Microsoft Word - 1-7 1| Biology 2014) عام 3(العدد 27المجلد مجلة إبن الھيثم للعلوم الصرفة و التطبيقية Ibn Al-Haitham Jour. for Pure & Appl. Sci. Vol. 27 (3) 2014 في Sulcus medianالكشف عن إنظيم الكاربونك آنھايدريز في الثلم الناصف )Rutts rutts( البالغ األبيضجرذ ال الخلفي في دماغلالبطين الرابع ل ذكرى عطا إبراھيم للعلوم الصرفة / جامعة ديالىقسم علوم الحياة / كلية التربية أنعم رشيد الصالحي معھد أبحاث األجنة ومعالجة العقم / جامعة النھرين البكري الرضا عبد نھلة (ابن الھيثم)/جامعة بغداد–قسم علوم الحياة /كلية التربية للعلوم الصرفة 2014/حزيران /22 في البحث قبل ، 2014/اذار /52: في البحث استلم خالصةال Carbonicوالمعتمدة على الكوبالت في الكشف عن إنظيم الكاربونك آنھايدريز (أعتمدت طريقة ترسيب المعادن الثقيلة anhydrase) في الثلم الناصف (Sulcus median(البطين الرابع الدماغ الخلفي ) فيFourth ventricle (الجرذ في ) بدالً 2CoClكلوريد الكوبالت ( استعمل , إذتعديل أساسي في طريقة العمل أجري ) . وقد Rutts rutts(البالغ األبيض يم الكاربونك ظأية فعالية كيميانسجية ألن تظھر في ھذه النتيجة) في وسط التفاعل . لم PO3Co)4(2من فوسفات الكوبالت ( أرضية البطين الرابع للدماغ محددة بشكل واضح ولم يتم العثور على رواسب حيث ظھرت. آنھايدريز في المقاطع النسجية , بشكل جيد واضح )لمثيل األخضرالملون المضاد (ا التفاعل الكيميانسجي في الثلم الناصف ألرضية البطين الرابع . كان من )Area postremaنخفضة (لباحة المل) Venter surfaceلسطح البطني (يتألف افي منطقة الثلم الناصف . اً وواضح وسطياً أو في المنطقة مفرداً تكون تركيباً اذسواء في المنطقة األمامية منھا أية فعالية لألنظيم فيھا ظھرلم ت خاليا عمودية . )Central canalمزدوجاً مستمراً مع بطانة القناة المركزية (تركيباً الخلفية حين تكون .الثلم الناصف, كاربونك آنھايدريزالباحة الخلفية , أنظيم الكلمات المفتاحية : 2| Biology 2014) عام 3(العدد 27المجلد مجلة إبن الھيثم للعلوم الصرفة و التطبيقية Ibn Al-Haitham Jour. for Pure & Appl. Sci. Vol. 27 (3) 2014 : المقدمة في التركيب اً مختلف, فعاالً اً يميظإن اً نظير 14الذي يضم يمات الفلزية ,ظإنظيم كاربونيك آنھايدريز ھو من مجموعة األنإن يشترك في عمليات وظيفية واسعة مثل توازن الحامض ، و يم في مختلف األنسجةظھذا اإلن يوجدوالخواص التحفيزية. تكوين والتحميض الكلوي ، وإمتصاص العظم ، والتنفس ، وو ثاني أوكسيد الكاربون ، , والقاعدة ، إنتقال األيونات امض الشوكي والح مخيسائل الالوتكوين , لغدة النخاميةل الفص األمامي رموناتوإفراز ھوتكوين اليوريا ، والكلوكوز ، خاليا الجسم في يم الكاربونيك آنھيدريز التحلل المائي للتفاعل العكسي لثاني أوكسيد الكاربون في ظيحفز إن . [1]المعدي كعامالً ]2[لجرذ من ل (Blood cells)دم اليم الكاربونيك آنھيدريز للمرة األولى في خاليا ظالثدييات ، وقد اكتشف إن : لتفاعل غاز ثاني أوكسيد الكاربون والماء الذي يكون تفاعالً عكسياً اً مساعد ⇌ يم ھي التفاعل العكسي بين ثنائي أوكسيد الكاربون وأيون الكاربونيك ظالميكانيكية األكثر قبوالً لعمل ھذا االنو :]3[كما أشار إلى ذلك كليھماأو االتيينوميكانيكية مثل ھذا التفاعل من المرجح أن تكون واحدة من المسارين ، : ⇌ ⇌ : ⇌ وأخرى تخص أيون الكاربونيك يم الكاربونيك آنھيدريز يحتوي على مواقع تخص ظأن أن (4)لقد إقترح يم األكسدة المائية العكسية لثنائي ظلذلك غالباً ما يحفز ھذا اإلن حامض الكاربونيكلكن ليس لـ يم ھي إنتاج أيونات ظالتحلل المائي له . وأن النتيجة النھائية من عمل ھذا اإلنبدالً من أوكسيد الكاربون التي تكون جاھزة ألغراض التبادل مع المواد المتفاعلة غير األيونية مثل والكاربونيك الھيدروجين الكشف عن إنظيم الكاربونك