vol 38 no 2-2005 64 Perbedaan daya hambat terhadap Streptococcus mutans dari beberapa pasta gigi yang mengandung herbal (The difference of inhibition zones toward Streptococcus mutans among several herbal toothpaste) Rini Pratiwi Bagian Ilmu Kesehatan Gigi Masyarakat Fakultas Kedokteran Gigi Universitas Hasanuddin Makassar – Indonesia ABSTRACT Prevention of dental caries and periodontal disease with health promotion has been the main goal of Dentistry, since the dental plaque is a common and predominating factor leading to loss of teeth both caused by both dental caries and periodontal disease. Most devices used for plaque removal and periodontal care are based on mechanical action, including toothbrushes, interdentally brushes and oral irrigators. Today, plaque control is facilitated by an increasing variety of active agents based on either natural ingredients or synthetic product. Alternative materials based on essential oil and plant extracts are therefore of particular interest. The aim of the present study was to investigate the different of zone inhibition of Streptococcus mutans of herbal toothpastes. Samples of the subjects were 4 types of herbal toothpastes and 1 herbal toothpaste as control. For inhibition zone trial toward Streptococcus mutans, agar diffusion method was used and the interpretation was done by measuring the widest inhibition zone. The result of the study indicated a statistical significance different on inhibition zone among the 5th toothpastes, but toothpaste containing siwak was the widest inhibition zone. Key words: zone inhibits, streptococcus mutans, herbal toothpaste Korespondensi (correspondence): Rini Pratiwi, Bagian Ilmu Kesehatan Gigi Masyarakat, Fakultas Kedokteran Gigi Universitas Hasanuddin. Jln. Perintis Kemerdekaan Makassar, Indonesia. PENDAHULUAN Karies adalah suatu penyakit yang disebabkan oleh adanya interaksi antara bakteri plak, diet, dan gigi. Tidak diragukan lagi bahwa tanpa adanya plak, maka tidak akan timbul karies. Penelitian klasik Keyes tahun 1960 dan Fitzsgerald and Keyes tahun 1960 pada binatang bebas kuman memperlihatkan bahwa plak yang didominasi oleh kuman Streptococcus mutans dan Lactobacillus menyebabkan terbentuknya karies.1 S. mutans dan Lactobasillus merupakan kuman yang kariogenik karena mampu segera membentuk asam dari karbohidrat yang dapat diragikan. Kuman tersebut dapat tumbuh subur dalam suasana asam dan dapat menempel pada permukaan gigi karena kemampuannya membuat polisakarida ekstra sel. Polisakarida ekstra sel ini terutama terdiri dari polimer glukosa yang menyebabkan matriks plak mempunyai konsistensi seperti gelatin, akibatnya bakteri terbantu untuk melekat pada gigi serta saling melekat satu sama lain. Plak makin lama makin tebal, sehingga akan menghambat fungsi saliva untuk melakukan aktivitas antibakterinya. Banyak yang dapat dilakukan untuk mencegah karies, dengan mengetahui penyebabnya merupakan hal penting agar mengerti cara melakukan pencegahannya. 