الصرفة والتطبیقیة المجلد 200) 4 (22مجلة ابن الھیثم للعلوم 9 واستغالل النفط الخام من بعض الفطریات المعزولة من التربةتأثیر شیماء نغیمش مزعل ، شذى علي شفیق ة العلوم ، قسم علوم الحیاة الجامعة المستنصریة، كلی الخالصة ر الحالیة الدراسةاستهدفت Penicillium sp Aspergillus , Aspergillus الفطریاتأنواع بعض في النفط الخام تأثی niger , Aspergillus terreus, Aspergillus flavus fumigatusها ي تم عزل قي الت ضوء علمن التربة لنل دور هذه ىال ة الكائنا ي في الترب یئ طریةعدادأا واضحا في النتائج تباینأظهرت ،ت في التوازن الب حیث كانت ، اذ ونسب انتشار العزالت الف ر Aspergillus fumiga السیادة للفط tus 32.47(بنسبة تردد % ز ، النفط الخام تأثیر وفیما یخص .) فلم توثر التراكی طریات المعزولة على الوسط ال) معدل قطر المستعمرة( في النمو الخضري همن )%0.1,0.05(الواطئة بقیة إماصلب للف ربة تأثیرا أظهرتفقد )% 1,0.5(التراكیز تج نمو خالل مدة ال ر الفطر ، سمیا تدریجیا في ال Aspergillus fumigatusواظه ةحساسیة عالیة تجاه التراكیز طریات األربع ط الخام مقارنة بالف خرى من النف ت المعزولة النتائج تباین أظهرت .األ قدرة الفطریا مصدرمن التربة عل اقة باختالف التركیز ومدة للكربون "ا وحید"اى استغالل النفط الخام على الوسط الملحي الصلب والط .التعریض ونوع الفطر المقدمة ئة وتظهر جانب سلبي على جمالیاألراضي انسكاب المركبات النفطیة على نا ناظر ة تسبب مخاطر كبیرة على البی الم تحسی تصالح لذلك اهتم علماء البیئة ب هوض بجمالیة المواقع ةالزراعی األراضين واس فتم استعمال ، التلوث منها ٕوازالة والن تریا بسبب قدرة ضمنها ومن المجهریة بصورة عامةاألحیاء ارنة بالبك مق على الخیوط الفطریةالفطریات في تحلیل النفط الخام نیة إلى عن" فضالسطح النفط طبقة غزیرة على النمو بشكل .[1]نموها تحت ظروف بیئیة قاسیة إمكا یرة و من الهیدروكاربونات المرتبطة مع مواد عضویة"ا معقد"االنفط الخام خلیط یعد یات صغ الف یحتوي على إذبكم أ یائیة المختلفة ربونات االلیفاتیة األخرىالمركبات الكیم Alip وتشكل الهیدروكا haticالمتضمنة االلكانات , Alkanesااللكینات Alkenes وااللكایناتAlky nes ، الهیدروكاربونات الحلقیةCy clic ات االروماتیة عن" فضال Aromatic والهیدروكاربون ط .[2] وكمیات ضئیلة من المعادن واألوكسجیننتروجین لوجود مركبات غیر هیدروكاربونیه حاویة على عناصر الكبریت وا للنف عدید من هیدروكاربونیة الفطریاتالخام تأثیرات ایجابیة وسلبیة في ال ركبات ال فقد ،وتعتمد سمیة النفط الخام على محتواه من الم خام من قـوج ط ال غالل النف نمو واست فزة في ثیرات مح تأ Papulaspora sp بل الفطریاتـد عدد من الباحثین Drechslera sp, Fusarium lateritium, ماالمعزولة من صحراء الكویت حرارة والملوحة بوجود عوالسی ، [3] املي ال ا ] 4 [بالمقابل وجد ائي أنواع ةثالثفي تحلل تباین یب الكیمی رك ر من النفط الخام المختلفة الت بین سالالت من الفط Pseudallesch eria boydii مجاري مخلفات ال خام ومن ة بالنفط ال تربة ملوث ن عزولة م ر . الم األجناس سیادة [5] واظه Aspergillus , Pencilliumتقاته " كأحیاء تغلة للنفط الخام ومش للفطریات المعزولة من تربة ةالتحلیلی القدرة اختبرت كما، مس ة والناقصةإلىغنیة بالنفط الخام ومعظمها تعود ة والبازیدی ریات الكیسی الفط الصرفة والتطبیقیة المجلد 200) 4 (22مجلة ابن الھیثم للعلوم 9 ة للحرارة وضحتأ و[6] راسات قابلیة الفطریات المحب Thermop العدید من الد hilic اویة أوساط على النمو في ح ة للكربون "امصدروي على الكلوكوز تحتأوساط مقارنة مع نموها في للكربون وحید "اعلى مركبات نفطیة كمصدر اق [8,7]. والط مل طرائق الع .