<4D6963726F736F667420576F7264202D20D1DEE320363020CF2ED8C7E1C820C7CDE3CF20CCC7EDCF> جايد و آخرون 2011، 76 - 69 ) : 2( 3مجلة ديالى للعلوم الزراعية ، 69   . العرابية األغنامفي ) الترانسفيرين(الدم إلىالتشكل الوراثي لبروتين ناقل الحديد جعفر محمد عويد بشار فالح زغير منتهى يعقوب يوسف طالب احمد جايد . جامعة البصرة - كلية الزراعة - قسم الثروة الحيوانية* الخالصة حطة أبحاث الهارثة، آلية الزراعة، جامعة البصرة وبعض القطعان التجارية أجريت الدراسة في م ظاهرة التشكل الوراثي لبروتين ناقل الحديد إلى الدم نماذج من الدم ودرست أخذت. في المحافظة في دم األغنام العرابية باستخدام تقنية الترحيل الكهربائي العمودي بوجود مادة متعدد) الترانسفرين( على سالالت هذه أول دراسة تجرى. في محلول منظم متغير بوجود صبغة االميدو السوداء يآلمايداالآر أي جين بروتين توزيع هذا الجين لدراسةفي هذه الدراسة احيوان 119تم استخدام . في العراقاألغنام لتشكل الوراثي في أشارت النتائج إلى وجود ظاهرة ا .في األغنام) Transferrin(ناقل الحديد إلى الدم ,BM, AM, ABتراآيب وراثية لهذا الجين وهي ثمانيةعن آل العينات المدروسة وبالتالي تم الكشف DD, MM, BB, AA وDM مسؤول عن هذه التراآيبوآان الطبقًا لحرآاتها في الوسط القاعدي و Bتفوق آل من األليل آان هناك اختالفات في تكرار الجين، إذ). Mو A ،B ،D(أليالت 4 الثمانية M )o.36 وo.31 ( على التوالي على األليلA )0.26 ( بينما آان األليلD أليال نادرا)وآذلك ). 0.07 آان الهدف من الدراسة هو استخدام .سجلت اختالفات بين األعداد المتوقعة والمالحظة للتراآيب الوراثية تعدد االآريآلمايد آطريقة سريعة وآفوءة وقليلة التكاليف تقنية الترحيل الكهربائي العمودي بوجود مادة م في تشخيص همكن استخدامالذي ي. لكشف االختالفات الوراثية لجين الترانسفرين في دم األغنام العرابية .نسل األغنام المقدمة في ) نباتيةحيوانية و ، خاليا إنسانية(تعرف الهجرة الكهربائية بأنها هجرة جزيئات البروتينات المختلفة تطورت طرق الفصل المستخدمة في . الحقل الكهربائي عند تعرض البروتين لتيار آهربائي معين مجاالت آيمياء البروتين واستخدمت أجهزة ترحيل آهربائي مثل جهاز الترحيل الكهربائي العمودي Two Dimension(ابتكار أجهزة ثنائية البعد اها جهاز الترحيل األفقي ثم أعقبهوتال Electrophoresis( و جهاز الترحيل الكهربائي بمستويات مختلفة من األس الهيدروجيني)Iso Electric Focusing-IEF ( وتاله جهاز دقيق جدًا يسمى الترحيل الكهربائي الشعيري)Capillary electrophoresis( إلى أن توجت هذه األجهزة المبتكرة بجهاز البصمة الوراثية(Polymerase Chain Reaction - PCR، إذ استخدمت بعض المرآبات الكيماوية مثل مادتي النشا)Starch ( و لتقوم مقام الوسط الذي يتم فيه فصل ) Agarose(واألآاروز ) Polyacrylamide(متعدد االآريآلمايد لتقنية في انجاز صار باإلمكان االستفادة من هذه او. ئيةيالمرآبات البروتينية اعتمادا على أو زانها الجز ، وأعقبها )PCR( عبر تقنية التفاعل السلسلي للبوليمريز) DNA(تشخيص الحامض النووي الوراثي DNA(المكونة للحامض النووي الوراثي اآتشاف الطرق الخاصة بتثبيت تتابع النيوآليوتيدات Sequences .( ــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــ . 2011/ 3/ 1تاريخ استالم البحث . 