<4D6963726F736F667420576F7264202D20D1DEE320363120D3E6D3E420E3D5D8DDEC> عبد الرحمن 2011، 136 - 127) : 2( 3مجلة ديالى للعلوم الزراعية ، 127 . مخثر للحليب من بذور العصفر وتوصيفه جزئياً إنزيم تخالصاس سوسن مصطفى عبد الرحمن . جامعة بغداد –كلية الزراعة - األغذيةقسم علوم خالصةال ،وتنقيتـه العصـفر من كسبة بذور بعد استخالصه مخثر للحليب ألنزيمتوصيف جزئي اجري ومحلـول % 5تمثلت في كلوريد الصوديوم محاليل الدارئةمن ال أنواع أربعة باستعمال األنزيماستخلص % 6و 3وذات المحلول الدارئ الحاوي على = pH 6موالر و 0.05فوسفات الصوديوم الدارئ بتركيز كلوريـد % 3منظم الفوسفات الدارئ الحاوي على محلول استخالص هو أفضلكان و ، كلوريد الصوديوم ـ % 60 إشـباع بواسطة كبريتات االمونيوم بنسبة سيبهبتر جزئيا األنزيمنقي . الصوديوم فعاليـة اَمحقق فعاليـة أقصـى إن إلـى المنقى جزئياً األنزيم نتائج توصيف أشارت. ملغم /وحدة 9.33قدرهانوعية . م7º تـه التخثريـة فعاليلة المثلى يدرجة الحراروبلغت ال. 6 = الهيدروجيني أألس كانت عند تخثرية له ـ الفعالية في زيادة ملي موالر 10- 100من بتراكيز تراوحت كلوريد الكالسيوم ةإضاف أظهرت ة التخثري ، β– mercaptoethanol مثـل تظهر المركبات ولم باالنخفاض أخذت وبعدها ، موالر يمل70 ولغاية Iodo acetic acid ،EDTA يةالتخثر األنزيممثبطاً في فعالية تأثيرا األنزيمعند حضنها مع. المقدمة تصنع معظم االجبان المنتجة حول العالم تقليدياً باستخدام مستخلص انزيمي مخثر من معدة العجول وهي مزيج من االنزيمات الطبيعية او المنفحة الحيوانية ،) ( Calf rennetوهذا المستخلص يعرف ب . محللين هما الكايموسين أنزيمينمن أساسا تتألفوالتي . الثدييات لهضم حليب االمهات ةالمنتجة في معد Chymosin EC 3.4.23.4) ( والببسـين األساسـي المكون)Bovin Pepsin 3.4.23.1 EC ( Guinee ) و Wilkinson،Wilkipedia ; 1992 (. آلصرةخثر الحليب بواسطة التحليل المتخصص ت الدور الرئيسي للكايموسين في صناعة الجبن هو Phe - Met ، عمله الوقائي في حماية الجسيمة الكازينية ويجعلهـا غيـر األخيريفقد إذللكاباكازين Tenz ؛2000 ، وآخـرون Fox(الخثرة بعـد ذلـك وإنتاجمستقرة ويسبب في النهاية حدوث التكتل ـ اإلنتاجزيادة ) . 2008، وآخرون ة الحيوانيـة العالمي من االجبان واستهالكه مع زيـادة سـعر المنفح مـن أودينية السيما عندما يكون مصدرها الخنزير ألسبابتجهيزها ، فضال عن الحظر عليها وانخفاض والسـموم Nنتيجة للمحاذير الصحية في حاالت انتشار مرض جنون البقـر، فيـروس أوقبل النباتيين Mohamed ؛ 1990 ، نوآخـرو Dahot (قادت جميعها للبحث عن بدائل مناسبة أسبابالميكروبية ، إالنباتية كانت مستخدمة قبل عصرنا بقـرون ، مخثرات بديلة من مصادر أنومع ) . 2009، وآخرون اسـتخدمت .بشـكل ملحـوظ اإلنتـاج اسـتعمالها فـي برز 1960االهتمام بها قد تجدد فمنذ عام أن خاصة مـن االجبـان، أنواعع المستخلصات من الفواكه والنباتات منذ مدة طويلة كمخثرات للحليب ولصن . papaya المستخلص من البابايا ) papin(البابين وأنزيم Cynara هذه النباتات جنس وأمثلة ـــــــــــــــ . 2011/ 3/ 2تاريخ استالم البحث . 2011/ 4/ 14تاريخ قبول النشر عبد الرحمن 2011، 136 - 127) : 2( 3مجلة ديالى للعلوم الزراعية ، 128 استخدامه وإمكانية بذور العصفر هدف البحث الحالي هو استخالص انزيم مخثر للحليب من كسبة إن يتميز العصفر بكونه من المحاصيل الزيتية إذ .