CAPITULO 111 DETERMINACION DE LAS RAZAS FISIOLOGICAS DE Fusarium oxysporum f.sp. dianthi EN CLAVEL EN LA SABANA DE BOGOTA Germán Arbeláez', Oiga Lucia Calderón2, Francisco Cevallos3 y Darlo González3 INTRODUCCION El conocimiento de la variación del hongo y la frecuencia de las razas fisiológicas es de gran importancia para entender el comportamiento de las variedades cultivadas y para los trabajos en el mejoramiento genético del clavel (Garibaldi, 1975; Garibaldi y Gullino, 1987). Además, elconocimiento de las razas fisiológicas del patógeno, en una región o en una finca en particular, permiten al productor la escogencia de las variedades más convenientes para cada situación (Garibaldi, 1988). Bickerton (1942) Y Guba (1945) observaron alguna variación en la respuesta patológica de diferentes aislamientos de Fusarium oxysporum f.sp. dianthi inoculados en distintas variedades de clavel y sugi- rieron la existencia de algunas razas fisiológicas del hongo. Hood Y Stewart (1957) en los Estados Unidos determinaron la presencia de tres razas fisiológicas del patógeno, a partir de varios aislamientos obteni- dos de diferentes estados productores de clavel, basados en la respuesta diferencial de variedades americanas. En Italia, Garibaldi(1975) basado en larespuesta de algunas variedades americanas y mediterráneas de clavel estándar, reconoció inicialmente la presencia de dos razas fisiológicas del hongo, las cuales denominó Razas 1 y 2. Las variedades americanas fueron resistentes a la Raza 1, pero susceptibles a la Raza 2, mientras que las variedades mediterrá- neas fueron susceptibles a la Raza 1 y resistentes a la Raza 2 del hongo. Mas tarde, Garibaldi et al (1986), trabajando con un gran número de aislamientos, describieron 8 razas fisiológicas de Fusarium oxysporum f.sp. dianthi, , Profesor Titular, Facultad de Agronomía, Universi- dad Nacional de Colombia, AA 14490, Santafé de Bogotá, D.C. , Microbióloga, Propagar Plantas SA, AA 90766, Santafé de Bogotá, D.C. , Biólogo, Facultad de Ciencias, Universidad Nacional de Colombia, AA 14490, Sant¡¡fé de Bogotá, D.C. de las cuales la Raza 2 es la de mayor virulencia y la de mayor ocurrencia en Italia, siguiéndole en frecuencia las Razas 8, 4 Y1; las razas 5, 6 y7 fueron poco frecuentes en dicha investigación. Aunque, en algunos paises se han registrado algu- nas razas fisiológicas del hongo, como en el Reino Unido (Matthews, 1978), Espana (Cebolla et al, 1979) y Estados Unidos (Hood y Stewart, 1957; Baker, información personal, 1988), la Raza 2 ha sido la más frecuente en el mundo y la que mayores danos ocasiona. En cambio, en Holanda, sólo se ha reconocido la Raza 2 del patógeno (Demmink et al, 1989). El objetivo de los trabajos fué la identificación de las razas fisiológicas de Fusarium oxysporum f.sp. dianthi procedentes de diversos aislamientos reco- lectados en diferentes fincas ubicadas en las prin- cipales zonas dedicadas al cultivo del clavel en la Sabana de Bogotá, as! como ladeterminación de las caracterlsticas culturales y moñológicas de las colonias y de las estructuras del patógeno. MATERIALES Y METODOS Para larealización de esta investigación, se hicieron dos experimentos, recolectando muestras de plan- tas de clavel afectadas por Fusarium oxysporum f.sp. dianthi y procurando abarcar todas las zonas productoras de la Sabana de Bogotá. En el labora- torio, se obtuvieron distintos aislamientos del hon- go, se realizó su identificación y se efectuaron estudios microbiológicos e inoculaciones del patógeno en variedades diferenciales de clavel. Experimento 1. Durante los meses de febrero y marzo de 1988, se tomaron muestras de material afectado en 49 fincas que cultivaban