Microsoft Word - 373-382 373 علوم الحياة | 2015) عام 3(العدد 28المجلد مجلة إبن الھيثم للعلوم الصرفة و التطبيقية Ibn Al-Haitham J. for Pure & Appl. Sci. Vol. 28 (3) 2015 ) النامية برياً Gladiolus L. )Iridaceaeالتنوع والعالقات الوراثية النواع جنس RAPD – PCRتقنية باستعمالفي العراق اريج عبد الستار فرمان مازن نواف عبود )/جامعة بغدادابن الھيثم (كلية التربية للعلوم الصرفة / قسم علوم الحياة 2015/تشرين الثاني/15،قبل البحث في:2015/ايلول/29استلم البحث في: الخالصة في تقنية DNA مؤشرات الدنا باستعمال البري .Gladiolus Lانواع تابعة لجنس 4التنوع والعالقات الوراثية بين الدراسةبينت ھذه من االوراق Genomic DNA، شملت الدراسة استخالص الدنا المجيني RAPDالتضخيم العشوائي متعدد االشكال لسلسلة الدنا عشوائية انتجت عدد من الحزم متعددة االشكال Primersبوادئ 4 استعمالعدة استخالص دنا النباتات ، وتم باستعمالالنباتية الجافة Polymorphic النواع االربعة المدروسة ، كذلك تم تحديد البصمة الوراثية لجميع االنواع من خالل ظھور عدد من الحزم بين ا التحليل العنقودي استعمال ، فضال عن 0.86الى 0.10، وتم تحديد البعد الوراثي بين االنواع اذ تراوح بين Unique bandsالفريدة وباالعتماد جرة من مجموعتين رئيسيتين تعتمد على سلفھم وصفاتھم المظھرية والتشريحية لبناء شجرة التنوع الوراثي اذ تكّونت الش .Boissعلى نتائج ھذه الدراسة ونتائج دراسات اخرى كالتشريح وحبوب اللقاح تم تسجيل نوع جديد في العراق ضمن ھذا الجنس ھو G.anatolicus . Gladiolus ،DNA ،RAPD: الكلمات المفتاحية *البحث مستل من اطروحة دكتوراه 374 علوم الحياة | 2015) عام 3(العدد 28المجلد مجلة إبن الھيثم للعلوم الصرفة و التطبيقية Ibn Al-Haitham J. for Pure & Appl. Sci. Vol. 28 (3) 2015 المقدمة Monocotyledonمن نباتات ذوات الفلقة الواحدة Iridaceaeثاني اكبر االجناس التابعة للعائلة السوسنية .Gladiolus Lجنس يعد 4في شمال وجنوب المناطق المعتدلة ينمو منھا في العراق السيماجنساً منتشرة عالمياً 70، اذ تضم ھذه العائلة .Iris Lجنس البعد لتحديد التاريخ العرقي استعمااليبقى الدليل االكثر Morphologyان المظھر الخارجي ، ]1[اجناس فقط احداھا الجنس قيد الدراسة Phylogeny ، اال ان البيانات الجزيئية تستعمل اليوم لبناء شجرة الحياةTree of life بكل فروعھا وليس لمجموعات محددة كتلك ن بعلم التصنيف يبدأ حين قدم المختصالذي التغيير الكبير الذي حدث في علم التصنيف فضالً عن ]،2[التي يمكن تمييزھا بسھولة الرايبوزي منقوص من خالل ما قاموا به من تحليل لبيانات تسلسل الحامض النووي غاية في االھميةالجزيئي معلومات االدوات ، الذي اتاح Molecular biologyالتطور السريع الذي حدث في مجاالت علم الحياة الجزيئي اذ ان ،]DNA ]3االوكسجين اذ ، Molecular Taxonomyفي ظھور علم التصنيف الجزيئي المناسبة لدراسة المادة الوراثية وتحليلھا الجزيئي مما ساعد كثيراً ظھرت مؤشرات اذ علم على حل الكثير من المشاكل التصنيفية عن طريق االستدالل على وجود عالقات القرابة بين الكائناتعمل ھذا ال لدراسة العالقات الوراثية بين االفراد وايجاد البصمة الوراثية لكونھا تعكس االختالفات في تستعملالتي DNA markersالدنا ].4[ ھمـــنة فيزـــوراثية المخـــالمعلومات ال 4ايجاد التنوع والعالقات الوراثية بين ھذه الدراسة االولى في تعدانواع ھذا الجنس بدراسة من ھذا النوع في العراق لذلك لم تحضَ DNAـ تقنية التضخيم العشوائي لقطع ال استعمالاذ تم ، .Gladiolus Lجنس في العراق التي تعود الى نامية برياً انواع )RAPD-DNA ( المعتمدة على سلسلة تفاعالت البلمرةPCR التي تستند على تضخيم اي جزء من الDNA مھما كان صغيرا . التي عادة ما تكون عشوائية primersوالبادئات DNA polymeraseخارج الجسم الحي بوجود انزيم المواد وطرائق العمل وھي المناطق من خالل السفرات الحقلية التي اجريت، ) 1 جدول ( من العراق ةتم الحصول على العينات الطرية من مناطق مختلف لص الدنا المجيني من استخالتي تنمو فيھا االنواع التابعة للجنس المدروس بعدذلك تم تجفيفھاووضعھافي اكياس خاصة لحين استعمالھا الخاصة بالنبات الدناعدة استخالص باستعمال االوراق النباتية الجافة Genomic DNA mini kit (plant) ملغم 25تم وزن ، و وزي كخاص بجھاز الطرد المر Microcentrifuge tubeمن مسحوق االوراق النباتية بميزان حساس ووضع في انبوب دقيق . وحسب االرشادات في قائمة العمل الخاصة بعدة االستخالص الدنااتبعت خطوات خاصة في استخالص الذي يتم فيه Spectrophotometer(nanodrop)جھاز المطياف لالشعة تحت البنفسجية الدقيق باستعمالتم قياس نقاوة وتركيز الدنا المعادلة الخاصة بقياس وتركيز ليستعمللغرض فحصھا وھو مبرمج مايكروليتر) 0.5(كمية قليلة من الحامض النووي استعمال OD 260/280الحامض النووي باالعتماد على امتصاصية المحلول المحتوي على الدنا والبروتينات المرافقة له عند كثافة بصرية انكستروم على التوالي وھي : dsDNA concentration = 50 μg/mL × OD260 or 280 × dilution factor 1.8الى 1.7ل عليھا للنقاوة بين وتراوحت القيم المتحص ) لالنواع االربعة للجنس المدروس ، اذ حضرت البادئات المناسبة 2بادئات عشوائية ، جدول ( 4تم استخدام PCRمن خالل تقانة 10) %10تم الحصول على تركيز O�ddHوحسب االرشادات المرفقة مع العبوات وبعد اذابتھا بماء معقم مضاعف التقطير pmol/µl) . الذي GoTaq ®Green master mixمن الخليط الرئيس 12.5µlوذلك باضافة 20µlتم تحضير الحجم المناسب من خليط التفاعل ثم اضيفت الكمية المناسبة من البادئ )dNTPs)dTTP،dGTP،dCTP،dATPو 2Mgclو polymerase-Taq DNAيحتوي 1µl 0.2، بعد توزيع خليط التفاعل على انابيب صغيرةµl 5اضيفµl ثم اكمل الحجم بماء مضاعف من الدنا المستخلص لكل انبوبة الذي تمت برمجته حسب الجدول Thermal cyclerلكل انبوبة . وضعت االنابيب في جھاز المدّور الحراري 25µlالتقطير الى ادناه : ime: 5min. Temp.95ºC Initial denaturation 35 cycles Time: 30 sec. Temp.95ºC Denaturation Time: 40 sec. Temp.36ºC Annealing Time: 2 min. Temp.72ºC Extension Time: 5 min. Temp.72ºC Final extension من كل 10µlتم تحميل Ethidium bromideوبعد تصبيغه بصبغة بروميد االثيديوم agarose gels 1.5%حضر ھالم االكاروز بعد غمرالھالم بمحلول DNA ladderمن سلّم الدنا 5µlالى تحميل فضالً عنعينة ناتجة من التضخيم في الحفر الخاصة بالھالم 375 علوم الحياة | 2015) عام 3(العدد 28المجلد مجلة إبن الھيثم للعلوم الصرفة و التطبيقية Ibn Al-Haitham J. for Pure & Appl. Sci. Vol. 28 (3) 2015 TBE-1x 50اذ تم الترحيل الكھربائي له بفولتية volt/cm لمدة ساعتين ، ثم فحص بجھاز االشعة فوق البنفسجيةUV المجھز بكاميرا وتم تصوير الھالم الحاوي على حزم الدنا ، ثم تمت دراستھا ومقارنتھا مع بعضھا ومع حزم سلّم الدنا المفصولة . ـالبيانات التي استُحصل عليھا من الكشف عن قطع ال وحللت البواديء العشوائيةباستعمال ) %حساب تعدد األشكال الوراثية (تم DNA ـودونت المعلومات التي تم الحصول عليھا من تضخيم قطع ال ،المتعددة األشكال DNA بواسطة تقانة PCR من جميع األنواع نفسه الحجم ھا ذات " لعدم وجود الحزمة نفس0" لوجود