1 Pencegahan karies dan penyakit periodontal dengan melakukan peningkatan kesehatan gigi telah menjadi tujuan utama dalam dunia kedokteran gigi, sejak diketahui plak gigi merupakan faktor yang mendominasi penyebab hilangnya gigi oleh karena karies dan penyakit periodontal.2 Salah satu cara pencegahan karies adalah mengusahakan agar pembentukan plak pada permukaan gigi dapat dibatasi baik dengan cara mencegah pembentukannya atau dengan pembersihan plak secara teratur. Pengendalian plak dapat dilakukan dengan cara pembersihan plak secara mekanis dan kemungkinan penggunaan bahan anti kuman terutama untuk menekan S. mutans. Menyikat gigi membantu kontrol plak dan merupakan langkah awal untuk mengontrol karies dan penyakit periodontal baik untuk individu maupun populasi.1,2 Saat ini kontrol plak dilengkapi dengan penambahan jenis bahan aktif yang mengandung bahan dasar alami ataupun bahan sintetik sebagai bahan anti kuman. Bahan anti kuman tersebut tersedia dalam bentuk larutan kumur dan pasta gigi.3 Pada masa lalu, pasta gigi yang digunakan bersama sikat gigi hanya bersifat sebagai alat kosmetik. Tetapi dalam tahun terakhir ini banyak dibuat pasta gigi yang mempunyai efek untuk mengobati penyakit mulut dan mencegah karies gigi, sehingga sukar dibedakan dengan jelas antara pasta yang berefek kosmetik dan yang berefek 65Pratiwi: Perbedaan daya hambat terhadap Streptococcus mutans terapi. Bahan anti kuman yang umum digunakan untuk kontrol plak diantaranya adalah fenol, hexetidine, fluor dan chlorhexidine. Chlorhexidine merupakan salah satu formula yang paling efektif untuk mengontrol plak, tetapi penggunaannya dalam jangka waktu lama dapat menimbulkan efek merugikan. Oleh karena itu bahan alternatif dari bahan minyak esensial dan ekstrak tumbuh- tumbuhan (herbal) merupakan hal yang menarik untuk dijadikan pilihan sebagai bahan anti kuman dalam pasta gigi.3 Meluasnya pemakaian pasta gigi adalah karena secara komersil mudah didapatkan dan akhir-akhir ini ketertarikan akan produk dengan kandungan dasar dari bahan alami telah meningkat. Di pasaran kini banyak beredar pasta gigi dengan kandungan bahan herbal antara lain: Aloe vera, Eucalyptus, siwak, dan daun sirih. Pemakaian Aloe vera di bidang kedokteran gigi telah dilaporkan oleh seorang dokter gigi di Chicago yaitu Melnick (1982), yang menggunakannya sebagai bahan pasta gigi untuk membantu penyembuhan pasien dengan radang gusi dan mengurangi pewarnaan akibat rokok.4 Siwak sangat umum digunakan di Timur Tengah dan diketahui memiliki efek antiplak dan khasiat farmakologis lainnya. Beberapa peneliti melaporkan adanya efek antibakteri dari siwak terhadap bakteri kariogenik dan patogen periodontal khususnya spesies bakteriodes serta menghambat pembentukan plak. Di Zimbabwe ditemukan bahwa anak-anak yang menggunakan siwak untuk pembersihan gigi mereka mempunyai lesi karies yang lebih sedikit dibandingkan dengan anak yang menyikat gigi mereka dengan sikat gigi konvensional dengan pasta.5 Di Sudan, Emsile melaporkan bahwa terdapat karies yang lebih sedikit pada pengguna siwak bila dibandingkan dengan pengguna sikat gigi.5 Daun sirih sudah dikenal oleh masyarakat Indonesia sejak lama, yaitu sebagai bahan untuk menginang dengan keyakinan bahwa daun sirih dapat menguatkan gigi, menghentikan perdarahan gusi dan sebagai obat kumur.6 Berdasarkan uraian yang telah dikemukakan, maka perlu diketahui perbedaan daya hambat terhadap S. mutans dari beberapa pasta gigi yang mengandung herbal. Tujuan dari penelitian ini adalah untuk mengetahui perbedaan daya hambat terhadap S. mutans dari beberapa pasta gigi yang mengandung herbal. Manfaat penelitian ini adalah untuk memberi alternatif pilihan pasta gigi