علوم الحياة | 245 2015) عام 3(العدد 28المجلد مجلة إبن الھيثم للعلوم الصرفة و التطبيقية Ibn Al-Haitham J. for Pure & Appl. Sci. Vol. 28 (3) 2015 ملھا تح فيالعراق والمختلفة فيالشعير المزروعة ألصناف الوراثيالتنوع RAPD الجفاف بطريقة جھادال نضال نعمه حسين جاسم زينب رعد جامعة بغداد)/ ابن الھيثم التربية للعلوم الصرفة(كليه قسم علوم الحياة/ حرب عادل /المزروعات وقايةدائرة وزارة الزراعة 2015/كانون االول/18،قبل البحث في:2014/تشرين الثاني/16استلم البحث في: الخالصة فيالعراق والمختلفة فيالمزروعة .Hordeum vulgar Lعشر صنفا من الشعير لستة الوراثيالتباين دراسةتم في الجفاف من خالل تعريض النبات إلجھادالشعير أصناف.قيمت RAPDطريقة المستعالجفاف با إجھادقابليتھا لتحمل تبين اإلنباتاعتمادا على نسبه .) PEG 6000( 6000اثلين كاليكول البوليتراكيز مختلفة من مادة إلى اإلنباتمرحلة متوسطه التحمل عدت، نومار،القادسيةبوادي،أمل، نور إماللجفاف تحمال األصناف أكثربان الصنف براق واريفات أصناف عدتف 7باءأ،1جزيرة، 9، فرات3،شعاع ،رافدين ،سمير،ريحانه99 باءإلوركاء ،أ،الخير األصناف ماأ, للجفاف لتحمل الجفاف . حساسة ) %10.39( الشعير،من صنفا 16) حزمه توزعت على 203(عددھا من الحزم بلغ اعدد RAPDبادئات نتجتا أو شكالاال متعددة Polymorphicفكانت الباقية) 89.60%أحاديه الشكل ،أما ( Monomorphicمنھا كانت ئ ادــــللب %71.4 ن ــــــ) تراوحت مابيPolymorphism )88.70%ن ـــــللتباي المئوية النسبة،وكان معدل متباينة OP-B11 للبادئ %100و OP-C16 .كالبادئ المدروسةالشعير أصنافبعض البادئات حزما مميزه لبعض أنتجت، OP-N13 450ذات الوزن الجزيئي بالحزمةتميز الذيbp وھى 7 إباء،1،جزيرة 9فرات األصنافوظھرت في ذات الوزن الجزيئي بالحزمة زتمي p27، والبادئاالخرى األصنافللجفاف ولم تظھر مع حساسةجميعھا أصناف 2000bp ھذهتكون إنلذلك يمكن الحساسة األصنافالتي ظھرت في الصنف براق المتحمل للجفاف ولم تظھر في مقياس تعمالباس RAPDبصفة التحمل للجفاف. أظھرت شجرة القرابة الوراثية المعتمدة على طريقة مرتبطةالحزمة Jaccard ضمت تحت % 75مجاميع رئيسيه عند درجة تشابه ثالث في المدروسة لشعيرللتشابه الوراثي انعزال عينات ا التحمل للجفاف ماعدا الصنفين الخير والمتوسطة المتحملة األصناف األولى للمجموعة التابعة والثانية األولىالمجموعة وتحت المجموعة والثالثة الثانية المجموعةريفات )، أما أ( اءاإلبد ـــــمع اح الوراثي أصلھمن انعزال حسب يكاء اللذروالو على وجود نسبه عاليه RAPDللجفاف. دلت نتائج مؤشرات الحساسة األصناففضمت األولىالثالثة التابعة للمجموعة تحملھا فيالفصل بين العينات المختلفة وأمكنالعراق فيالشعير المدروسة والمزروعة أصنافبين الوراثيمن التباين عدد قليل من المواقع الوراثية. تعمالالجفاف باس دجھاال .PEG، البولي اثلين كاليكول , RAPDالشعير ، الجفاف : المفتاحيهالكلمات علوم الحياة | 246 2015) عام 3(العدد 28المجلد مجلة إبن الھيثم للعلوم الصرفة و التطبيقية Ibn Al-Haitham J. for Pure & Appl. Sci. Vol. 28 (3) 2015 لمقدمها المحاصيل النجيلية بعد القمح والرز والذرة الصفراء ويتميز بقدرة أھمرابع .Hordeum vulgare Lيعد الشعير ينمو ضمن مدى واسع من الظروف البيئية .بلغت المساحة المزروعة بالشعير إذ، High Adaptability تكيفية عالية تل الشعير ).يح1(1-كغم.ھـ 2440نتاجيةواالطن لفا 35915 إلى اإلنتاجھكتار، ووصل لفا 55698عالميا قرابة صناعة المولت فيكعلف للحيوانات ويستعمل األساسيستعمل بالدرجة إذالقمح من الناحية االقتصادية المرتبة الثانية بعد تحضير الحساء فيكما يستعمل السكريلمرضى را لشعيخبزالصحية حيث يستعمل األغذيةوالبيرة واحد مكونات من المحاصيل إذ يعد في العراق وأقدمھالحبوب ا لمحاصي أھمشعير من ل) .يعد ا2( ويستعمل خبز الشعير لمختلف الثقافات وذي قار وكركوك والقادسيةمحافظات العراق مثل نينوى فييزرع الشعير و ) 3(ه المستعملة كعلف للحيواناتسياسالا طن إلف) 1003.2الشعير في العراق بـ( نتاجاقدر . وميسان والبصرةالح الدين والنجف وديالى واالنبار وبغداد وص احتلت إذطن إلف )832.0كان ( إذ الماضيةالسنة انتاجعن % 20.6بلغت نسبتھا بزيادة 2013للموسم الشتوي لسنة ھا تالعراق تل نتاجامن مجموع 48.5%طن بنسبة إلف)486.9والذي قدر بـ( اإلنتاجمن حيث األولمحافظة نينوى المركز إذھا محافظة ذي قار تالعراق تل نتاجا) من مجموع 12.5%طن بنسبة ( لفأ) 125.0( إنتاجھاالذي قدر القادسيةمحافظة العراق فيما شكلت بقيه المحافظات نسبة مقدارھا نتاجأ) من مجموع 10.8طن بنسبة ( إلف (108.6) إنتاجھاقدر ).4( كردستان إقليمعدا ما العراق إنتاج) من