clavel estándar y miniatura, ubicados en 18 municipios de la Sabana de Bogotá y que presentaban distintos grados de infestación de la enfermedad. Los aislamientos del patógeno se ob- tuvieron de plantas de 2 a 6 meses de edad y que presentaban los slntomas tlpicos de la enfermedad. Para el aislamiento del patógeno en ellaboratorio, se realizaron cortes transversales de los tallos afecta- 19 dos, los cuales se desinfestaron superficialmente con hipoclorito de sodio al 2% durante un minuto y, luego, se enjuagaron con abundante agua estéril; estos trozos se colocaron en cajas de Petri con el medio de cultivo papa-dextrosa-agar (PDA) y se incubaron a 25°C. De los 220 aislamientos del hongo obtenidos se seleccionaron finalmente 100, de acuerdo con la variedad de clavel y la finca, para que fueran bien representativos. Dichos aislamientos se sometie- ron a una serie de estudios microbiológicos y cultu- rales, tales como tasa de crecimiento, morfologla y pigmentación de la colonia, producción, tamaño y morfologla de las conidias y de las clamidosporas. Estos estudios se hicieron bajo idénticas condicio- nes de luz, temperatura y tiempo de incubación y se utilizaron tres repeticiones por cada aislamiento. La identificación de las razas fisiológicas de Fusarium oxysporum f.sp. dianthi se hizo mediante la prueba de patogenicidad en las variedades diferenciales de clavel Duca, Pink Calypso, Raggio di Sole y San Remo (Cuadro 3.1). Aunque ha debido usarse la variedad Zecchino como quinta variedad diferen- cial, no fue posible hacerlo, al no encontrarla dispo- nible comercialmente, ni en Colombia ni en otro pals. Las pruebas de patogenicidad se hicieron mediante la inoculación de cada aislamiento del hongo en diez plantas de clavel de cada variedad diferencial. Por razones de espacio, la mitad de las plantas se colocó en un invernadero de vidrio con una tempe- ratura promedio de 26°C y la otra mitad se colocó en un invernadero metálico con cubierta de polietileno, similar a los utilizados comercialmente en la produc- ción de clavel y con una temperatura promedio de 18°C. En cada invernadero, se utilizó un diseño experimental de Parcelas Divididas con 5 plantas de cada una de las variedades diferenciales, para un total de 20 plantas porcada aislamiento del patógeno. El inóculo de patógeno se preparó mediante la siembra de tres trozos de micelio en érlenmeyers de 125 mi en el medio de cultivo liquido Caselna Hidrolizada esterilizado a 121°C durante 15 minutos y se colocaron en agitación continua por 7 dlas a 24°C. La inoculación de los esquejes de cada una de las variedades se efectuó mediante la inmersión de las ralees en una suspensión conidial de Fusarium oxysporum f.sp. dianthi a una concentración de un millón de conidias por mililitro durante 15 segundos e inmediatamente antes de la siembra. La siembra de los esquejes se hizo en forma indivi- dual en bolsas de polietileno negro de un kilogramo 20 Cuadro 3.1. Reacción de las variedades diferenciales de clavel a 4 razas de Fusariumoxysporumf.sp. dianthi en el Experimento 1. VARIEDAD REACCION A LA RAZA FISIOLOGICA 2 4 8 Duca R R R R Raggio di Sole R S R R Pink Calypso R S S R Zecchino R MS R S San Remo S S S S R - Resistente S - Susceptible MS - Moderadamente Susceptible de capacidad que contenlan suelo pasterizado con vapor a 82°C, durante 30 minutos. El suelo utilizado fué de textura franco-limosa. En cada invemadero, se utilizaron 50 plantas testigo para cada una de las variedades diferenciales y, antes de la siembra las ralces de dichos esquejes se trataron con agua destilada estéril. La evaluación dellndice de la enfermedad se realizó mediante la observación de los slntomas