2011/ 4/ 27تاريخ قبول النشر جايد و آخرون 2011، 76 - 69 ) : 2( 3مجلة ديالى للعلوم الزراعية ، 70   استخدمت بروتينـات الـدم بشكل واسـع لتوصيف عشائر سالالت الحيوانات الن معظـم هذه البروتينات تتشكل وراثيًا وتتبع قوانين الوراثة البسيطة لذلك درست هذه البروتينات لعدد من أنواع باستخدام تقنيات مختلفة وآانت معظم هذه الدراسات قيمة وخاصة فيما يتعلق بالوراثة، وراثة الحيوانات ) Goswami ،1991و (Balakrishnan العشائر، التشخيص السريري والخرائط الجينية هو آاليكوبروتين يرتبط مع ذرتين من الحديديك لكل جزيئة ترانسفرين وهو يعمل آحامل الترانسفرين آذلك هناك عدة مسميات لبروتين . مل 100/ملغم 280- 240سجين، وترآيزه في البالزما الطبيعية لألوآ وجود البروتين مثًال إذا وجد في الدم يسمى الترانسفرين أصلالترانسفرين وتعتمد هذه التسميات على )Evan (في حين يسمى أوفوترانسفرين ). 1956، وآخرونOvotransferrin-OTF (في الطيور وفي الحليب يسمى ) Williams ،1968(في بروتين بياض البيض % 12ويشكل هذا البروتين حوالي . )1987، وآخرون Baker(الحديد أيوناتوله دور آبير في نقل ) Lactoferrin-LTF(الآتوفيرين ). Richardson ،2000(في أنسجة اإلنسان Melanotrans ferrin-MTFويسمى ميالنو ترانسفرين التراآيب الوراثية المختلفة لبروتين اأول من اآتشف) Salisbury )1959و Smithiesن آا يتميز هذا البروتين (Electrophoresis)الترانسفرين في األغنام باستخدام طريقة الترحيل الكهربائي فقط لينأليوجدوا إذ )0198( وآخرين Robertsباحتوائه على مجموعة آبيرة من االليالت بدأت بدراسة أغنام الرومني في أليالتأربع وخمس ) (1984( وآخرين Weimer اسةمرورا بدر Eو Dوهما ) ستة أليالت في المرينو البولندي) (2007( وآخرين Steppa، دراسة )مارش والكورديل على التوالي ع الحيوي ونتيجة إلى هذا التنو. وجد تسعة أليالت في األغنام) Ashton )1958وأخيرا وفي دراسة وا يدرسون عالقة هذه االليالت مع بعض ؤالكبير في اليالته، انتهز آثير من الباحثين هذه الميزة وبد ، Konukو Rahman(الصفات االقتصادية في األغنام ومنها الوزن عند الميالد والزيادة الوزنية ، إنتاج الحليب )Dellal ،2001(الصوف إنتاج، )Dellal ،2002 ؛Yur ،1999و Bildik ؛1977 Steppa ؛1984، وآخرون Weimer(، األداء التناسلي )Bilgen ،2004و Yuce(في الماعز من اهذه المجموعة الكبيرة من األبحاث والدراسات على الترانسفرين، دفعت آثير). 2007، وآخرون ن ومن هذه الدول الدول وخاصة دول الجوار العراقي بالسعي الحثيث في آشف بعض مزايا هذا البروتي ؛1993، وآخرون Bagci(وترآيا ) 2010، وآخرون Shahrbabak ؛1971، وآخرون Lay( إيران Elmaci ، 1998؛ Dellal ،2002؛ Kargin ؛2003، وآخرون Mert ،2003 .( ،اما في العراق .والحيوي همفتكاد تكون الدراسات معدومة في هذا المجال ولذلك قررنا الدخول في هذا الموضوع الم البحثالمواد وطرائق من الوريد الوداجي )مل لكل نموذج10(العرابية نموذج من دم األغنام 119تم الحصول على Jugular vein . وضعت نماذج الدم في أنابيب خالية من مادة الـ(EDTA) والخاصة بتحديد التراآيب مع إجراء AOACحسب PAGEريقة اجري الترحيل الكهربائي باستخدام ط .