ةعزل وتشخیص الفطریات من الترب 1- تخافیف) 10(جمعت ع طریقة ال من تربة زراعیة في مدینة بغداد وبإتبا الفطریات في تعزل ،[9] عینات بصورة عشوائیة كار حاویة على الوسط الغذائي أطباق روزالمعقم أ طا الدكست pot البطا ato dextrose agar (PDA) األطباق وحضنت جمیع تصنیفیة م وباالعتماد على )2± 25( بدرجة ة لتردد [11,10] المفاتیح ال طریة ثم حساب النسبة المئوی تشخیص العزالت الف تم Frequencyكل فطر % [12]. ة تأثیر النفط الخام في النمو 2- .المعزولة للفطریات) معدل قطر المستعمرة ( القطري دراس %) 0.05 , 0.1 , 0.5, 1 (تيأمایك من النفط الخام یدةعد تراكیز استعملت حجم من الوسط الغذائي المعقم / حجم (PDA)ام في ، 13] [ باالعتماد على طریقة تلفة من النفط الخ تراكیز مخ ى بتري أطباقصب الوسط الغذائي الحاوي عل عة افة مزرـسم من ح) 0.7(وبعد تصلب الوسط الغذائي أخذت قطعة دائریة الشكل یبلغ قطرها سم9)(زجاجیة معقمة بقطر ثاقب فلین معقم ونقلت ) 5( بعمر stock culture أصلیة ثم احكم إلىأیام باستخدام ط الطبق قالالص بالشریط إغالقه وس رة م حست، م (28) في الحاضنة بدرجة حرارة األطباقوحضنت ل . حافة الطبق منب قطر المستعم عملت ثالث مكررات لك . معاملة السیطرة عن" فضالمعاملة اراخت3- لى استغالل النفط الخامب قدرة الفطریات ع ت الفطریة لمعرفة مدى اختبرت ط الخام العزال غالل النف ا على است صدرقدرته میتها في للكربون "ا وحید"ام تن ة خالل اق والط اوي على تراكیز مختلفة من النفط الخام األمالحوسط تخدم هذا ، [14] المعدني الصلب المحضر والح الوسط بعد حذف وقد اس اتبعت لذلك الطریقة السابقة الذكر في حساب قطر ، تراكیز من النفط الخام ٕواضافة) الكلوكوز ( منه الكربونمصدر ط ى وس معاملة السیطرة عن" فضالعملت ثالث مكررات لكل معاملة، ت لكل نوع من الفطریا . PDAالمستعمرات عل ة . ند مستوى احتم للتحلیل اإلحصائANOVAاستعملت طریق SPSSباستخدام نظام(0.05 ) الیة اقل من ـي وع Statist ical Packages F or So cial Scien ces . والمناقشةالنتائج Rhizopus sp Aspergillus fumigatuاتـطریـ الففرتربة تواـن الـحص العینات مـائج فــ نتحتـأوض s , Aspergillus terr eus , Aspergillus niger , Aspergillus flavus , وPenicillium sp اذ فیها وبنسب مختلفة فطر أعلىكانت تتفق نتائج ، ) 1( كما موضح في الجدول 32.47% بلغت النسبة المئویة إذ A. Fumigatus نسبة تردد لل نتائج العدید من الباحثین انت اذ العزل هذه مع ابعة لجنس اأكثر ك ى ویعزى ذلك Aspergillusلفطریات انتشارا الت ما تتمیز إل ابلیة أنواعبه مختلفة وق و في مدیات بیئیة یة هذا الجنس من قابلیة نم بقیة أنزیم تمكنها من السیادة على ألجناس عالیة [15] ا ط ) 2(كما یبین الجدول . ب نتائج معاملة الفطریات المعزولة