كل حزمة في الھالم وسجل الرقم "1اذ أعطي الرقم " ،مع أي باديء عملةالمست :في حساب تعدد االشكال الناتجة من كل بادئ تية االالمعادلة استعملت. ]5[األخرى في األنواع NP /NT × (100تعدد االشكال % = ( NP احد البوادئ العشوائية ، باستعمال= عدد الحزم متعددة االشكال من تضخيم الدناNT العدد الكلي للحزم الناتجة من = الوراثية عن طريق حساب البيانات الناتجة من تحليل مواقع وقياس المسافة وتم تحليل العالقات الوراثية نفسه ، البادئ استعمال تم حساب ، واعتمدت الحزم الواضحة فقط ، قطع الدنا المتعددة األشكال التي ظھرت على مواقع محددة من الھالم بعد الترحيل واستنادا إلى الصيغة االتية:بناًء على مصفوفة البيانات ]6[ـبين كل زوج من األصناف وفقاً ل (GD) تقديرات المسافة الوراثية G.D = 1-{2Nab/(Na + Nb)} Na العدد االجمالي لقطع =DNA ، شوھدت في الفرد أNb العدد الكلي لقطع =DNA ، التي اظھرھا الفرد بNab = المشتركة بين الفردين أ وب DNAعدد قطع (Unweighted Pair-Group Method with Average arithmetic (UPGMA)طريقة استعمال بعد ذلك تم برنامج باستعمال، واجريت العمليات الحسابية الالزمة ]7[طريقة مجاميع االزواج غير الموزونة مع المعدل الحسابي Numerical( 2.1االصدار (NTSYS) بنظام التصنيف العددي والتحليل متعدد المتغيرات الحاسوب الخاص Taxonomy and Multivariate Analysis System (]8، [ العنقودي وذلك لغرض اجراء التحليل Cluster analysis جنس الانواع بين الوراثية العالقة شجرة مخطط لبناءGladiolus . تم الجزء العملي من البحث في مختبرات ابن الھيثم . –كلية التربية للعلوم الصرفة النتائج والمناقشة : االنواع االربعة للجنس وھي :اربعة بوادئ مع استعمال تم جميعھا متعددة االشكال 1600bpو bp 450حزم تقع عند االوزان الجزيئية بين 10اعطى ھذا البادئ : OPC-9البادئ Polymorphic حزم فريدةثالثة وانتج ،%100وبنسبة Unique bands اثنتان منھا للنوعBoiss. G.atroviolacious ين تقع عند الوزنين الجزيئيbp )650 وواحدة سجلت للنوع900و (Mill G.italicus عند الوزن )3،جدول ( )1لوحة ( ،500bpالجزيئي االشكال من الحزم كانت متعددة bp،7 1500و bp 500حزم تقع عند االوزان الجزيئية 9انتج : RAPD-2البادئ االولى سجلت ينفريدت يناعطى ھذا البادئ حزمت،%22.22اما الحزم االحادية فكانت اثنتان وبنسبة %77.77وبنسبة سجلت للنوع 900bp والثانية عند الوزن الجزيئي 1000bpكانت عند الوزن الجزيئي G.atroviolasiousللنوع G.italicus 3، جدول( ) 1(لوحة( جميع ھذه الحزم متعددة االشكال ،1200bpو 290bpحزم تقع جميعھا عند االوزان الجزيئية 10انتج : R-15البادئ 300bpعند الوزن الجزيئي Boiss G.anatolicus انتج ھذا البادئ ثالثة حزم فريدة واحدة مع النوع ،%100وبنسبة )3( ، جدول) 2(لوحة ،) 700و bp )500عند الوزنين الجزيئيين G.italicusواثنتان سجلت للنوع من الحزم bp،7 1500و bp 200كانت جميعھا عند االوزان الجزيئية بين ، 9البادئ عدد الحزم الكلي لھذا : R-8البادئ كان العدد ، 22.2%وكان عدد الحزم االحادية التي انتجھا ھذا البادئ حزمتين وبنسبة ،%77.7متعددة االشكال وبنسبة عند االوزان الجزيئية G.atroviolaciousسجلت لھذا البادئ اذ اعطى ثالثة حزم مع النوع 6االكبر من الحزم الفريدة ھو bp )390 وثالثة اخرى مع النوع450و 400و (Boiss G.kotschyanus الوزان الجزيئية باbp )250 900و ) 3، جدول ()2(لوحة ،)1500و انتجت عدة حزم ،Gladiolus لكل من االنواع االربعة لجنس DNAـفي تضخيم الان البوادئ االربعة التي اثبتت فعالية مع متوسط اليل لكل موقع وراثي يساوي المستعمل البادئ حزم وحسب 10-9تراوح عدد الحزم بين ،عند ترحيلھا بالھالم ) وذلك من خالل مالحظة صور الترحيل للھالم، لوحة bpزوج قاعدي( 1600الى 200تراوحت احجام الحزم من ،9.5 ، وكانت النسبة المئوية لتعدد R-8و RAPD-2اعطته كل من البوادئ 9زم ھو اذ كان الحد االدنى لعدد الح )2) و(1( سجله كٌل 10قياساً بعدد البوادئ الكلي، وكان الحد االعلى لعدد الحزم ھو 18.4ھي R-8و RAPD-2 االشكال للبادئين استعمالتم ). 