آنھايدريز ن الھدف من الدراسة الحالية ھو إ . والماء ثنائي أوكسيد الكاربون . البالغ في الثلم الناصف في ارضية البطين الرابع لدماغ الجرذ األبيض المواد وطرق العمل تفاعل إنظيم الكاربونك آنھيدريز الكيميانسجي في أستعمل . وقد [6]والمعتمدة على الكوبالت مع تحويرھا من [5] من المستعملةأعتمدت طريقة ترسيب المعادن الثقيلة كلوريد الكوبالت أكثر يكون اذ , بدالً من فوسفات الكوبالت في وسط التفاعل CoCl)2(طريقة العمل كلوريد الكوبالت شمع البارافين . إن نتائج ھذه حضرت بطريقة مقاطع متسلسلة واستعملت في التفاعل ، [7] ذوباناً من فوسفات الكوبالت ية لحركيات التفاعل الكيميانسجي . يجري إعداد وسط ئنوعية وليست كمية بناًء على الطبيعة الكيمياالطريقة ھي نتائج : استعمالهحسب التسلسل المدرج لتقليل فرصة تكون رواسب ويتم ترشيح الوسط قبل اآلتيةالتفاعل بإضافة المكونات بيكاربونات الصوديوم في من ملغم 188 إذابة نحضر آنياً موي) Fluka( NaHCO)3(بيكاربونات الصوديوم محلول – 1 مل من الماء المقطر . 10 مل من الماء 10كلوريد الكوبالت في من ملغم 25 إذابة حضر منوي ) ، Fluka( CoCl)2(كلوريد الكوبالت محلول – 2 المقطر الالآيوني . 3| Biology 2014) عام 3(العدد 27المجلد مجلة إبن الھيثم للعلوم الصرفة و التطبيقية Ibn Al-Haitham Jour. for Pure & Appl. Sci. Vol. 27 (3) 2014 بتركيز 4PO2(KH(فوسفات البوتاسيوم أحادية القاعدة محلول – 3 1 5 . يموال ر . يموال ربتركيز نصف 4SO2(H(حامض الكبريتيك – 4 طريقة إجراء التفاعل ثم من الكحول المثيلي ،إلزالة الشمع منھا ثم مررت بسلسلة تنازلية التركيز Xylene)(الزايلين فيالشرائح وضعت – 1 بشكل عمودي على ورق الترشيح . وضعت الشريحة النسجية تغطي لباستور وترك القطرة تنساب بإستخدام قطارةقطرة على شكل وسط التفاعل إضافةيتم – 2 ورق التِرشيح أسفل الشرائح. بالكامل ووضع العملية عشرين مرة (مدة عشر دقائق) ھذه وتكررمن وسط التفاعل قطرة أخرى يتم إضافةثالثين ثانية بعد مرور – 3 .درجة مئوية) 25 – 22في درجة حرارة الغرفة (و إظھار نتائج التفاعل في محلول مخفف لكبريتيد النسجية غمر الشرائح, اذ يتم )فوسفات الكوبالتبتكون ( يتم إظھار نتائج التفاعل وذلكو ، لثواني عدة )مل من الماء المقطر الالأيوني 10كبريتيد األمونيوم في من (مكون من خمس قطرات NH)S2)4األمونيوم .بالماء سريعاً الشرائحثم تغسل : المضاد التلوين تمدة ثالث دقائق ، غسل % 25.0بتركيز )C.I. 42000, Methyl greenالمثيل ( بملون أخضرالمقاطع النسجية لونت تثبيت غطاء لغرض )(PVPمادة راتنجية وحملت المقاطع بإستعمال ورق الترشيح . بالماء وجففت بإستخدامبعدھا سريعاً لتجف في درجة حرارة الغرفة المقاطع النسجية توترك الشريحة النتائج الكشف عن انظيم الكاربونك انھيدريز كانت أرضية البطين المدروسة حيثلكاربونك آنھيدريز في المقاطع النسجية انظيم ألأية فعالية كيميانسجية تظھر النتيجةلم ألرضية البطين يب التفاعل الكيميانسجي في األخدود الوسطالرابع للدماغ محددة ، بشكل واضح ولم يتم العثور على رواس بلون ملونةت نوى الخاليا ظھرو، ما تم مالحظته بشكل جيد وواضح في المنطقة ولمثيل األخضر ھا ملون كانوالرابع )(Area postremaة لباحة المنخفضكانت الخاليا األسطوانية العمودية المكونة للسطح البطني لو) . 1شكل داكن ( العصبية في المنطقة . ىمتمايزة ودون ظھور أية فعالية لألنظيم فيھا وھذا ينطبق على الطبقات دون السطحية منھا والنو وسطياً أو في المنطقة الخلفية مفرداً تكون تركيباً اذ , ة أية فعالية سواء في المنطقة األمامية منھاالباحة المنخفضولم تظھر ) وبرھنت الكيمياء النسيجية 2شكل ( )Central canal( مزدوجاً مستمراً مع بطانة القناة المركزية تركيباً حين تكون يم في الخاليا المبطنة ظم طريقة فوسفات الكوبلت المعدلة فقدان النشاط المحفز لھذا اإلناستخدبإيم الكاربونك انھيدريز ظلإلن . لھذا التفاعل اً مضاد لوناً م المثيل ملون أخضرية .