en las plantas en forma semanal y utilizando la escala descrita en el Cuadro 3.2. La identificación de las razas fisiológicas de Fusarium oxysporum f.sp. dianthi, para cada uno de los aislamientos, se efectuó de acuerdo con la reacción de las cuatro variedades diferenciales de clavel inoculadas con cada aislamiento del patógeno, se- gún la respuesta encontrada por Garibaldi (Infor- mación personal, 1987; Garibaldi, 1983; Garibaldi y Rossi, 1987) (Cuadro 3.1). Experimento 2. El trabajo se inició durante el segundo semestre de 1989 recolectando muestras de plantas de clavel afectadas por el patógeno en 61 cultivos ubicados en 20 municipios de la Sabana de Bogotá. En el laboratorio se obtuvieron distintos aislamientos del hongo para su estudio. Cuadro 3.2. Indice de la enfermedad utilizado en las pruebas de patogenicidad en los Experimentos 1 y 2. VALOR SINTOMATOLOGIA OBSERVADA o Planta sin slntomas 1 Planta con slntomas en el primer tercio 2 Planta con slntomas en el segundo tercio 3 Planta con slntomas en el tercio superior 4 Planta muerta. Entre los aislamientos obtenidos e identificados como Fusarlum oxysporum, se escogieron 121, a loscuales se les realizaron estudios microbiológicos e inoculaciones en las variedades diferenciales Ibiza, Taiga, Raggio di Sole, Pink Calypso, Niki y San Remo. En este experimento, al no encontrarse las mismas variedades usadas en el Experimento 1, se utilizaron estas 6 variedades por su disponibili- dad comercial en Colombia. Como patrón de comparación, se utilizaron 9 aisla- mientos extranjeros del patógeno pertenecientes a las razas 1; 2; 4 Y 8, obtenidos del profesor Angelo Garibaldi del Instituto de Patologla Vegetal de la Universidad de Turln, Italia, del doctor Henk Rattink de la Estación Experimental de Floricultura de Aalsmeer, Holanda y del doctor Ralph Baker de la Universidad Estatal de Colorado, Fort Collins, Esta- dos Unidos. La obtención de los aislamientos del patógeno a partir de los tejidos enfermos, los estudios microbiológicos y culturales de dichos aislamien- tos, la propagación del inoculo y su aplicación a los esquejes en las pruebas de patogenicidad fueron similares a los utilizados en el Experimento 1. Cada uno de los 130 aislamientos del hongo (121 aislamientos colombianos y 9 aislamientos extran- jeros) se inoculó en 10 plantas de cada variedad diferencial, excepto en el caso de las variedades Ibiza yTaiga, en donde, por disponibilidad deesque- jes, únicamente se inocularon 4 plantas. Por cada variedad de clavel se utilizaron 50 plantas testigo, en donde los esquejes se trataron mediante la inmersión de las raíces en agua destilada estéril durante 15 segundos. Las plantas se colocaron sobre 4 bancos de concre- to elevados, de 30 metros de largo por un metro de ancho. Un sistema de riego con goteros individuales para cada planta se utilizó. Las plantas recibieron fertilización comercial cada semana. Para evitar interacción entre los aislamientos, los grupos de las seis variedades inoculadas con cada uno de los aislamientos del hongo, se separaron 20 centrmetros. Una vez efectuada la siembra, las plantas se mantu- vieron durante 20 semanas en un invernadero metá- lico con cubierta de polietilenode 34 metros de largo por 7 metros de ancho y rodeado por los lados con polietileno para aumentar un poco la temperatura. Laidentificación de lasrazas fISiológicas delpatógeno se hizo de acuerdo con la reacción de .las seis variedades diferenciales de clavel y según la res- puesta encontrada por Garibaldi (Información per- sonal, 1987 y 1990; Garibaldi y Rossi, 1987) (Cua- dro 3.3). Cuadro 3.3. Reacciónde las variedadesdiferenciales declavela4 razasdeFusarlum oxysporumf.sp. dlanthl