4(الكلي،جدول قياساً بعدد البوادئ 26.3الذين اظھرا تعدد االشكال بنسبة R-15و OPC-9من البادئين التي ظھرت في الھالم بعد DNAـال الى قطع استناداً Gladiolusمعامالت التشابه الوراثي لالنواع االربعة للجنس ، اذ تم تقسيم االنواع UPGMAتحليل استعمال عن طريق )1الشكل(لبناء المخطط الشجيري، RAPDاستخدام طريقة 0.10، وكانت اقل مسافة وراثية ھي 0.86-0.10االربعة في مجاميع ووجد ان نسبة التشابه الوراثي بينھا تراوحت بين .)5( جدول. G.anatolicusو G.italicusالنوعين وايضا بين G.kotschyanusو G.italicusلوحظت بين النوعين 376 علوم الحياة | 2015) عام 3(العدد 28المجلد مجلة إبن الھيثم للعلوم الصرفة و التطبيقية Ibn Al-Haitham J. for Pure & Appl. Sci. Vol. 28 (3) 2015 Cluster Analysisالتحليل العنقودي باستخدام التحليل العنقودي اذ Gladiolusلالنواع االربعة العائدة لجنس )1شكل( dendrogramشيدت مجموعة تحليل IIو Iالنامية في العراق مجموعتين رئيسيتين ھما Gladiolusاالنواع االربعة لجنس اظھرت العالقة الوراثية بين تمثلت IBوالمجموعة الثانوية G.atroviolaciousتمثلت بالنوع IAالمجموعة االولى شملت مجموعتين ثانويتين وھي . G.italicusاما المجموعة الرئيسية الثانية مثّلھا النوع G.anatolicusو G.kotschyanusبالنوعين وقد انفصل في G.atroviolaciousبالنوع IAثلت اذ تم )،1شكل ( Gladiolusجنس الالنواع اوضح المخطط الشجيري ، اما Ovoid vascular bundleاسطوانة وعائية ذات شكل بيضي اختلف في كونه يمتلك ومجموعة ثانوية عن االنواع ) فھما متشابھان في اغلب صفاتھما المظھرية والتشريحية، وھذا ما G.anatolicus )IBو G.kotschyanusالنوعين ) انفصل ايضا عن بقية G.italicus)IIجعلھما في مجموعة واحدة اي انه دليل على تقاربھما الوراثي الكبير، النوع االخير كل بيضي عريض يمتلك ثمرة ذات ش بكونهاالخرى االنواع االخرى بمجموعة رئيسة ثانية اذ اختلف عن االنواع broadly-ovoid البيضي الطويل - فضال عن الشكل البيضيOvoid-long ovoid .6جدول (السطوانته الوعائية ( . ألنھا التتطلب معلومات وراثية مسبقة حول الكائن الحي مثل تسلسل القواعد RAPD-PCRتقنية استعملت لقد تقانات أخرى ذات عالمات وراثية محددة، على استعمالتخصصة أواألمر الذي يؤدي إلى تصميم بواديء م النيوكليوتيدية نظراً لعدم وجود دراسة RAPDالرغم من أننا اختبرنا العديد من البادئات العشوائية قليلة النوكليوتيدات والخاصة بتقانة د اختالفات في عدد بادئات فقط التي اختيرت بسبب وجو 4وان في العراق، Gladiolusانواع جنس بھذا االسلوب حول مع البواديء في الھالم نتيجة األختالف في الوزن الجزيئي للحزم PCRتقانة استعمال الحزم بين العينات عند ترحيل نواتج ھو G.anatolicus النوعوھو مايتوضح من خالل حركتھا أثناء الترحيل الكھربائي لھا في الھالم وھذا ما يدل على ان في دراسة التغايرات الوراثية بين األنواع، التي عمالھاعلى العراق، وتتميز ھذه الطريقة بكفاءة عالية عند است نوع جديد DNAان استخراج الحامض النووي تجعل من المفيد أن يتم اعتمادھا في برامج المحافظة على التنوع الحيوي في البيئة. تختلف في بعض انواع النباتات وذلك بسبب DNAطرق