yang mengandung herbal kepada masyarakat penggunanya. BAHAN DAN METODE Jenis penelitian adalah ekperimen laboratoris yang dilakukan di laboratorium Mikrobiologi Fakultas Kedokteran Universitas Hasanuddin Makassar. Sampel adalah 4 pasta gigi yang mengandung herbal dan 1 pasta gigi non herbal sebagai kontrol. Pasta tersebut adalah: 1) pasta gigi herbal A, mengandung Sodiummono fluorfosfat, bahan herbal eucalyptus, clove dan tea tree oil; 2) pasta gigi herbal B, mengandung bahan aktif Kalsium gliserofosfat, Sodiummono fluorfosfat dan Triclosan, Aloe vera dan daun sirih; 3) pasta gigi herbal C, mengandung Siwak; 4) pasta gigi herbal D, mengandung ekstrak daun sirih dan fluoride; 5) pasta gigi E mengandung bahan aktif Sodium fluoride dan Triclosan. Jalannya penelitian: a) pembuatan Medium Nutrien Agar (NA) sebanyak 200 ml, 0,6 gr Beef extract + 1 gr Pepton + 3 gr Agar dimasukkan dalam erlenmeyer dan cukupkan volumenya dengan aquades 200 ml, kemudian dimasak dalam air mendidih selama 15 menit, lalu disterilkan dalam autoclave; b) pembuatan Medium Glukosa Nutrien Agar (GNA) sebanyak 300 ml : 1,5 gr Beef extract + 3 gr pepton + 3 gr agar dimasukkan dalam erlenmeyer. Cukupkan volumenya dengan aquades hingga 250 ml, masak selama 15 menit lalu disterilkan. Ambil glukosa sebanyak 10 gr dilarutkan dengan 50 ml aquades steril. Keluarkan campuran dan dimasak kembali selama 15 menit lalu masukkan glukosa ke dalam campuran, dan siap digunakan; c) peremajaan isolat S. Mutans yaitu dengan cara: ambil NA dan masukkan dalam tabung reaksi lalu dimiringkan. S. mutans yang berasal dari stock diambil dengan ose steril lalu dimasukkan ke dalam tabung reaksi yang berisi NA beku dan diinkubasi selama 24 jam; d) pembuatan sediaan pasta gigi dibuat dengan cara, diambil sebanyak 1 gr masing-masing pasta lalu diencerkan dengan 1 ml aquades; e) untuk mengetahui kepekaan S mutans terhadap pasta gigi, dilakukan hal sebagai berikut: disiapkan 10 cawan petri dan 50 paper dish dengan diameter 55 mm. Paper dish direndam selama 5 menit dalam pasta gigi yang telah diencerkan (tiap pasta gigi 10 paper dish), kemudian disetiap cawan petri yang telah berisi media GNA dan isolat S. mutans diletakkan 5 paper dish dari 5 macam pasta. Lalu dimasukkan dalam inkubator dengan suhu 37° C selama 24 jam; f) kriteria penilaian daya hambat yaitu dengan mengukur zona bening atau zona inhibisi disekitar paper dish dengan menggunakan kaliper secara vertikal, horizontal dan diagonal, kemudian dirata-ratakan. HASIL Hasil penelitian yang dilakukan menemukan semua pasta gigi mempunyai daya hambat terhadap S. mutans dengan kemampuan yang berbeda (tabel 1). Hasil perhitungan dengan uji ANOVA adalah r = 0,001 jadi Ho ditolak berarti ada perbedaan bermakna daya hambat terhadap S. mutans dari pasta gigi yang diuji. Karena ada perbedaan kemudian dilakukan uji beda lanjut (LSD), yang hasilnya ditampilkan pada tabel 2. 