en el Experimento2. VARIEDAD REACCION A LA RAZA FISIOLOGICA 2 4 8 Taiga R R R R Ibiza R R R R Raggio di Sole R S R R Pink Calypso R S S R Niki R R R S San Remo S S S S R - Resistente S - Susceptible RESULTADOS Estudio Microbiológico de los Aislamientos. La tasa de crecimiento micelial de los diferentes aislamientos de Fusarlum oxysporum f.sp. dianthi en el medio de cultivo Papa Dextrosa Agar presentó valores bastantes similares cercanos a un centrme- tro por dla, y oscilaron entre 0,84 cm y 1,20 cm por dla. A diferencia deuna tasa de crecimiento micelial muy parecida entre los aislamientos del hongo, en la morfologla, en la coloración de las colonias yen la producción de esporas de los diferentes aislamien- tos en PDA, se observó alguna variabilidad. Todos los aislamientos estudiados formaron macroconidias, microconidias yclamidosporas y se encontraron aislamientos con esporulación muy abundante, esporulación intermedia y aislamientos muy poco esporulantes. Lagran mayorla de los aislamientos produjeron una gran cantidad de macroconidias yde microconidias, pero algunos produjeron baja cantidad de ambos tipos de conidias; también, se encontraron aisla- mientos con una gran producción de macroconidias y baja cantidad de micronidias, asl como el caso inverso, es decir, con elevada producción de microconidias, perobajacantidad de macroconidias. La mayorla de lasmacroconidias de los aislamien- tos presentaron forma de media luna con los extre- mos agudos,aunque,también se observaron algunos aislamientoscon formas ovaladas y rectangulares. En 21 , Fotogr.n. 3.1.Mcroconidiasymac:roconidiasdel.... miento No. 38 deFusarlum oxysporum f.sp. clen"'l (400 aumentos). todos los casos, las macroconidias presentaron de 3 a 4 septas transversales (Fotografla 3.1). las microconidias, también, presentaron una morfologla muy similar, observándose formas ova- ladas y, en unos pocos aislamientos, conidias casi redondas. En todos los casos, las microconidas no presentaron septas (Fotografla 3.1). las clamidosporas presentaron pared gruesa y forma globosa y, en algunos casos, estas esporas se encontraron formando cadenas o en forma soli- taria; su ubicación en la hifa fue variable, pues se observaron clamidosporas intercalares, subtermi- nales y terminales (Fotografla 3.2). las macroconidias presentaron tamanos entre 28 y 62 micras de largo por 3 micras de ancho, y para las microconidias,los valores fueron de 5,2 micras y 8,4 micras por 2,0 micras y 2,5 micras de ancho. El tamano de las clamidosporas varió de acuerdo a su ubicación dentro de la hifa. las clamidosporas intercalares fueron más grandes que las clamidos- poras terminales; además, cuando las clamidospo- ras se produjeron en cadena, su tamano fué menor que cuando su formación fué solitaria. la producción de macroconidias en PDA estuvo entre 500. 000 Y 1.200.000pormililitro, mientras que los recuentos de microconidias oscilaron entre 2 y 8 millones por mililitro, según el aislamiento. Una tendencia similar se observó en el medio liquido Caselna Hidrolizada utilizado en la propagación del in6culo para las pruebas de patogenicidad. Identificación de las Razas Fisiológicas. Experimento 1.Noventa y siete de los cien aisla- mientos inoculados correspondieron a la Raza Fi- siológica 2 del patógeno porsu reaecíén de resisten- cia en la variedad Duca y por su reacción de susceptibilidad en las variedades Pink Calypso, 22 Fotografta 3.2. Micelio, clamlda.porn, mac:roconidln ymic:roconldiasdelaislamiento116deFusarlumoxyspo- rum f.sp. clen"'l (100 aumentos). INVERNADERO DE VIDRIO Figura 3.1. Respuestade las Variedadesdiferenciales de clavel al aislamiento 43 de la Raza 2 de Fusarlum