وقد استخدم السطحوالطبقات المناقشة للبطين الرابع الثلم الناصفالكاربونك آنھيدريز في ألنظم qualitativeالتحقق من وجود نوعي ھدفت الدراسة الحالية وأجريت تحويرات عدة لطريقة العمل للوصول إلى التحقق النوعي Area postrema)( الباحة المنخفضة ومنطقة الناتج من 2COلمطلوب . إن التفاعل الكيميانسجي المستخدم في ھذه الدراسة يركز على تثبيت ثاني أوكسيد الكاربون ا 4| Biology 2014) عام 3(العدد 27المجلد مجلة إبن الھيثم للعلوم الصرفة و التطبيقية Ibn Al-Haitham Jour. for Pure & Appl. Sci. Vol. 27 (3) 2014 )2CoCl(الفعالية األنظيمية ألنظيم الكاربونك آنھيدريز وذلك بربطه بأيون الكوبالت . وقد إستبدل كلوريد الكوبالت فوسفات البوتاسيوم أحادية استعمل. كما [7]يز عاٍل أليون الكوبالت للحصول على ترك )4Co(PO(2(بفوسفات الكوبالت التفاعل القاعدة لمعادلة تأثير تجمع أيون الھيدروكسيل الذي قد ينتج من الفاعلية األنظيمية ويغير معدل الحموضة في وسط راءات وظروف قياسية متكررة لم يتم إال أنه على الرغم من ھذه التعديالت والتحويرات والعمل ضمن إج قاعدي .ال باالتجاه للبطين الرابع أو في األجزاء المحيطة به ، وھذا الثلم الناصفالحصول على ما يؤيد وجود أنظيم الكاربونك آنھيدريز في ال يتمتع بفعاليات كيميانسجية , اذفعالية ضمن األعضاء حول البطينية ليس له , أن لھذا الموقع من الدماغ الخلفي يعني خاليا يمكن عدھذه الدراسة االستناد الى ب. و ]8[أنظيمية تؤھله ليتم إدراجه ضمن األعضاء حول البطينية كما إقترح ھي مماثلة لباقي أجزاء بطانة البطين الرابع وإمتداداتھا الخلفية خالل ه المنطقة لھذ )(Ependymal cellsالبطانة العصبية أن التركيب المستدق لھذه المناطق من البطين [9] ناة المركزية من الناحية الكيميانسجية . وقد بينت دراسة الباحث الق –ويظھر من الدراسات الحديثة أن دور خاليا البطانة العصبية ال يقع ضمن منظور الحاجز الدموي الرابع متماثلة أيضا . ) 10يا كخاليا جذعيه توفر رصيداً متجدداً من الخاليا للجھاز العصبي ، فقد بيَن (يقع ضمن فعاليات ھذه الخال انماالدماغي تولد خاليا نجميه وأخرى مولدة عصبية )Telen cephalon(الدماغ مقدم أن ھذه الخاليا في بطانة تجاويف )Neurobalasts( . المصـــــــادر 1-Parkkila S. and Parkkila A.-K. (1996): Carbonic anhydrase in the alimentary tract – role of the different isozymes and salivary factors in the maintenance of optimal conditions in the gastrointestinal canal. Scand. J. Gastroenterol. 31(4): 305-317 2- Meldrum N. U. and Rouphton F. J. W. (1933): Carbonic anhydrase. Its preparation and properties. J. Physiol. (Lond.) 80: 113-142 3- Maren T. H. (1967): Carbonic anhydrase: chemistry, physiology and inhibition. Physiol. Rev. 47: 595-781 4- Coleman J. E. (1984): Carbonic anhydrase: zinc and the mechanism of catalysis. In: Tashian R. E. & Hewett-Emmett D. (Eds.): Biology and chemistry of the carbonic anhydrases. Ann. N. Y. Acad. Sci. 429: 26-48. 5- Hansoon, H. P. (1967): Histochemical demonstration of carbonic anhydrase. Histochemie. 11(2):112-128. 6- Brown, D.; Kumpulainen, T.; Routh, J.; and Orci, L. (1983): Immunohistochemical localization of carbonic anhydrase in post-natal and adualt rat kidney. Am.J.Physical, 245:F118-F118. 7- Styer, L. (1995): Biochemistry. 4th ed., W. H. Freeman and Co. USA. 8- Collin, P. (1989): The sulcus medianus organ in the fourth ventricle of the rabbit: A previously undescribed circumventriclar organ. J.Anat. 162, 185-193. 