كمصدر بديل لالنزيمات المخثرة وتحديد بعض خواصه وتعد كسبة 1972عام العراق وقد بوشر بزراعته في يةالعراق وي للبيئةشتال الموسم القليلة التي تالئم .الزيت إنتاجبذور العصفر كناتج عرضي في البحثلمواد وطرائق ا األنزيم مصدر ، حصل عليها من قسم المحاصيل الحقلية في كلية Gilaاستخدمت بذور العصفر الجافة من صنف جيال بعد تنظيفها من الشوائب والبذور التالفة ، جرشت البذور وطحنت باستخدام مطحنة يدوية وتم و. الزراعة استعملت الكسبة المزال زيتها كمصدر ساعة ، 12 لمدة نمع الهكسا جهاز السوكسليتباستخالص الزيت . لالنزيم المخثر االستخالص مل من احد محاليل االستخالص 100+ غم بذور 1.5كسبة بذور العصفر بنسبة من األنزيم استخلص التالية .كلوريد الصوديوم % 5 محلول ملحي بنسبة -1 . pH 6 –موالري 0.05بتركيز الدارئوسفات الصوديوم محلول ف2- . NaCl% 3 + المحلول الدارىء نفسه -3 .NaCl% 6 + المحلول الدارىء نفسه -4 رشح الخليط على قماش ململ مع ساعة مع التحريك بين فترة واخرى ، 24اجري االستخالص لمدة يقة للتخلص دق 20د لمدة / د 10000العصر ثم فصل المستخلص الخام بالطرد المركزي المبرد بسرعة . وقدر تركيز البروتين حسبت الفعالية التخثرية لراشح المستخلص الخام . من الراسب قياس الفعالية التخثرية مل من 1 بإضافةوذلك ) Mukai )1970 و Kawai قدرت فعالية االنزيم المخثرة للحليب وفقاً لطريقة ح والحاوي على كلوريد /و% 10 بة مل من محلول حليب فرز بنس10 إلى األنزيميالمستخلص حضن في حمام مائي وبعد المزج كمادة خاضعة ، 6.4موالر وبرقم هبدروجيني 0.01لسيوم بتركيز الكا من خالل سجل وقت التخثر بالثواني وذلك مع استمرار تحريكه بصورة دائرية هادئة ، ْم 37بدرجة ت وحدة الفعالية التخثرية بانها كمية االنزيم التي تخثر عرف. األنبوبةجدار على قطع من الخثرة مشاهدة . ْم 35دقيقة بدرجة 40الخاضعة خالل المادةمل من 10 ) .1951(واخرون Loweryقدر تركيز البروتين حسب طريقة : ياس تركيز البروتينق لالنزيمتنقية الجزئية ال لترسيب االنزيم المخثر، ترك لليوم % 60بة اضيف ملح كبريتات االمونيوم لراشح لمستخلص الخام بنس 20د لمدة / د 10000جمع الراسب الناتج بعد عملية الطرد المركزي بسرعة . مْ 4التالي بدرجة حرارة األمالحمنه أزيلتثم 6 موالر واس هيدروجيني0.05 في منظم الفوسفات الدارئ بتركيز وأذيبدقيقة .نفسهتبديالت من المحلول المنظم 3ساعة تجاه 24بالديلزة لمدة عبد الرحمن 2011، 136 - 127) : 2( 3مجلة ديالى للعلوم الزراعية ، 129 النزيم ل الجزئي توصيفال : التخثرية االس الهيدروجيني االمثل لفعالية االنزيم -1 .4.5 - 8 بمدى صر وقت للتخثرقحدد االس الهيدروجيني االمثل لتخثر الحليب بمالحظة ا :درجة الحرارة المثلى لفعالية االنزيم التخثرية -2 .مْ 40-90درجات الحرارة تراوح بين من الفعالية االنزيمية في مدىقدرت :التركيز االمثل من كلوريد الكالسيوم - 3 قدرت الفعالية التخثرية لالنزيم بمالحظة زمن التخثر في محلول الحليب الفرزالمحتـوي علـى تراكيـز . ملي موالر 10 - 100 مابين CaCl2 متدرجة من :بطات في فعالية االنزيم التخثرية تاثير بعض المث - 4 :ملي موالر 10بتركيز اآلتيةحضرت المثبطات Iodo acetic acid , Ethylene diamine tetra acetic acid ( EDTA) , β- mercaptoethanol ثم قـدرت الفعاليـة ْم 37لمدة ساعة بدرجة حرارة األنزيمي ت مع حجوم متساوية من المحلولحضن . لمثبطةالمواد ا إضافةتمت بدون ف controlمعاملة السيطرة أمابقية ، المت النتائج والمناقشة االستخالص أنلوحظ محاليل مختلفة على استخالص انزيم مخثرللحليب من كسبة بذور العصفر ، تأثير 1شكليبين بلغت الفعالية إذاستخالص أفضل أعطى NaCl% 3 والحاوي على ئوسفات الصوديوم الدارفمحلول ) 5.69)(4.5)(2.12( أعطتالتي األخرىبالمقارنة مع المحاليل لغمم /وحدة 657.