الوراثية للترانسفرين Vertical Electrophoresisبعض التحويرات عليها باستخدام جهاز الترحيل الكهربائي العمودي Separation(حضرت محاليل هالم الفصل . البريطانية Cleaver scientificالمجهز من قبل شرآة gel ( و هالم الترآيز)Staking gel (1آما هو موضح في الجدول لغرض فصل بروتينات الدم و . تحليل عينات الترحيل الكهربائي المصنع من Gel Documentationتم تحليل عينات الترحيل الكهربائي بجهاز توثيق البيانات من ) Software(ومزود ببرنامج تطبيقي 2009البريطانية سنة Cleaver Scientific Ltdشرآة . البريطانية جآامبردجامعة جايد و آخرون 2011، 76 - 69 ) : 2( 3مجلة ديالى للعلوم الزراعية ، 71   ). 8.9األس الهيدروجيني ( لترانسفرين دم األغنام العرابيظام الترحيل الكهربائي ن.1جدول ولحساب تكرار الجين. لحساب التراآيب الوراثية، استخدمت طريقة العد المباشر: التحليل اإلحصائي : استخدمت المعادلة التالية . األولتكرار االليل qحيث يمثل x1x1 =لالليل األول ية المتماثلةعدد التراآيب الوراث. x1x2 وx1x3 وx1xn = األولعدد التراآيب الوراثية غير المتماثلة لالليل. N =العدد الكلي للحيوانات قيد الدراسة . : لبيان اتزان العشيرة استخدمت المعادلة التالية .البيانات المتوقعةعدد Eالبيانات المالحظة بينما تمثل عدد Oحيث تمثل نتائج والمناقشةال ) الترانسفرين(أوضحت نتائج الدراسة وجود ظاهرة التشكل الوراثي لبروتين ناقل الحديد إلى الدم وهذه النتيجة متفقة . 2بشكل جلي من خالل وجود أآثر من ترآيب وراثي وآما موضح في الجدول رقم ين في آثير من حيوانات المزرعة مع آثير من البحوث الذين أشاروا إلى وجود التشكل الوراثي لهذا الج وفي ) Salisbury ،1959و Smithies(وحتى اإلنسان فقد وجدت ظاهرة التشكل الوراثي في األبقار جايد و آخرون 2011، 76 - 69 ) : 2( 3مجلة ديالى للعلوم الزراعية ، 72   و Smithies(وفي اإلنسان ) Elmaci ،1998(وفي الماعز) 1980، وآخرون Tan(الجاموس Hiller ،1959 ( مثل األرانب وآثير من الحيوانات المختبرية)Zaragoza فهذا ). 1990، وآخرون البروتين ينفرد بصورة واضحة عن غيره بوجود مجموعة آبيرة من االليالت وفرتها له القابلية الوراثية أليالت لهذا 9هذا القدر الكبير من االليالت، فتشير البحوث إلى وجود حداث الطفرة وبالتالي امتالآه لفي إ . ترآيب وراثي 45ود وبالتالي نتوقع وج) Ashton ،1958(الجين فنالحظ من هم بروتينات المصل في دم األغنام،صور توضيحية حول أ 3- 1رقم اإلشكالعطي ت األعلى وجود بروتين األلبومين والذي يعتبر البروتين األآبر من حيث الكمية في دم األغنام ويالحظ في ية لكون طريقة العمل مخصصة لجين بعض العينات وجود تشكل وراثي بسيط إال انه ال يرتقي إلى المثال يلي بروتين األلبومين بروتين الترانسفرين والذي يكون في الوسط انسجامًا مع محتواه من . الترانسفرين األحماض االمينية المتعادلة وفيه نالحظ وجود أآثر من ترآيب وراثي اعتمادًا على وجود حزمة واحدة إذ ة أو منخفضة في وسط الهالم وهكذا،زم إذ آانت مرتفعأو حزمتين لكل عينة وآذلك توزيع هذه الح أشارت البحوث إلى وجود الترآيب الوراثي الهجين من خالل وجود حزمتين ووجود ترآيب وراثي في آثير من الدراسات نتائج دراستنا تتفق مع). Ashton ،1958(متماثل من خالل وجود حزمة واحدة آيب وراثية غير متماثلة حزمة واحدة وترا- التراآيب الوراثية المتماثلة هذا االتجاه، إذ تم إيجاد آثير من ).2007، وآخرون Steppa ؛1984، وآخرون Weimer ؛0198، وآخرون Roberts(حزمتين – بطريقة الهجرة الكهربائية ) متعدد االآريآلمايد(نواتج