مجموع %28.2( الشد أليهتمام باالھ الضروريبات من النموھ كافنظرا" ألھمية المياه في حياة النباتات وقلتھا وعدم توفرھا بشكل المراحل في السيماالجفاف و إجھادتحمل فيوراثية ذات قابلية أنماطت بغية الحصول على باالن في نمو وأثره المائي ھذا المجال وذلك في دراسات عديدة أجريت إذ ،إنتاجيتهبدء وتحديد في أساسيةل تعد مراح والتيمن حياة النبات األولى استعملت من قبل العديد من الباحثين التي فعل اوزموزى كمادة البولى اثلين كاليكول يمواد ذ إلىبتعريض النبات ) وفى نبات 7( منبات الطماط ) وعلى6وكذلك على نبات قصب السكر ( Cowpeaاللوبيانبات في) 5فاستعملت من قبل( ).8الشعير ( التحمل في المفيدةبامتالكه مجموعة من المورثات Hordeum vulgare ssp. Spontaneumيتميز الشعير البرى مقاومه لتلك االجھادات أصنافتربيه الشعير للحصول على فيه عماللذا من الممكن است ،الحيوية تھادااالجللعديد من المورثات إدخال إن إالالتھجين بين الشعير البرى والشعير المزروع ممكن ويعطى نسال خصبا إجراء إنالرغم من ب). (9 الشعير المنزرع يعد عمليه صعبة وطويلة وذلك المتالك الشعير البرى على عدد من الصفات غير إلىمن الشعير البرى ).10( القاسيغوب فيھا كصفة انفراط البذور والسفا رالم عن المؤثرات تأثيراتھاتسريع تقويم المكونات الوراثية وعزل إلى أدى DNA ـلل الجزيئيةالمؤشرات عمالاست إن ھذه المؤشرات تأثرقصوى على صعيد تربيه النبات بفعل عدة عوامل منھا عدم أھميهالبيئية ، وتعد المؤشرات الوراثية ذا أنھافضال عن ، والحصول على عدد كبير من المؤشرات بزمن قصير نسبيا ، ئيةالبيللنبات والمؤثرات المظھريبالشكل على المعتمدة DNAمن مؤشرات الـ RAPDطريقة د) . تع11( والتربيةعمليه االنتخاب فيتعد مؤشرات مساعدة مضاعفه مواقع معينه أنھاوتعرف على DNA Polymerase chain reaction (PCR)تقنيه التضاعف المتسلسل للـ حرارةودرجه DNA DNA Polymeraseالـ هبلمر إنزيمبادئ واحد عشوائي وبوجود باستعمال المحيني ألدنامن التباين دراسةفعاليتھا في ةھذه التقان وأثبتت). 12( الجزيئية األوزان مختلفة متعددة متضاعفة ابحيث تنتج حزم مناسبة ) وكانت 13ن(اإلنساوفي الدقيقة حياءاألالتنوع الوراثي في لدراسة عملتفقد است الحيةئنات الكا أنواعالوراثي لمختلف التنوع الوراثي دراسةفي عملتفقد است المختلفةفي الكشف عن التنوع الوراثي في النباتات وسريعةفعاله RAPDتقنيه الـ ).16) (15) (14) (12( عديدة أصنافبين المواد وطرائق العمل النباتية المادة من مركز تكنولوجيا الدراسةھذه إجراءفي )(.Hordeym vulgare Lتم الحصول على ستة عشر صنفا من الشعير .وھى : لوزارة الزراعة عالتاب البذورفحص وتصديق أةومن ھي االتابع لوزارة العلوم والتكنولوجي البذور ،فرات 3،شعاع،رافدين ،سمير،ريحانة 99،الخير،نور القادسية ،نومار ،اباءلوركاء أمل ،أريفات،أبراق ،بوادى ، .7اباءو1،جزيرة9 الجفاف إلجھادالشعير أصنافتحمل فى حاضنة %2) ثم بمحلول كلوريد الزئبق بتركيز %5محلول الھايبوكلورايت ( فيالبذور بعد تعقيمھا إنباتتم كل طبق ورطبت بمحاليل البولى اثلين فيوضعت ورقتا ترشيح .معقمة بتري إطباق فيْم 25وبدرجة حرارة إضافةمعاملة السيطرة بدون فضال عن) بار، 9- ,6-, 3-ود المائية (جھال إلىوبتراكيز مختلفة للوصول 6000غاليكول من محلول البولى مل 6 أضيفمكررات لكل معاملة . هكل طبق وبواقع ثالث فيبذور 10اليكول .وضعت كالبولى اثلين كميات متساوية من محاليل إضافةالحاضنة .تم في أيام 10كل طبق وتركت لمدة فياليكول وبالتركيز المناسب كاثلين :)17األتيه (وحسب المعادلة اإلنباتتم حساب نسبة أيام 10اليكول لسد النقص الحاصل بسبب التبخر. وبعد كالبولى اثلين X 100ذور النابتة/عدد البذور الكلية )= عدد الب اإلنباتنسبة علوم الحياة | 247 2015) عام 3(العدد 28المجلد مجلة إبن الھيثم للعلوم الصرفة و التطبيقية Ibn Al-Haitham J. for Pure & Appl. Sci. Vol. 28 (3) 2015 DNA extractionاألحماض النووية استخالص من بادرات أخذتالفتيه التي لألوراق النباتيةمن العينات ) Genomic DNA ( مجين ألدنا تمت عمليات عزل وذلك وفقاً CTAB) ماده( عمالعلى است المعتمدةوباالعتماد على طريقة االستخالص أيام 10الشعير بعمر أصناف طة مقياس الطيف الضوئيابوس المستخلصةDNA كمية الـ تم تقدير ).19المعتمدة على ( (18)لطريقة Spectrophotometer نوعية الـ اختبرتو DNAترحيلمن األكاروز ومن خالل عملية ال %1ذات تركيز ةھالم على . )20حسب طريقة( ي باألفق الكھربائي )DNA )RAPD لسلسلة الـ األشكالتفاعالت التضاعف العشوائي المتعدد أعداد التفاعل في حجم نھائي قدره أجري ).1جدول رقم ( فيموضحة RAPDئا عشوائيا من بادئات دعشر با حدأ عملاست النيوكليوتيدات األربعةمن كل من ميكرومول250 وDNA من الـ نانوغراما 50 عملاست .