النوعية التخثرية على ملغم لمحلول كلوريد الصوديوم ومحلول فوسفات الصوديوم الدارئ وذات المحلول الحاوي / وحدة 6% NaCl لوريد الصوديوم مما يساعد وقد يرجع ذلك الحتواء هذا المحلول على ملح ك. على التوالي النباتية حيث تحل ايونات الصوديوم والكلوريد محل االنزيم المرتبط األنسجةمن األنزيمفك ارتباط على كلوريد الصوديوم يزيد القوة االيونية لمحلول أنكما ل استخالصه ،باواصر ايونية وبالتالي تسه ؛ 2010، وآخرون Guiama ( هقدر من أقصى حرراالستخالص وبالتالي يحسن ذائبية االنزيم وي Guiama زيادة في تركيز البروتين تعلى من الملح حصلأوعند استخدام تركيز ). 2010، وآخرون بروتينات اخرى ليس لها فعالية تخثرية وخاصة البروتينات الكروية ، ومن ثم انخفاض نتيجة الستخالص ). 1992، وآخرونالمزين (في الفعالية النوعية التخثرية عبد الرحمن 2011، 136 - 127) : 2( 3مجلة ديالى للعلوم الزراعية ، 130 0 1 2 3 4 5 6 7 8 1 2 3 4 ترآيز البروتين ملغم / مل الفعالية وحدة / مل الفعالية النوعية التخثرية وحدة / ملغم والفعالية النوعية لتخثرية الفعالية فيمختلفة استخالصتأثير محاليل . 1 شكل .بذور العصفر لكسبة للمستخلص الخام يم وصـفاته منها وخـواص االنـز ةتتباين محاليل االستخالص المستخدمة حسب طبيعة المادة المستخلص الهيدروجيني والقوة االيونية لمحلول االستخالص ، فعند استخالص وتتحدد كفاءتها بعدة عوامل منها االس ـ مختلفة من المحاليل الدارئة أنواعاستعمال ب Solanun dubium انزيم مخثر للحليب من بذور أند وج ) .2009 ،وآخرون pH 5 )Ahmed يفي منظم الخالت ذ NaCl% 5كان محلول أكفأ لألنزيمالتنقية الجزئية واسعة االنتشار في تنقيـة االنزيمـات، أولىكخطوة كبريتات االمونيوم باستخدامالبروتينات ترسيب عدي ،وآخرونDuarte (بعض الملوثات إزالةفي أيضا تفيدلكونها اقتصادية وسهلة فهي إضافةوهذه الطريقة األنـزيم أنلوحظ إذ بذور العصفر لكسبة لمستخلص الخامل الجزئية نتائج التنقية 1 يبين جدول ) .2009 ملغم ، /وحدة 9.33 له تخثريةالنوعية الفعالية كانت ال% 60كبريتات االمونيوم بنسبة اشباع ب بعد ترسيبه . 2.73وعدد مرات تنقية % 46.2بحصيلة .التنقية الجزئية لمستخلص بذور كسبة العصفر .1جدول خطوات نقيةالت الحجم )مل( الفعالية التخثرية / وحدة ( )مل تركيز البروتين )مل/ملغم( الفعالية النوعية التخثرية )ملغم/وحدة( الفعالية الكلية )وحدة( عدد مرات التنقية الحصيلة (%) المستخلص 100 1 428.4 3.42 1.39 4.76 90 الخام الترسيب بكبريتات االمونيوم 23 8.6 0.92 9.33 197.8 2.73 46.2 لثمار البابايا ان الترسيب الملحي للمستخلص الخام من )2009( وآخرون Duarte مماثل لما ذكرهوهذا ، وآخرون Asakuraكما وجد . اعطى افضل فعالية مخثرة للحليب% 60 إلى40 إشباعبنسبة البري 5 % NaCl الفوسفات دارئ 3 +الفوسفات دارئ % NaCl + الفوسفات دارئ 6 % NaCl عبد الرحمن 2011، 136 - 127) : 2( 3مجلة ديالى للعلوم الزراعية ، 131 ملغم بحصيلة / وحدة 95.7 ة بلغتالنوعي من بذور الرز ان فعاليته oryzasin أنزيمعند تنقية (1997) .