Agronomfa Colombiana, 1998 Volumen XV No. 1pago 49- 57 EVALUACION DE LA FERTILIDAD MASCULINA EN 81 GENOTIPOS DE LA COLECCION COLOMBIANA DE Solanum phureja* Male Fertility evaluation of 81 genotipes from the Colombian Colection of Solanum phureja Sandra Guarín', Carlos E. Ñustez L.2, Juan Ospína A.2. RESUMEN 81 genotipos de la Colección Colom- biana de Solanum phureja, Juz. et Buk. se sembraron para evaluar su fertilidad y la du- ración de la viabilidad del polen. Las flores se colectaron y se dejaron secar al aire du- rante 48 horas, luego se extrajo el polen y se guardó en nevera a 7°C. Cada cinco días, se evaluó la fertilidad por el método de germinación "in vitro» y cada 15 días por el método de tinción. Según los resultados, seis genotipos de la colección son estériles y, en general, los genotipos presentan baja fertili- dad (menor 20%). El método más adecuado para la estimación de la fertilidad del polen en el tiempo fue la germinación in vitre. Bajo las condiciones de almacenamiento, el po- len de la mayoría de los genotipos evaluados tiene un período corto de viabilidad. Palabras claves: Polen, viabilidad, germinación "in vitre», tinción. SUMMARV 81 genotypes of the Colombian Collection of Solanum phureja were grown in the field to evaluate fertility and duration of • Recibido en Septiembre de 1997. 1. Ingeniera Agrónoma, Universidad Nacional de Colombia. Santafé de Bogotá, D.C. 2. Profesor, Facultad de Agronomía. Universidad Nacional de Colombia. AA 14490. Santafé de Bogotá, D. C. pollen viability. Flowers were Collected and air-dried for 48 hours, then pollen was extracted and kept at 7°C. Fertility was evaluated by the in vitro germination method every five days, and by the stain method every 15 days. Six genotypes of the collection are sterile and, in general, the genotypes have low fertility (Iess than 20%). The most adequate method to estimate pollen fertility was in vitre germination. Under the storage conditions, the pollen of most genotypes evaluated had a short period of viability. Key words: Pollen, viability, in vitro germination, staining. INTRODUCCION Solanum phureja Juz et Buk es una especie diploide, de la cual existe en Colom- bia una importante variabilidad genética, lo- calizada principalmente en el sur del país. Noobstante, solo se comercializan mortotipos redondos y de color amarillo, conocidos como "yema de huevo» o "papa criolla común», que son variedades primitivas y que repre- sentan aproximadamente el 10% de la papa que se cultiva en el país (Carrasco y Pineda, 1993). En su anatomía, los granos de polen son similares entre sí, pero, a veces, se en- cuentran algunas diferencias que no son sig- nificativas para su posterior desarrollo y fun- ciones, como la polinización, la germinación, la fecundación del óvulo y la formación del embrión que va a contener la semilla 49 (Laverde et al., 1993). Los mismos autores aseguran que, en general, los granos de po- len tienen una viabilidad muy corta, y que, después de su muerte, el protoplasma y la intina se descomponen rápidamente. Se sabe que el polen soporta altas temperaturas y tratamientos con ácidos y bases concentra- das y, bajo condiciones anaeróbicas, resiste a la pudrición. Sin embargo, bajo condicio- nes