كروليترايم25 (dTTP/dATP/dCTP/dGTP) البلمرةأنزيم من كل بادئ ووحدة واحدة من بيكومول10وTaq DNA polymerase ، تيالبرنامج الحراري اال وفق Tc(5000)Techne المبلمرالحراري في جھازAmplification التضخيمعملية أجريت م لمدة o92تتكون كٌل منھا من المراحل التالية دورة 40ثم (المسخ األولي) دقائق 2م لمدة o94دورة واحدة بدرجة حرارة على حرارة دقائق10لمدة ثم تركت العينات (االستطالة) ثانية 15لمدة oم 72(االلتحام)ثانية 15لمدة oم3 6،(المسخ) ثانية30 .(االستطالة ألنھائيه) oم72 Electrophoresis and gel analysis الترحيل الكھربائي وتحليل الھالم 5– 4ولمدة ألحجميفولت / سم مع مؤشر الدليل 3-1 وبفولتية %1بتركيز االكاروز حّملت العينات على ھالم ويتم تصويره بواسطة كاميرا UV light فوق البنفسجية األشعةصبغ بصبغة بروميد االثيديوم ويفحص تحت ساعات . ثم جمعت المتضخم مع البادئات المختلفة. DNA صور الھالمات وتحديد الوزن الجزيئي لقطع الـ لتحل تم . Canon نوع الحقاً في التحليل. عمالھاخاصة الست في جداول بھا ئج كل البادئات والبيانات الخاصةنتا تحليل البيانات املـــــــالك وائيالعشم ــق التصميــــــــف وفـــــاالجف ـــــادجھالالشعير أصنافصممت تجربه تحمل Completely randomized design) المعوحللت النتائج باست %5مستوى فيتحليل التباين إلىالبيانات ) وأخضعت . )SAS )21 حصائيةاالبرنامج التحاليل DNAحزم الحامض النووي بقراءة المدروسةلتحليل درجه التشابه الوراثي بين العينات حصائياالاجري التحليل في حساب PAST ver. 1.91برنامج عملواست 0ولعدم وجودھا بالرمز 1برقم ألحزمهفي الھالم ورمز لوجود الظاھرة التي توضح التشابه الوراثية القرابةورسمت شجره Cluster تم وضع مخطط التحليل العنقودي معامل التشابه الوراثي. UPGMA )Un weighted pair- group method using anبطريقه المدروسة افاألصنالوراثي بين arithmetic average( . برنامج المعوباست عماالاست األكثرلكونھا لطريقةااعتمدت ھذهPAST المعدلةوبنسخته )Version.1.91 (مقياس وباستعمالJacard ) المستعملةالبادئات لكفاءة المئوية النسبة حسبت). 22للتشابه الوراثي Primer efficiency لمؤشرات الـRAPD المعادلةمن خالل:- x 100= العدد الكلي لحزم البادئ / العدد الكلي لحزم كل البادئات % البادئ كفاءة - :االتيه المعادلةلكل بادئ من خالل التمييزية للقدرة المئوية النسبةثم تم استخراج .) x 100 )23لكل البادئات المتباينةللبادئ / عدد الحزم المتباينةعدد الحزم النسبة المئوية للقدرة التميزية %= النتائج والمناقشة لفحص ) بار9 - ، 6-،3-مختلفة ( مائيةجھود إلىالعراق فيمختلفة من الشعير المزروع أصنافتم تعريض بذور الجفاف . جھادالالمختلفة األصنافمدى تحمل ةمختلف ةمائيود ــــلجھ والمعرضةمختلفة من الشعير أصناف نباتاتأثير الجھد المائي في نسبة يوضح )2الجدول( إنبات) بار في خفض نسبة 6-,9-الجفاف عند المستويين ( جھادالمعنوي تأثيروجود لىاالنتائج أشارتبار. 3-,6-,9-)( . لوحظ انخفاض في نسب المدروسة األصنافاغلب نباتانسبه فيمعنويا ابار تأثير )(3-يظھر المستوى مالبذور ول مقارنة بمعاملة السيطرة حيث %69,12 إلى نباتاألبار انخفضت نسبة 3-فعند الجھد المائي يالجھد المائكلما زاد نباتاأل انخفضت نسبة بار 6-جھد مائي إلى عند تعريض البذور إما،%5بنسبة انخفاض تعادل إي73,42% اإلنباتكانت نسبة نسبة فأصبحتبار 9-الجھد المائي إلىوعند تعريض النبات %40بنسبة انخفاض تعادل إي43,37% إلى نباتاأل عند التركيز العالي من كاليكول متعدد نباتاأل. يعزى انخفاض نسبة %54بنسبة انخفاض تعادل إي33,31% اإلنبات امتصاص الماء من البذور الضروري لتحول المواد الغذائية المخزونة الداخلية في البذور تحت انخفاض معدل إلىاالثلين )،فضـــال عن ذلك تأثـير الجفــــاف 24(اإلنباتالبســيط ومن ثــــم بـــدء إلىمن الشــكل المعقــد اإلنزيميتأثير النشــاط انيثبط اللذين بيتــــا اميليز والفـــا امليز إنزيميلوحظـ نشـــاط إذبـــذور نفسھــــا مبـاشره داخـــل ال اإلنزيماتفي نشــــاط علوم الحياة | 248 2015) عام 3(العدد 28المجلد مجلة إبن الھيثم للعلوم الصرفة و التطبيقية Ibn Al-Haitham J. for Pure & Appl. Sci. Vol. 28 (3) 2015 في نباتات العدس وزھرة الشمس. ) 28)و(27(تماثلت ھذه النتائج مع ما حصـــــــل عليـــه كل من ).26(25,بفعل الجفــاف بار)فيعود (3-عند التراكيز المنخفضة من كاليكول متعدد االثلين األصنافأو ارتفاعھا في بعض اإلنبات ةتأثر نسبأما عدم إذ اإلنباتانخفاض الجھد المائي لھذا المحلول الذي لم يكن كافيا لمنع تشرب الكميه المطلوبة من الماء لحدوث إلى وحظ من خالل نسبة وھذا ل