% 60عند نسبة اشباع % 27.8 نزيم ألتوصيف ا الثخثرية مثل لفعالية االنزيمألس الهيدروجيني األا على مدى قيم اس هيدروجيني مختلفة ، ويبدو من النتائج زيـادة الفعالية االنزيمية 2يوضح شكل عنـده حيث سـجلت pH 6وحتى 4.5من pH يادة قيمة الالفعالية الثخثرية النزيم بذور العصفر مع ز خثرية تقع في المدى الحامضي مـن لتالفعالية ا أن أي بشكل تدريجي، فعالية ، ثم انخفضت بعدها أقصى . هيدروجينيالس الا .األس الهيدروجيني األمثل للفعالية التخثرية ألنزيم بذور العصفر . 2شكل المنقى مـن لألنزيمفعالية أقصى أنمن )2007( وآخرون Egitoلما وجده جاءت هذه النتيجة مطابقة نفس قيمـة ، وهي 6التخثرية لفعاليةلاالمثل دروجينييالهكانت عند االس Albizia julibrissinبذور )1999،وآخـرون السـلطان ( المنقى جزئياَ من ثمار نبات البابايا لألنزيمخثرية تللفعالية ال األمثل pH ال عند دراستهم لبروتييز حامضـي مخثـر ) 2006( وآخرون Senthilkumarومقاربة مع ماتوصل اليه . 5.5 له األمثل pH ـاذ كان ال Streblus asperللحليب شبيه بالرنين منقى من اغصان ن تكون ذات تركيب اكثر كثافة واكثر ترابط م) pH )6 ،6.3اشارت البحوث ان الخثرة المتكونة في قيم ). 2007،وآخرونEl-Bendary (في قيم اعلى باستعمال المخثرات النباتية والكايموسين الخثرة المتكونة الهيدروجيني الحامضي ضروري في تكوين الشبكة التخثرية بين كازينات الحليب وايونات األسوان 2+Ca قبل االنزيم المخثر الموجودة في الحليب المشجعة لحدوث التخثر بعد حالة تحلل جسيمة الكازين من . )Sonnet ، 1989و Whitaker( تكوين الشبكة التخثرية عدم إلى pH ـارتفاع ال في حين يؤدي درجة الحرارة المثلى لفعالية االنزيم الثخثرية درجة الحرارة في فعالية انزيم بذور العصفر ، والمالحظ زيادة الفعالية التخثرية تأثير 3يظهر شكل مل عند درجة / وحدة 282.4ارتفاع درجة الحرارة ، حيث بلغت اعلى قيمة لها ية مع صورة طردب في الحرارة له تاثيرايجابي اذ يمنح جزيئات وتعليل ذلك ان االرتفاع. ْم ثم انخفضت بعدها 75حرارة دة معدل التفاعل تكرار التصادم بينهما وبالنتيجة زيا فرص االنزيم والحليب زيادة في الطاقة وبالتالي تزداد اما درجات الحرارة االعلى فستحطم االواصر الهيدروجينية وااليونية التي تعطي االنزيم تركيبه الفعال . عبد الرحمن 2011، 136 - 127) : 2( 3مجلة ديالى للعلوم الزراعية ، 132 التفاعل وسيتوقف تاثير وبانهيار هذه االواصر يتغير شكل الموقع الفعال لالنزيم بحيث اليتوافق مع مادة ً تصنف ) . Parkin ،2006(االنزيم عليها ضمن المخثرة من مصادر نباتية األنزيماتوعموما وان لبروتييزات من تلك المالحظة في حالة منفحة العجول ، أعلىدرجات حرارة التي تتحمل األنزيمات الخرشوف أزهارالمخثر المعزول من لألنزيمفعالية أعلى أنالنباتات طبيعة محبة للحرارة، فوجد Nouani(ْم على التوالي 82و 80درجتي الحرارة عندوعصارة شجرة التين كانت ) شوكي األرضي( أغصانالمستخلص من األنزيم أن) 1983( وآخرون Hosonoكما الحظ ) . 2009، وآخرون Wrightiana calysina درجة أعلىْم ولغاية 70بدرجة حرارة من تخثرية فعالية أقصى أبدىقد فعالية لبروتييز أعلى أنتثناءات عن هذه القاعدة فذكر هناك بعض االس. ْم 90استخدمت بالدراسة وهي ْم ولذلك اقترح 37تكون عند درجة حرارة Withaniaاالسبارتيك النباتي المستخلص من مخثر وآخرون Naz(استخدامه في عمل االجبان المنضجة بحرارة معتدلة مثل جبن الموزاريال والشيدر ،2009 . ( .