من التربة وعلى الوس ئي الصل عدم وجود اختالفات PDA الغذا كل من وومعاملة السیطرة ) % 0.05 , 0.1 ,0.5 ,1(معنویة بین التراكیز في الیوم الثاني ل الصرفة والتطبیقیة المجلد 200) 4 (22مجلة ابن الھیثم للعلوم 9 طریات با لمعاملة Penicillium sp , A. terrues , A. flavus , A. nigerالف مساو تقری بحیث كان معدل قطر المستعمرة رة ز عدا ما%0.0السیط بینما اظهر ) (P<0.05 عند مستوى "ا معنوی"ا اظهر اختالفاذ Penicillium spللفطر % 1 تركی طرة A.fumigatusالفطر عاملة السی ربعة وم تراكیز األ بع لم تظ، اختالفات معنویة بین ال یوم الرا هر اختالفات معنویة وفي ال اختالفات معنویة عند ) % (0.1, 0.5 , 1یة ـالـتراكیز العـالهرت ـأظنما ـ بی،عة ـتراكیز األربـد الـعن A. terruesبالنسبة للفطر ن ، A. flavus و Penicillium spللفطر ،)(P<0.05مستوى مستعمرة عند الفطری وتباینت معدالت قطر ال A.fumigatus و A. niger . س فات المعنویة بزیادة التركیز للفطر أظهرتوفي الیوم الساد عند Penicillium sp االختال , 0.5 )عند التركیزینA. flavus وللفطر A. terruesللفطر % 0.5 عند التركیز "اكان االختالف معنوی بینما ،التراكیز العالیة تركیزین كانت ا A.fumigatusفقط وفیما یخص الفطر % (0.1 ولم تظهر أي % (0.1 ,1)الختالفات معنویة عند ال ط الخام ، A. nigerاختالفات معنویة للفطر زولة ،قد یعزى زیادة سمیة النف ریات المع عض الفط كیز في ب بزیادة الترا إلى ربونیة مع نسب مختلفة إذ یمثلالطبیعة الكیمیائیة للنفط الخام من الكبریت الالعضوي والماء خلیط معقد من المركبات الهیدروكا معا یكون له نا ذا ،واألمالح تواجد كل هذه المواد قتص ، [2] سلبي في النمو تأثیر السمي والمثبط للنفط الخام التأثیر روال ی تركیبه یما ونیة وال س وجود مركبات غیر هیدروكاربإلى كذلكقد یعودف على نوع ونسب المركبات الهیدروكاربونیة الداخلة في ثالثةالكبریت المتوافر یعد في تركیب هذه المركبات ال و .[16] فطري من وجوده مبید لنمو الفطریات وال یخلو أي "ا مثبط، اذ عزولة على استغالل النفط الخام كمصدرةقدر) 3(الجدول یظهر ریات الم جمیع الفط ة على الوسط للكربون "ا وحید"ا اق والط صلب وتباینت هذه فطر قدرةالالملحي ال ض ونوع ال باختالف التركیز ومدة التعری في Penicillium sp اظهر الفطر فقد، ركیزین الیوم الثاني بینما اظهر ) (P<0.05 عند مستوى احتمالیة % )1,0.5( اختالف معنوي عند الت ة بمعاملة السیطرة مقارن A. terrالفطر eus الف ط الخام عند ال"ا معنوی"ااخت یز في استغالل النف ات إما، فقط %0.5ترك ری ،A.flavus بقیة الفط A.fumigatus و A. niger عة بین التراكیز ا معنویفاتالخ اأظهرتفقد ةاألرب ت المعزول ن الفطریا 0.0ومعاملة السیطرة لكل م میة على الوسط الملحي الصلب مضاف% ي تمثل الفطریات النا دس لم یظهر وفي الی، للكربون"امصدر الكلوكوز إلیه "ا الت وم السا رین ) (P<0.05 عند مستوى "ا معنوی"ا اختالف %0.05التركیز A. terr و Penicillium spلكل من الفط eus في حین كیز تركیز األربعكانت االختالفات معنویة عند الترا لم إذ A.fumigatus للفطر % 0.1 في بقیة الفطریات المعزولة ما عدا ال توىعیظهر أي اختالف معنوي على عملیة تكوین ا واضحاتأثیر %)1,0.5( التراكیز العالیة أظهرتكما ، ) (P<0.05 ند مس Penicillium sp ، A.flav االبواغ والسیما للفطریات اآلتیة us و A.fumigatus واغ ـكوین االبـملیة تـ عرتـتأخ إذ sporogenesisة بمعاملة السإلى تجربة مقارن خالل [17,4,5] عدیدة تتفق هذه النتائج مع بحوث. یطرة الیوم العاشر من ال تحلیلیة للنفط الخام هم حول القدرة ال ت مصدرأودراست ة وكان الجنس للكربون "ا مشتقاته من الفطریا و Aspergillus والطاق Penicillium المهمة في استغالل النفط الخام األجناس من . المصادر 1-Boonchan , S. ; Britz , M . L. and Staniey , G. A. ( 2000). Degradation and mineralization of high mol ecul ar weight poly cy clic aromatic hydrocarbons by defined fungal – bacteri al co cultures , App li. Environ. M icrobiol . 66(3):1007-1019 2-Okolo , J. C. ; Amadi , E. N.and Odu , C. T . I. ( 2005) . Effects of soil treatments cont aining p oultry manure on crude oil degr adation in a sandy loam soil . App lied ecology and environmental research 3(1) : 47-53. الصرفة والتطبیقیة المجلدمجلة ابن ا 200) 4 (22لھیثم للعلوم 9 3-Badrudeen , A. M . ; Al- Saleh , E. and M ulder ,J. L .( 2005) . Growth and hy drocarbon degr adation by three desert fungi under condition of simultaneous temp erature and salt stress. Int ernational bio- det erioration and b iode grad ation , 56 (4) : 197-205. 4- Ap ril, T.M . ; Abbott, S.P. ; Foght , J.M. and Currah, R. S. (1998) . Degradation of hy drocarbons in crude oil by the asco my cete Pseudallescheria boyd ii (M icroascac eae ) . Can . j . M icrobiol. 44 (3) : 270-278. 5- Solarzanol emos , J. L. ; Rizzo, A.C. ; M illioli , V. S. : Soriono , A. U. (2000). Petroleum de gradation by filament ous fungi. App lied Environ. M icrobiol. 44 (3) : 270-278. 6- Boldu , F. X. P. ; Kuhn , A. ; Luy kx, D.M. ; Van, J. W. (2001). Isolation and characterization of fungi growin g on volatile aromatic hydrocarbons as t heir sole carbon and ener gy source . Mycological resear ch . 105 : 477-484. 7- Adekunle , A.A. , Oluyode , T. F. 2005. biodegradation of crude petroleum and p etroleum p roduct s by fungi isolated from two oil seeds (melon and soy bean ) . J. Environ. Biol.26(1); 37-42 . 8-Ijah , U. J. And N dana , M . 2004.Stimulated biodegradation of crude oil in soil amended with p eriwinkle shells . T he environmentalist . 23 (3) : 249-254. 9 –Burnet te, J. H . 1976. Fundementals of my cology . second edition , Edw ard Arnold , England . 673p p . 10- Samson , R. A. ; Hockstra, E. S. and Vanoorschot , C. A . N. 1984. Introduct ion of food borne fungi . second edition ,Inst itut e of the Royal Netherlands Academy of arts and sciences.523 p p . 11-Robert,A.S.;Ellen, S.H.;and Connie, A.N. (1984). Int roduction of food borne – fungi cont amination . second edition , Drukker .J. Van Gestol and Zn.B.v.laren NH: 1-205. 