66 Maj. Ked. Gigi. (Dent. J.), Vol. 38. No. 2 April–Juni 2005: 64–67 Tabel 1. Perbedaan daya hambat (lebar zona inhibisi dalam mm) terhadap S. mutans dari pasta gigi setelah 24 jam Pasta Gigi N Rerata Simpang Baku p Herbal A 10 19,90 1,09 Herbal B 10 23,17 1,50 Herbal C 10 25,48 2,96 0,001* Herbal D 10 22,03 2,15 Kontrol 10 19,79 2,03 Keterangan: Pasta gigi herbal A = Eucalyptus; Pasta gigi herbal B = Aloe vera dan daun sirih; Pasta gigi herbal C = Siwak; Pasta gigi herbal D = Daun sirih; Pasta gigi kontrol = Non herbal. PEMBAHASAN Pemeliharaan kesehatan mulut yang teratur melalui kontrol plak secara mekanis dengan sikat gigi dan pasta gigi akan menjamin kesehatan gigi dan mulut, karena telah terbukti bahwa menyikat gigi merupakan metode yang efektif untuk mengeluarkan plak. Hanya terdapat sedikit dari populasi yang diharapkan dapat melakukan pembersihan plak yang adekuat secara mekanis, dan plak gigi dapat terbentuk kembali setelah beberapa jam atau hari setelah plak tersebut dibersihkan. Oleh karena itu pemakaian bahan pasta antimikroba sangat bermanfaat sebagai tambahan dalam pembersihan plak secara mekanis. Produk herbal yang diuji dalam percobaan ini mengandung beberapa unsur yang berbeda dan semua mengandung bahan antibakteri yang secara teori dapat mengontrol plak dan penyakit periodontal. Kandungan fluor dalam pasta gigi herbal A mempunyai kemampuan memacu remineralisasi karies dini dan mengurangi kemampuan bakteri untuk memproduksi asam.7 Minyak Eucalyptus mempunyai daya antibakteri dan digunakan sebagai antiseptik.8 Clove dalam pasta gigi merupakan anestetik ringan yang bersifat sementara.9 Tea tree oil mengandung sifat antiseptik ringan yang dapat mengontrol pertumbuhan bakteri.10 Kandungan kalsium gliserofosfat dalam pasta herbal B dapat mencegah karies melalui aktivitas enzim yang memacu remineralisasi.11 Kandungan Triclosannya termasuk golongan fenol merupakan bahan anti bakteri.12,13 Selain bahan aktif tersebut, pasta ini juga mengandung ekstrak daun sirih dan Aloe vera. Minyak atsiri daun sirih diketahui mempunyai daya antibakteri, hal ini disebabkan oleh karena adanya senyawa fenol dan turunannya yang dapat mengubah sifat protein sel bakteri. Salah satu senyawa turunan itu adalah kavikol yang memiliki daya antibakteri lima kali lebih kuat dibanding fenol.6 Aloe vera mengandung gugus Glikosida yang memiliki daya antiseptik yang merupakan gugus aminoglikosida yang bersifat antibiotik. Senyawa aminoglikosid ini akan berdifusi pada dinding sel bakteri, dan proses ini berlangsung terus-menerus dalam suasana aerobik. Setelah mabuk ke dalam sel, aminoglikosida ini akan diteruskan pada ribosom yang menghasilkan protein, sehingga akan menimbulkan gangguan pada proses sintesa protein dan selanjutnya akan menyebabkan terjadinya pemecahan ikatan protein sel bakteri.4 Kandungan lain Aloe vera adalah gugus antrakuinon seperti barbaloin, isobar baloin, antranol dan tannin. Tannin adalah salah satu bahan antibakteri yang umumnya terdapat pada tanaman berkhasiat obat yang digunakan dalam pengobatan. Menurut penelitian Boel, 4 Aloe vera mempunyai daya antibakteri terhadap S. mutans pada konsentrasi 25%, 50% dan 100%. Daya hambatnya terhadap S. mutans akan semakin besar pada konsentrasi yang lebih tinggi. Kandungan siwak (Salvadora persica) pasta gigi herbal C terdiri dari trimetyl amine, silica, alkaloid, chloride, fluoride, saponin, tannin, resin, sulfur, vitamin C dan sterol.5 Chloride berguna dalam mengangkat stain, silica merupakan bahan pembersih gigi, tannin dan resin membentuk lapisan pelindung pada email yang mencegah masalah kerusakan gigi, vitamin C dan trimetyl amine membantu dalam menyembuhkan jaringan gingiva, trymetyl amine sendiri berfungsi dalam mengurangi kalkulus dan stain, sulfur, alkaloid