فعالية التخثرية ألنزيم بذور العصفر الحرارة المثلى لل. 3شكل التخثرية األنزيمكلوريد الكالسيوم على فعالية تأثير لوحظ إذ بذور العصفر أنزيمفعالية فيد الكالسيوم يكلور مختلفة من تراكيز إضافة تأثير إلى 4يشير شكل ثم أعالهاحيث بلغت ، موالر ملي70 إلى 10الكالسيوم من تركيز كلوريد بزيادة األنزيميةزيادة الفعالية موالر 0.5تركيز أن إلى) 2009( وآخرونNouani توصل. تناقصت الفعالية مع زيادة تركيز الملح يد منعدال وقد سلط.التين عصارة وأنزيمالخرشوف ألنزيم تخثرية فعالية أقصىيكون عنده CaCl2من إضافة أن إلى وأشارواللحليب األنزيميية التخثر ايونات الكالسيوم في عمل تأثيرباحثين الضوء على ال رتبط مع الباراكازين ت Ca+2وان ايونات ، لألنزيميوثر بشكل مباشر على الفعالية الحفزية الملح ال ). 2007، وآخرون El-Bendary(مشدودة خالل المرحلة الثانية من عملية التخثر لتكوين خثرة متماسكة عبد الرحمن 2011، 136 - 127) : 2( 3مجلة ديالى للعلوم الزراعية ، 133 .لوريد الكالسيوم المضاف على الفعالية التخثرية ألنزيم بذور العصفرتأثير تراكيز ك. 4شكل التخثرية في فعالية االنزيم المثبطاتبعض تأثير على نوع من خاللها التعرف و األنزيمة فعالي على تأثيرهاطبيعة اختبرت بعض المثبطات لمعرفة المثبطات عدم تاثر فعالية االنزيم باي من 2يبين جدول . المجاميع الفعالة الموجودة في الموقع الفعال مما يشيرالى عدم تاثره بالعوامل % EDTA 107.04 المدروسة فقد كانت الفعالية المتبقية بوجود كما ان عدم تاثره باحد المركبات الكاشفة ليس من االنزيمات المعدنية ،الكالبية ويستدل على انه بروتييز يصنف على انه ال األنزيم أن يدل على Iodo acetic acid وهو) SH( لمجموعة الثايول .β- mercaptoethanol بالمادة المختزلة تأثرهعدم فضال عن ،) Cysteine protease(السستين .بعض المثبطات على الفعالية التخثرية لبروتييز بذور العصفر تأثير . 2جدول controlنسبة الى %الفعالية المتبقية المثبطة المادة control 100 سيطرة Iodo acetic acid 103 Ethylenediamine tetra acetic acid 107.04 -mercaptoethanolβ 100 عبد الرحمن 2011، 136 - 127) : 2( 3مجلة ديالى للعلوم الزراعية ، 134 قد تكـون مـن صـنف زات المخثرة للحليب من اصناف مختلفةييالبروت أن ذات العالقة األبحاثذكرت Aspartic proteases ن بذور الرز، اغصـان مثل االنزيمات المنقاة مStreblus ومسـتخلص نبـات Withania بواسطة كلياَ األنزيم، اذ ثبط Pepstatin في الموقـع وجود حامض االسبارتيكمشيرا إلى ) . 2009، وآخرون Naz؛ 2006 ، وآخرون Senthilkumar؛ 1997، وآخرون Asakura(الفعال proteases Cysteineا البـري فصـنف مـن مجموعـة اما البروتييز المخثر للحليب من ثمار الباباي )Duarte االصـفر وهناك بروتييزات السيرين الموجودة في الفواكه كما في البطيخ ) 2009، وآخرون )Whitaker 1989، وآخرون ( المصادر استخالص وعزل بعض . . 1992 كلزاراسماعيل نعيمة احمد والجاف ، وسعيد ، قحطان احمد ،المزين 1(24) : 109-118 .:مجلة زراعة الرافدين . المعديةالماعز أنزيمات .