اإلنباتتحصل على كميه الماء الالزمة لبدء إناستطاعت البذور بفعل قوى التشرب الداخلي بار وھذا يدل على 3-عند التركيز 100% إنباتبوادي ،الوركاء،الخير،نومار حققت نسبة األصنافعند المرتفعة اإلنبات بالرغم اإلنباتالحصول على كميه الماء الالزمة لحدوث إلى أدتتمتاز بقوى تشرب داخلية عالية األصنافبذور ھذه إن في منطقه النمو. من وجود جھد مائي منخفض عند 88بار فكانت 9- للصنف براق واريفات لم تتأثر معنويا بأعلى جھد مائي نباتاالنسبه إنكذلك يبين )2الجدول ( اعتمادا فينالصن عد ھذين بار وعلى التوالي لذا 9-عند الجھد المائي %83،77 وأصبحتلكال الصنفين السيطرةمعامله اإلنبات، نومار فقد تأثرت نسبه القادسيةبوادي،أمل، نور األصنافللجفاف أما المتحملة األصنافمن اإلنباتعلى نسبه بار فكانت نسبه 6-ولم تتأثر معنويا بالجھد المائي السيطرةمعامله إلىبار نسبه 9-فيھم معنويا عند الجھد ند الجھد ـع 38%, 44%, 61% ,77% وأصبحت السيطرةعلى التوالي عند معامله 88%, 61%, 88%, 100% إنباتھم أباء الوركاء، الخير، األصناف قيةمتوسطه التحمل للجفاف ،أما ب عدھم اصنافار على التوالي لذا يمكن با 9-المائي بار 3-بار و 6-معنويا بالجھد المائي إنباتھمتأثرت نسبه 7إباء،1جزيرة، 9، فرات3،سمير،ريحانه ،رافدين ،شعاع99 للجفاف. حساسة أصنافلذا أمكن اعتبارھم األصنافلبعض عشر صنفا من الشعير المزروعة فى العراق والمتحملة لدرجات ستة لدراسةعشر بادئا عشوائيا إحد عملاست من اصنف 16) حزمه توزعت على 202من الحزم بلغ ( اھذه البادئات عدد أنتجتالجفاف، إجھادمختلفة من ) فكانت 89.60%( إي الباقيةحزمه 181أحاديه الشكل ،أما Monomorphic) كانت %10.39(أي حزمه21،الشعير Polymorphic حزمه للبادئ الواحد.البادئ 23-10بين ( أعدادھا، تراوحت متباينةأو اإلشكال متعددة (P27 أعطى ، وبلغ حزم 10 المتباينةدد من الحزم أوطئ ع أنتج OP-B11حزمه بينما البادئ 23 شكالاأل متعددةأعلى عدد من الحزم Polymorphismللتباين المئوية النسبة،أما معدل اصنف 16) حزمه لكل بادئ بين 16.45%( المتباينةمعدل الحزم البادئات قد ءهكفا إماOP-C16 .للبادئ %100و OP-B11 للبادئ %71.4 ) تراوحت مابين %88.70فبلغت ( إما،OP-C16فكان البادئ ءهاقلھا كفا إما المستعملهالبادئات أكفأ P27 ) حيث كان البادئ5.94_12.37تراوحت مابين ( إما P27قدره تميزيه للبادئ أعلى)فكانت _12.70 (5.52فكانت تتراوح بين ةعملالمستللبادئات التمييزية للقدرة بالنسبة ة ــبدراس اقاموإذ )(29ا أجراھمع دراسة الدراسة). اتفقت نتائج ھذه 3.جدول ( OP-B11 اقل قدره تميزيه فكانت للبادئ حزمة متباينة سمحت 23 أظھرتبادئات ست المعسوريا باست فيالمزوع من الشعير اوراثي اتركيب23 ـل يالوراثوع ــالتن بالتميز بين التراكيب الوراثية. ) ، فمثال 1(الشكل ) و4جدول (ال كما في المدروسة) حزمة مميزة لعينات الشعير RAPD )11بادئات أعطت حساسةجميعھا أصنافوھى 7 إباء،1،جزيرة 9ميزت كل من فرات 450bالحزمة أعطى OP-N13البادئ ميزت الصنف التي bp 1500 الحزمة وأعطىالمتحملة والمتوسطة التحمل . األصناف فيفقدت ھذه الحزمة وللجفاف ، ذات الوزن الجزيئي بالحزمة أيضاتميز الذي OP-C16ميزت الصنف رافدين وكذلك البادئ 1400شعاع ،والحزمة 1500 bp البادئ وإما 99،نومار،اباءةالقادسي نور لخير، الوركاء،براق،بوادي،اريفات،أمل، ا في ألحزمهظھرت ھذه إذ OP-P27 2000يئي ذات الوزن الجز بالحزمةفقد تميز bp التي ظھرت في الصنف براق المتحمل للجفاف فقط ولم تظھر نتيجةمع النتيجةبصفة التحمل للجفاف . اتفقت ھذه مرتبطةتكون ھذه الحزمة إنللجفاف لذا يمكن الحساسة األصناف في وقد ظھرت له حزمه مميزه لصفه اإليرانيبريه من الشعير أصنافنفس ھذا البادئ على عمال ) الذي است30الباحث( األصنافولم تظھر في المتحملة األصناففي ألحزمهفقد ظھرت ھذه bp 600 يالتحمل للجفاف كانت ذات وزن جزيئ على نطاق واسع للتميز عمالھايمكن است والتيمن الحزم المھمة جدا P27التابعة للبادئ bp 2000 الحزمة د. تعالحساسة SCAR) (Sequence-characterize إلىالمتحملة والحساسة للجفاف من خالل تحويل ھذه الحزم الشعير أصنافبين amplified region ادئاتمن ب ومشتقةعالية هثبوتيذو ادئاتوھى ب )RAPD ( )31)(32،( لقد تم تطوير بادئات ال SCAR ابتداء من (34والحساسة للملوحة والمتحملة) 33(المتحملة والحساسة للجفاف الحنطة أصنافاستعملت لتميز ( .RAPDبادئات H.vulgareالمدروسة لنبات الشعير األصناففي تقدير البعد الوراثي بين كافة RAPDاستثمرت نتائج بادئات الـ أظھرت.) 