Bioscienc Journal V.20 N.1 2004 ��������� � ���� ��� � �! "�2!���8����: (9=>: �9;: "9 ;<>B ��� �*� �� � �������� � ���-���� � ��� ������� �� �6� �-��� ���� � �������� ������ ��� ��������� �� ��111�-���� � ��� ������� �� �6� �-��� ���� � �������� ������ ��� ��������� �� ��111�-���� � ��� ������� �� �6� �-��� ���� � �������� ������ ��� �����������-�� ���� ������� 5�� ��� �� �5� � ��B��� ���� � ������2;��� ��� ��:� � ��� �� �6� �-���� � ��� ������� �� �6� �-��� ���� � �������� ������ ��� �*� �� � �����.� �� �;��-���� � ��� ������� �� �6� �-��� ���� � �������� ������ ��� ��!��� ���"�'#%#&%#& ����� "�(9%#D%#& ������ �� ������� � �� ����� �� ���� ������� ���� �� ����� ����� ���� �����$���� �� ��������� �� ����� ����� ����� � ������ ���������� ������ ������� �� ��� ����� ���� �� ��� ����� ������������� ��������� -������ -�7� [� /+�����+�"� 1�>��� J�6��� ������>��� 1���+�"� !� [ ��� .� ���� ��� ���`!+�"���������� !� J .�Y�"� ����� ��6���� ��� �-.��"�3�������,������������� � �-.� �� #/+J # �M"�������� 1�� ��������� ��� � �!5���(� �� �"������� � � ����� �� "��������%O� �� �� �� -���� "��� ��� �� ���� �� �� ������� � �6��: ���������� ��1������ ���������� �� ���6 ��� �!���� �� ���(� �� +����� ����������9 N� �� ��� ��������� ��� � �� 1��������� 1���� ��������� � ���6 ��� ����� G)H: �� ���!���� G�H � �6����� (� ������ G0H9 -� 1��� �� ����� �� ��"���� �� ���6 ��� �� ���!����: � �� �� 1�� �� "�� ��� �� �� ��� ���� �(� 9 � �� �!������� : "��� � ���6 ��� 0 � ): 1���� �� AIa � H: � ��� "������ � �"������� �������� �� ���6 ��� "��� "��������%O� �� �� �� �� �������� �� ���� G��#N�� �� ��9: ;DDIH9 # �� ��"���� �� �� �� -���� �!���� "�� /���� �� ��9 G=>>>H 1�� ��"�� ������ "��� ��M� �� �� �!������� (���C ����: �� "����(������: � ���� � "���� �� ����� ��� ��� G= �H � ��P G@ �H �� (�� C"���O� �� DI:>a � A>:>a "��� � ���6 ��� (� ������ �� ���(� �� +� ���������� G0H � �� ;>>:>a � D=:>a "��� � ����� G)H\ � "��� � "���1������� (������� �� D<:Fa � ;>>:>a "��� 0 � �� DA:>a G= � � @ �H "��� )9 N� "��������%O� �� �� �� -���� "��� � ��� �� ���� �� �� ������� � �6��: /���� �� ��9 G=>>>H �����������: �� C "����(������: ���� ������� ���������%[� �� �����%[� : = z K�� G���6 ���H: ;JB>> G ���H � ;J;>>> G���5� ���H �� �� ��� � ���6 ��� �� �6����� (� ������ �� +� ���������� � F z K�� G���6 ���H: ;J;>> G ���H � ;J=>9>>> G���5� ���H �� �� ��� � ���6 ��� ����� �� �� �� "��� ���9 N� �� �� �: � "���� �� ����� 1�� �� >:AA G@ �H "��� � 0\ >:BDD G= �H � >:FFA G@ �H "��� � )9 # ���6 ��� �� ���(� �� +� ���������� ��(������ �� ��"���� �� ��������� �"����� �� �� ���(� �� +� � ���� �� �� �� -����: "�����"������� ������ _ �� �!�������: � ���� /���� �� ��9G=>>>H9 -��������� � ���6 ��� �� ��!� � "��� ��� �� ������ �� ������ ����+3#MN+ � �� ������� � ��� ��� "��� +����� � ���� �1��� �6�� � �������������� � �� ������: ���� ����� �� ���� "��!