سعدون محمد وياسين،فرعون احمد مكي عبد الجبار والدروش،عامر خلف عزيزورشيد، أحالمالسلطان ، مجلة العلوم. Carica papayaمخثر للحليب من نبات الباباظ أنزيماستخالص 1999. .479-486 :30(1)الزراعية العراقية Ahmed , I. A . M ., I . Morishima , E. F. Babyker and N. Mori. 2009. Characterization of partial purified milk-clotting enzyme from Solanum dubium Fresen seeds. Food Chemistry.116(2) :395-400. Asakura, T., H. Watanabe, K. Abe and S. Arai. 1997.Oryzasin as an Aspartic protease occurring in Rice seeds :Purification , characterization, and Application to milk clotting. J. Agri. Food Chem.45:1070-1075 Dahot, M.U., M.Y. Kham and A.N. Memon. 1990.Screning of some Pakistani Plants for milk clotting activity. J. Islamic Academy Sci .3(4) :284 – 286 . Duarte,A.R.,D.M.R.Duarte,K.A.Moreira.M.T.H.Cavalcanti,J.L.Lima-Fiho, and A.L.F Porto. 2009.Jacaratia corumbensis O. Kuntze a new Vegetable source for milk- cloting enzymes .Braz. A rch.Biol .Tech.52 (1) :1-3. Egito,A.S.,J.M.Girardet,L.E.Laguna,C.Porison,D.Molle,L.Miclo,G.Humbert and J.L. Gaillard. 2007 .Milk clotting activity extracted from sunflower and alibizia seeds and specific hydrolysis of bovine K-casine .Int .Dairy.J.17:816-825. EL-Bendary ,M.E. Moharam and T.H. Ali. 2007 .Purification and characterization of milk clotting Enzyme produced by Bacillus sphaericus .J.Appl.Sci.Res. 3(8):695-699. Fox, P.E., T.P. Guinee and T.M. Cogan .2000.Fundamentals of cheese science. Aspen publishers,Inc.,Gaithersburg Maryland. Guiama,V.D.,D.G.Libouga,E.Ngah,R.G.Beka,A.C.Ndi,B.Maloga,J.M.Bindzi, P.Donn and C.M.Mbofung. 2010 . Milk clotting potential of fruit extracts from Solanum esculentum ,Solanum macrocarpon L. and Solanum melongena. Afr.J.Biol.9(12):1797-1802. عبد الرحمن 2011، 136 - 127) : 2( 3مجلة ديالى للعلوم الزراعية ، 135 Guiama,V.D.,D.G. Libouga,E.Ngah and C.M. Mobofung. 2010.Milk clotting activity of berries extrcats from nine Solanum plants. Afr.J.Biol.9(25):3911-3918. Guinee,T.M.andM.G.Wilkinson.1992.Rennet coagulation and coagulants in cheese manufature.J.Soci.Dairy Tech.45:94-104 . Hosono,A.,H.Otani and F.Tokito. 1983 .Studies on milk- clotting enzyme from the "Litsusu" tree(Wrightiana calysina) evidence for milk coagulation.Japanes J.Zootechnical Sci.54(11):725-728. Kawai ,M .and N.Mukai . 1970 . Studies on milk clotting enzymes produced by Basidiomycetes . Part 1 . Screening tests of Basidiomycetes of milk clotting enzymes .Agric .Biol .Chem .34 (1) :159 – 166. Lo Piero,A.R. and G.Petrone. 1999 .Purification and Partial characterization of an ATP-hydrolyzing serine protease from lettuce leaves .Phytochemistry. 51:349-356 . Lowry,O.H.,N.J. Rosebrogh,A.L.Farr,and R.J.Randall. 1951 .Protein measurement with the folin phenol reagent .J.Biol.Chem .193:265 -554. Mohamed,A.,M.M.Talib,I.A.Abubabakar,Jideani and A.Hassan. 