5للتشابه الوراثي ، وتمثلت النتيجة بالجدول ( Jaccardمعامل المعوباست Past اإلحصائيمن خالل البرنامج إباء) أما اكبر قيمه للتشابه كانت بين (0.69048) حيث بلغت (9كانت بين (سميروفرات الوراثياقل قيمه للتشابه إنالنتائج .) وتراوحت بقية العينات بقيمھا بين ذلك0.97674 (وبراق) حيث بلغت 99 المعباست RAPDعلى تحليل بيانات االشعير استناد ألصناف) شجرة عالقات القرابة الوراثية 2( شكلالبين ي UPGMA برامج فيالداخلة اإلباءالوراثية واختيار األصولتنظيم إمكانية إلىتحديد القرابة الوراثية أھمية.وترجع تحتوى على اكبر قدر ممكن من الصفات الجيدة التيالھجن ومعرفة اقل عدد من التراكيب الوراثية بأحسنوالتنبؤ التربية ثالث مجاميع إلىعشر الستةالشعير أصنافقسمت Similarity indexوبناء على درجة التشابه ) 35( التربيةج برام في األولىتحت المجموعة ضمت %81ثالثة تحت مجموعة وبنسبه تشابه األولىضمت المجموعة %75عند درجة تشابه كاء والخير الحساسين للجفاف التي ظھر ردا الصنفين الوالمتحملة للجفاف والمتوسطة التحمل ماع األصنافجميع ةوالثاني علوم الحياة | 249 2015) عام 3(العدد 28المجلد مجلة إبن الھيثم للعلوم الصرفة و التطبيقية Ibn Al-Haitham J. for Pure & Appl. Sci. Vol. 28 (3) 2015 ريفات تحت أ) لذا قد يكون وجودھم مع 36(المحلي األسودبأن صنف الخير ناتج من تضريب صنف اريفات مع صنف المجموعة الثانية والثالثة وتحت المجموعة الثالثة التابعة للمجموعة إماالوراثي، األصلاعتمادا على ھانفس المجموعة قد ميزت وبكفاءة التراكيب RAPDتقنيه إن إلىتشير النتائج وبالتاليالحساسة للجفاف، األصناففقد ضمت األولى .)38)و(37)و(30ن (ن بعضھا وھذا يتفق مع نتائج كل مالوراثية المتحملة للجفاف عن تلك الحساسة ع التحسين إمكانية إلىن العينات المدروسة مما يشير بي الوراثيعلى وجود نسبه عاليه من التباين أيضادلت النتائج ھذه المجموعة من التراكيب الوراثية . عمالالشعير اعتمادا على ھذه النتائج وباست ألصناف الوراثي المصادر 1-FAO (2002) Statistical yearbook production . 2- Fischbeck,G.(2002).Contribution of barley to agriculture,Abrief over view . in:G.A. , :1-4. . مجلة زراعة الرافدين ، األمطار محدودة) . انتخاب واختيار سالالت من الشعير للمناطق 2000العذاري ، حسن محمد . ( -3 .العراق.5(8)40-31 .العراق. الزراعة). وزاره 2013مديريه االحصاء الزراعي.(-4 5- Badiane,F.A.;Diouf,D.;Sané1,D.;Diouf,O.; Goudiaby,V. and Diallo,N.(2004). Screening cowpea [Vigna unguiculata (L.) Walp.] varieties by inducing water deficit and RAPD analyses. African J. Biotech .3 (3): 174-178. 6- Patade,V.Y.;Saprasanna,P.;Bapat,V.A. and Kulkami,U.G.(2006).Selection for abiotic (salinity and drought) stress tolerance and molecular characterization of tolerant lines in sugarcane .Sugar.Tech.8(1):63-68. 7- Abdel-Raheem, A.T.; Ragab, A. R.; Kasem, Z.A.; Omer, F. D. and Samera, A.M. In vitro selection for tomato plants for drought tolerance via callus culture under polyethylene glycol (PEG) and mannitol treatments (2001). African Crop Science Conference Proceedings, 8:2027- 2032. الحلولى فى ھاداإلججابة بعض اصناف الشعير لتحمل .تقيم است.(2006)علي الشيخ رؤى و صالح ,رفيق; العودة الشحاذة ,أيمن -8 .سوريا. 22(1) :33-15الزراعية . للعلوم دمشق جامعة . مجلةاألولىمرحلة النمو 9- Jaleel,C.A. ;Manivannan,P. ;Wahid,A. ;Farooq,M. ;Al-Jubury,H.J. ; Somasundaran, R. and Panneerselvem, R.(2006). Drought stress in plant: areview on morphological characteristic and pigments composition. Int. J.Agric. Biol.,11(1):100-105. 10- Baum,M. ;Grando,S. ;Backes,G. ;Jahoor,A. ;Sabbagh,A. and Ceccarelli,S. (2003). QTLs for agronomic traits in mediterranean environment identified in recombinant in bread lines of the cross 'Arta'x H.spantaneum 41-1. Theor.Appl.Genet.,107:1215-1225. ثم . ( -11 دنا 2001سيد ، محمود ھي في انتخاب مورثات المقاومة لالمراض في الشعير . DNA) . استخدام مؤشرات من ال أطروحة دكتواره ، جامعة دمشق ، كلية الزراعة ، سوريا. 12-Williams, J.G.K.; Kublaik , A.R.; Livak, K.J.;Rafalski, J.A. and Tingey, S.V. (1990) . DNA polymorphisms amplified by arbitrary primers are Usedul as genetic markers . Nucl. Acids . Res., 18:6531-6535. 13- Welsh.J. and McClelland, M.(1990).Fingerprinting genomes using PCR with arbitrary primers,Nucleic Acid,Res,18:7213-7218. 14- Vierling,R. and Nguyen, H.T. (1992). Use of RAPD markers to determine the genetic relationship of diploid wheat genotypes ,Theor .Appl .Genet.,84 :835-838. 