aerobicas, es susceptible a la degrada- ción enzimática de hongos y otros microorganismos. Maine (1988) evaluó la producción de semillas en un clon de S. phureja, cuando el polen había sido guardado por un mes, dos años, cuatro años y cinco años a -15QC con silica gel, y encontró que el número de semi- llas por polinización y por fruto decrece con la edad del polen a una tasa aproximada de cerca del 60% por año de almacenamiento. Howard (1970) resume la información obtenida por él y por otros investigadores acerca de la relación entre la temperatura de almacenamiento y la supervivencia del po- len, y concluye que el deterioro del polen es menos rápido a bajas temperaturas, mien- tras que cuando son mayores a 2,5QC el po- len de papa permanece viable por un mes. Además anota que secando las anteras y guardándolas a -20QC, el polen puede con- servar su viabilidad por dos años. La duración de la viabilidad del polen se define como el tiempo transcurrido entre la recolección del mismo y la pérdida total de su fertilidad. La viabilidad del polen se puede determinar directamente por cruzamientos, o indirectamente mediante técnicas de tinción y de germinación in vitro. La prueba de tinción con acetocarmín y lactofenol, fucsia ácido y pruebas de enzimas ha sido usada rara esti- mar la viabilidad del polen en grupos de S. andigena, S. phureja y S. tuberosum. Como resultados de este estudio, todos los indica- dores de viabilidad aparecen útiles, a excep- ción del acetocarmín, el cual no es confiable para predecir la fertilidad (Burke y Lauer, 1990). Aunque las especies de papa silvestre y la mayor parte de las papas cultivadas pro- ducen flores, muchos cultivares tetraploides producen pocas flores, y algunas variedades importantesno producen flores, o, cuando las forman , los botones se caen después de un corto tiempo (Howard , 1970). En uno de los estudios realizados por Vidal y Velásquez (1986), la estimación de la fertilidad se hizo porcentualmente, conside- rando como fértiles los granos bien formados (redondos) y perfectamente coloreados y como estériles aquéllos deformes y transpa- rentes. El presente trabajo tuvo como objeti- vos: evaluar la fertilidad y viabilidad del po- len en 81 genotipos de S. phureja MATERIALES V METODOS El experimento se realizó en la Esta- ción Experimental I.C.A San Jorge, en el municipio de Soacha (Cundinamarca) a 3100 m.s.n.m., con los siguientes parámetros climáticos durante el ciclo del cultivo, precipi- tación promedia 9,75 mm/día, temperatura promedia 12Q C y humedad relativa 80%. Los materiales y equipos utilizados para la realización de este trabajo fueron: Polen fresco de 81 genotipos de S. phureja, solución germinativa para polen de papa, colorante para tinción de polen (azul de lactofenol), microscopio, reglilla micrométrica de 2mm, cajas de petri, láminas portaobjetos, láminas cubreobjetos, palillos y papel secan- te. OBTENCION DEL POLEN: Las flores fueron colectadas semanal- mente en bolsas de papel de acuerdo con la época de floración de cada accesión, y se secaron al aire en el laboratorio por 48 horas; el polen se obtuvo sacudiendo las flores con un vibrador eléctrico y se almacenó en cáp- sulas de gelatina a 7QC. DETERMINACION DE LA FERTILIDAD DEL POLEN