dan fluor melindungi gigi dari bakteri kariogenik.5 Efek terapeutik dan profilaktik dari siwak kemungkinan diakibatkan oleh adanya pembersihan mekanis, pelepasan zat kimia aktif yang terdapat didalamnya dan atau kombinasi keduanya. Adanya substansi silica pada Salvadora persica (siwak) ini, diduga membantu aksi mekanis siwak terhadap pembersihan plak. Dalam penelitian untuk menentukan efek penggunaan Tabel 2. Perbedaan daya hambat terhadap S. mutans antar pasta gigi yang mengandung herbal dan pasta gigi kontrol setelah 24 jam Pasta Gigi Herbal A Herbal B Herbal C Herbal D Kontrol Herbal A (Eucalyptus) − 0,001* 0,001* 0,024* 0,905 Herbal B (Aloe vera + Daun Sirih) 0,001* − 0,015* 0,218 0,001* Herbal C (Siwak) 0,001* 0,015* − 0,001* 0,001* Herbal D (Daun Sirih) 0,024* 0,218 0,001* − 0,018* Kontrol 0,905 0,001* 0,001* 0,018* − Keterangan: * = Ada perbedaan bermakna 67Pratiwi: Perbedaan daya hambat terhadap Streptococcus mutans siwak sebagai sikat gigi dapat mempengaruhi jumlah S. mutans yang terdapat pada permukan gigi, 30 relawan diinstruksikan untuk menggunakan siwak komersial dua kali sehari sebagai tambahan pembersihan mulut secara rutin. Ditemukan bahwa 6 orang (20%) dari partisipan tersebut mengalami pengurangan jumlah S. mutans lebih besar daripada cara lain.5 Pasta gigi herbal D yang mengandung minyak atsiri daun sirih mempunyai daya antibakteri karena adanya fenol dan turunannya yang dapat mengubah sifat protein sel bakteri. Salah satu senyawa turunan itu adalah kavikol yang memiliki daya antibakteri lima kali lebih kuat daripada fenol. Adanya fenol yang merupakan senyawa toksik mengakibatkan struktur tiga dimensi protein terganggu dan terbuka menjadi struktur acak tanpa adanya kerusakan pada struktur kerangka kovalen. Hal ini mengakibatkan protein berubah sifat. Deret asam amino protein tersebut tetap utuh setelah berubah sifat, namun aktivitas biologisnya menjadi rusak sehingga protein tidak dapat melakukan fungsinya.6 Berdasarkan penelitian Hasim6 yang membandingkan aktivitas antibakteri daun sirih dan fluor ditemukan bahwa daya hambat minyak atsiri daun sirih lebih besar daripada NaF pada semua konsentrasi uji. Minyak atsiri daun sirih memiliki aktivitas antibakteri terhadap S. mutans lebih besar daripada fluor. Dalam bentuk pasta gigi, maka pasta gigi yang mengandung fluor menunjukkan aktivitas antibakteri pada konsentrasi 0,75% sedangkan pasta gigi yang mengandung minyak atsiri daun sirih menunjukkan aktivitas antibakteri pada konsentrasi 0,1%. Aktivitasnya terus meningkat dengan meningkatnya konsentrasi minyak atsiri. Adanya perbedaan bermakna antara pasta gigi herbal dalam menghambat S. mutans dimungkinkan karena adanya perbedaan kandungan herbal pasta gigi tersebut. Hasil penelitian yang dilakukan menyimpulkan bahwa semua pasta gigi yang diuji mempunyai daya hambat terhadap S. mutans dan berbeda secara bermakna (r < 0,05). Daya hambat terbesar dimiliki oleh pasta gigi herbal C (mengandung siwak) dan terkecil pasta gigi kontrol (non herbal). DAFTAR PUSTAKA 1. Kidd EAM, Joyston S. Pencegahan karies dengan pengendalian plak. Dalam: Narlan Sumawinata, Safrida Faruk. Dasar-dasar karies: Penyakit dan penanggulangannya. Jakarta: EGC; 1992. h. 141–54. 2. Da Silva DD, Goncalo CS, De Sousa MLR, Wada RS. Aggregation of plaque disclosing agent in a dentifrice. J Appl Oral Sci 2004; 12(2): 154–8. 