oxysporum f.sp. clen"'/. Reacción de Resistencia en Ducay de Susceptibilidaden Pink Calypso, Raggio de Soley San Remo. Raggiodi Soley San Remo (Figura 3.1 y Fotografla 3.3). Tres aislamientos correspondieron a la Raza 4 (Figura 3.2 y Fotografla 3.4). Estos tres aislamien- tos provinieron de variedades mediterráneas de clavel estándar. De acuerdo con los resultados obtenidos, no hizo falta la variedad Zecchino que permite diferenciar las Razas 1 y 8, razas no encontradas en este experimento. Al comparar el Indice de enfermedad y el periodo de incubación en los dos invernaderos utilizados, am- bos valores fueron mucho más altos en las plantas desarrolladas en el invernadero de vidrio, ya que el promedio de temperatura fué mucho mayor que en el invernadero de cubierta plástica. Sin embargo, la respuesta de las variedades diferenciales fué simi- lar en los 2 invernaderos (Figura 3.3). Experimento 2. Por la reacción de resistencia de las variedades Ibiza y Niki Y por la reacción de Fotografla 3.3. Respuesta de las 4 variedades diferen- ciales de clavel al aislamiento 18 de la Raza 2 de Fusarlum oxysporum f.sp. dlantIJl cien dlas después de la inoculación. De izquierda a derecha Duca (Resisten- te), Pink Calypso, Raggio di Sole y San Remo (Suscep- tibles). Invernadero de Vldr.lo ....... , . Figura 3.2. Respuesta de las variedades diferenciales de clavel al aislamiento 4 de la Raza 4 de Fusarlum oxysporum f.sp. d/antIJ/. Reacción de Resistencia, en Duca y Raggio di Sole y de Susceptibilidad, en Plnk Calypso y San Remo. susceptibilidad de las variedades.Raggio di Sole, Pink Calypso y San Remo, ciento doce aislamientos de los ciento veintiuno inoculados, loque correspon- de al 93%, se clasificaron como pertenecientes a la Raza fisiológica 2 del patógeno (Figura 3.4). Sin embargo, la respuesta a la inoculación de los 121 aislamientos del patógeno en lavariedad Taiga, supuestamente resistente a todas las razas del patógeno, fué variable y se pudieron establecer 4 Fotografla 3.4. Respuesta de las cuatro variedades diferenciales de clavel al aislamiento 93 de la Raza 4 de Fusarlum oxysporum f.sp. d/antIJ/, cien dias después de la inoculación. De izquierda a derecha Duca (Resisten- te), Pink Catypso (Susceptible), Raggio di Sole (Resis- tente) y San Remo (Susceptible). grupos, según su reacción: resistente (30%), mo- deradamente resistente (34%), moderadamente susceptible (21%) y susceptible.(15%) (Figuras 3.4,3.5, 3.6 Y3.7 Y Fotografla 3.5) Los 112 aislamientos clasificados como Raza 2 presentaron diferencias en su agresividad. Se ob- servaron aislamientos muy agresivos, como los aislamientos 89 y 1OS,aislamientos menos agresi- vos, como el aislamiento 138 y aislamientos inter- medios en su agresividad. Los 3 aislamientos extranjeros de la Raza 2 mostra- ron diferencias patogénicas, siendo más agresivo el aislamiento 126, procedente de Estados Unidos, un poco menos agresivo el aislamiento 128, de Holan- da y menos agresivo, el aislamiento 123 de Italia. Sin embargo, algunos aislamientos colombianos de la Raza 2 fueron mucho más agresivos que el aisla- miento procedente de Estados Unidos. Cuatro aislamientos del patógeno (3%) mostraron un nivel muy bajo de patogenicidad por lo cual no fué posible diferenciar la raza a la cual pertenecen (Figura 3.8). Cinco aislamientos (4%) dieron una respuesta pa- tológica no coincidente con las reacciones estable- 23 Invernadero de Vidrio ..... -,- o 02534 42 50 5868 74 8290 98 106114122130138 TIempo (Oles) Invernadero de Plástico TIempo (Olas) Figura 3.3. Respuesta de las variedades diferenciales de clavel-al_ aislamiento 18 de la Raza 2 de Fusarlum oxysporum f.sp. cJ/anthl en los dos invernaderos