Microsoft Word - 110-117 110 | Biology 2014) عام 3(العدد 27المجلد مجلة إبن الھيثم للعلوم الصرفة و التطبيقية Ibn Al-Haitham Jour. for Pure & Appl. Sci. Vol. 27 (3) 2014 التأثيرات الحيوية لألنثوسيانينات المستخلصة من ثمرة البرتقال في بعض انواع البكتريا سعيد حميد محمد قسم علوم الحياة/كلية التربية األساسية / جامعة ديالى 2014/تشرين الثاني /24 في البحث قبل ، 2014/اذر/5: في البحث استلم الخالصة يتناول البحث دراسة تأثيرات نوعين من األنثوسيانينات المستخلصة من ثمرة برتقال "الحسناء" وھما من نوع ) ،في Methiola violet) وميثيو ال أنثوسيانين البنفسجية ( EvolvulusAnthocyoninايفولفيوالس انثوسيانين ( ) والمكورات العنقودية الذھبية coli Escherichiaعين من البكتريا المرضية وھما األشريكية القولونية ( نو )Staphylococcus aureus وأظھرت النتائج ان المستخلصين لھما تأثير متقارب أذ كان قطر دائرة التثبيط (عدم ,( ملغم /مل له التأثير األكبر. 10-3مم وأن المستخلص األول عند تركيز 12-10النمو أو الخالية من النمو) بين و ھالة النمو .Staphylococcus aureusو بكتريا E.coliاألنثوسيانيات و بكتريا - كلمات مفتاحية:ال 111 | Biology 2014) عام 3(العدد 27المجلد مجلة إبن الھيثم للعلوم الصرفة و التطبيقية Ibn Al-Haitham Jour. for Pure & Appl. Sci. Vol. 27 (3) 2014 المقدمة المركبات التي تشغل علماء التغذية ھذه األيام. وھذه األنثوسيانينات والمركبات متعددة الفينول األخرى ھي من بين أھم ا في الفواكه والخضر م) الموجودة بتراكيز عالية والسيPhytochemicalsالمركبات من أصناف الكيميائيات النباتية ( لسرطان كالعنب ,والبرتقال ,والشاي, والثوم, وغيرھا من النباتات المتنوعة التي يعرف عن فعاليتھا المضادة لمرض ا ).2,1وضغط الدم وغيرھا من األمراض ( )تحت قشرة النباتات والفواكه، وتوجد Vacuoles Cellتتجمع األنثوسيانينات والفالفونات في الحويصالت الخلوية ( يق أو كذلك في الجذور والسيقان واألوراق. وفي الخلية النباتية، تتركز فـــي الحويصالت في المحلول المائي ويقال بأن رح عصارة الخلية يكون حامضيــآ ضعيــفآ أومتعادآل مما يجعل الوان ھذه الصبـغات ثابتة في ھذه الظروف الحامضية الضعيفة. األنثوسيـانينات و الفالفونــات صبغات نباتية وھي التي تضـفي األلوان المختــلفة على زھـــور النباتات. وتوجد في كاليكوسيدات يحتوي بنـاؤھا على وحدات سكرية وھي مركبـات أمفوتيرية تذوب في المـاء، وغالـبآ ما الطبيعة على ھيئة تكــون أمالحھا الحامضية حمراء في حين تكـون امالحھا القاعدية زرقآ. وتتلون المحاليل المتعادلة من ھذه المركبات ) المعروفة Phenylbenzopyrilium Chloride-2يوم (باللون البنفسجي. والنواة األم ھي كلوريد فينيل بتروبريل . Flavylium Chloride)بكلوريد فالفيليوم ( في Sinesis. L. (Osbeck) Citيتناول البحث دراسة تأثير مركبات األنثوسيانينات المستخلصة من نبات البرتقال Staphylococcus) والمكورات العنقودية الذھبية((Escherichia coliنوعين من البكتريا وھي األشريكية القولونية aureus .ومقارنة فعالياتھا مع بعض المضادات الحيوية ،( المواد وطرائق العمل المواد المستعملة – Riedel- de)ھان –دي –المواد التي استعملت في ھذا البحث من النوع التجارياالعتيادي مصدره من شركة ريدل Heanوميرك(E. merck) : وھي - (ا) اطباق بتري معقمة، (ب) مــاء معقم(محلول فسلجي)، (ج) عيدان خاصة بالمسحات (مسحات قطنية)،(د) ، (و) اقراص مضادات حيوية مختارة للمقارنة ( Wathman 1))، (ه) اقراص ورق ترشيح معقمة Loop(ناقل)( )Neomycin وSterptomycine وCefaloxine المجــھزة ). الشــركةGist Brocades AB(Sweden) staphylococcus, والمكــورات العنقودية الذھبية ( (Escherichia coli)(ر) مـزارع بكتيـريا االشـريشا القولونيـة aureus. النقية التي تم الحصول عليھا من احد مختبرات الصحة المركزية للمستشفى التعليمي في ليبيا ( مزارع بكتريا نقية التي تم الحصول عليھا من احد مختبرات الصحة المركزية للمستشفى التعليمي في ليبيا (أ) - طرائق العمـــل : (أ): استخالص االنثوسانيات . تم تعيين Citrus Sinesis. L.