن38 من 30فً حٌن إن Mb Florescentوٌتم تحدٌدها وتمٌزها فً الوقت الحاضر بتقنٌة التهجٌن الموضعً المتفلور InSitu Hybridization (FISH). إلـى مجامٌع، اجــكروموســـومات الدج( 2004) و آخرون ، Masabandaثم صـنـّف ٌمكن Z, Wي الجنس روموســـومـك بضــمنها 10 إلى 1 مـن كروموســـوماتاألولى فٌــها ال 16 إلى 11 من كروموســـوماتوالمجموعة الثانٌة تشمل ال (.Mac)تمٌٌزها بطبعة النواة وهً الحاوي على مواقع 16 كروموســـومبضمنها (Mic). الصغٌرة الكروموســـوماتتضم أكبر والمجــموعة الثـالــثة ضمـّت Nuclear Organizer Regions (NOR)مولدات النوٌة والتً تمٌز باالستعانة بالمجامٌع االرتباطٌة، أما المجموعة 32 إلى 17 مــن روموســـوماتــكال روموســـوماتـالك أي أنــها ضمـّت اصــغر 38 إلى 33 من الكروموســـوماتالرابعة فإنها تشمل الطٌور ٌعتبر السبب كروموســـوماتإن التباٌن فً أطوال Burt ،(2005)الصغٌرة، وقد بّرر 5 وهنــاك (.Mac) كبٌـرة 5 زوج جسـمً منـها 38فً عدم تساوي جٌنوماتها وإنـها تملك ي له عبور واحد على كروموســـوم كما أضاف أن كل ذراع ٬(Mic). صـغٌرة 28متوســطة و . الكبٌرة نسبة عالٌة من االتحادات الجدٌدةكروموســـوماتاألقل وإن لل ونظرا لعدم وجود دراسات سابقة اهتمت بهذا الموضوع لذا هدف هذا البحث إلى وضع طبعة . الكروموسومٌة لكل من الدجاج المحلً واللكهورن األبٌض فً العراقالىىاة أو الهيئة المواد وطرائق العمل األنباري و آخرون2009 ، 32 - 22 ( : 1 ) 1مجلة دٌالى للعلوم الزراعٌة ، 25 ، حقنت فً فأر إلدامة Staphyloccocus aureas (S.aureas)استخدمت جرثومة Mukker ، (1979)ضراوتها ثم سحب الدم من قلب الحٌوان مباشرة وأكمل العمل حسب طرٌقة ورسـّبت N. broth و Macconky agar ، Nutrient agarإذ تم استنباتها على أوساط زرعٌه % 0.3دقٌقة لمدة ربع ساعة وأضٌف للراسب مادة الفورمالٌن بنسبة / د5000بالمنبذة بسرعة 5000 ساعة وفصلت الجراثٌم المقتولة بالمنبذة بسرعة 24 -18لقتلها، بعدها حضن العالق لمدة دقٌقة لمدة نصف ساعة وغسل عالق الخالٌا الراسبة بالمحلول الملحً الفسلجً /د PBS(Phosphate buffer solution) ًثم وعلى جهاز المطٌاف الضوئً وعلى طول موج 10 ×3 حصـل منها على تركٌز 0.25 نانومتر وبقراءة 600 8 جرثومة لكل مل، استخدم هذا التركٌز لحقنه فً مجموعتٌن من الطٌور بعمـر النضـج الجنسـً وهً إناث المحلً واللكــهورن Agطٌر وبعد أسبوعٌن أعٌد الحقن بالمستضد / مل 5حـقنت تحت الجلد فً منطقة الرقبة بمقدار لزٌادة تحفٌز توالد كرٌات الدم البٌض اللمفاوٌة للحصول على طبعة النواة ومن ثم من تلك الطٌور من زرع خالٌاها اللمفاوٌة، حٌث سحب الدم من منطقة الورٌد الكروموســـومات إذ مزج الدم المسحوب بالهٌبارٌن الذي كان Bőyum،(1968)الجناحً وأكمل العمل حسب طرٌقة ومزج االثنان معا ثم محلول الملحً الفسلجً من 1:1قد وضع فً حقنة السحب ثم أضٌف له نسبة فً Lympho Separation Medium (LSM) مل من وسط عزل الخالٌا اللمفاوٌة 4أضٌف أنبوبة سٌلٌكونٌة وأضٌف لها الدم المخفف بصورة هادئة ومائلة حتى ال ٌمتزج االثنان معا ثم وضع دقٌقـة وبدرجـة 20الدقٌقة لمـدة / دورة 2000األنبوب فً جهاز النبذ المركزي المبـّرد بسـرعة مئوٌـة، بعده سحبت طبقة الخـالٌا اللمفاوٌة بماصـة باسـتور نظـٌفة ثم غســلت 20-16حرارة ثالث مـرات مـع النبـذ فــً كل مرة وأخٌرا حصل على راسب الخالٌا Lympho Pripبمـادة 4 والتً تضمنت إضافة Christidis،(1972)اللمفاوٌة فً قعر األنبوبة إذ تم زرعها حسب طرٌقة Fetal Calf) مل سٌرم أجنة العجول 1 مع RPMI 1640مل من مادة الوسط الزرعً Serum) مل من 0.3 مع mutagen PHA مل مضاد حٌوي، حضنت 0.7 كمادة مشطرة و %0.0001 مل من 0.1 ساعة إذ أضٌف هنا 71 م ولمدة 40ْاألنابٌب المزروعة فً درجة ، نبذت ( ساعة وقت الحضن الكل72ً) وبعد ساعة أخرى من الحضن Colchicineمحلول دقٌقة لمدة عشر دقائق وأضٌف لها محلول