Microsoft Word - 47-Agra_19608 892 Original Article Biosci. J., Uberlandia, v. 30, supplement 2, p. 892-900, Oct./14 HEMOPARASITOS EM CÃES DOMÉSTICOS NATURALMENTE INFECTADOS, PROVENIENTES DAS ZONAS URBANA E RURAL DO MUNICÍPIO DE ABADIA DOS DOURADOS, MINAS GERAIS, BRASIL HEMOPARASITES IN DOMESTIC NATURALLY INFECTED DOGS, FROM URBAN AND RURAL AREAS OF ABADIA DOS DOURADOS MUNICIPALITY, STATE OF MINAS GERAIS, BRAZIL Marina Cruvinel Assunção SILVA¹; Antonio Vicente MUNDIM²; Guilherme Arantes MENDONÇA³; Maria José Santos MUNDIM⁴; Ednaldo Carvalho GUIMARÃES² 1. Mestranda do Programa de Pós Graduação em Ciências Veterinárias, Faculdade de Medicina Veterinária - FAMEV, Universidade Federal de Uberlândia - UFU, Uberlândia, MG, Brasil. marinacruvinel@hotmail.com; 2. Professor Doutor, FAMEV – UFU, Uberlândia, MG, Brasil; 3. Médico Veterinário, Uberlândia, MG, Brasil; 4. Instituto de Ciências Biomédicas –UFU RESUMO: As hemoparasitoses estão entre as mais frequentes enfermidades que acometem os cães, tendo como vetor os carrapatos o que dificulta o controle destas patologias principalmente nas áreas rurais. Os hemoparasitos mais frequentes em cães no Brasil são Ehrlichia sp., Hepatozoon sp. e Babesia sp. O objetivo deste trabalho foi determinar a frequência de hemoparasitos em cães da zona urbana e rural do município de Abadia dos Dourados, Minas Gerais, através da pesquisa de hematozoários em extensões sanguíneas, comparando os índices entre as zonas rural e urbana. Foram estudados 250 cães, sendo 150 provenientes da zona rural e 100 do perímetro urbano. Foram confeccionadas, de cada cão, extensões de sangue periférico coradas pelo método May-Grünwald Giemsa e analisadas por microscopia óptica. Observou-se 60 (24,0%) cães parasitados por Hepatozoon sp., cinco (2,0%) por Ehrlichia sp. e quatro (1,6%) por Babesia sp. A frequência de cães parasitados por Hepatozoon sp. foi significativamente superior à dos demais hematozoários, ocorrendo em todas as faixas etárias, predominando nos cães da zona rural e entre os machos. PALAVRAS-CHAVE: Frequência. Canis familiaris. Hepatozoon sp. Ehrlichia sp. Babesia sp. INTRODUÇÃO Os hemoparasitos mais frequentes encontrados em cães no Brasil são Hepatozoon sp., Ehrlichia sp. e Babesia sp. Esses parasitos são intracelulares obrigatórios, transmitidos aos cães por diferentes espécies de carrapato dentre eles os gêneros Amblyomma e Rhipicephalus (COSTA, 2011). A hepatozoonose canina é causada pelo Hepatozoon. O gênero Hepatozoon compreende protozoários pertencentes ao filo Apicomplexa; classe Sporozoa; sub classe Coccidia; ordem Eucoccidiida; sub ordem Adeleina e família Hepatozoidae (BARTA, 1989; SMITH, 1996). Hepatozoon canis e Hepatozoon americanum são as duas espécies responsáveis por infectar os cães. Esses dois protozoários são distintos nos seus aspectos clínicos, patológicos, genéticos e antigênicos, e também no que diz respeito ao vetor de transmissão. H. americanum ocorre nos Estados Unidos, enquanto o H. canis ocorre em vários outros países. No mundo, a prevalência da hepatozoonose em trabalhos recentes foi relatada na Turquia, Croácia e Israel variando de 1 a 25,8% (BANETH et al., 1996; KARAGENC et al., 2006; VOJTA et al., 2009). A espécie que acomete os cães no Brasil é H. canis (RUBINI et al., 2005). Ocorre em diversas regiões do país sendo considerado de menor patogenicidade, além de frequentemente, estar associada com outras infecções (MUNDIM et al., 2008a). Tem sido relatado em vários estados brasileiros; Distrito Federal (PALUDO et al., 2003), Espirito Santo (SPOLIDORIO et al., 2009), Goiás (MUNDIM et al., 2008b), Mato Grosso do Sul (SALGADO, 2006), Minas Gerais (MUNDIM et al., 2008a, GOMES et al., 2010), Rio de Janeiro (O`DWYER; MASSARD; SOUZA, 2001), Rio