15-Askari,E. ;Al-Khalifa, N.S. ;Ohmura,T. ;Al-Hafedh,Y.S. ;Khan,F.A. ;Al-Hindi,A. and Okawara,R. (2003). Molecular phytogeny of seven data palm (Phoenix dactylifera L.) cultivars.7(1):223-228 علوم الحياة | 250 2015) عام 3(العدد 28المجلد مجلة إبن الھيثم للعلوم الصرفة و التطبيقية Ibn Al-Haitham J. for Pure & Appl. Sci. Vol. 28 (3) 2015 16-Awasthi,A.K.;Nagaraja,G.M.;Naik,G.V.;Kanginakudru,S.;Thangavelu,K. and Nagaraju,J. (2004). Genetic diversity and relationships in mulberry (Morus) as revealed by RAPD and ISSR marker assays.BMC Genetic,5(1) :1471-1486. 17-Hamidi , H. and Safarnejad ,A. (2010) . Effect of Drought Stress on Alfalfa caltivars (Medicago Sativa L.) in Germination stage . American – Eurasian . Agric. Environ . Sci., 8(6):705-709. 18- Weigand , F.; Baum, M. and Udupa, S.(1993) . DNA Molecular marker techniques , technical manual . No. 20. Int. center Agric. Res. In the Dry Acas .15:117-125. 19- Saghai – maroof, M. A.; Soliman, K. M.; Jorgensen, R. A. and Allard, R. W. (1984) . Ribosomal DNA Spacer length polymorphisms in barley : Mendelain inheritance , Chromosomal location and population dynamics proc. Natl. Acad sci., USA. 81 : 8014-8018. 20- Sambrook, J.; Fritch, E.F. and Maniatis , J. (1989) . Molecular Cloning alaboratory manual . 2nd edation . coldspring Harbor laboratory press , New York. 21-SAS.(2012).Statistical Analysis System,User's Guide.Statistical.Version 9.1th ed. SAS .Inst. Inc. Cary.N.C.USA. 22- Hammer,D.;Harper,A. and Ryan,P.(2001).PAST:Palacontologi cal statistics. 23- Grudman.H.;Schneider,C.;Hartung,D.;Daschner,F. and Pith,T.(1995). Discriminatory power of three DNA typing techniques for P.aeruginosa. Clin.Microbiol.,3:528-532. 24-Rubio,M.C. ;Gonzalez,E.M. ;Minchin,F.R. ;Webb,K.J. ;Arrese-Igor ,C.; Ramos, J. and Becana ,M. (2002). Effects of water stress on antioxidant enzymes of leaves and nodules of transgenic alfalfa over expressing superoxide dismutases.Physiol. Plant ,115:531-540. 25- Todaka,D.;Matsushima,H. and Morohashi,Y.(2000).Water stress enhances .B-amylase activity in cucumber cotyledons. J. Exper. Bot.,345 (51):739-745. 26- Yan ,P.; Wu,L.J. and Yu,Z.L.( 2006). Effect of salt and drought stress on antioxidant enzymes activities and SOD isoenzymes of liquorice(Glycyrrhiza uralensis Fisch). Plant Growth Regulation, 49 (2-3): 157-165. 27- Singh,N.K.;Handa,A.K.;Hasegawa,P.M. and Bressan,R.A. (1985). Protein associated with adaptation of cultured tobacco cells to NaCl. Plant Physiol., 79:122-126. 28- Mohammed,salehi.(2012). The study of drought tolerance of lentil (Lens culinaris Medik) in seedling growth stages. Int. J. Agron. Plant Prod.3(1):38-41. . التنوع الوراثي في الشعير السوري بأستخدام مؤشرات )2001اشتر ، سھا وباوم ، مايكل.( ;غزال ، حسن ;شومان ،وفاء -29 RAPD،33-5: 99. مركز بحوث كليه الزراعة، جامعه الملك سعود. 30- Nazari,L. and Pakinyat, H.(2008). Genetic diversity of wild and cultivated barley genotype under drought stress using RAPD marker. Biotechnology ,7(4) :745-750. 31- Li , S.F. ; Tang , S.J. and ail , W.Q ( 2010) .RAPD – SCAR marker for genetically improved NEW GIFT Nile Tilapia ( Oreochrmis niloticas niloticas L.) and their application in strain identification .Res.,31 :147-153. -32 Rajesh , M.K.; Jerard , B,A, ; Prethi , P. ; Thomas, R.J. ; Fayeis , T.P. , and Rachana , K.E. (2013 ). Development of RAPD - derised SCAR marker associated with tall – type palm trait in coco nut . Sci. Hortic ., 150: 312-316. 33- Pakniyat,H. and Tavakol,E. (2007). RAPD markers associated with drought tolerance in bread wheat (Triticum aestivum L.). Pak.J.Biol.Sci., 10(18): 3237-3239. 34- Pakniyat,H.;Namayandeh,A. and Forster,B.P. (2004). Identification of RAPD markers linked to salt tolerance in cultivated and wild barley. Int. barley Genet. 191-194. 