استخالص ال ان و ق متنوعة،ائمن األنسجة النباتية يتم بطر استخالص ، اذ تم ]9[ونواتج ثانوية اخرى من العمليات االيضية Polyphenolsمحتواھا من الفينوالت المتعددة اذ ] ،10[مع في ھذه الدراسة من االوراق النباتية المجففة بغض النظرعن كونھا فتية او غير فتية وھذا ما يتفق DNAـال ان االوراق الفتية واالوراق المتفتحة جزئياً ھي المفضلة في عملية العزل وذلك النھا تحتوي كمية اقل من الفينوالت مختلفة الستخالص الحامض استعمال طرائقلذلك تم ،نقي DNAالمتعددة والمكونات االخرى التي تمنع الحصول على باستعمال النيتروجين السائل المستخدمة يتم سحق انسجة االوراق للعينات اذ دراسةللنباتات قيد ال النووي تكون مناسبة DNaseوالھاون المختبري، وھي طريقة مفيدة لمنع تلف العينات عند الحفظ وذلك بتثبيط عمل االنزيمات النووية مثل على الطرائقمية اعتماد بعض التي يتم إطالقھا عندما تتكسر جدران الخاليا، أوضحت بعض التقارير اھ Nuclaeseو ] .11[ الرغم من أنھا تعد من المواد غير االمنةبالنيتروجين السائل، استعمال في العزل وھذا يتفق مع نقاوة المستعملة ممكن ان تتباين بسبب النبات او البروتوكوالت DNAدرجة النقاوة ونوعية وكمية ق مختلفة ومتعددة وتقنيات متوفرة لعزل ائالتي تم الحصول عليھا في ھذه الدراسة اذ ھناك طر DNAـوكمية ال DNA في الحصول على نقاوة عالية وھي مھمة في السيما المجيني وھي تعتمد على اختيار عوامل مختلفة اصبحت ممكنة . اختصار الوقت والنتائج ، وان ھذه الطريقة انواع تعود للجنس المدروس 4قات الوراثية بين بنجاح اذ تم الكشف عن العال RAPDطريقة استعملت لتعيين RAPD-PCR تقانةوتم استخدام ،] 12[ في الماضي بنجاح للكشف عن العالقات الوراثية بين االفراد استعملت PCRعمل تقانة المدروسة،اذ تم تحسين ظروف االنواعالمستخلص من DNA عمالباست تعدد األشكال والتنوع الوراثي اذ تم annealingمرحلة السيمافي البرنامج الخاص بعمل الجھاز عملةالتي شملت المواد الكيميائية وعدد الدورات المست المستخدمة التي اعطت النتائج المطلوبة التي ادت الى تضخيم قطع الحامض النووي DNAـضبطھا بما يناسب عينات ال ) ضروري للحصول PCR)Optimizationعمل تقانة يء المناسبة،أن تحسين ظروفالبواد عمالالتي ظھرت بعد است ھو عدد الحزم التي ظھرت في مجين RAPD عمالان مبدا است، ] 13[ على أعلى خصوصية وأفضل النتائج المطلوبة ساطةالتضخيم بو (جينوم) االنواع المدروسة والذي يوضح عدد المواقع التي كشف عنھا الباديء بعد ارتباطه معھا عند DNAالعينات وتم مقارنتھا مع DNAمع عمالهاذ تم الحصول على عدد من الحزم لكل بادئ تم است PCRجھاز تقانة ladderويمكن ، ]14[ للبواديء ، ويتأثر عدد ھذه المواقع بأثنين من العوامل ھما ، حجم الجينوم والتسلسل النيوكليوتيدي فضال عن الجنس المدروس ، الوراثية التي ظھرت في ھذه الدراسة كمؤشر وراثي بين أنواعاستخدام نتائج تعدد األشكال نس ـــواع جـــض انــــع بعـــريدة مــــحزم ف ستة R-8فقد انتج البادئ ض البوادئـــتھا بعــريدة التي انتجـــالحزم الف Gladiolus خاصة بتعريف تلك االنواع السيما النوع يةــــة وراثصمــــكب عمالھاكن استـــ، اذ يم األكبردد ـــوھو الع أحادية الشكل اً فأن بعض البواديء أنتجت حزم فضالً عن ذلكالذي تم تسجيله في ھذه الدراسة ، G.anatolicusالجديد monomorphic البادئان كما فيRAPD-2 وR-15 بينما انتج البادئانOPC-9 وR-15 ، حزم متعددة االشكال فقط فيرت ــــي أثــــحثة التــــتـــفرات المســــة أو الطــــيـــذاتــــرات الــــطفــــدوث الــــال نتيجة حــــدد األشكـــحدث تعـــي ثناء العملية التطورية للكائنات التي قد تحدث بشكل طبيعي في أ ةــــيـــــوراثـــــع الـــــواقــــن المـــيـــة بـــــافــــســـــالم وھذا ما يتفق مع ] 15[قد حدث نتيجة حذف أو إضافة في الموقع الذي يرتبط به الباديء وقد يكون تعدد األشكال ،الحية ھذه الدراسة . 