التحلل البروتيني على هالم الفصل .1شكل . رين في دم األغنام العرابيةلبروتين الترانسف ,BM, AM, AB, DD, MM BBتم الكشف عن ثمانية تراآيب وراثية لهذا البروتين وهي AA وDM 4 الثمانيةمسؤول عن هذه التراآيب الوراثية ،طبقًا لحرآتها الكهربائية في الوسط القاعدي وحسب قوانين مندل (Co dominants)تتبع في توارثها السيادة المشترآة ) Mو A ،B ،D( أليالت ) MMو AA ،BB ،DD( أربعةآان عدد التراآيب الوراثية المتماثلة ). Jaayid ،2003(في الوراثة حيث .)2الجدول ) (DMو AB ،AM ،BM( أربعةآما آانت أعداد التراآيب الوراثية غير المتماثلة التراآيب الوراثية بأعدادمقارنة %) 68.07(يبين الجدول زيادة أعداد التراآيب الوراثية غير المتماثلة وهذه النتيجة تؤآد غياب االنتخاب والتزاوج المسيطر عليه وبالتالي وجود نسبة %) 31.93(المتماثلة آثير من الدراسات حيث وجدت هذه تتفق نتائج دراستنا مع .التراآيب الوراثية المتماثلة بنسب قليلة وفي آثير من ) 1993 وآخرون ؛ Bagci ؛1986، وآخرون Soysal(الترآية األغناماالليالت في على التوالي ) o.31و o.36( Mو Bتفوق آل من األليل ).Ashton ،1958(سالالت األغنام األوربية وجماعته Soysalتتفق هذه النتيجة مع ). 0.07(أليال نادرا Dبينما آان األليل ) A )0.26على االليل األلبومين ما بعد االلبومين الترانسـفريــن   جايد و آخرون 2011، 76 - 69 ) : 2( 3مجلة ديالى للعلوم الزراعية ، 73   األغنامالترآية وهذا دليل على التقارب الوراثي بين األغنامحصلوا على نتائج متقاربة على إذ ،)1986( .العراقية والترآية 1 2 3 4 5 6 7 8 بطريقة الهجرة الكهربائية في دم ) متعدد االآريآلمايد (بروتين الترانسفرين على هالم الفصل .2شكل .األغنام العرابية . األغنام العرابيةتوزيع التراآيب الوراثية لبروتين الترانسفرين في .2جدول جايد و آخرون 2011، 76 - 69 ) : 2( 3مجلة ديالى للعلوم الزراعية ، 74   1 2 3 4 5 6 7 8 د(الترانسفرين على هالم الفصل بعض التراآيب الوراثية لجين .3شكل بطريقة ) متعدد االآريآلماي .الهجرة الكهربائية في دم األغنام العرابية أسوةالعرابية قد تشكل وراثيا األغنامتقدم يمكن االستنتاج بان جين ترانسفرين من خالل ما :االستنتاج األغناممن ساللة في عدد التراآيب الوراثية على بعض سالالت أآثرالعالمية وتفوق على األغنامببقية االنتخاب الكبيرة في عدد االليالت في عملياتالعالمية وبالتالي يمكن االستفادة من هذه الفسيفسائية والتحسين للحيوانات المحلية ومحاولة فك رموز أسباب التشابه واالختالف بين حيواناتنا المحلية نفسها . وبينها وبين الحيوانات األجنبية وخاصة القريبة من الرقعة الجغرافية للقطر العراقي المصادر Ashton, G.C. 1958 . Further G-globulin phenotypes in sheep. Nature, Lond. 182, 1101-1102. Bagcı, C., Sulu, N. and B. Emre . 1993. The types of haemoglobin and transferrin in Akkaraman X German Black Headed Mutton crosses. A. U. Vet. Fak. Derg., 40: 535-512. Baker, E.N., S.V. Rumball and B.F. Anderson .1987. Transferrin in sighs into structure and function from studies lactoferrin. Trends Biochem. Sci., 12: 350-353. Balakrishnan, C.R. and S. L. Goswami. 