ناقص التوتر / د5001األنابٌب بالمنبذة بسرعة Hypotonic دقٌقة لمدة عشر / د15000 دقٌقة وبعد نبذها بالمنبذة بسرعة 15وأعٌد الحضن لمدة وأعٌد النبذ وكررت هذه العملٌة ثالث مرات وهنا أصبحت Fixativeدقائق أضٌف لها المثبت الخالٌا جاهزة للتقطٌر على السالٌدات المحضرة مسبقا باستعمال ماصة باستور وبعد أن جففت األنباري و آخرون2009 ، 32 - 22 ( : 1 ) 1مجلة دٌالى للعلوم الزراعٌة ، 26 والزٌتٌة X40وفحصت تحت المجهر الضوئً على العدسة Gimasa stain بـصبغت السالٌدات . وأخذت لها عدة لقطات وصور النتائج والمناقشة فً الطٌور الداجنة من المواضٌع الحدٌثة فً العراق (الكارٌوتاٌب)ٌعد موضوع طبعة النواة التً لم ٌتطرق لها من قبل بل أن هذه المواضٌع ٌتم إجراؤها فً بعض المراكز المتخصصة مثل المركز العراقً لبحوث السرطان والوراثة وبشكل دقٌق لإلنسان فقط فً حاالت تشخٌص األمراض الوراثٌة التً لها عالقة باالنحرافات الكروموسومٌة ، وباإلضافة إلى ما ذكر سابقا عن المعوقات والصعوبات التً تواجه إجراء مثل هذه الدراسات على الطٌور الداجنة أال أننا وعلى الرغم من هذا من الخالٌا اللمفاوٌة التً حفزت باستخدام الكروموســـوماتفقد تمكنا من الحصول على صور لمفاوٌة Blast تظهر خالٌا 2 و 1 المقتول بالفورمالٌن والصور s. aureas Agالمستضد ثم زرعت طبقة الخالٌا اللمفاوٌة بعد أن فصلت من . محفزة الدجاج للمحلً واللكهورن على التوالً وسط الخالٌا الحمر المترسبة وصلنا إلى مرحلة فصل الخالٌا المزروعة وإضافة المواد المشار إلٌها والتً تظهر خالٌا لمفاوٌة محفزة 4 و 3آنفا فً المواد وطرٌقة العمل منها حصلنا على الصور . مزروعة للدجاج للمحلً واللكهورن وعند الوصول إلى مرحلة تقطٌر المستخلص الحاوي على الخالٌا الحظنا وجود أنوٌه عدة فً بشكل واضح الكروموســـومات تظهر فٌها Metaphase (االستوائً)مراحل االنقسام االعتٌادي وصفـّت أزواجا كل مع نظٌره ورتبت من الكروموســـوماتتم أخذ الصور لها وقطعت صور كما تظهر ذلك (الجنسً) الخامس كروموســـوم األول وحتى الثامن ومن ضمنها الالكروموســـوم وهنا . 6 لدجاج أنثى لكهورن الصورة (Karyotype) ، كما حصلنا على طبعة نواة 5الصورة أو طبعة نواة الطٌور الداجنة الكروموســـوماتنشٌر إلى أن الوصول لمرحلة الحصول على من خالل زرع الخالٌا اللمفاوٌة بشكل خاص كما هو حاصل فً هذه الدراسة فإنه ٌمكن (الدجاج) . اعتماد نتائج هذا البحث فً الدراسات الخلوٌة الالحقة التً تجرى على الدجاج األنباري و آخرون2009 ، 32 - 22 ( : 1 ) 1مجلة دٌالى للعلوم الزراعٌة ، 27 خاليب ليمفبوية للدجبج المحلي (1)صىرة خاليب ليمفبوية لدجبج اليكهىرن (2)صىرة خاليب ليمفبوية محفسة مسروعة للدجبج المحلي (3)صىرة األنباري و آخرون2009 ، 32 - 22 ( : 1 ) 1مجلة دٌالى للعلوم الزراعٌة ، 28 خاليب ليمفبوية محفسة مسروعة لدجبج اليكهىرن (4)صىرة األنباري و آخرون2009 ، 32 - 22 ( : 1 ) 1مجلة دٌالى للعلوم الزراعٌة ، 29 CH5 بضمهب كرومىسىم الجىس CH8 إلى CH1أزواج كرومىسىمبت الدجبج المحلي مه (5)صىرة .الهيئة الكرومىسىمية ألوثى اليكهىرن (6)صىرة األنباري و آخرون2009 ، 32 - 22 ( : 1 ) 1مجلة دٌالى للعلوم الزراعٌة ، 30 المصادر . 1987البلداوي، عبد اللطٌف فالح والراوي، عبد الرزاق عبد الحمٌد والعانً، هٌثم جسام محمد .وزارة التعلٌم العالً والبحث العلمً ، جامعة بغداد. الوراثة تأثٌر أنواع من المركزات البروتٌنٌة فً إحداث الطفرة على أجنة . 1999األنباري، إٌمان حسن هادي .كلٌة الزراعة ، جامعة بغداد. الدجاج المحلً، رسالة ماجستٌر Bloom, S.E. 1981. Detection of Normal and Aberrant chromosomes in chicken embryos and tumer cells. Poultry sci. 60: 1325-1361. Bőyum, A. 1968. Procedure for separation of lymphocytes. Scand. J. Clin. Lab. Inves: 21 suppl. 97-100. Burt, D. W. 2005. Chicken Genome, Current status and future opportunities. Genome Research. 