Método de tinción: La fertilidad se determinó cada 15 días a partir del día en que se colectó el polen. El procedimiento consistió en colocar sendas gotas de azul de lactofenol (Brown et al., 1989) en cada extre- 50 mo de una lámina portaobjeto y en ellas unos granos de polen utilizando la punta de un palillo. Después, la preparación se cubrió con una lámina cubreobjetos, y 30 minutos des- pués se examinó al microscopio, para deter- minar la tasa de fertilidad. Estatasa se define como el número de granos de polen bien te- ñidos y formados sin distorsiones en su inte- rior, con relación al número total de granos observados. Método de germinación in vitro: Se utilizó una solución germinativa (20% de sa- carosa y 50 ppm de ácido bórico) (Brown el al., 1989). Las observaciones de fertilidad con este método se realizaron cada cinco días. Se consideraron granos fértiles aque- llos que presentaban crecimiento del tubo polínico, y no fértiles, aquellos que no lo pre- sentaron. Para determinar el porcentaje de germinación, se hizo la relación entre los gra- nos de polen fértiles sobre granos de polen total. Para cada genotipo, se contaron al mi- croscopio 10 campos de 100x. DURACION DE LA VIABILIDAD DEL POLEN Se determinó utilizando la informa- ción de la fertilidad del polen por los dos métodos anteriores y cuantificado, en tér- minos del tiempo transcurrido entre la re- colección del polen y la pérdida de su fer- tilidad, guardado en condición de nevera a temperatura de 7QC. RESULTADOS Y DISCUSION Entre los genotipos de S. phureja eva- luados, se encontró un genotipo (# 53), que presentó anteras con una coloración verde pálida, morfología irregular y ausencia total del polen, y otro genotipo (# 77), que presen- tó anteras con características normales, pero sin producción de polen. Esto coincide con otros resultados citados por Ñustez (1990), en los que se anota que la fusión antera - estilo, la indehiscencia y las anteras pálidas, muchas veces coinciden con la esterilidad masculina y que el grado de derramamiento de polen se correlaciona muy bien con later- tilidad. Además, los genotipos # 48, # 58, # 60, # 62 Y# 80, no produjeron flores. Los dos genotipos que no produjeron polen se clasifi- caron como estériles, y los cinco genotipos que no florecieron no se incluyeron en el es- tudio. DETERMINACION DE LA FERTILIDAD DEL POLEN Método de tinción : Lafertilidad deter- minada por este método varió entre 3,97% y 96,44%. Según los resultados obtenidos, los genotipos se clasificaron en tres categorías: 30 genotipos de alta fertilidad (> 50%), 25 genotipos de mediana fertilidad (entre 20% y 50%) Y 19 genotipos que presentaron baja fertilidad « 20%) (Cuadro 1). El genotipo # 41 presentó la fertilidad más alta en la primera lectura con 95,17% Y el genotipo # 86 presentó la fertilidad más baja con 3,97%. Así mismo, el porcentaje de máxima fertilidad observado en la colec- ción, en las diferentes lecturas, lo presen- tó el genotipo 41, con un 96,44% y el de menor porcentaje fue el 86, con un 3,97% (Cuadro 3). Método de germinación in vitro: La fertilidad determinada por este método varió entre 0,0% (genotipos # 23, # 55, # 63 Y# 86) Y39,14% (genotipo # 10). Teniendo en cuen- ta el resultado y la clasificación