utiliza- dos. Reacción de Resistencia en Duca y de Susceptibi- lidad en Ragglo di Sole, Pink Calypso y San Remo. cidas en las variedades diferenciales utilizadas y no se pudieron identificar dentro de las razas fisiológi- cas conocidas. Como se mencionó anteriormente, la reacción de las variedades diferenciales permitió clasificar 112 aislamientos dentro de la Raza 2 del Patógeno y, en ningún caso, se identificaron las ~azas 1, 4 Y 8. Además, el uso de los aislamientos extranjeros como patrones de comparación permitió confirmar la ausencia de dichas razas. En ningún caso, se observó reacción de resistencia de la variedad Pink Calypso a los 121 .,islamientos colombianos del patógeno, reacción caracterlstica de las Razas 1 y 8, como tampoco se observó reacción de resistencia de la variedad Raggio di Sole, caracterlsticade las Razas 1, 4 Y8. Tampoco, se observó reacción de susceptibilidad en la varie- dad Niki, excepto en los aislamientos 125 y 130 de la Raza 8, procedentes de Italia y Holanda respec- tivamente, y que, junto con la reacción de resisten- cia de la variedad Pink Calypso, permitieron iden- 24 Fotografta 3.1. RespuMIa de plantas de la variedad Taiga, a los aislamientos 36 (Resistente), 59 (Mediana- mente Susceptible) y 67 (Susceptible) de Fusarlum oxysporumf.sp. dlanthlyel testigo, 105 dias despues de la inoculación. lIotografta a.l,Corte tra_1 deitanode una planta de la variedad Taiga, inoculada con el aislamiento 59, en donde su reacción fué Moderadamente-Susceptible. En la parte superior izquierda se observan daños aprecia- bles del xilema. tificar la Raza 8, hasta el momento no Conocida en Colombia. Al observar, al finalizar el experimento, cortes trans- versales de la base del tallo de las plantas inocula- das de la variedad Ibiza, los resultados mostraron, también, una alta resistencia de dicha variedad , pues 97 de los 121 aislamientos no ocasionaron algún tipo de slntoma extemo, ni, tampoco, slnto- mas intemos. En la variedad Niki, caracterizada, también, por su resistencia a la Raza 2, 23 de los 121 aislamientos inoculados no ocasionaron slntomas internos ni externos, mientras que, en la variedad Taiga, 11 aislamientos no indujeron ningún tipo deslntoma en las plantas inoculadas. Slntomatologla de la Enfermedad En la evaluaCión de la respuesta patológica de las plantas a la inoculación con los diferentes aisla- mientos del hongo se observaron diferencias apre- Aislamiento NO.74~ 4~~~==~------~~------' al 3.5 E 3 ~2.5 W 2 .!!! 1.5 111 'ti 1 ~ 0.5 L_,,"~;:;;;;:;;;;:;;;;:;;:;;;:;;:::::::::::::===:Jf (¡ o 6 6 7 8 9 10 11 12 13 ~ 16 16 17 18 19 20 Tiempo (Semanas) Figura 3.4. Respuesta de las seis variedades diferen- ciales de clavel a la inoculación del aislamiento 74 de la raza 2 de Fusarfum oxysporumf.sp. dianthl. Reacción de Resistencia en Taiga, Ibiza y Niki Yde Susceptibilidad en Raggio di Sole, Pink Calypso y San Remo. Aislamiento NO.56 Tlempo (Semanas) Figura 3.6. Respuesta de las seis variedades diferen- ciales de clavel a la inoculación del aislamiento 56 de la raza 2 de Fusarfum oxysporumf.sp. dianthl. Reacción de Resistencia en Ibiza y Niki, de Mediana Susceptibilidad en Taiga y de Susceptibilidad en Raggio di Sole, Pink Calypso y San Remo. Aislamiento NO.71 'ti 4 ~------------------------------, ~3.5~111 ...E 3 ~ 2.5 . e W 2 !l1.5 111 'ti 1 .~ 0.5 •.••••.• ~ o ~~---'--'--'---'--'-'--'--',-----'-------------~o 5 B 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 Tiempo (Semanas) Figura 3.8. Respuesta de las seis variedades diferen- ciales de clavel a la inoculación del aislamiento 71 de Fusarfum oxysporum Lsp, dianthi. Este aislamiento se caracterizó por su baja patogenicidad. Aislamiento NO.9~ 4~~~==~--------------~ al 3.5 E 3... !2.5 e W 2 .!!! 