1991. Biochemical polymorphism in river buffalo in: Tulloh, N.M(Ed), Buffalo and Goats in Asia, genetic diversity and its application proceeding of a warkshop, Kualo lumepur, Malaysia, 10-14 February. Aciarl proceedings No. Bildik, A. and F. Yur . 1999. Investigation of Relationship Between Transferrin and Birth Weight and Live Weight Gain in Lambs. Tr. J. of Veterinary and Animal Sciences, 23: 43-48. Dellal, G. 2001. The Relationships Between Transferrin (Tf) Types and Some Wool Characteristics in Akkaraman and Anatolian Merino Ewes. Turk J. Vet. Anim. Sci., 25: 135-138. Dellal., G. 2002. Effects of Environmental and Hereditary Factors on Lamb Production Traits in White Karaman and Anatolian Merino Ewes. Turk J. Vet. Anim. Sci., 26: 581-586.   جايد و آخرون 2011، 76 - 69 ) : 2( 3مجلة ديالى للعلوم الزراعية ، 75   Elmaci, C. 1998. Transferrin (Beta-Globulin) Polymorphism in Angora Goat. Tr. J. of Veterinary and Animal Sciences, 22: 321–323. Evan, J.V., J.W. King , H. Harris F.L. and Warren . 1956. Genetic of hemoglobin and blood potassium differences in sheep. Nature. 178: 849-850. Jaayid, T.A. 2003. The study of the milk proteins and its influence on the lambs in Precos and Romanov ovine breeds. PhD. Thesis. Kazan State Academy of Veterinary Medicine, Russia. Kargin, F., A. Bulduk and K. Seyrek . 2003. Haemoglobin and Transferrin Types in Ine Type Sheep, Turk J Vet Anim Sci., 27 1451-1455 Lay, D.M., F. Charles and Z. Nadler.1971. The transferrins and hemoglobins of wild Iranian sheep (ovis linnaeus). comp. biochem. physiol., vol. 40b, pp. 521 – 529. Mert, N. 2003. Correlation between Biochemical Parameters and Production Traits in Merino Cross Sheep. II- Hemoglobin and Transferrin Types. Turk J Vet Anim Sci., 27: 575-581. Rahman, M.F. and T. Konuk . 1977. A note on transferrin genotypes and their relationship with weight gain in sheep. Animal Production. 25: 99-101. Richardson, D.R. 2000. The role of the mcnibrane-douno luniour antigen melanotransferrin (p97) in iron uptake by the human maligna melanoma cell. Eur. J. Biouchem., 267:1290-1298. Roberts, P.R., D.J. Nash and R.E. Keiss . 1980. Transferrin polymorphism in bighorn sheep, Ovis canadensis, in Colorado. Western North American Naturalist. 2. Shahrbabak, H., A. H. Farahani , M. Shahrbabak and H. Yeganeh . 2010. Genetic variations between indigenous fat-tailed sheep populations African Journal of Biotechnology. 9: 5993-5996. Smithies, D.C. and H. Hiller . 1959 The genetic control of transferrins in humans Biochem. J., 72:121-125. Smithies, D.C. and G.W. Salisbury . 1959. Distribution and inherited variations in the serum proteins of cattle. Genetics. 43: 374-385. Soysal, M.I., K. Tanaka and S. Suzuk . 