hecha para el método de tinción, cuatro genotipos son com- pletamente estériles, seis genotipos de me- diana fertilidad y ninguno presentó alta fertili- dad El genotipo # 64 presentó la fertilidad más alta en la primera lectura con 30,51%. El polen de varios genotipos no germinó o pre- sentó apenas trazas de germinación (Cua- dro 2). Extrapolando los resultados obtenidos con los 74 genotipos por este método, se pue- de decir que la Colección. Colombiana de S. phureja es, en términos generales, de baja fertilidad, ya que sólo 16 genotipos tienen niveles de fertilidad de 10% o más. Este método es más confiable que el método de tinción, porque no todos los gra- nos de polen que tiñen perfectamente son fértiles ni germinan normalmente y es lógico pensar que la fertilidad se reduzca en el tiempo. 51 Cuadro 1. Distribución da frecuencias para la variable fertilidad de polen (en porcentaje) por el método de tinción en el primer muestreo. INTERVALO EN NUMERO DE TOTAL PORCENTAJE GENOTIPO ACUMULADO GENOTIPOS NO FLORACION 5 5 48 ; 58 ; 60 ; 62 Y 80 ESTERILES 2 7 53 y77 < 10,0 8 8 4;5 ;17 ;27 ;31 ; 63 ;85 Y 86 10,1 - 20,0 11 19 7 ; 11 ; 12 ; 14 ; 19 ; 23 ; 24 ; 25 ; 29 ; 35 y73 20;1 - 30,0 13 13 1; 8; 15; 21 ; 22; 30; 36; 45; 61, 67,75, 81 y83 30,1 - 40,0 3 16 42; 68 Y 78 40,1 - 50,0 9 25 2 ; 32 ; 47 ; 49 ; 54 ; 55 ; 71 ; 74 Y 87 50,1 - 60,0 6 6 43 ;66 ;69 ;70 ;76 Y 82 60,1 - 70,0 5 11 57 ;59 ;79 ;84 Y 85 70,1 - 80,0 11 22 6 ;16 ;20 ;26 ;33 ; 34 ;40 ;56 ;65 Y 72 80,1 - 90,0 4 26 9;13;37y64 90,1 - 100,0 4 30 3 ;10 ;28 y 41 Cuadro 2. Distribución de frecuencias en porcentaje, para la fertilidad de polen por el método de germinación in vitro en el primer muestreo. INTERVALO EN NUMERO DE TOTAL PORCENTAJE GENOTIPO ACUMULADO GENOTIPOS NO FLORACION 5 5 48; 58; 60; 62; 80. ESTERILES' 2 7 53 Y 77 ESTERILES2 4 4 23 ; 55 ; 63 ; 86. < 0,2 8 12 4;7 ;14 ;27 ;35 ;66 ;76y85. 5;8 ;11 ;12 ;15 ;16 ;17 ;19 ;20 ;21 ;22 ;24 ;25 ;26 ;28 ; 0,2 - 4,9 36 48 29 ;30;31 ;33;36;41 ;42; 45;47;49;54;59;65;68; 69;73;75;81 ;82;83;84 5,0 - 9,9 10 58 2; 9; 32; 34; 56; 61 ; 71 ; 79; 87 ; 88 10,0 - 15,0 4 62 6 ;37 ;67 Y 70 15,1 - 20,0 6 68 10 ;43 ;46 ;57; 72 Y 74 20,1 - 25,0 4 72 1 ;3,13 Y 78 25,1 - 30,0 1 73 40 30,1 - 35,0 1 74 64 (1) Genotipos con ausencia total de polen. (2) Genotipos que producen polen, pero totalmente estéril. 52 Cuadro 3. Lectura con la más alta fertilidad de polen para cada genotipo de la Colección de S. phureja por los métodos de tinción y germinación in vitro. MElaDO DE TINCION MElaDO DE GERMINACION IN VITRO 088. Genotipo NTL FPl (%) NlMF MF(%) NTL FPl (%) NlMF MF (%) 1 1 4 27,039 2 79,723 9 24,983 2 29,501 2 2 3 41,851 1 41,851 6 6,622 1 6,622 3 3 11 91,992 8 94,708 31 21,931 7 24,608 4 4 3 9,672 2 9,792 6 0,089 1 0,089 5 5 4 7,947 2 12,528 9 2,787 1 2,787 6 6 5 74,149 4 85,006 12 10,903 1 10,903 7 7 3 19,215 3 20,316 6 ·0,000 5 0,278 8 8 8 26,946 8 38,641 22 2,465 7 8,580 9 9 9 87,949 2 88,608 23 9,825 7 37,502 10 10 8 92,979 8 94,632 22 15,557 2 39,135 11 11 4 15,643 2 20,347 9 0,891 7 4,553 12 12 4 16,154 4 29,824 9 0,960 1 0,960 13 13 4 88,795 3 91,488 9 20,670 6 21,284 14 14 4 19,997 1 19,997 9 0,000 6 1,622 15 15 4 21,157 2 31,928 9 0,942 7 2,367 16 16 3 71,482 2 72,320 6 2,485 1 2,485 17 17 3 5,483 