377 علوم الحياة | 2015) عام 3(العدد 28المجلد مجلة إبن الھيثم للعلوم الصرفة و التطبيقية Ibn Al-Haitham J. for Pure & Appl. Sci. Vol. 28 (3) 2015 عدد مع ت 10-9زوج قاعدي، وان عدد الحزم متعددة االشكال تراوح من 1500و 200تراوح بين ان احجام الحزم الناتجة ) .4(جدول ، R-15و OPC-9في البادئين % 100و R-8و RAPD-2في البادئين % 77.77اشكال ارتباطاً I.anatolicusو I.kotschyanusقربھا الوراثي اذ ارتبط النوعان من حيث ان انواع الجنس المدروسة تباينت وھذا اقلفكان ارتباطھا الوراثي االخرى لتشابھھما في الكثير من الصفات المظھرية والتشريحية اما االنواع جداً وثيقاً ) .1( ) وشكل6جدول (الصفات الوراثية والتشريحية . بعض واضح في اختالفھا في العراق اذ اختلف عن يفھو نوع جديد G.anatolicusوباالعتماد على نتائج ھذه الدراسة نستطيع ان نثبت ان النوع في الدراسة المستعملة في عدد ونوع الحزم الناتجة من التضخيم باختالف البوادئ للجنس نفسهالتي تعود االخرى االنواع وھذا ما كان واضحا في صور الھالم والتحليالت والنتائج التي تم التوصل اليھا. المصادر 1- Mathew,B.(1985) in Tonwnsend,C.C. and Guest,E.Flora of Iraq. Monocotyledones.Minstry of Agriculture and Agrarian reform , Baghdad , 8:226-256 . 2-Olmost,R.G. and Scotland,R.W.(2005).Molecular and morphological datasets.Taxon, 54(1):7-8. 3- Taia,W.K.(2005).Modern trends in plant taxonomy.Asian J. plant Sci. 4:58-62. 4- Williams,C.E. and St-clir,D.A.(1993).Phonelic relationship and level of vriability detected by restriction fragment length polymorphism and random amplified DNA analysis of cultivated and wild accession of (lycopersicon esculentum) Genome .36:619-630. 5- Bibi,S.; M.U., Dahot; I.A., Khan; A., Khatri; and Naqvi M.H.,. (2009).Study of genetic diversity in Whet using RAPD markers.Pakistan.Pak.J.Bot., 41(3):1023-1027. 6- Ni,M. and Li , W.H.(1979).Mathmatical model for studying genetic variation in terms of restriction Endonucleases.Proceeding of the National Academy of Sciens, USA 74:5267-5273. 7- Sneath,P.H.A. and Socal, R.R. (1973).Numerical taxonomy : The principels and practice of numerical classification .W.H. Freeman co.San.Francisco.California. 8- Roholf ,F.J.(2004).NTSYSPc,Numerical taxonomy and multivariate analysis system.Version 2.1.47 Roult 25A,Suit 2, Setauket, New York. 11733-2870. 9- Aljanabi,S.M.; Forget, L.; and Dookum, A. (1999).An inproved and RAPID protocol for the isolation of polysaccharide-and polyphenol-free sugarcan DNA. Plant Mol.Biol.Rep.,17:81-281. 10- Shankar,k.; Chavan,L.; Shinde,S.; and Patil, B .(2011).An improved DNA extraction protocol from four in vitro Banana cultivars.Asian J.Biotechnol. 3:84-90. 11- Sharma,A.D.; Gill, P.K.; and Singh ,P. (2002).DNA isolation from dry and fresh sample of polysaccharide-rich plants.Plant Mol.Biol.Rep. 20:415a-415f. 12- Goswami,S. and Tripathi, V.