3. Pistorius A, Willershausen B, Steinmeier EM and Kreisler M. Efficacy of subgingival irrigation using herbal extract on gingival inflamation. J Periodontol 2003; 74: 616–22. 4. Boel T. Daya antibakteri pada beberapa konsentrasi dan kadar hambat tumbuh minimal dari Aloe vera. Dentika Dent J 2002; 7(1): 58–66. 5. Almas K, Al-Zeid Z. The immediate antimicrobial effect of a toothbrush and miswak on cariogenic bacteria: A clinical study. J Contemp Dent Pract 2004; 5(1): 1–8. 6. Hasim. Daun sirih sebagai antibakteri pasta gigi. Kompas 24 September 2003. 7. Sodiummonofluorfosfat. Available from: URL:http//scitoys.com/ ingredients/sodiummonofluorfosfat.htm. Accessed May 26, 2004. 8. Grieve M. Eucalyptus. Available from: URL:http//www.botanical. com/botanical/mgmh/e/eucaly.htm. Accessed April 20, 2004. 9. Home toothpaste. Available from: URL:http//www.anglefire.com/ il2/purpleflame/herbs/toothpaste.htm. Accessed May 26, 2004. 10. Tea tree place. Available from: URL:http//www.teatreeplace.com/ naturetoothpaste.htm. Accessed May 26, 2004. 11. Dental hygiene toothpaste. Available from: URL:http// www.anewlife.co.uk. Accessed May 26, 2004. 12. Boel T. Daya antibakteri kombinasi triklosan dan zink sitrat dalam beberapa konsentrasi terhadap pertumbuhan Streptokokus mutans. Dentika Majalah Ilmiah Kedokteran Gigi USU 2000; 5(1): 7–17. 13. Jordan SL and Taylor LT. The analysis of triclosan in toothpaste via LC/FT-IR mobile phase elimination AN-20. Available from: URL:http//www.stjapan.co.jp/014 labconnection/014 l b a/an 20.pdf. Accessed May 26, 2004. << /ASCII85EncodePages false /AllowTransparency false /AutoPositionEPSFiles true /AutoRotatePages /All /Binding /Left /CalGrayProfile (Dot Gain 20%) /CalRGBProfile (sRGB IEC61966-2.1) /CalCMYKProfile (U.S. Web Coated \050SWOP\051 v2) /sRGBProfile (sRGB IEC61966-2.1) /CannotEmbedFontPolicy /Warning /CompatibilityLevel 1.4 /CompressObjects /Tags /CompressPages true /ConvertImagesToIndexed true /PassThroughJPEGImages true /CreateJDFFile false /CreateJobTicket false /DefaultRenderingIntent /Default /DetectBlends true /DetectCurves 0.0000 /ColorConversionStrategy /LeaveColorUnchanged /DoThumbnails false /EmbedAllFonts true /EmbedOpenType false /ParseICCProfilesInComments true /EmbedJobOptions true /DSCReportingLevel 0 /EmitDSCWarnings false /EndPage -1 /ImageMemory 1048576 /LockDistillerParams false /MaxSubsetPct 100 /Optimize true /OPM 1 /ParseDSCComments true /ParseDSCCommentsForDocInfo true /PreserveCopyPage true /PreserveDICMYKValues true /PreserveEPSInfo true /PreserveFlatness true /PreserveHalftoneInfo false /PreserveOPIComments false /PreserveOverprintSettings true /StartPage 1 /SubsetFonts true /TransferFunctionInfo /Apply /UCRandBGInfo /Preserve /UsePrologue false /ColorSettingsFile () /AlwaysEmbed [ true ] /NeverEmbed [ true ] /AntiAliasColorImages false /CropColorImages true /ColorImageMinResolution 300 /ColorImageMinResolutionPolicy /OK /DownsampleColorImages true /ColorImageDownsampleType /Bicubic /ColorImageResolution 300 /ColorImageDepth -1 /ColorImageMinDownsampleDepth 1 /ColorImageDownsampleThreshold 1.50000 /EncodeColorImages true /ColorImageFilter /DCTEncode /AutoFilterColorImages true /ColorImageAutoFilterStrategy /JPEG /ColorACSImageDict << /QFactor 0.15 /HSamples [1 1 1 1] /VSamples [1 1 1 