15: 1692 – 1698. Christidis, L. 1972.A rapid procedure for obtaining chromosome preparations from birds.The Auk 102:No. 4. Fechheimer, N. S. and W. P. Jaffe. 1966. Method for the display of avain chromosomes. Nature 211: 773-774. Masabanda, J. S., D. W. Burt and K. G. Darren. 2004. Molecular cytogenetic definition of the chicken Genome: The first complete Avian Karyotype. Genetics 166: 1367 – 1373. McPherson, J. D., Jerry Dodgson; K. Robb and P. Oliver. 2002. Proposal of sequence the Genome of the chicken. www.chickengenome.org Miller, R. A.; N. N. S. Fechheimer and W. P. Jaffe. 1971. Chromosomes abnormalities in 16 to 18 hour chick embryos. Cytogenetics. 10: 121 – 136. Mukker, T. K. S. 1979. Immunogenisty of chatropically extract protection antigene(s) origion against experimental pasteurllosis in mice. J. cenerd Microb. 113:P 37 – 43. Musa, H. H., B. Li, C., G.H. Rher , TP Lanyasgya, Q. Xu, and W. B. Bao. 2005. Karyotype and Banding patterns of chicken breeds. Int. J. Poultry Sci. 4(10): 741 – 744. http://www.chickengenome.org/ األنباري و آخرون2009 ، 32 - 22 ( : 1 ) 1مجلة دٌالى للعلوم الزراعٌة ، 31 Newcomer, E. H. 1957. The mitotic chromosome of the domestic fowl. J. Herd. 48: 227-237. Owen, J. J. T. 1962. Karyotype studies on Gallus domisticus. Chromosome (Berl). 16: 601 – 608. Rieger, R., A. M. Mechaelis and M. Green. 1976. Glossary of genetics and cytogenetics. Classical and Molecular. 4 th ed. Springer. Berlin Heidelberg. New York. Sheldon, S. and W. W. Nichols. 1981. Comparison of the patterns of chromosomal late replication. 11 chick embryo lung and kidney in vivo and in vitro. Cytogenet Cell Genet. 29: 51 – 59. Shoffner, R. N.; A. Krishan; G. J. Haiden; R. K. Bammi and J. S. Otis. 1976. Avian chromosome methodology. Poultry Sci. 46: 333-344. Smith, J., C. K. Bradley and T. R. Paton. 2000. Differences in gene density on chicken macro- chromosome and micro- chromosome. Avian genet. 2: 96 – 103. األنباري و آخرون2009 ، 32 - 22 ( : 1 ) 1مجلة دٌالى للعلوم الزراعٌة ، 32 Study the karyotype for local and white Leghorn Chickens Eman H.AL-Anbari E. H. AL-Mashhadani E. K. Shubber Animal Resources Dep. Ministry of Science College of Agriculture & Technology Baghdad University ABSTRACT This study was conducted at the Dept. of Animal Resources, College of Agriculture. University of Baghdad and completed at the laboratories of dangerous material and environmental research at the ministry of science and technology during the period from 15/10/2004 to 30/9/2005 to investigate the karyotype features of the Local and White Leghorn chickens, because there is no such studies about this subject in Iraq before, so four birds from each of Local and White Leghorn chickens at sexual maturity which were vaccinated with staphylococcus aureus (S.aureas) antigene killed by formalin prepared for this purpose were employed for this study. By using lymphocyte leocus culture technique photographic karyotype pictures for Blast cell of female leghorn were obtained and pictures for chromosomes at Metaphase for local female were re-arranged according to their length from CH 1 to CH 8 including the Sex chromosomes CH 5.