(2010).The use ISSR and RAPD markers for detecting DNA polymorphism ,genotype identification and genetic diversity among Trichosanthes dioica Roxb.Cultivars .International Jornal of Biodiversity and Conversation.India 2(12):405-413. 13- Williams,J.G.; Kubelic, A.R.; Livak, K.J.; Rafalaski, J.A.; and Tingey, S.V.(1990). DNA polymorphisms amplified by arbitrary primers are useful as genetic markers.Nucleic Acid Res.18:6531-6535pp. 14- AL-Asi,A.H.A.(2002).The use of DNA markers for genetic diversity analysis of (Hordum vulgar L.)cultivated in Iraq.PhD thesis.Biology department ,college of Ibn AL- Haitham Education.University of Baghdad.221p. 15- Tingey,S.V. and Tufo Del, J.P.(1993). Genetic analysis with RAPD markers. Plant physiology.101:349-352pp. 16-Azimi,M.H.; Sadeghian, S.Y.; Razavi Ahari ,V. ; Khazaei, F.; and Fathi Hafashjani , A. (2012).Genetic variation of Iranian Iris species using morphological characteristics and RAPD markers.International Jornal of Agrisciece.2(9):875-889. 17- Nasir,I.A.; Jamal, A.; Rahman, Z.; and Husnain, T. (2012).Molecular Analyses of Gladiolus lines with improved resistance against Fusarium with .Pak.J.Bot.44(1):73- 79. 378 علوم الحياة | 2015) عام 3(العدد 28المجلد مجلة إبن الھيثم للعلوم الصرفة و التطبيقية Ibn Al-Haitham J. for Pure & Appl. Sci. Vol. 28 (3) 2015 لعينات RAPD-2و OPC-9للبادئين RAPD-PCRهالم االكاروز بعد الترحيل الكهربائي لتفاعل %) ,11.5لوحة ( DNA لالنواع االربعة لجنسGladiolus .صورت تحت االشعة فوق البنفسجية بعد تصبيغها بصبغة بروميد االثيديومG1 )G.atroviolacius،(G2 )G.italicus ، (G3 )G.kotschyanus، (G4 )G.anatolicus ، ( M=100bp DNA ladder،N=negative sample DNAلعينات R-8و R-15للبادئين RAPD-PCRهالم االكاروز بعد الترحيل الكهربائي لتفاعل %),21.5لوحة ( G1بروميد االثيديوم. صورت تحت االشعة فوق البنفسجية بعد تصبيغها بصبغة Gladiolusلالنواع االربعة لجنس )G.atroviolacius،(G2 )G.italicus ، (G3 )G.kotschyanus، (G4 )G.anatolicus ، ( M=100bp DNA ladder،N=negative sample 379 علوم الحياة | 2015) عام 3(العدد 28المجلد مجلة إبن الھيثم للعلوم الصرفة و التطبيقية Ibn Al-Haitham J. for Pure & Appl. Sci. Vol. 28 (3) 2015 Gladiolusتظهر المسافة الوراثية لالنواع االربعة لجنس Dendrogram) شجرة التحليل الوراثي 1الشكل ( .UPGMAباستخدام التحليل العنقودي .المستخدمة في الدراسة ومناطق جمعهااالنواع ) 1جدول( location taxa No. ErbilGladiolus.atroviolacius1 Suleimaniyha،Erbil،DahookG.italicus2 SuleimaniyhaG.kotschyanus3 DahookG.anatolicus4 .) اسماء وتسلسالت القواعد للبادئات العشوائية التي استخدمت في الدراسة مع مصادرها2جدول ( No. Primers name Sequence 5'…….3' Reference 1 OPC-9 CTCACCGTCC ]16 [ 2 RAPD-2 TGCGCCCTTC ]16 [ 3 R-15 GGACAACGAG ]17 [ 4 R-8 CCCGTTGCCT ]17 [ 380 علوم الحياة | 2015) عام 3(العدد 28المجلد مجلة إبن الھيثم للعلوم الصرفة و التطبيقية Ibn Al-Haitham J. for Pure & Appl. Sci. Vol. 28 (3) 2015 Gladiolus) النواع جنس M.W.bp) البوادئ وعدد الحزم الفريدة التي انتجتها واوزانها الجزيئية (3جدول ( = NP= عدد الحزم الكلي لكل بادئ، Gladiolus ،NT) البوادئ المستخدمة مع االنواع االربعة لجنس 4جدول ( = عدد الحزم المفردة لكل بادئ . NMمتعددة االشكال لكل بادئ ، عدد الحزم Primer's name NT Sizeof bands/bp Np % NM % OPC-9 10 450-1600 10 100 0 0 RAPD-2 9 500-1500 7 77.77 2 22.22 R-15 10 390-1200 10 100 0 0 R-8 9 200-1500 7 77.77 2 22.22 Total 38 200-1600 34 355.54 4 44.44 Gladiolus لجنس االربعة االنواع بين GD الوراثية المسافة قيم) 5( جدول Primer Unique bands Taxa M.W.