1] >> /ColorImageDict << /QFactor 0.15 /HSamples [1 1 1 1] /VSamples [1 1 1 1] >> /JPEG2000ColorACSImageDict << /TileWidth 256 /TileHeight 256 /Quality 30 >> /JPEG2000ColorImageDict << /TileWidth 256 /TileHeight 256 /Quality 30 >> /AntiAliasGrayImages false /CropGrayImages true /GrayImageMinResolution 300 /GrayImageMinResolutionPolicy /OK /DownsampleGrayImages true /GrayImageDownsampleType /Bicubic /GrayImageResolution 300 /GrayImageDepth -1 /GrayImageMinDownsampleDepth 2 /GrayImageDownsampleThreshold 1.50000 /EncodeGrayImages true /GrayImageFilter /DCTEncode /AutoFilterGrayImages true /GrayImageAutoFilterStrategy /JPEG /GrayACSImageDict << /QFactor 0.15 /HSamples [1 1 1 1] /VSamples [1 1 1 1] >> /GrayImageDict << /QFactor 0.15 /HSamples [1 1 1 1] /VSamples [1 1 1 1] >> /JPEG2000GrayACSImageDict << /TileWidth 256 /TileHeight 256 /Quality 30 >> /JPEG2000GrayImageDict << /TileWidth 256 /TileHeight 256 /Quality 30 >> /AntiAliasMonoImages false /CropMonoImages true /MonoImageMinResolution 1200 /MonoImageMinResolutionPolicy /OK /DownsampleMonoImages true /MonoImageDownsampleType /Bicubic /MonoImageResolution 1200 /MonoImageDepth -1 /MonoImageDownsampleThreshold 1.50000 /EncodeMonoImages true /MonoImageFilter /CCITTFaxEncode /MonoImageDict << /K -1 >> /AllowPSXObjects false /CheckCompliance [ /None ] /PDFX1aCheck false /PDFX3Check false /PDFXCompliantPDFOnly false /PDFXNoTrimBoxError true /PDFXTrimBoxToMediaBoxOffset [ 0.00000 0.00000 0.00000 0.00000 ] /PDFXSetBleedBoxToMediaBox true /PDFXBleedBoxToTrimBoxOffset [ 0.00000 0.00000 0.00000 0.00000 ] /PDFXOutputIntentProfile () /PDFXOutputConditionIdentifier () /PDFXOutputCondition () /PDFXRegistryName () /PDFXTrapped /False /Description << /CHS /CHT /DAN /DEU /ESP /FRA /ITA /JPN /KOR /NLD (Gebruik deze instellingen om Adobe PDF-documenten te maken voor kwaliteitsafdrukken op desktopprinters en proofers. De gemaakte PDF-documenten kunnen worden geopend met Acrobat en Adobe Reader 5.0 en hoger.) /NOR /PTB /SUO /SVE /ENU (Use these settings to create Adobe PDF documents for quality printing on desktop printers and proofers. Created PDF documents can be opened with Acrobat and Adobe Reader 5.0 and later.) >> /Namespace [ (Adobe) (Common) (1.0) ] /OtherNamespaces [ << /AsReaderSpreads false /CropImagesToFrames true /ErrorControl /WarnAndContinue /FlattenerIgnoreSpreadOverrides false /IncludeGuidesGrids false /IncludeNonPrinting false /IncludeSlug false /Namespace [ (Adobe) (InDesign) (4.0) ] /OmitPlacedBitmaps false /OmitPlacedEPS false /OmitPlacedPDF false /SimulateOverprint /Legacy >> << /AddBleedMarks false /AddColorBars false /AddCropMarks false /AddPageInfo false /AddRegMarks false /ConvertColors /NoConversion /DestinationProfileName () /DestinationProfileSelector /NA /Downsample16BitImages true /FlattenerPreset << /PresetSelector /MediumResolution >> /FormElements false /GenerateStructure true /IncludeBookmarks false /IncludeHyperlinks false /IncludeInteractive false /IncludeLayers false /IncludeProfiles true /MultimediaHandling /UseObjectSettings /Namespace [ (Adobe) (CreativeSuite) (2.0) ] /PDFXOutputIntentProfileSelector /NA /PreserveEditing true /UntaggedCMYKHandling /LeaveUntagged /UntaggedRGBHandling /LeaveUntagged /UseDocumentBleed false >> ] >> setdistillerparams << /HWResolution [2400 2400] /PageSize [612.000 792.000] >> setpagedevice