1.5 111 'ti 1 .~0.5~ Q L-~~~ ~==~~u o 5 6 7 8 9 10 11 12 13 1. 15 16 17 1~11¡620 Tiempo (Semanas) l Figura 3.5. Respuesta de las seis variedades diferen- ciales de clavel a la inoculación del aislamienlo 9 de la raza 2 de Fusarfumoxysporumf.sp. dlanthl. Reacción de Resistencia en Ibiza y Niki, de Mediana Resistencia en Taiga, y de Susceptibilidad en Raggio di soíe, Pink Calypso y San Remo. Aislamiento No.15 *¡SO I ====J E 60 ~ ; 40 e ." ~ 20 ee~ oLF~~~~~~~~~~~ .E 80 100 120 140 180 180 200 220 240 260 280 300 Tiempo (Oías) Figura 3.7. Respuesta de las seis variedades diferen- ciales de clavel a la inoculación del aislamiento 15 de la raza 2 de Fusariumoxysporumf.sp. dianthi. Reacción de Resistencia en Ibiza y Niki Yde Susceptibilidad en Taiga, San Remo, Raggio di Sole y Pink Calypso. ciables en la sintomatologla en las variedades utili- zadas. Los slntomas observados en las variedades sus- ceptibles a la mayorla de los aislamientos de la Raza 2 del patógeno fueron tipicos de la enfermedad en las variedades Raggio di Sole y San Remo; estos slntomas se observaron también, en la variedad Taiga cuando presentó reacciones de susceptibili- dad y mediana susceptibilidad. Los slntomas con- sistieron en una clorosis unilateral de las hojas bajeras y superiores del lado de la planta afectado, el doblamiento del tallo principal, seguido del marchitamiento de la planta. En la variedad Pink Calypso, también susceptible a la Raza 2, los slntomas se caracterizaron por un amarillamiento generalizado de la planta, con un 25 ascenso muy rápido de la enfermedad y un marchitamiento acelerado, 'seguido de la muerte de la planta. Esta sintomatologia es bastante diferente a laobservada en esta variedad y en otras variedades igualmente susceptibles en cultivos comerciales. En las variedades resistentes a la Raza 2 del patógeno, como fueron las variedades Ibiza y Niki Y cuando la variedad Taiga se comportó como resis- tente y medianamente resistente, el desarrollo de los sintomas fué el tipico de la enfermedad, pero su avance fué muy lento, en comparación con las variedades susceptibles. Cuando la mayoria de los aislamientos de la Raza 2 se inocularon en las variedades Ibiza y Niki, las cuales se comportaron como altamente resistentes y que, en algunos casos, no presentaron sintomas externos de la enfermedad, se observó una reduc- ción apreciable en la altura y en el desarrollo de las plantas en por lo menos un 20%, en comparación con las plantas testigo. Cuando, al finalizar el experimento, en las varieda- des susceptibles a la Raza 2, se hicieron cortes transversales de los tallos a diferentes alturas de la planta, se observó una degradación del xilema y formación de cavidades más o menos grandes en la región vascular. Al hacer, en lavariedad Ibiza, cortes transversales de la base de los tallos, se observaron muy pocos danos en el xilema, sin la formación de las cavidades observadas en las variedades susceptibles. En la variedad Taiga, la cual presentó diversos grados de afección a los diferentes aislamientos de la Raza 2, el daño en el xilema fué grande o pequeño dependiendo de la reacción que presentó la planta inoculada (Fotografia 3.6). DISCUSION Los resultados de los dos experimentos mostraron una gran similitud en la tasa de crecimiento micelial, pero presentaron una gran variabilidad en la apa- riencia y en la coloración de la colonia y en la producción de esporas, entre los 230 aislamientos del patógeno estudiados. Debido a esta alta variabilidad, las caracteristicas morfológicas de las colonias y de las esporas del hongo son de poca utilidad para la identificación de las razas