1986. Hemoglobin and transferring polymorphisms in some Turkish Native Sheep and their several crosses. Proc. Japan Acad., 62: 10. Steppa, R., P. Losarz , A. Strojna and M. Stanisz .2007. Transferrin genotypes as genetic markers of lifetime prolificacy of ewes in a flock of prolific sheep. ANNALES Universities Mariae curie – Skłodowskalublin Polonia. 25: 55-62. جايد و آخرون 2011، 76 - 69 ) : 2( 3مجلة ديالى للعلوم الزراعية ، 76   Tan, S.K. , S.G. Tan , Y.Y. Gan, and M.R. Jainudeen . 1980. Biochemical Polymorphisms in the Malaysian Water Buffaloes. Pertanika, 3: 103- 112. Weimer, T.A., M. Helena , P. Franco and C.F. Moraes. 1984. Hemoglobin and transferrin types in Corriedale and Romney-Marsh sheep in Brazil. Rev. Brazil Genet. 2: 287-297. Williams, J. 1968. Comparison of glycopeptides from the ovotransferrin and serum transferrin of the hen. Biochem. J., 108: 57-67. Yuce, H. and G. Bilgen . 2004. Relationships between blood proteins polymorphism and some milk yield traits in Bornova goats. Hayvansal Uretim 45: 28-32. Zaragoza, P., A. Arana , C. Rodellar , I. Zarazaga and B. Amorena .1990. Blood biochemical polymorphisms in rabbits II. Genetic variation and distance among populations of Spanish wild rabbits and relationships with other rabbit populations. Options Mediterranean’s – Series Seminaries. 8: 53-56. GENETIC POLYMORPHISM OF TRANSFERRIN IN ARABI SHEEP BREED . T.A. Jaayid M.Y. Yousief B.F. Zaqeer J.M. Owaid * Animal Production Department - College of Agriculture - Basrah University. ABSTRACT This study was carried out at the Animal Farm, Hartha Research Station, College of Agriculture, Basrah University and several farms in Basrah Provence. Polymorphism of transferrin biochemical system was examined in the blood of Arabi sheep breed using vertical polyacrylamide gel electrophoresis (PAGE) in discontinuous buffer system and staining (Amido Black). This is the first study on transferrin on sheep breeds in Iraq. Totally 119 blood samples were analyzed. Transferrin loci were found to be polymorphic among all analyzed samples. Eight transferrin variants have been found in Arabi sheep breed sera which are designated AA, BB, DD, MM, AB, AM, BM and DM in order of decreasing mobility caused by four alleles of that locus (A, B, D and M). Sheep populations were studied which differed in gene frequencies. The superiority of allele B and M (o.36 and o.31), respectively on the allele A (0.26) while the D allele was rare allele (0.07). Differences between expected and observed number of transferrin genotypes were significant. The aim of this study was to use the PAGE as a fast, efficient and low cost method to detect the genetic variants of transferrin gene in Arabi sheep breed. The polymorphism of sheep transferrins can be used for the identification of offspring.