3 10,065 6 0,928 1 0,928 18 19 2 11,910 1 11,910 3 1,939 3 2,654 19 20 3 71,970 2 84,108 6 3,596 1 3,596 20 21 3 24,518 1 24,518 6 1,914 2 1,982 21 22 6 24,320 4 53,574 14 3,507 7 4,832 22 23 3 6,643 1 6,643 6 0,000 ° 0,00023 24 3 6,959 1 6,959 6 0,352 1 0,352 24 25 3 19,045 3 25,954 6 1,097 1 1,097 25 26 11 78,381 1 78,381 31 3,128 15 10,084 26 27 3 4,590 1 4,590 6 0,000 5 0,758 27 28 11 92,780 7 96,240 6 26,482 6 30,064 28 29 5 10,930 3 16,713 12 0,472 2 1,424 29 30 4 22,985 4 27,572 9 2,786 2 2,882 30 31 3 9,437 1 9,437 4 0,537 1 0,537 31 32 8 43,059 7 58,787 21 7,167 7 13,403 32 33 3 72,126 1 72,126 6 ·0,950 1 0,960 33 34 3 76,950 2 80,782 6 5,111 1 5,111 34 35 3 12,895 1 12,895 6 0,000 5 0,758 35 36 5 26,488 1 26,488 12 0,265 4 1,903 36 37 7 87,347 7 92,268 18 11,708 1 27,967 37 40 4 74,652 1 74,652 9 27,967 1 27,967 38 41 3 95,171 2 96,442 6 0,286 3 1,221 39 42 4 34,156 1 34,156 8 2,928 5 3,110 40 43 8 57,396 6 66,337 22 17,267 1 17,267 41 45 5 28,567 4 52,942 12 0,889 5 1,340 42 46 4 74,527 1 74,527 9 19,382 1 19,382 Continúa .... NTL : Número total de lecturas, FPL: Frecuencia observada en primera lectura, NLMF: Número de lectura donde se observó la máxima frecuencia, MF: Máxima frecuencia observada. 53 Cuadro 3. Lectura con la más alta fertilidad de polenpara cada genotipo de la Colección de S. phureja por los métodos de tinción y germinación in vitro . ....Viene METODO DE TINCION METODO DE GERMINACION IN VITRO oas Genotipo NTl FPL (%) NLMF MF(%) NTl FPL (%) NLMF MF (%) 43 47 2 44,924 1 44,924 2 0,441 1 0,441 44 49 5 40,654 5 48,551 12 3,998 4 4,412 45 54 4 41,164 4 53,897 10 3,041 4 5,096 46 55 2 42,470 2 45,098 2 0,000 O 0,000 47 56 7 70,146 6 87,364 17 5,085 3 20,709 48 57 7 63,997 6 76,213 17 19,806 1 19,806 49 59 7 60,399 3 85,490 16 2,211 3 12,337 50 61 3 22,319 1 22,319 5 6,522 1 6,522 51 63 3 8,109 1 8,109 6 0,000 O 0,000 52 64 5 86,353 5 91,869 12 30,509 1 30,509 53 65 6 73,418 1 73,418 15 0,000 12 11,007 54 66 7 53,233 5 71,151 18 0,104 3 14,065 55 67 4 22,354 3 23,242 8 11,882 1 11,382 56 68 4 36,667 1 36,667 8 2,618 3 6,078 57 69 4 56,042 1 56,062 8 1,251 1 1,251 58 70 8 55,769 7 59,778 22 10,812 3 22,223 59 71 6 47,246 1 47,246 16 7,450 5 9,397 60 72 7 71,790 7 89,032 19 15,587 1 15,587 61 73 3 16,813 1 16,813 6 2,237 1 2,237 62 74 7 44,710 7 71,539 19 19,376 1 19,376 63 75 4 25,354 3 32,694 9 0,533 3 4,952 64 76 4 58,706 1 58,706 8 0,122 3 4,002 65 78 4 40,716 4 58,887 9 22,537 1 22,537 66 79 10 69,938 7 76,365 27 8,180 19 17,731 67 81 4 21,679 3 30,054 9 1,331 3 9,639 68 82 4 54,924 1 54,924 10 0,463 3 6,225 69 83 4 23,063 3 24,990 9 2,662 5 4,139 70 84 4 60,548 3 79,470 9 3,405 1 3,405 71 85 3 6,882 1 6,882 5 0,000 4 0,250 72 86 3 3,967 1 3,967 3 0,000 O 0,000 73 87 5 47,861 5 83,602 12 6,148 3 8,396 74 88 4 65,279 4 85,020 7 5,286 1 5,286 NTL : Número total de lecturas, FPL: Frecuencia observada en primera lectura, NLMF: Número de lectura donde se observó la máxima frecuencia, MF: Máxima frecuencia observada. Es importante resaltar que el máximo valor de fertilidad en los dos métodos no se encontró siempre en la primera lectura, como era de esperarse, sino que ocurrió indistinta- mente en una de las siguientes lecturas; esto indica que la muestra aleatoria que se