Grande do Sul (LASTA et al., 2009), São Paulo (GONDIM et al., 1998; RUBINI et al., 2005; O`DWYER et al., 2006), Pernambuco (RAMOS et al., 2010). A erliquiose é uma doença de distribuição mundial, particularmente em regiões tropicais e subtropicais; causada pelo gênero Ehrlichia que pertence à ordem Ricketsiales e são bactérias gram- negativas, parasitas intracelulares obrigatórios de células hematopoiéticas maduras ou imaturas, principalmente do sistema fagocítico mononuclear, tais como monócitos e macrófagos, podendo algumas vezes infectar células mielóides como neutrófilos, dependendo da espécie acometida Received: 17/10/12 Accepted: 20/02/14 893 Hemoparasitos em cães... SILVA, M. C. A. et al Biosci. J., Uberlandia, v. 30, supplement 2, p. 892-900, Oct./14 (AGUIAR et al., 2007). No Brasil três espécies foram descritas: E. ewingii agente etiológico da erliquiose granulocítica humana e canina; E. chaffensis agente da erliquiose monocítica humana e E. canis agente da erliquiose monocítica canina (OLIVEIRA et al., 2009), esta particularmente frequente em regiões tropicais e subtropicais, principalmente em áreas urbana e suburbana, devido à maior concentração do seu principal vetor, o carrapato Rhipicephalus sanguineus (LABRUNA; PEREIRA, 2001; MOREIRA et al., 2003). A babesiose canina é uma doença causada pelo protozoário intraeritrocitário Babesia sp., classificado no filo Apicomplexa, Classe Sporozoa, sub classe Coccidiasina, ordem Piroplasmorida, família Babesiidae (VIAL; GORENFLOT, 2006). No Brasil a babesiose é endêmica, causada por Babesia canis e Babesia gibsoni, ambas transmitidas principalmente pelo carrapato Rhipicephalus sanguineus (DANTAS-TORRES; FIGUEREDO, 2006). Atualmente são reconhecidas três subespécies de Babesia canis: Babesia canis canis, detectada na Europa, Babesia canis vogeli, no norte e sul da África, América do Norte e Brasil, Babesia canis rossi no sul da África (CARRET et al.,1999; MATJILA et al., 2004; COSTA-JÚNIOR et al., 2009). Estudos moleculares realizados no Brasil apontam Babesia canis vogeli e Babesia gibsoni como sendo as espécies envolvidas na babesiose canina (PASSOS et al., 2005; TRAPP et al., 2006). O método de diagnóstico de hemoparasitos por esfregaço sanguíneo é específico, porém, a ausência de parasitos não exclui a presença de infecção (COSTA, 2011). Atualmente métodos de imunodiagnóstico e de caracterização molecular estão sendo utilizados. Um destes métodos é a reação em cadeia de polimerase (PCR) o qual auxilia na detecção dos agentes e de novas cepas (NAKAGHI et al., 2008; RUBINI et al., 2009). O diagnóstico mais usado na rotina das clínicas, para detecção do Hepatozoon, baseia-se na identificação em esfregaços sanguíneos, de neutrófilos e monócitos parasitados pelos gametócitos do Hepatozoon (AGUIAR et al., 2004; GOMES et al., 2010). Outros estudos mostram que a imunofluorescência indireta, o western blot e a biópsia tecidual são alternativas de diagnóstico (AGUIAR et al., 2004). Muitos são os métodos atualmente utilizados para o diagnóstico de erliquiose: o clínico auxiliado pelo hemograma, métodos indiretos pela pesquisa de anticorpos, métodos diretos como citológico com a observação de mórulas em leucócitos, métodos moleculares pela amplificação do DNA e o isolamento em cultivo celular. O diagnóstico de E. canis, basicamente se dá pela observação de mórulas em células dos esfregaços de sangue periférico ou concentrado leucocitário (RIECK, 2011). O objetivo do presente estudo foi diagnosticar e determinar as frequências de hemoparasitos na população canina da zona urbana e rural do município de Abadia dos Dourados, MG, através da pesquisa em extensões de sangue capilar. MATERIAL E MÉTODOS O estudo foi realizado em Abadia dos