���� �� �'�� "'!���� �� (7��� "�6 � ���� � "�!��C �� � � 1���� �� �� ���� 1�(������ � �� ���� �� O� G�- ��2&� �� ���: ;DDIH9 ���� � �6�� O� � �� "������ ���������7��� : � "��(��P���� �� �� ������� � �6�� � �� ��������� ���1�7(�� �� ���� �� ���� �� O� ���(� G���2))# �� ��9: ;DDA�H9 # �� �� ������� ��� �P� ���� ��� �� ������ � "�%� �� ��� �� ���� �� �� ������� � ������ � ��� ������������ �� �6��: ���� ���������(� �� ����� : ��(���� ���� "���������� "��� � � ������ �� !�� �� ��"����9 +� ���������� � �� �� ����� ����� �� ��"� � �� -���"�: ��5� 1���� ���(7��� G����������� � ���� ����H ���������� �� "������ ������� G.,--��N: ;DI=H: ��� ��� ��"�� ��� �� "��"��� �� ���6 ��� "��� ��� �� ���� �� �� ������� �9 � �! �����%O� �� ���6 ��� �� ���(� �� +� � ���� "��� �� +� ���������� 1�� ��1��%��� "�� �������� �� ��� G;DD>H �� (���1���� �������%� �� �� ��"���� �� ��!� �� �� �� -���� "��� �� ������� � ������: ����(� �� ��M� �� ��C �!������� � �� � "���1�������9 #���� (���� �� �� ��"�� � �� ���6 ��� �� +� ���������� � �7 ����������� ��� � 1�C �������� �� �������%O� �� �� ������� �� ��!��������9 ��� � �! "�2!���8����: (9=>: �9;: "9 ;A;C;AI: &��9K�"�9 =>>B �7'��6�� ��� ���<6��� � ��� ���%� /+�����+"� - � - � ��� �� ��( �D��J �� ��>����A�������'��'����������<6����������C� � D # �� ������� 6��� �� 1���� �� �������� g�(���� ��h "�� ���1�����%O� � "� ����������� ��������� �� ���9 �� "� �!���� 1�� ���������� ���%O� ����� >:;F� �� "��"��%O� �� ;>a9 � �� ���� �!���� 1�� ���� �������� �� ���� ��������� �� ������ ��"� /�����: �� !���� �� ���: ������� ;> ������ � ������1� ��� _ ;<9B>> M : ������� @> ������ : _ Br�9 # �!��������� 1�� �"����� �� ������C ��: ��� �������� � ���6 ���: ��� 1�� � ������ � ?=>r� 9 D� �J �� �� >����A���� ��� '��'���� ��� ���<6���� �� 7�7������ C/D �� ���C � � �� �� "����������� �� "��"��� �� ���6 ��� ����� G) � H: "������� �� �������� 1���� �!���� �� "��"��� �� ���6 ��� (� ������ G0 � H9 �D��J �� ��>����A�������'��'������ ����<6��� �������� '���� >���� �7� C. �� �� � � D C�� �� "��"��� �� ��������� G0 � � ) � H: "���� �!������ : �� 1����: �� ����� �� � => $��� � =>9>>> �����: ������� B ����� �� @> � ���� 9 �D� 3� �6�7� ��� '����<�� � �� � �� �� "����6�� 1�� 1���� ���1���� ������ "���������� "�� ��$�� �� ��9 G;DF;H9 *D� H� � � ��� '������A�:;�� ��� �� ��� �-� �� �������� * �D� �� ��� � '����7����� .���� ��������� �� �� ��� ���� � ���6 ��� "��"�C ���� � �� �� ��� C�������� �� ��������� �� ��� ��� ��9 /��� ������� -���� �������: ��������C � "���� �� "���� ������ 1���� ����� G�#,N�N�H: ��� 1���� �� �!���C ���� ��� � ���6 ��� ����6�� �� ���%O� ���"����� ���!�����C!����!����� >:F� "+ D:I ������� ;=���� � B��: ���������� "�� ����!�%O� _ ���"������� ��!