fisiológicas del patógeno y, para su reco- nocimiento, deben utilizarse especialmente las prue- bas patológicas, las cuales toman bastante tiempo y requieren bastante espacio, materialesyesquejes sanos. Esto coincide con lo observado por Matthews 26 (1978), Baayen y Gams (1988), Manicom et al (1990) y Wright et al (1991). Otros métodos de identificación de formas especia- les de Fusarium oxysporum yde las razas dentro de dichas formas especiales se han usado en ellabo- ratorio, tales como compatibilidad vegetativa (Katan et al, 1989; Wright et al, 1991), producción de sustancias volátiles (Moore et al, 1991) Yanálisis de ADN polimórfico ampliado al azar (RAPO), en el caso Fusarium oxysporum f.sp. cubense (Sorensen et al, 1991). Algunos de estos métodos se están ensayando en diversos laboratorios de la Universi- dad Nacional de Colombia sin haberse encontrado, hasta el momento, un método que reemplace las pruebas de patogenicidad. En el Experimento 1, se encontraron aislamientos pertenecientes a las Razas 2 y 4, pero la Raza 2 fue predominante. En el Experimento 2, se encontra- ron, únicamente, aislamientos pertenecientes a la . Raza 2 del patógeno. Estos resultados son conse- cuencia de importación de esquejes de otros paises en donde la Raza 2 es predominante. La baja frecuencia de la Raza 4 encontrada en el experimen- to, posiblemente, se debe al escaso material de propagación importado de Italia, en donde esta raza está ampliamente distribuida. Las cuatro respuestas diferentes obtenidas en la variedad Taiga, supuestamente resistente a todas las razas del hongo, permite asumir la presencia de, por lo menos, cuatro variantes de la Raza 2 de Fusarium oxysporum f.sp. dianthi. Esta variación puede deberse a cambios ocurridos en la población del patógeno establecido en Colombia, bien sea en forma natural o debido a la presión de selección por el uso de vapor, de algunos fumigantes o de algunos fungicidas sistémicos aplicados al suelo, para el manejo de la enfermedad en muchas empresas. Dicha variación puede deberse, también, a las condiciones ambientales y de los suelos de la Sabana de Bogotá, bastante diferentes a los sitios donde se desarrollan esquejes de clavel importa- dos. Esto coincide con lo expresado por Sparnaaij (1978) y por Scovel (1987), quienes consideran que el patógeno tiene la habilidad de producir nuevas razas fisiológicas o variantes patogénicas. La presencia de estas variantes de la Raza 2 permite, además, explicar las diferencias observa- das por los técnicos colombianos en el comporta- miento de algunas variedades de clavel en distintas empresas de la Sabana de Bogotá. La inoculación de los nueve aislamientos extranje- ros de las Razas 1, 2, 4 Y 8 en las variedades diferenciales utilizadas en el Experimento 2, permi- tió observar las reacciones patológicas descritas en la literatura y fueron un buen punto de comparación. Además, permitieron confirmar, hasta el momento, la ausencia de las Razas 1 y 8 del patógeno en Colombia. La variación patogénica observada, en ambos expe- rimentos, en las variedades diferenciales inocula- das con los diferentes aislamientos del hongo fué totalmente independiente de lavariación morfológica de dichos aislamientos, de manera similar a lo encontrado por Messiaen y Cassini (1981). BIBLIOGRAFIA 1. Baayen, R.P. and W. Gams. The Etegans fusaria causingwilt diseaseof camation.l. Taxonomy. Nether- lands Joumal of Plant Pathology 94: 273-288. 1988. 2. Bickerton, J.M. Fusarium wilt of camalion caused by Fusarlum dlanthlPrill. et Del. NewYorkAgr. Exp. Sta. BuI78.1942. 3. Cebolla, V., C. Monton, P. Carrasco y A. Rodríguez. 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