Dourados, Minas Gerais, município com aproximadamente 6427 habitantes e área de 897 km2. As coletas foram realizadas durante os meses de agosto e setembro de 2009. O protocolo de colheita foi aprovado pela Comissão de Ética na Utilização de Animais (CEUA) da Universidade Federal de Uberlândia, sob o número 005/09. O delineamento amostral foi de conveniência, coletando-se amostras durante campanha anti-rábica no município. Foram utilizados 250 cães de idade e raças variadas, ambos os sexos, sendo 150 provenientes da zona rural e 100 do perímetro urbano da cidade. Os animais foram escolhidos ao acaso, não tendo distinção entre raça, sexo ou idade, sendo que no momento da coleta foi preenchida uma ficha para cada animal, onde foram relacionados: nome, raça, sexo, idade, estado nutricional, presença de ectoparasitos e dados de contato do proprietário. Após contenção mecânica do animal, segundo normas de contenção e exame físico dos animais, realizou-se tricotomia na face interna da orelha, assepsia local com solução de álcool iodado e a punção de capilares superficiais da face interna do pavilhão auricular. Com auxilio de tubo de microhematócrito heparinizado, foram colhidos aproximadamente 100 µL de sangue, dos quais parte foi transferida para uma lâmina de microscopia, desengordurada e seca, para confecção da extensão sanguínea. Após secagem em temperatura ambiente, as extensões sanguíneas foram identificadas e armazenadas em caixas porta lâminas para serem transportadas ao laboratório onde foram processadas e analisadas. A coleta nos cães da zona rural foi realizada conjuntamente com a equipe do Centro de Controle de Zoonoses de Abadia dos Dourados, durante a campanha de vacinação anti- rábica realizada no mês de agosto de 2009. As 250 lâminas com as extensões sanguíneas foram encaminhadas ao Laboratório 894 Hemoparasitos em cães... SILVA, M. C. A. et al Biosci. J., Uberlandia, v. 30, supplement 2, p. 892-900, Oct./14 Clínico do Hospital Veterinário da Universidade Federal de Uberlândia, onde foram coradas pelo método May-Grünwald Giemsa segundo Ferreira Neto, Viana e Magalhães (1982) e analisadas. A pesquisa dos hematozoários nas extensões sanguíneas foi realizada em microscopia óptica com objetiva de imersão (100 X). Foi utilizado um delineamento inteiramente casualizado e calculada a frequência de animais infectados pelos diferentes hematozoários. Para verificação de existência de diferença na positividade entre animais da área urbana e rural, idade e sexo, assim como entre a frequência dos diferentes hemoparasitos nas diferentes populações estudadas foi utilizado o teste da binomial para duas proporções, com uma significância de 5% utilizando o programa BIO ESTAT 4.0 (AYRES et al., 2005). RESULTADOS Foram registrados três gêneros de hemoparasitos, sendo a maior positividade observada para Hepatozoon sp. (24,00%). No total, analisando os cães da zona rural e urbana positivos para qualquer espécie de hemoparasitos, observou-se diferença significativa entre os positivos para Hepatozoon sp. e as outras duas espécies de hematozoários (p<0,05). A frequência de hemoparasitos em cães naturalmente infectados provenientes da zona rural e urbana do município de Abadia dos Dourados, MG, encontra-se na Tabela 1. Tabela 1. Frequência de hemoparasitos em cães naturalmente infectados da zona rural e urbana do município de Abadia dos Dourados, MG. Hemoparasitos Zona Rural (n = 150) Pos. Neg. Zona urbana (n = 100) Pos. Neg. Geral (n = 250) Pos. Neg. Hepatozoon sp. n % 52 98 34,67 Aa 65,33 08 92 8,00 Ab 92,00 60 190 24,00 A 76,00 Ehrlichia sp. n % 05 145 3,33 Ba 96,67 00 100 0,00 Aa 100,00 05 245 2,00 B 98,00 Babesia sp. n % 04 146 2,66 Ba 97,34 00 100 0,00 Aa 100,00 04 246 1,60 B 98,40 Pos. = Positivo, Neg. = negativo, n = número de animais ; (a, b) Proporções seguidas de letras minúsculas diferentes na linha, são estatisticamente diferentes pelo teste da binomial (p< 0,05); (A, B) Proporções seguidas de letras maiúsculas diferentes na coluna, são estatisticamente diferentes pelo teste da binomial (p< 0,05). Houve diferença significativa para Hepatozoon sp. entre os cães procedentes da zona rural (34,67%) e urbana (8,00%). Com relação a Ehrlichia sp. e Babesia sp. não detectou-se diferença entre as duas zonas estudadas. Comparando a frequência das diferentes espécies de hematozoários entre cães da zona rural, observou-se diferença para Hepatozoon sp. e as duas espécies, as quais apresentaram frequências estatisticamente iguais. Nos cães do perímetro urbano não foi detectado diferença significativa entre as três espécies de hemoparasitos, constatando que o Hepatozoon sp. ocorre mais frequentemente em cães da zona rural. Na área rural de Abadia dos Dourados cerca de 95% dos cães estudados estavam parasitados por carrapatos enquanto que na área urbana 53%. No perímetro urbano, os cães apresentaram melhor estado geral, uma vez que os proprietários se mostravam mais preocupados com a saúde de seus animais. A frequência de hemoparasitos em cães machos e fêmeas naturalmente infectados da zona rural e urbana do município de Abadia dos Dourados, MG, mostra-se na Tabela 2. Verificou-se diferença significativa para o Hepatozoon sp. entre machos (25,34%) e fêmeas (9,33%) procedentes da zona rural. Entre machos e fêmeas da zona urbana a estatística não mostrou diferença para nenhuma espécie de hemoparasitos. A frequência de cães naturalmente infectados por Hepatozoon sp. provenientes da zona rural e urbana do município de Abadia dos Dourados, MG, de acordo com a faixa etária, se encontra na Tabela 3. 895 Hemoparasitos em cães... SILVA, M. C. A. et al Biosci. J., Uberlandia, v. 30, supplement 2, p. 892-900, Oct./14 Tabela 2. Frequência de hemoparasitos em cães machos e fêmeas naturalmente infectados provenientes da zona rural e urbana do município de Abadia dos Dourados, MG. Hemoparasitos Zona Rural (n =150) Macho Fêmea Zona urbana (n = 100) Macho Fêmea Hepatozoon sp. 38 (25,34%) a 14 (9,33%) b 05 (5,00%) c 03 (3,00%) c Ehrlichia sp. 03 (2,00%) a 02 (1,33%) a 00 (0,00%) c 00(0,00%) c Babesia sp. 03 (2,00%) a 01 (0,66%) a 00 (0,00%) c 00(0,00%) c n = número de animais examinados; (a, b) Proporções seguidas de letras minúsculas diferentes na linha, são estatisticamente diferentes, comparando machos e fêmeas da zona rural pelo teste da binomial ( p< 0,05); (c, d) Proporções seguidas de letras minúsculas diferentes na linha, são estatisticamente diferentes, comparando machos e fêmeas da zona urbana pelo teste da binomial ( p< 0,05). Tabela 3. Frequência de cães naturalmente infectados por Hepatozoon sp. provenientes da zona rural e urbana do município de Abadia dos Dourados, MG, de acordo com a faixa etária. Faixa etária Zona Rural (n = 150) N % Zona urbana (n = 100) N % Geral (n = 250) N % < 1 ano 03 2,00 a 02 2,00 a 05 2,00 1 a 2 anos 19 12,66 a 04 4,00 b 23 9,20 3 a 4 anos 19 12,66 a 01 1,00 b 20 8,00 5 a 6 anos 11 7,33 a 01 1,00 b 12 4,80 Total 52 34,66 a 08 8,00 b 60 24,00 N = Número de animais positivos; n = número de animais examinados; (a, b) Proporções seguidas de letras minúsculas diferentes na linha, são estatisticamente diferentes pelo teste binomial ( p< 0,05). Considerando a faixa etária, observou-se que a frequência de cães positivos para Hepatozoon sp. da zona rural foi estatisticamente superior aos da zona urbana em todas as faixas etárias acima de um ano. DISCUSSÃO As prevalências podem variar para cada região estudada, pois vários fatores interferem como a própria região estudada, metodologia