����� �����C �� ��� ����9 �"� ��(� �� �� ���%O� ����� �������� >:>Fa �� �$���C=>: 1�� ��������� � !������� �� 6��� �����(� G/�� "+ <:B: ����� �� ������: ������ C N� ���: � FaH "�� ; ���� � @<��9 N�(� ��(� �� 1���� ��������� � � ��� ��� 1���� ����6�� �� /�� "+ <:B: ����� �� ������ � ;a � � "���� ����!��� "�� @> ������ � @<��9 �"� ��(� �� : 1�� ���������� � ���5� ���: ����C� � �� �6�� ������� ��� "���M��� � �C FI<> G�� �� �������� ��: �� ���� : �#: 2��H � ��"���C �� � "����������� �� ����!�%O� � ��(� ��9 � ���%O� 1�� ��(����� ��� ���%O� �� #/� G>:;aH � + � # �� >:>>@a �� ���"O� �������C1� 1��� >:=� "+ F:>: ������� �� "��6�C �� �� ����!�%O� �� F ������ 9 � ���%O� 1�� !�������� ��� + � �# � BN9 � ������� 1���� ��������� �� 1�(��7(�� �� �� ��"�� � �� ��� �� ���� �� �� ������� � �6��9 ������ �� ��� ���������(� "�7���� � "� �(������� ��� �1������� �� ��� �� ���� �� �� ������� � �6�� ����(� �� �� �� -����: 1����O� 1�(������� � �%[� �� �'�� "'!���� � �� ������� ������: �� ������ ��� � �� � ��� �� ���� �� �� �����P���� ��O� �"�������� � "����O� ������� ������ ������������� �� ��������: "�����"������� �� � ���� ������ ���� �� ����%O�: �!��� � ������������%O� �� �����9 +� '�� ����� ��������� �'�� ����>� �7�� ��B���%� 8 C0���1���%O� �� ��"������!������� �� �����%[� ���C �� �� "��������%O� �� �� �� -����: ����J ���������C %O� �� ���6 ��� : ��� � ���5� ��� � ��"� �� �! �8���� !����������9 C���"���%O� �� ��1������ ���������� �� ���6 ��� �� ���(� �� +� ���������� �� �� �� -����J (� ������: �� ���!���� � �����9 /������-� �� /P�+3+ �D� �7� ���6�7� C ��� D .���� ��������� ;B ��� ��� �� ��� �� �6�� ��� �� ������� � ���"��(��� ����(� �� �M��� � ���� ���� G�������"����� ���H: I> ��� ��� �� ��� �� ���(� � FA ��� ��� �� ��� �� �6�� "�������� �� ����� "����� �C � : ����J �������� � GAH: ���������������� � GDH: � ������� � G=:=�� �� ����%O� ������ )��"����� .� 1����� G/��H9 �"� D> ��� : � ������ ��� ������� �� (����� �!������� 1���� ����1����� � � "��� ��� 1���� �������� "�� ��(�C �� �� ��(����� "���������9 # �� ������� 1���� ��(��� �� /��: ���� ��������� ������ �� 1� � �� �� �����C %O� �� �����1���%O� � ��������� �� "��"��� �� ���6 ��� : ���� �� ����� � � ��� 1��'���� �� � ���<6��� �D��J �� ��>����A�������'��'����������<6����%� � >��� C. � D # �� ������� �!���� 1���� ������1� ��� � @F9>>> M : ������� @>������ : _ Br� � � �!��������� G���6 ���H �"����� � "� ����������� � ������ � ?=>r�9 # �������� ���!�� 1�� �� ������ �� "��"��� �� ���6 ��� �� ���!����9 �7'��6�� ��� ���<6��� � ��� ���%� /+�����+"� - � - � ��� �� ��� � �! "�2!