12-Pitt , J. I. ; Hocking , A. D. and Glenn, D. R. 1983 . An improved medium for det ection of Aspergillus flavus and Aspergillus parasiticus . J. Ap p l. Bacteriol. , 54 : 109-114. 13-Al-Rekabi , S. A. W. ;Ali , b. Z. ;Shafik, Sh. A. 2002.Effect and ut ilizat ion of crude oil , gasoline and kerosene on the vegetative growth of Achlya conspicua and Sapr olegnia diclina. t he second conference and exhibition on biotechnology and genetic engineering 4 : 23-27. 14-Prenafeta-boldu, F.X. ; Kuhn, A. ; Luy kx,D .M.A., Groenestlin, J.W. and debont , J.A.M .2001.Isolation and characterization of fungi growing on volatile aromatic hydrocarbons as their sole carbon and energy source .M y cological research.105(9): 477-484. 15-Karaoglu , S. A. ; Ulker , S. (2006). Isolation , identification and seasonal distribut ion of soilborne fungi in tea growing areas of ly idere- ikizdere vicinity (Rize – Turkey ) . j. of basic microbiol. 46(3): 208-218. 16- Panda , H. (2000). the complete technology book on p est icides , insecticides , fungicides and herbicides industrial research . New Delhi, India. 706p p . 17-Elshafie , A. ; Alkindi , A. ; Al-Bus aidi , S. And A lbahry ,S. N. ( 2007). Biodegradation of crude oil and N-alkanes by fungi isolated from Oman . M ar. p ollut .bull. 54 (11): 1692- 1606. الصرفة والتطبیقیة المجلد 200) 4 (22مجلة ابن الھیثم للعلوم 9 لتردد )1(جدول f)النسبة المئویة re quen cy %) ة من عینات لعزالت الفطری لتربة ا ا %النسبة المئویة للتردد األجناس واألنواع Penicillium sp Aspergillus flavus Aspergillus niger Aspergillus terreus Aspergil lus fumigatus 23. 13 8.24 11. 85 24. 22 32. 47 للفطریات المعزولة) معدل قطر المستعمرة(تأثیر النفط الخام في النمو الخضري :)2(جدول م األیا العزالت الفطریة كیز الترا 2 4 6 Penicillium sp 0.0 0.05 0.1 0.5 1.0 0.45±1.60 1.00±1.40 0.20±1.55 0.00±1.30 0.11±0.35* 0.25±3.05 0.10±2.35 0.15±1.75* 0.17±1.45* 0.11±1.40* 0.10±3.80 0.00±2.60 0.20±1.90* 0.11±1.85* 0.00±1.50* A. terreus 0.0 0.05 0.1 0.5 1.0 0.25±2.25 0.32±2.45 0.70±2.15 0.15±2.15 0.15±2.30 0.37±2.70 0.20±3.20 0.23±3.15 0.00±3.50 0.32±3.60 0.20±4.30 0.15±4.95 0.25±3.55 0.00±5.45* 0.20±4.75 A.flavus 0.0 0.05 0.1 0.5 1.0 0.10±2.55 0.25±2.75 0.20±2.10 0.10±3.00 0.20±4.10 0.26±4.30 0.20±3.10* 0.11±2.90* 0.00±3.00* 0.15±4.10 0.22±5.20 0.25±4.25 0.15±3.05* 0.00±3.30* 0.15±5.10 A.fumigatus 0.0 0.05 0.1 0.5 1.00 1.00±1.50 0.15±1.00* 0.00±0.90* 0.00±0.90* 0.16±0.80* 0.28±1.50 0.40±1.40 0.11±0.90 0.00±1.00* 0.00±0.90 0.17±1.70 0.25±2.10 0.22±1.20* 0.15±1.40 0.00±0.90* A. niger 0.0 0.05 0.1 0.5 1.00 0.25±3.25 0.55±3.55 0.00±2.95 0.23±3.10 0.00±3.00 0.25±5.55 0.10±3.80* 0.22±5.69 0.15±3.10* 