empregada, número de amostras analisadas. O encontro de 24,0% de cães neste estudo parasitados por Hepatozoon sp. foi inferior a 39,2% encontrado por O’Dwyer, Massard e Souza (2001), em 250 cães de áreas rurais do Rio de Janeiro parasitados por Hepatozoon canis, superior a 2,4% obtidos por Salgado (2006) estudando 177 cães de diferentes áreas de Campo Grande – MS, parasitados por Hepatozoon sp. e Mundim et al. (2008b) que encontraram 5,59% de cães parasitados em Anápolis- GO e 5,9% por O’Dwyer et al. (2006) em cães de rua no estado de São Paulo. Trabalhos relatando a infecção por Hepatozoon sp. em cães procedentes de áreas rurais demonstraram através da análise de esfregaços de sangue periférico, diferentes índices de prevalência, variando de 9,3% (RUBINI et al., 2008) e 39,2% (O’DWYER; MASSARD; SOUZA, 2001), sendo que nos cães da zona rural do presente estudo foi observado 34,67% de positividade. A maioria dos trabalhos relata a hepatozoonose em animais procedentes de áreas rurais o qual observa-se índices de prevalência elevados como os de O’Dwyer, Massard e Souza (2001), Rubini et al. (2008) e Spolidorio et al. (2009) que detectaram índices de 39,2; 53,3 e 58,7%, respectivamente. A maior frequência de cães positivos da zona rural neste estudo em comparação ao perímetro urbano, pode ser atribuído à maior locomação destes possibilitando maior contato com outros animais e com maior número de espécies veiculadoras do protozoário, além da provável infestação por carrapatos do meio rural, como o Amblyomma ovale, um reconhecido vetor de Hepatozoon no Brasil (FORLANO et al., 2005). No Brasil, a prevalência da infecção por Hepatozoon sp. varia em diferentes regiões e estudos demonstram que em áreas urbanas o protozoário se encontra em menor proporção 896 Hemoparasitos em cães... SILVA, M. C. A. et al Biosci. J., Uberlandia, v. 30, supplement 2, p. 892-900, Oct./14 quando comparada com áreas rurais (GOMES et al., 2010). Cães de áreas rurais se locomovem mais em diversos ambientes podendo ter contato com diferentes espécies de animais silvestres e domésticos, predispondo a infestações por várias espécies de carrapatos (PEREIRA et al., 2011), do que cães procedentes de áreas urbanas. No presente estudo, a frequência de animais parasitados pelo Hepatozoon sp. no perímetro urbano foi de 8,00%, próxima a de Gondim et al. (1998), O’Dwyer et al. (2004), O’Dwyer et al. (2006), Chiareli (2009) e Gomes et al. (2010), que estudaram cães procedentes de áreas urbanas em outras regiões do Brasil. A maior positividade entre os cães machos deste estudo corrobora com Gavazza, Bizzeti, Papini (2003) e Mundim et al. (2008a) que também detectaram a infecção significativamente maior em machos, mas contradiz outros pesquisadores ao relatarem que a infecção pode ocorrer independente do sexo (BEAUFILS; MARTIN-GRANELL, 1988; GOMES et al., 2010). O resultado do presente estudo pode estar relacionado com a maior exposição dos cães machos aos carrapatos vetores do protozoário, devido a hábitos comportamentais dos cães (MUNDIM et al., 2008a). Com relação a idade, a diferença observada na frequência de cães positivos para Hepatozoon sp. da zona rural pode ser atribuída ao fato de terem os animais da zona rural com idade superior a 12 meses maior contato com o vetor, uma vez que deslocam à distâncias maiores favorecendo a infestação por carrapatos. Embora alguns estudos relatam maior ocorrência em animais jovens (MUNDIM et al., 2008a; GOMES et al., 2010), segundo O’Dwyer, Massard e Souza (2001) a infecção pode ocorrer em cães de todas as idades. No entanto, o encontro de maior ocorrência em cães jovens por alguns pesquisadores é possivelmente devido se encontrarem na fase aguda da doença, período em que maior número