���8����: (9=>: �9;: "9 ;A;C;AI: &��9K�"�9 =>>B ��K 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 5 10 15 20 30 Concentração de antígeno 50S 100S 200S 400S "� ���(� : �� ���(� � �� ����� "����� �� : ���1���� �� ��������� �� ��� ��� ��: ��� ����C� ��� � ���6 ��� (� ������ G0 � H � ����� G) � H: �O� ������� "��� ����� ��: �� ������� �����%[� �� "��������%O�: ��1����� �� ���"� �M"��������� ��������9 0� ���� � ��1���%O� �� ���"��������� �� ��� C ��������: ���� "� ���(� �� �� ���(� �� ������ �� "��������%O� "��"� �� �� "������� 1� �: 1���� ����������� � "���� �� �����: ��� 1���� ��"�� ������ "��� ��� �� �# ����� �!���� �� ��7�� � "��(�� �� �C �� C�������� �� ���(� ��� = � �� ��� @ � G�� (�� C "���O�H9 � "����� �� ���� �!���� : 1���� ����������� � ��M� �� �� �!�������: � "���1�������: (����� "������(� "� ���(� � �� ���(�9 �� #-��3+ � �� 3� ,# N+ ������� �� ������ 1���� �!���� ��� � � � �� ���6 ��� �� �6����� (� ������ _ ���������%O� �� @z K�� � �� ����� � =>z K�� G.� ��� ; � =H9 �"� �(����%O� "���������: "�� ���������� �� �� �� -����: �! ��(��C � ��� � ����� O� �� ���������� ��� ����� �� �O� ��1�������� �� �� ��"���� �� ���6 ��� G�� ������ �O� �"�� ������ H9 � "�����1��Q����� GN������ =>>; ��"� ;>;FB>: U� ����H � BD=��9 � ���������� �� ��� ���� �"������ _ "���� � �����(� �� ;>>z�: �M���� "��� � ���%O� !����������: =>>z�9 # "��8����� �(������ �� "��������%O� 1����J ��"� � ���������%O� �� ���6 ��� G@: F: I: ;>: ;F: => � @> z K��H: �����%[� �� ��� G;JF>: ;J;>>: ;J=>> � ;JB>>H � ���5� ��� ����C� � �� �6��: ������� ��� "���M��� � G�� �� �CFI<>H: G;JF>>: ;J;9>>>: ;JF9>>>: ;J;>9>>>: ;J=>9>>> � ;J B>9>>>H: �! C �8���� !���������� �� 6��� �����(� �� "���� G����� �� "� �� ������: ������� � ��!�����H9 - �� "��8����� 1�C ��� �(������ � "����� �� ��� ����� �"���� G�#H �!���� �� �� ������ �� �� �� �����8��� �� ��� ��� C�������� "�C ���(� � ������ �� ���(� 9 # �������� �� ���������%O� �� �� ��"���� �� "��8����� 1�� � ��"������ �� ��1����%� �� �# ����� ��� "� ���(� � �� ���(� : � ���� 1�� ��������� "��� ��(� O� �� ����� �� �# �� ��� "� ���(� "��� "���� �� ����� ��� = � G�� (��C"���O�H: ��� �������� � ������ ��� �� ���(� �� ���� 9 * �D� H� �� ?���� � ���������%O� �� �� ��"���� 1���� �� �� �� -���� 1�� 1���� ����(� �� �� ��� �� ���� � ��� C�������� 0 2 4 6 8 10 3 6 10 Concentração de antígeno 50S 100S 200S 400S H�6>���� ��"������ �� ��1����%� ����� �# �� ��� �� �6�� "� ���(� � �� ���(� "��� �� ������� �: "�� ���������%O� �� ���6 ��� (� ������ � �����%O� G;K999H �� ��� G�H � � "� �� �� � �� � �1 �� �� %� H�6>���� ��"������ �� ��1����%� ����� �# �� ��� �� �6�� "� ���(� � �� ���(� "��� �� ������� �: "�� ���������%O� �� ���6 ��� ����� � �����%O� G;K999H �� ��� G�H � � "� �� �� � �� � �1 �� �� %� ��� � �! "�2!���8����: (9=>: �9;: "9 ;A;C;AI: &��9K�"�9 =>>B �7'��6�� ��� ���<6��� � ��� ���%� /+�����+"� - � - � ��� �� �(& ���"������ � ��1������ ��"� �� ���6 ��� ��� �� �� ���������%O�: (���1����C � ��� � ���6 ��� �� ���!���� �"�� ����� �� ������ �� 1�(��7(�� �� ����%O� �� ����� 9 ������� �� ������ 1���� �!