9- Stumpf, W. E. and Barbero, M. G. (1978): SEM studies of the fourth ventricle: collicullar recess, sulcus medianus, and recess of locus ceruleus and lateral recess, Scanning Electron Microscopy II, 811-816. 10- Carlen, M.; Meletis, K.; and Goritz C. (2009) Forebrain ependymal cells are Notch- dependent and generate neuro blasts and astrocytes after stroke. Nature Neuroscience 12(3):259-267. 5| Biology 2014) عام 3(العدد 27المجلد مجلة إبن الھيثم للعلوم الصرفة و التطبيقية Ibn Al-Haitham Jour. for Pure & Appl. Sci. Vol. 27 (3) 2014 ملون الھيماتوكسلين .المنخفضةمقطع تاجي مار في البطين الرابع يوضح الثلم الناصف والباحة )1(رقم شكل .×200، وااليوسين AP: Area postrema المنخفضةالباحة DMX: Dorsal motor nucleus of vagus ة الظھرية للعصب التائهيالنواة الحرك NTS: Nucleus of tractus solitaries نواة الرقعة المفردة CC: Central canal القناة المركزية NTS CC DM X AP 6| Biology 2014) عام 3(العدد 27المجلد مجلة إبن الھيثم للعلوم الصرفة و التطبيقية Ibn Al-Haitham Jour. for Pure & Appl. Sci. Vol. 27 (3) 2014 مستمر مع بطانة القناة الة و منخفضتاجي مار في الثلم الناصف يظھر الجزء المنقاري من الباحة المقطع : ) 2(رقم شكل ×400. ملون المثيل األخضر, المركزية AP: Area posterema المنخفضةالباحة SAP: Sub layers cells of area posterema المنخفضةتحت الباحة الخلوية الطبقات CC: Central canal القناة المركزية CC A P ASP 7| Biology 2014) عام 3(العدد 27المجلد مجلة إبن الھيثم للعلوم الصرفة و التطبيقية Ibn Al-Haitham Jour. for Pure & Appl. Sci. Vol. 27 (3) 2014 Detection of Carbonic Anhydrase Enzyme in Sulcus Median in Hind Brain (Fourth Ventricle) in the Hind Brain of the Adult White Rat (Rutts rutts) Thekra A. Ibrahim Dept. of Biology /College of Education for Pure Science / University of Diyala Anam R. Al-Salihi Institute of Embryo Researchers and Infertility Treatment / University of Al- Nahrain Nahla A. Al-Bakri Dept. of Biology /College of Education for Pure Science - Ibn Al-Haitham / University of Baghdad Receivd in:25/March/2014, Accepted in :22/June/2014 Abstract The method of heavy metals deposition which is based on cobalt in detection of Carbonic anhydrase enzyme in the Sulcus median in the hid brain (fourth ventricle) in the adult white rat (Rutts rutts). An essential amended in the method has been done by using cobalt chloride (CoCl2) instead of cobalt phosphate (Co3(PO4)2) in the reaction medium. Any efficacy of enzymic histochemical for carbonic anhydrase enzyme did not show in histological sections. The floor of the fourth ventricle of the brain is specific, clearly any histochemical reaction sediments have not been found in sulcus median of the floor of the fourth ventricle. The corresponding stain to green methyl which was observed clearly in sulcus median region. The ventral surface of area postrema composes of differentiated columnar cells without existence for any efficacy for carbonic anhydrase enzyme in it. Area postrema did not show any effective in both outerion region where appears as one mid line component or in back region where as continuing couple with central canal lining appears. Key words: area postrema, carbonic anhydrase enzyme, sulcus median