toma del «bulk» de polen colectado del genotipo correspondiente, en diferentes flores y de di- ferentes plantas, y del mismo clon, presenta una variación natural al interior de la mues- tra, por lo cual es recomendable tomar varias muestras del «bulk» y hacer menos conteos por cada una. De otra parte, ésto implica con- tar con una buena disponibilidad de polen, lo cual, no siempre es posible (Cuadro 3) Al realizar el análisis de correlación para cada una de las lecturas entre la varia- ble fertilidad de polen estimada por el méto- 54 Cuadro 4. Coeficientes de correlación para la fertilidad de polen entre los métodos de tinción y germinación in vitro. VARIABLES OlA DE LECTURA N r LT1 Vs LG1 1 74 0,514 ** LT2 Vs LG2 15 71 0,473 ** LT3 Vs LG3 30 48 0,520 ** LT4 Vs LG4 45 29 0,121 ns LT5 Vs LG5 60 20 0,302 ns LT6 Vs LG6 75 18 0,078 ns LT7 Vs LG7 90 12 0,013 ns LT8 Vs LG8 105 9 0,477 ns LT= Lectura por tinción. LG= Lectura por germinación in vitro. do de tinción y por el método de germinación in vitro, se encontró correlación altamente sig- nificativa hasta la tercera lectura y, en las si- guientes lecturas la correlación no fue signifi- cativa (P>O,05) (Cuadro 4). Este resultado corrobora la observación que la fertilidad per- manece constante cuando es determinada por el método de tinción, pero decrece cuan- do es determinada por el método de germinación in vitre, y, por lo tanto, los res- pectivos valores pierden correlación. Para el caso de la especie S. phureja, los resultados de los dos métodos tienen correlación por un corto periodo, durante el cual, por aspectos prácticos se recomendaría el método de tinción. Sin embargo, al analizar el resultado real, consideramos que el método más confiable es, sin duda alguna, el de germinación in vitro. DURACION DE LA VIABILIDAD DEL POLEN La duración de la viabilidad del polen para los 74 genotipos de S. phureja presentó una variación entre Oy 150 días, lo cual evi- dencia una respuesta de diversidad genotípica. Los resultados se presentan agru- pando los genotipos por el número de días que el polen se mantuvo viable, con interva- los de cinco días (Cuadro 5). La duración mediana de viabilidad del polen está entre los 21 y 25 días después de colectado; 45 de los 74 genotipos evaluados conservan el polen fértil hasta los 40 días; nueve genotipos alcanzaron más de 100 días de viabilidad, tres genotipos mantuvieron la viabilidad del polen hasta el final del ensayo (150 días), aunque con muy bajos porcenta- jes de germinación (Cuadro 5). Se debe destacar también que el nú- mero de lecturas para la viabilidad en los di- ferentes genotipos osciló entre dos y 31. El polen se agotó para 22 genotipos (6; 8 ; 9 ; 10; 19; 22; 32; 36; 43 ;47; 57; 61 ; 64; 65; 66; 68 ; 70; 71 ; 72; 74; 79 Y85) por lo cual no fue posible evaluar la duración de su via- bilidad hasta el rango máximo. Enconclusión,cuandoel objetivo es rea- lizar cruzamientos y el polen se almacena en condiciones de nevera (72 C), éste se debe utilizar en un corto plazo. Además, en S. phureja, se debe tener en cuenta que existe amplia variabilidad en esta respuesta. Este resultado coincide con los resultados mencio- nados por Howard (1970), en el sentido que cuando el polen es guardado a temperaturas