���� ��� � �����%[� �� ���5� ��� �� ;J;9>>> "��� � ���6 ��� �� �6����� (� ������ � �� ;J;>9>>> "��� � ����� G.� ��� @ � BH9 ��(�C � � �������� ���: �"� �� �� ��"������ �� ��1����%� ����� ��� "� ���(� � �� ���(� ����������� �"� � � � �� ���5� ��� ;J=>9>>> "��� � ���6 ��� (� ������: ����� ��� ������ �� ����%O� _ �!���� ��� � ���5� ��� ;J;9>>>: � �� '����� 1�� "��1����� "�� ��� "��"��������� �� (���� ��� ���� �� �# �� ���%[� : � ��� ������� � ���C �� �� ���� �� �7����� 9 ��� �������� � ��(�� � �� ��� ��������� ��� ��1������ �����%[� �� ���: � �����%O� ;J;>> 1�� � "��1����� "�� �"�� �����: �� ������� �� (��� : ��� ��"������ �� ��1����%� ����� ��� � ����� 9 �"� �� �� �����%[� ;J=>> � ;JB>> ����� �"�� ������ ����� ��"������ �� �� ��� ��� �[� : ����� ��� ������C � ��� � �����%O� ;J;>> "��"������� ����� ������ �� ���� �� �7����� : �� ��1����� ��� �[� : "�� � �� (����� �� �# 1���� ������ ��� � �� ����� G.� ��� ;: =: @ � BH9 # ����� �� "� 1�� � ������ �! �8���� !����������: � ���� "��� �������: ����������� ��� /���� �� ��9 G=>>>H9 0 2 4 6 8 10 500 1000 5000 20000 Diluição de conjugado 50S 100S 200S 400S H�6>���� ��"������ �� ��1����%� ����� �# �� ��� �� �6�� "� ���(� � �� ���(� "��� �� ������� �: "�� �����%[� G;K999H �� ���5� ��� � ��� G�H: "��� � ���6 ��� (� ������ � � "� �� �� � �� � �1 �� �� %� 0 1 2 3 4 5 6 5000 10000 20000 40000 Diluição de conjugado 50S 100S 200S 400S H�6>���* ��"������ �� ��1����%� ����� �# �� ��� �� �6�� "� ���(� � �� ���(� "��� �� ������� �: "�� �����%[� G;K999H �� ���5� ��� � ��� G�H: "��� � ���6 ��� ����� # �� ������ �� �� ��� 1���� �� "��������%O� ��"�� ���� ���� � ��� C��������: !�� ���� � ��M� �� �� ��"���� �� �� �� -���� � �O� ��"�� ������ "��� ��!��� ;9 #������ �"��� ��� ���%O� ��� "��61���: ��� ��� �� ���(�: ��� � �� ���� �� �� ���6 ��� (� ������9 ������ _ ���%[� ������� : ��� ��������� ��� � ���6 ��� (� ������: �"��� �� ��� "��������� �� ������ ��� � ������� � G��� H � ��� � ���6 ��� ����� �� ��� �� � ������� � G��P H: �������� � G��H � ���������������� � G��H9 -� 1��� �� �� �����1��P���� �� �� ��"���� �� �� �� -����: � ���� O� �!�� � ��"�� � �� = � �� @ � ���� �������� �� "���� �� ����� ��"�����7 �� 1��������� �� "� ��� �: @ � G����� � "���1�������H � ��� �"��"����� "��� 1�� �� ��� �� ���� � = � G����� �� �!�������H "��� ���� ��9 N� �� "� ��� �: � �"%O� "�� = � �"�� ����� ��M� �� �� ��"���� ��� ���(������� : "�� ��(������ �� �!������� �M"�� �(������ ����� ��������� ����� "���� � � "���1�������9 ���"������ � ��� ���6 ��� G(� ������ � �����H: �7'��6�� ��� ���<6��� � ��� ���%� /+�����+"� - � - � ��� �� ��� � �! "�2!���8����: (9=>: �9;: "9 ;A;C;AI: &��9K�"�9 =>>B �(� (���1������C � �� ��"���� ��������� : ��!��� � ���6 ��� (� ������ ����� �"�� ������ ��M� �"������ �� �� �!������� � �� (���� "������(� "� ���(�9 � !�!