Agronomía Colombiana. 1987. Volumen IV: 19-22. Determinación de una Metodología a Nivel Citogenético Aplicada a Brugmansia Sangu/nea CECILIA ALVARADO DE CORAL 1, BERTHA COBA DE GUTIERREZ2 RESUMEN. Teniendo en cuenta diferentes factores ambientales tales como: Tempera- tura, humedad, hora, así como el tamaño de los meristemos radicales y botones florales se logró establecer una metodología a nivel citogenético aplicable, con pequeñas varia- ciones, a cualquier tipo de planta. Se obtu- vieron preparaciones de células en estado metafásico cuyos cromosomas presentaron una buena diferenciación permitiendo evi- denciar la posición del centrómero y así lograr un cariotipo e ideograma real en Brug- mansía sangu(nea. ABSTRACT. Working with Brugmansía san- guínea and .bearing in mind environmental factors such as: Temperature, humidity time and the size of radical meristemes and floral buas, a cytogenetical metodology was set up, usable with small varlations in any kind of plants in order to get clear cut metafasic stages with well differentiated chromosomes where centromeres are easily located making easier to elaborate caryotypen and ideograms. INTRODUCCION Brugmansía sanguínea es un arbusto que al- canza una altura hasta 3,50 metros muy ra- mificado desde la base. Se reproduce vegeta- ti va mente formando clones, de inflores- cencia monocacial, con flores péndulas, abiertas durante el día con antesis de cua- tro a seis días. Cález en forma de espátula rodeando la parte basal de la corola, que puede faltar o estar completo o formando una estructura persistente, como una cáscara 1 Profesor Asistente. Bacteriología y Ciencias Naturales· Facultad de Ciencias - Depto. de Biolo- gía, Universidad Nacional. 2 Bacteriótopa - Facultad de Ciencias - Depto. de Biología, Universidad Nacional. alrededor del fruto maduro. Este es péndulo largo nacido sobre pedicelos elongados, bi- carpelado y bilocular debido a la carencia de un septo, indehiscente con pericarpio liso y desprotegido. Semillas grandes cubiertas por una envoltura seca y gruesa desprovistas de carúncula, (Lockwood, 1971). Es una planta de importancia farmacológica en la prepara- ción de sustancias medicinales psicotrópicas. Mediante el estudio cariológico de un or- ganismo se logra determinar el número, ta- maño y morfología de los cromosomas. En células animales los cromosomas en estado metafásico son grandes y no presentan difi- cultades de manejo con las técnicas usuales de tinción; en cambio en plantas que tienen cromosomas pequeños, se hace más difícil la obtención de buenas preparaciones para con- teo y elaboración de cariotipos (Nai Chaw y Sun Sadanaga, 1986). La presencia de pared celular es otro obstáculo que limita la obten- ción de células con cromosomas lo suficien- temente separados, que permitan un conteo fácil e identificación de la morfología de los pares de cromosomas para elaborar el carioti- po (Murata, 1983). En el presente trabajo se desarrolló una metodología mediante la cual se obtuvieron preparaciones con células en meta fase cuyos cromosomas muestran la posición de los centrómeros, forma y longitud de cromáti- des para poderlos distinguir y diferenciar morfológicamente. Se tuvo en cuenta los diferentes factores meteorológicos de con- trol del medio ambiente: Temperatura, hu- medad y hora. Además del tamaño de los meristemos radicales y botones florales. MATERIA ....ES y METODOS El material de Brugmansía sanguínea fue re- colectado. en los jardines del Instituto de 19 Ciencias Naturales de la Universidad Nacio- nal. Se tomaron frutos maduros y botones florales de los cuales se obtuvieron meriste- mos radicales y anteras que se procesaron en el laboratorio de Investigación de Morfolo- g ía Vegetal del Departamento de Biolog ía. Los meristemos radicales se obtuvieron de semillas, germinadas en cámara húmeda so- bre papel de filtro, previa esterilización con hipoclorito de Sodio al 50/0 por tres minutos y lavado con agua destilada esterilizada. La temperatura se midió con termómetro de Mercurio corriente (OC). Se colectaron las muestras a las 8 9 10 11,12, 15, 16horas,endiversasopo;tu~ida: des, con el fin de seleccionar la hora más apropiada para obtener mejores preparacio- nes. Los botones florales y ra íces obtenidas en cada muestreo se midieron con una regla graduada en cm. para elegir las dimensiones óptimas. Por simple observación se calculó el grado de insolación en el momento de cada colecta. A todo este material se le aplicó la si- guiente metodología: 1. Se usaron pretratamientos con el fin de obtener células en metafase utilizando sustancias químicas para la inhibición del huso acromático, tales como: a. Para diclorobenceno en solución saturada, 1 hora. b. 8 hidroxi - quinolina 0.002 M du- rante 1 hora. 2. Fijación con formol, ácido acético, alcohol (FAA). 3. Hidrólisis con HC1 1 N, durante 15 a 30 mintuos. 4. Lavado con agua destilada. 5. Tinción con orceína lactopropiónica, 6. Aplastamiento entre porta y cubre objeto, previo calentamiento suave con me- chero de alcohol. Para la identificación de la morfología de los cromosomas, se siguieron las normas pro- puestas por Akerman (1971). Del total de preparaciones obtenidas fue- ron seleccionadas las que se consideraron mejores, debido a su claridad para distinguir los cromosomas y diferenciar su morfología. Este material fue fotografiado con fotomi- 20 croscopio Laboval Carl Zeiss Jena ocular 10 x objetivo lOO x 1.25 película Kodalitte Asa S con papel.de alto contraste. RESULTADOS Las mediciones de temperatura arrojaron valores entre 70C y 1SoC. Al procesar el ma- terial obtenido a las diferentes temperaturas, se encontró que las mejores preparaciones se lograron con 1SoC. En cuanto a la hora del día, más apropia- da para realizar la colecta, se determinó que los resultados óptimos provinieron del mate- rial obtenido entre las 12 1/2 y 2 P.M. La medición de ra íces dio valores entre 0.2 y 3 cm, evidenciándose que los tamaños muy pequeños, inferiores a 0.5 cm como así mismo los muy grandes, superiores a 2 cm, no son los más apropiados para obtener buenas preparaciones. Los capullos florales midieron desde 0.5 a 4 cm de longitud; los resultados óptimos se lograron con tamaños entre 2 y 3 cm. Se observó que las colectas realizadas en días grises, fríos y lluviosos, proporcionan material de bajo rendimiento. En cambio las muestras obtenidas en horas de alta insola- ción, brindaron los mejores resultados. Se obtuvieron preparaciones que conte- n íari células en metafase, lo que permitió el conteo de cromosomas, a la vez diferenciar la forma y el tamaño de los mismos. La metodología usada ofrece una diferen- ciación de color entre el citoplasma y el cro- mosoma, permitiendo observar claramente la posición del centrómero, así como las constricciones (Figura 1). ( ._ I I Figura 1. Cariotipo de Brugmansia sanguinea de meristemo de raíz en estado metafásico en el que 2 n = 24. Gua r.o 11_' ediciones enornosómlcas, valor r y posición tdel c.entrómero