0.00±4.90 0.00± 8 0.00± 8 0.00± 8 0.00± 8 0.00± 8 ابي حس وسط ال قراءة تمثل ال االنحراف المعیاري±كل  معنوي عند مستوى احتمالیةP<0.05)( الصرفة والتطبیقیة المجلدمجلة ا 200) 4 (22بن الھیثم للعلوم 9 الل النفط الخام كمصدروحید للكربون والطاقة:)3(جدول على استغ لفطریات )النمو القطري( اختبار قدرة ا األیام العزالت الفطریة 6 4 2 التراكیز Penicillium sp 0.0 0.05 0.1 0.5 1.00 0.15 ± 1.35 0.17±1.20 0.15±1.10 0.11±1. 00* 0.0±1.00* 0.17±2.70 0.10±2.10* 0.15±2.10* 0.20±1.80* 0.0± 1.80* 0.30±3.50 0.15±3.10* 0.23±2.80* 0.11±2.15* 0.00±2.25* A. terreus 0.0 0.05 0.1 0.5 1.00 1.00±1.80 0.77±1.90 0.70±1.50 0.11±1.20* 0.15±1.50 0.11±4.5 0.0± 3.95* 0.10±4.05* 0.20±3.10* 0.35±3.75* 0.0±8.00 0.15±7.10 0.11±6.50* 0.26±5.25* 0.35±6.65* A.flavus 0.0 0.05 0.1 0.5 1.00 0.10±3.10 0.15±1.90* 0.00±1.95* 0.15±1.75* 0.20±1.70* 0.00±8.00 0.15±4.10* 0.11±2.80* 0.00±3.60* 0.50±4.20* 0.00±8.00 0.32±6.30* 0.15±6.20* 0.15±5.80* 0.00±6.10 A.fumigatus 0.0 0.05 0.1 0.5 1.00 0.20±1.20 0.00±0.90* 0.20±0.80* 0.11±0.80* 0.00±0.80* 0.20±2.1 0.15±1.2* 0.40±1.6 0.00±0.8* 0.00±0.8* 0.11±2.60 0.00±1.25* 0.28±2.25 0.00±0.90* 0.10±1.45* A. niger 0.0 0.05 0.1 0.5 1.00 0.28± 2.75 0.00±1.70* 0.11±1.65* 0.10±1.95* 0.15±1.80* 0.15±6.10 0.25±3.10* 0.00±2.90* 0.10±2.40* 0.10±3.00* 0.11±8.00 0.00±5.00* 0.00±4.55* 0.15±3.55* 0.11±4.20* ابي حس قراءة تمثل الوسط ال یاري±كل االنحراف المع یة * توى احتمال P معنوي عند مس <0.05)( IBN AL- H AITHAM J. FO R PURE & APPL. S CI. VO L.22 (4) 2009 Effect and UtilIzation of Crude oil on Some of Fungi Isolated From Soil Sh. A. Shafiq , S. N. Mizil De partment of Biology, College of sciences, Unive rsity of AL-Mustansiriya Abstrac t The p resent study was conducted t o reveal the effect of crude oil on some fungal sp ecies isolation from soil in order t o evaluate the role of these fungi in environmental balance of soil . The result s show ed a variation in numbers and p ercentage of the fungal isolates Aspergillus fumigatus dominated over all isolates with a frequency of (32.47) . In resp ect of the effect of different concentrations of the crude oil, low concentrations (0.05, 0.1) % showed no effect on radial growth ( mean colony diameter) of the isolated fungi grown on solid media , whereas other concentrations (5.10)% showed gradual toxic effect on these fungi . T he fungus Aspergillus fumigatus reveal higher sensit ivity against all concent rations of the crude oil comp ared to ot hers sp ecies , The results showed also variation of these fungi in ut ilization of the crude oil on solid mineral media used as a sole carbon and energy source with the different concentrations of t he crude oil , exp osing time and kind of sp ecies.