��� ��1�� G������ �� ��9: ;DDI: �� ���5� �� ��9: ;DDI: /���� �� ��9: =>>>H ��� �� ����� ����� (����%O� �� (����� �� "���� �� ����� �� �� �� -����: ��1��������� � � ��!���������� �� (����� �� 1��M� ��� ��������7(�� "��� ��"�� ����� �� "���� �� ����� �������9 - �� (����C %[� "������ � ��� ����������� ��� � 1���� �� "������C ��%O� � �� ��"������!������� �� "����������� ��"�� �C �� �� ������� �� �� �� -���� "��� � ��� �� ���� �� �� ������� � �6��: �!������: ������ _ ���������%[� � ��"� �� ��� ���� ��������� �� � � �� �9 � ��"������!������� �� �� ������ �� �� "� ��� � 1�� ��� 1������ �� ����%O� �� �!���� "�� /���� �� ��9 G=>>>H: �� ������ �� ���� ����� �� ��M� �� �� �!������� � (���� "������(� "� ���(�: �����������: "����: ��� � ���� ��M� �� � "���1������� � (���� "������(� �� ���(�9 �� ���,�J )�� �M"������� $� "��1����� �� ��� -���� �� � �������������� 1�� ��� ��� �� � �1 $��� �� ������� � : �� ����� �� (���1� ��� ��"������!����� �1 ��� ����� �������������� ����� : � �� ��11����� ���� �� ��"� �!������ 1��� +����� ���������� ���(��9 )�� � �� $� �����"�� ��� $��� ��� ����� G)H: ���!���� G�H ��� (� ������ ������ G0H ���� �� 9 )�� ���!���� ���� �� $� �M������ �� ��� ���� �(� � �� : !���� � �1 ��� "��� "��1�������9 )�� �� ���(���� ���� 1�� ��� 0 ��� ) ���� �� � �� $��� AIa ��� K;B ,��%O� N� ���(�K)���� ;;FK;;A ;;IK;;A ;;@K;;A ;;IK;;A ,��%O� ��� "��61��� ; > > > ,��%O� ������� = = F = ��� �!������� GaH AI IB A= ID A@ 0���� /������(� ? GaH DA DI D< D< ,+�,-# N+ ��� �� �!������� �� AIa "��� � ���6 ��� (� ������ � �� : �9;: "9 ;A;C;AI: &��9K�"�9 =>>B �7'��6�� ��� ���<6��� � ��� ���%� /+�����+"� - � - � ��� �� �(� .,--��N: ,9 �9 ������ �� ��� !���� � �1 +����� ����������9 ,�� �! �Y���� (9 B>: "9 DIDCDD>: ;DI=9 ��,,���-: �9\ �#)-�#: &9\ �#N)#Y�: ,9 �9\ /��-N���: �9\ /������: �9\ �#0- -N�3Y: )9\ ��� �9 �9\ ���2))#: -9 ��������� ��� � �1 ����� �� ������� � �� ����!�� "���� 1����9 ���� �� 1��� ������ +����� ���������� �� ������� �11����(��� �! ������ ��� � 1��� "������ +����� � ����9 �� � �1����� �-�� �/��9 (9 ;;B: "9 D=ICD=A: ;DD>9 �#S,Y: S9 #9\ ,#�-N�,#2�+: N9 &9\ .�,,: �9 �9\ ,�N����: ,9 &9 /������ ��� ������� $��� ��� .���� "����� ��� ���9 ! ����� �,��79 (9 ;D@: "9 =IFC=��9: �O� /����: (9 B=: �9 =: "9 <;C>>9 ���2))#: -9\ .,��#�#: �9\ ),2-��: �9\ �-�2�: �9\ �#N)#Y�: ,9 �9\ ��� : �9 �9\ �#0- -N�3Y: )9\ �#�-��: �9\ )�/��: �9\ ��,,���-: �9 �� ������� � (������J ��� "�������� �������� $��� +� � ���� ���� �� � ��� � �M"��������� ������ +� ���������� �� ������� � 9 1��� �����77>���9: (9 ;=: "9 IA9 ���2))#: -9\ +-,N�N�- : �9\ ��,���: �9\ �- ��2&�: �9 �9\ 0�����#�#�: �9 N9 �9\ ,#��,)-: �9 .9\ /�,3+#2�-: �9\ +�,,��#N: �9 ��� �� � �1 "������ �� ������� � J � ���"�����(� ���� �1 ����� ���� �� � 1�� ��������� �1 ���������� ����!��� ��� (��!�� "��� ��� 9 .�� �1��� ����9: �� ������: (9