2009. Use of Jiben seeds Extract to manufacture soft white cheese. American J. Applied. Sci.6(4):551-554. Madden,D. 1995 .Food Biotechnology an Introduction .Examples of the use of Enzymes in food processing ,ILSI press Belgium . pp 26. NouaniA . ,E.Dako , A . Morsli ,N. Belhamiche , S . Belbrouet , M .M. Bellal,and. A.Dadie. 2009 . Characterization of the purified coagulant Extracts Derivied from Artichoke flowers (Cynara scolymus) and from the fig tree Latex (Ficus carica) in light of their use in the manufacture of Traditional cheeses in Algeria .J.Food Technol.7(1):20-29 . O'conner,C.B. 1993.Traditional cheese making Manual . International Livestock center for Africa.Addis Ababa ,Ethiopia.pp:58-61. Parkin,K.L. 1993.Environmental effects on enzyme activity .In :Enzymes in Food Processing (3eds.Nagodawithana,T.and Reed,G) Academic press Inc New York pp.273 . Senthilkumar , S. ,D.Ramasamy, and S.Subramanian .2006 .Isolation and Partial chracterisation of milk-clotting Aspartic protease from streblus. Asper.12(2):103-109. Temiz,H.,E.Okumus,U.Aykut,M.Dervisoglu and F. Yazici .2008.Partial purification of pepsin from turkey proventiculus. World .J.Micro.Biot.24:1851-1855. عبد الرحمن 2011، 136 - 127) : 2( 3مجلة ديالى للعلوم الزراعية ، 136 Whitaker, J.R. and P.E. Sonnet. 1989.Biocatalysis in Agricultural Biotechnology American chemical Society.DC.Washington.pp 384 . http://en-Wikipedia.org /org/wiki /Rrnne EXTRACTION OF MILK – CLOTTING ENZYME FROM Cartamus tinctorius SEEDS AND PARTIAL CHARACTERIZATION S.M. Abdul – Rahman Dept. of Food Tech.- College of Agric - Univ. of Baghdad . ABSTRACT The partial characterization and purification of milk clotting enzyme from defatted meal of safflower seeds was done . The enzyme was extracted using four different types of buffers ,the most efficient extraction solution was found to be 3% NaCl in phosphate buffer . The enzyme was partially purified by precipitation with ammonium sulphate at 60% saturation , giving specific milk clotting of 9.33 unit/mg . The study of some specifies of partially purified enzyme pointed out that the maximum milk clotting activity observed at pH value 6 . At determination the optimum temperature for activity the enzyme from safflower seeds exhibited the maximum coagulation activity at 75 C. Upon examining the effect of the addition of CaCl2 on coagulation activity at range of 10 – 100 mM ,the enzymatic activity increases as the concentration of CaCl2 increases ,and the high activity at a salt conc. of 70 mM ,after that the activity decrease . To know the effects of some inhibitors on activity like Iodo acetic acid , EDTA and β-mercaptoethanol ,the enzyme was incubated with these compounds , it was clear that they had no significant inhibitory effect on enzyme coagulation activity .