(bp) OPC-9 3 G.atroviolacious 650 900 G.italicus 500 RAPD-2 2 G.atroviolacious 1000 G.italicus 900 R-15 3 G.anatolicus 300 G.italicus 500 700 R-8 6 G.atroviolacious 390 400 450 G.kotschyanus 250 900 1500 G .1 G .2 G .3 G .4 G.atroviolacius(G.1) 0.00 G.italicus(G.2) 0.79 0.00 G.kotschianus(G.3) 0.54 0.10 0.00 G.anatolicus(G.4) 0.86 0.10 0.31 0.00 381 علوم الحياة | 2015) عام 3(العدد 28المجلد مجلة إبن الھيثم للعلوم الصرفة و التطبيقية Ibn Al-Haitham J. for Pure & Appl. Sci. Vol. 28 (3) 2015 جدول ) 6 ( س جن ع ن انوا ي بي ب الوراث التقار G la d io lu s حية شري ظھرية والت ت الم صفا ض ال مع بع clu ster I II C .S . = cro ss sectio n V .b . = v ascu lar b u n d le su b clu ster IA IB S P . G .a tro vio la ciu s G .ko tsch ya nu s G .a n a to licu s G .ita licu s M o rp h o lo g ica l ch a ra cters S h ap e o f fru it o b o v ate o b o v ate o b o v ate B ro ad ly -o v o id S eed s - w in g ed - U n w in g ed stig m as E q u al U n eq u al E q u al U n eq u al A n a to m ica l ch a ra cters S h ap e o f c.s. stem circular O v o id -circu lar circular o v o id S h ap e o f v .b . O v o id L o n g o v o id O v o id -lo n g o v o id T rian g le-lo n g o v o id 382 علوم الحياة | 2015) عام 3(العدد 28المجلد مجلة إبن الھيثم للعلوم الصرفة و التطبيقية Ibn Al-Haitham J. for Pure & Appl. Sci. Vol. 28 (3) 2015 Biodiversity and Genetic Relationships to the Species for the genus Gladiolus L. (Iridaceae) Wild Growing in Iraq Using RAPD-PCR Technique Areej A.Farman Mazin N. Aboud Dept. of Biology/ College of Education for Pure Science (Ibn-Al-Haitham)/ University of Baghdad. Received in:29/September/2015,Accepted in:15/November/2015 Abstract This study observed the genetic diversity and relationships among 4 species belonging to genus Gladiolus L. , by using the Random Amplified Polymorphic DNA (RAPD) technique , the study includes extraction of genomic DNA from the dray leaves by using commercial kit . 4 random primers used the produced of many polymorphic bands among the 4 species , it was also possible to fined the DNA fingerprint of all studied species.Through the appearance of a number of bands that were unique to each species.Genetic distances ranged from 0.10 to 0.86, and used cluster analysis were performed to construct dendrogram.Cluster analysis grouped the 4 species Into tow main clusters depending on their ancestor and their morphological and anatomical traits. Depending on the results of this study and other such as anatomical and palynologycal studies we can record a new species in Iraq belonging to genus Gladiolus, it is G. anatolicus. Key words: Gladiolus , DNA , RAPD