de gametócitos pode ser detectado no sangue periférico. O encontro de 3,33% de cães da zona rural positivos para Ehrlichia sp. nos animais desse estudo foi próximo de 6,56%, 5,56% e 5,69% relatados por Medeiros e Lima (2004) em cães do município de Mossoró – RN, Mundim et al. (2008b) em cães de Anápolis –GO e Borin, Crivelenti e Ferreira (2009) em cães de Uberlândia – MG, respectivamente. O’Dwyer, Massard e Souza (2001) detectaram 4,8% para E. canis, enquanto Salgado (2006) encontrou 60,48% de positividade. O encontro de 1,25% de cães infectados por Babesia sp. foi próximo ao índice de 2,0% observado por Soares et al. (2006) em Juiz de Fora – MG e a 1,47% encontrado por Miranda et al. (2008) em cães de Campos de Goytacazes – RJ. No entanto, foi inferior aos achados de 26,92% por Rodrigues, D’Agosto e Daemon (2002) em Juiz de Fora – MG; 6,9% e 9,0% por Carlos et al. (2006) em Ilhéus e Itabuna – BA; 46,0% por Massard et al. (2006) no Rio de Janeiro – RJ e 33,95% por Ungar de Sá et al. (2007) em Salvador e Região Metropolitana, Bahia. O’Dwyer, Massard e Souza (2001) encontraram 5,2% de cães positivos para B. canis e Salgado (2006) 10,78%. Ressalta-se tratar do primeiro estudo sobre hemoparasitos e do primeiro diagnóstico de Hepatozoon sp. em cães no município de Abadia dos Dourados, Minas Gerais. Os resultados obtidos demonstram que se faz necessário um maior acompanhamento veterinário, com realização de campanhas de orientação aos proprietários, juntamente com a prática de exames e tratamentos periódicos. CONCLUSÕES A frequência de Hepatozoon sp. é relevante na população canina do município de Abadia dos Dourados, ocorrendo em todas as faixas etárias, predominando nos cães da zona rural e entre os machos. Hepatozoon sp. ocorreu em maior frequência comparada com Ehrlichia sp. e Babesia sp. AGRADECIMENTOS Ao Centro de Controle de Zoonoses de Abadia dos Dourados e sua equipe, aos técnicos do Laboratório Clínico do Hospital Veterinário da Universidade Federal de Uberlândia, que não mediram esforços para nos auxiliar na execução deste estudo. ABSTRACT: Hemoparasites are among the most common diseases that affect dogs, having ticks as vector, which hinders the control of these diseases especially in rural areas. The blood parasites more frequently found in dogs in Brazil are Ehrlichia sp., Hepatozoon sp. and Babesia sp. The objective of this study was to determine the frequency of blood parasites in dogs from the urban and rural municipality of Abadia dos Dourados, Minas Gerais, through research in blood smears, comparing rates between rural and urban areas. A sample of 250 dogs, 150 from rural and 100 urban 897 Hemoparasitos em cães... SILVA, M. C. A. et al Biosci. J., Uberlandia, v. 30, supplement 2, p. 892-900, Oct./14 perimeter of the city. It was made from each dog, smears of blood collected from capillaries of the inner edge of the ear, which were stained with May-Grünwald Giemsa and analyzed under optical microscope. The infection by Hepatozoon sp. was observed in 60 (24.0%) the dogs, Ehrlichia sp. in five (2.0%) by Ehrlichia sp. and Babesia sp. in four (1.6%).The frequency of dogs parasitized by Hepatozoon sp. was significantly higher than the other hematozoa, occurring in all age groups, predominantly in dogs from rural areas and among males. KEY WORDS: Frequency. Canis familiaris. Hepatozoon sp. Ehrlichia sp. Babesia sp. REFERÊNCIAS AGUIAR D. M.; RIBEIRO M. G.; SILVA W. B.; JÚNIOR J. G. D.; MEGID J.; PAES A. C. Hepatozoonose canina: achados clínico-epidemiológicos em três casos. Arquivo Brasileiro de Medicina Veterinária e Zootecnia, Belo Horizonte, v. 56, n. 3, p. 411-413, 2004. AGUIAR D. M.; SAITO B. T.; HAGIWARA M. K.; MACHADO R. 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