35- Dwivedi, S.L.S. ; Gurtn , ; Chandra , W. ; Yuejin N. and Nigam , N. (2001) Assessment of Genetic diversity among selected ground nut germplasm I : RAPD analysis plant Breeding 120: 345 – 349. .Hordum vulgar L) . استخدام مؤشرات الدنا في تحليل التنوع الوراثي للشعير 2002العاصي ، عقيل حسين علي . ( 36- اق . أطروحة دكتواره ، كلية التربية ابن الھيثم ، جامعة بغداد ، العراق.المزروع في العر 37-Reena,D.;Nawab,S.T.;Niraj,T. and Sharad,T. (2012). Identification of RAPD and ISSR markers for drought tolerance in Wheat (Triticum aestivum L.) .Physiol.Mol.Biol.Plant, 18(11): 101-104. علوم الحياة | 251 2015) عام 3(العدد 28المجلد مجلة إبن الھيثم للعلوم الصرفة و التطبيقية Ibn Al-Haitham J. for Pure & Appl. Sci. Vol. 28 (3) 2015 38- Mohammed,salehi.(2012). The study of drought tolerance of lentil (Lens culinaris Medik) in seedling growth stages. Int. J. Agro. Plant Prod.3(1):38-41. مع تتابعاتھا تعملةيوضح البادئات العشوائية المس :)1الجدول ( ت اسم البادئ 5 ـــــــــــــــ //3تتابع البادئ GTTTCGCTCC OP-BO1 1 GTAGACCCGT OP-B11 2 CACACTCCAG OP-C16 3 ACCCGGTCAC OP-D20 4 GGTGCGGGAA OP-EO2 5 AGCGTCACTC OP-N13 6 AAGCGACCTG OP-N16 7 GTGTCTAAGG OP-P04 8 CACAGAGGGA OP-T04 9 CCGTGCAGTA P 27 10 CTGCATCGTG P 7 11 الشعير المدروسة ألصناف(%) اإلنباتفي نسبة المائيد جھال تأثير :)2الجدول ( لمائي (بار)الجھد ا الصنف %المعدل Control -3 -6 -9 89.75 83 94 94 88 براق 91.25 77 88 100 100 بوادي 85.50 77 83 94 88 اريفات 81.50 61 83 94 88 أمل 74.75 50 61 100 88 الوركاء 73.45 44 61 100 88.8 الخير 52.50 44 50 55 61 نور القادسية 78.50 38 88 100 88 نومار 99أباء 66 61 27 27 45.25 38.25 16 27 44 66 شعاع 28.75 11 22 38 44 رافدين 14.75 5 5 22 27 سمير 3ريحانة 100 83 5 0 47.00 9فرات 66 66 0 0 33.00 1جزيرة 83 33 0 0 29.00 7أباء 33 22 0 0 13.75 --- 33.31 43.37 69.12 73.42 المعدل LSDقيمة * 21.053* ، التداخل: 12.281: لمائي* ، للجھد ا 14.768: للصنف: ) *P<0.05.( علوم الحياة | 252 2015) عام 3(العدد 28المجلد مجلة إبن الھيثم للعلوم الصرفة و التطبيقية Ibn Al-Haitham J. for Pure & Appl. Sci. Vol. 28 (3) 2015 والحزمه الناتجه ونسبه التباين وكفائتھا والقدره التمميزيه لھا عملهالبادئات المستيوضح :)3جدول( الحزم البادئ ت الرئيسيه الحزم المتباينه نسبه التباين% القدره التميزيه كفاءه البادئ للبادئ 1 OP-E02 16 14 87.5 7.92 7.73 2 OP-N13 22 19 86.36 10.89 10.49 3 OP-T04 23 22 95.65 11.38 12.15 4 OP-P04 19 18 94.73 9.40 9.94 5 OP-D20 21 20 95.23 10.39 11.04 6 OP-B01 13 11 84.61 6.43 6.07 7 OP-B11 14 10 71.41 6.93 5.52 8 OP-C16 12 12 100 5.94 6.62 9 OP-N16 18 15 83.3 8.91 8.28 10P27 25 23 92 12.37 12.70 11P7 20 17 85 9.90 9.39 واالصناف التي ظھرت فيھا ھذه الحزم عملهيوضح الحزم المميزه الناتجه للبادئات المست :)4جدول( ت الحزم مميزه (وزنھا البادىء bpالجزيئي ( الصنف المتميز 1 OP-N13 450 1500 1400 7، اباء 1، جزيرة 9فرات شعاع رافدين 2 OP- C16 1500 ، اريفات ، امل ، الخير ، الوركاء ، نور براق ، بوادي 99القادسية ، نومار ، اباء 3 OP- BO1 800 1400 بوادي امل 4 OP- EO2 1200 400 شعاع امل 5 P27 2000 300 براق ، شعاع 99براق،بوادي،اريفات،امل،الوركاء،نومار،اباء 9،رافدين ، فرات علوم الحياة | 253 2015) عام 3(العدد 28المجلد مجلة إبن الھيثم للعلوم الصرفة و التطبيقية Ibn Al-Haitham J. for Pure & Appl. Sci. Vol. 28 (3) 2015 A) (C16 OP- B) (OP- N13 C)(OP-B01 D)( OP-E02 (E) P27 مع الدليل % 1يوضح نواتج تضاعف البادئات المتميزه المرحله على ھالم االكاروز :)1شكل ( Ladderالحجمي M - ، أباء - 9نومار، 8-نور القادسيه ،7-الخير، -6الوركاء ، -5أمل ، - 4اريفات ،-3بوادي ،2-براق ، 1-الدليل الحجمي ، 9فرات -14، 3ريحانه 13-سمير ، 12-رافدين ، -11شعاع ،- 99،10 .7أباء-16، 1 جزيرة15- علوم الحياة | 254 2015) عام 3(العدد 28المجلد مجلة إبن الھيثم للعلوم الصرفة و التطبيقية Ibn Al-Haitham J. for Pure & Appl. Sci. Vol. 28 (3) 2015 RAPDيوضح مخطط التحليل العنقودي (شجره القرابه) اعتمادا على مؤشرات الـ :)2الشكل ( 0.75 0.78 0.81 0.84 0.87 0.9 0.93 0.96 0.99 S im ila r it y راق ب وادي ب ات اريف ل أم اء الورك ير الخ يه ور القادس ن ار نوم اء ٩اب ٩ عاع ش دين راف مير س ه ٣ريحان رات ٩ف زيره ١ج اء ٧اب       RAPDمن استخدام تقنيه الـ الناتجة البياناتعلى اعتمادايوضح قيم معامل التشابه الوراثي ألصناف الشعير المدروسة :)5جدول ( اقل قيمه للتشابه الوراثي اعلى قيمه للتشابه الوراثي ومارن 99اباء شعاع رافدين سمير 3ريحانه 9فرات 1جزيرة 7اباء نور القادسية براق بوادي أريفات أملالوركاء الخير براق 1 بوادي 0.904 1 أريفات 0.880 0.875 1 أمل 0.880 0.973 0.85 1 الوركاء 0.976 0.880 0.8570.857 1 الخير 0.833 0.871 0.8460.8 0.853 1 نور القادسية 0.904 0.9 0.8570.829 0.8710.880 1 ومارن 0.813 0.761 0.7380.871 0.7310.790 0.804 1 99اباء 0.976 0.883 0.8600.860 0.8130.953 0.8370.883 1 شعاع 0.928 0.833 0.8090.853 0.951 0.85 0.8290.878 0.906 1 رافدين 0.883 0.878 0.8530.809 0.860 0.85 0.8290.878 0.8570.906 1 سمير 0.976 0.880 0.8570.857 0.8530.952 0.8330.926 0.9510.853 0.904 1 3ريحانه 0.906 0.853 0.8290.829 0.8250.926 0.7610.809 0.8780.883 0.8800.878 1 9فرات 0.714 0.789 0.7630.763 0.7560.731 0.6920.743 0.7250.697 0.6900.725 0.789 1 1جزيرة 0.928 0.878 0.8530.853 0.8970.951 0.8290.878 0.906 0.95 0.9510.902 0.925 0.725 1 7اباء 0.761 0.75 0.7250.769 0.7170.780 0.7890.75 0.8200.744 0.7800.731 0.794 0.771 0.820 1 علوم الحياة | 256 2015) عام 3(العدد 28المجلد مجلة إبن الھيثم للعلوم الصرفة و التطبيقية Ibn Al-Haitham J. for Pure & Appl. Sci. Vol. 28 (3) 2015 Genetic Diversity of Iraqi Barley Species Differing in Their Tolerance to Drought by RAPD Analysis Nidhal N. Hussain Zainab R. jassem Dept. of Biology / College of Education for Pure Science (Ibn AL-Haithem) /University of Baghdad Harb Adeel Dept. of plant protection/ Ministary of Agriculture Received in:16/November/2014,Accepted in:18/January/2015 Abstract The genetic diversity was studied in sixteen barley Hordeum vulgar L. species cultivated in Iraq , which are differ in their ability to drought stress tolerance by using random amplified polymorphic DNA polymerase chain reaction (RAPD - PCR ) .Barley species was evaluated to drought stress after treatment the plant seedling at germination stages to different concentration of polyethylene glycol (PEDG6000) . The results showed that the Broaq and Arefat species have the highest tolerance to drought stress in contrast the rest of Barly species like Alkhair, Alwarkaa, Ebaa99, Shoaa, Alrafidain,Sameer Rehana 3 , forat9 , jazeral ,and ebaa7 revealed sensitivity to drought stress . The primes which used RAPD technique for all the studied species were produced 203 bands . The percentage of monomorphic bands is 10.39 % , while the polymorphic bands scored 89.70% raning from 71.4 % for OP-B11 primer to 100% for OP-C16 primer .Some primers produced specific or distinguished bands for some Barley species , such as primer OP-N13 which produced band with 450 bp molecular weight. and this band was appeared in sensitive drought stress species only like Forat 9 ,Jazera 1 and Ebaa7. Primer P27 produced band with 2000 bp molecular weight and this band was appeared in highest tolerance Boraq Barley species .This band maybe associated with drought tolerant. Cluster analyses by using jaccard scale for genetic similarity revealed a dendogram with three major groups with 75% similarity degree .The first and second sub group of group one included the tolerant and moderately tolerant species excluding Alkhair and Alwarkaa species which they are separated according to their genetic origin with one of the parents (Arefat) . The second and the third groups with the third sub group of group one included the sensitive species. The results of RAPD markers indicated the presence of high percentage of genetic diversity within the studies Barley species cultivated in Iraq .Moreover .these result enable the researches to separate the samples which differ in their ability to drought stress tolerance by using few numbers of genetic sites. . Key Words: Hordeum vulgar , drought and RAPD 245-254 255 256