mayores a 2,52 C éste permanecerá viable por un periodo de aproximadamente un mes. CONCLUSIONES Teniendo en cuenta los resultados y las condiciones en las cuales se realizó el pre- sente trabajo, se puede concluir que: 1. Cinco genotipos de la Colección Colombiana de S. phureja (# 48, # 50, # 60, # 62 Y # 80) no produjeron flores, dos más (# 55 Cuadro 5. Duración de vlabllldad de polen de 74 genotipos de S. phureja VIABILIDAD DEL NUMERO DE POLEN (OlAS) GENOTIPOS GENOTIPOS O (NO FLORACION) 5 48 ; 58 ; 60 ; 62 Y 80 O (ESTERILES) 2 53 Y 77 1- 5 2 47 y55 6- 10 2 19 Y 86 11- 15 1 31 16- 20 2 61 Y 85 21- 25 17 2; 4; 7; 16 ; 17 ;20 ;21 ;23 ;24 ;25 ;27 ; 33 ; 34 ;3 5 ; 41 ; 63 Y 73 26- 30 1 88 31- 35 5 42 ; 67 ; 68 ; 69 Y 76 36- 40 15 1 ;5 ;11 ;12 ;13 ;14 ;15 ;30, 40 ;46 ;75 ; 78 ;81 ;83 Y 84 41- 45 2 54y 82 46- 50 0' O 51- 55 7 6 ; 29 ; 36 ; 45 ; 49 ; 64 Y 87 56- 60 O O 61- 65 1 22 66- 70 1 65 71- 75 1 71 76- 80 2 56 Y 57 81- 85 3 37; 59 Y 66 86- 90 2 72 Y 74 91- 95 O O 96- 100 1 32 101- 105 4 8; 10; 43 Y 70 106- 110 1 9 111- 115 O O 116- 120 O O 121- 125 O O 126- 130 1 79 131- 135 O O 136- 140 O O 141- 145 O O 146- 150 3 3; 26 Y 28 (1) El valor de (O) significa que ningún genotipo se ubicó en ese rango de viabilidad. 56 53 Y# 77) no produjeron polen, y otros cuatro (# 23 ,# 55, # 63 Y # 86) produjeron polen que no germinó. 2. La fertilidad del polen, estimada por el método de tinción, se mantiene relativa- mente constante a través del tiempo, en ra- zón de que su respuesta es colorimétrica y, por lo tanto ésta es una metodología no confiable para estimar viabilidad del polen. 3. Los resultados de fertilidad por el método de germinación in vitro mostraron que la colección de S. phureja presenta bajos niveles de fertilidad, con porcentajes que van descendiendo progresivamente en el tiempo en la gran mayoría de los genotipos y consti- tuye una metodología adecuada para esti- mar viabilidad. 4. La viabilidad del polen de la colec- ción de S. phureja guardado a 7QC, varió en- tre 1 y 150 días, siendo el mejor tiempo pro- medio para la mayoría de los genotipos entre 20 y 25 días después de colectado, lo cual indica que la viabilidad es corta y que el po- len se debe utilizar en el menor tiempo posi- ble. 5. Los métodos de tinción y germinación in vitro presentaron correlación altamente significativa hasta los 30 días de colectado el polen y, de aquí en adelante, los valores de fertilidad por los dos métodos no se correlacionan. BIBLlOGRAFIA BROWN, C., IWANAGA, M., y WISSAR, R. 1989. Determinación de la fertilidad mas- culina. Manual sobre manejo de germoplasma de papa. Reproducido para el "Curso Internacional de manejo de Germoplasma de papa". Colombia y Ecua- dor. Junio 11-24. 1989. CIP. Lima (Perú). BURKE, M. y LAUER, F.1. 1990. Pollen viability indicators for predicting viability of reduced and, unredUced gametes in S. tuberosum group phureja. European Association for potato Research EAPR abstracts. 11. Triennial Conference EAPR. Edinburgh (UK). 8-13 Ju1.1990. Pp: 518-519. CARRASCO, C. y PINEDA, R. 1993. Papa criolla "yema de huevo», una multivariedad nativa. Revista Papa NQ7. Pp. 14-16. HOWARD, H. W. 1970. Genetics of the potato S. tuberosum L. 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