(Osbeck)تم استخالص الألنثــوسيانـيات من ثمرة البرتقال (الحسناء) واسمھا العلمي ، وتم (Gallenkamp)درجات االنصھار للألنثوسيانيات بجھاز تعيين درجات األنصھار الميكرســكوبي من نــوع -األســتخالص بالخطوات االتية: مل+ 300قطعت ثمرتان من ثمار (الحسناء ) الى قطع صغيرة واستخلصت االنثوسيانيات بواسطة الميـثانـول المحمض ( %0.1Hcl ( في جـھاز االستـخالص(Soxhlte extraction apparatus) تم تركيز مستخلص الميثانول تحت وفصلت المادة المترسبة بالترشيح وحصلنا على مادة صلبة صفراء فاتحة بلورية دقيقة درجة ₒم40ضغط مخلخل في . ₒ(3,4)م280انصھارھا ودلت النتائج على وجود (TLC),ح كروماتوجرافيا الطبــقة الرقيــقة ومن اجل معرفة مكونات المستخلص استعملنا شرائ ، بعد مقارنة اطياف (Evolvulus Anthocyonin , Methiola violet)نوعين من االنثوسيانيات في المستخلص حاليل القياسية االشعة فوق البنفسجية والمرئية لالنثوسانيات المستخلص باالطياف المختلفة لالنثــوسيانـيات ( الم الجاھزة ) . وتمت تنقية وفصل مكونات المستخلص السائــل وفصل مكونــاتـه بطريقة كروماتوجرافيا العمود ).5باستعمال المبادالت األيونية وتمليص العمود بمزيج من الميثانول والماء ( 112 | Biology 2014) عام 3(العدد 27المجلد مجلة إبن الھيثم للعلوم الصرفة و التطبيقية Ibn Al-Haitham Jour. for Pure & Appl. Sci. Vol. 27 (3) 2014 - (ب) اعداد المعلق البكتيري: م في انبـوب ونأخذ بواسطة الناقل مستعمرة بكتـيرية مفردة من المزرعة النقية لكل من مل(5)نأخذ ماء معقـمآ نوعي البكتريا المزروعة في اطباق بتري ونفردھا مبدئيآ على جدار األنبوب ونحركھا في الماء حتى تختلط جيدا لتعطي )6) خلية / مل.(x 10 81.5 معلقآ بكتيريآ(العدد التقريبي للخاليا البكتيرية ھو ): Disk diffusion test(ج): اختبار انتشار القرص ( ) muller – hinton Agarتؤخذ المسحة القطنــية وتغمس في المعلـق البكتــيري وتـزرع البكتـــريا علــى طبق( قراص ورق الترشيح المعقمة بطريـقة المسـح الكامل على سـطح اآلجار حتى يتغطى تمامآ بالمعلق وبمكررين توضـع ا في انابيب على حدة وتـترك لـيوم واحد في (%50 ,%25)في المواد المجـھزة من مستخلـصات األنثوسـيانين بتراكيـز المستخلصات لضمان تشبعھا وبعد ذلك تؤخذ االقراص المشبعة التي تم اعدادھا وتوضع على سـطح اآلجار المـلقح يث تتوزع بتناـسق في الطبق. ويوضع على الطبق الثاني الملقح اقراص المضادات الحيوية بواسـطة ملقـط معـقم بح .(6)ساعة 24م لمدة ه37بالطريقة نفسھا وتحضن األطباق في درجة النتائج والمناقشة ) على نوعين من Evolvulus Anthocyonin ,Methiola violetتمت دراسة تأثير مستخلصات االنثوسيانينات ( ) Staphylococcus aureusوالمكورات العنقودية الذھبية ( E.coli)البكتريا المرضية وھما االشريكية القولونية ( كان قطر دائرة تثبيط النمو أو الخالية من `h,) لھما تأثير متقارباً 2)و(1) ان المستخلصين (2) و(1ويظھر من الجدولين ( ).2) و (1) له التأثير األكبر أيضا كما ھو واضح من الشكلين (1المستخلص ( مم وان 10 -12النمو ) 4و 3وعند دراسة تأثير بعض المضادات الحيوية في نمو نوعي البكتريـا تحت الدراسة يالحظ من الجدولين ( وعي البكتريا وان دائرة تثبيط النمو ) ان المضادات الحيوية المستعملة في الدراسة قد ادت الى تثبيط ن 4و 3والشكلين ( مم في حالة 16- 12مم في حالة نيومايسين مم وبين 12-10مم في حالة المضاد ستربتومايسين و 16 –12كانت بين سيفالوكسين.وھذه النتائج مقاربة لما حصلنا عليھا بواسطة مستخلصات االنثوسيانينات. وتبين ھذه الدراسة أن لھذه تأثيرات مھمة كمركبات مضادة للجراثيم. وھذه النتيجة ليست غير متوقعة ألن االنثوسيانينات المستخلصة المستخلصات تحتوي على مجاميع ھيدروكسي فينولية عديدة. والسيا تلك التي تحتوي مواقع متجاورة في حلقة البترين االروماتية ولھاتين مع ايونات معدنية في أنزيمات مھمة في البكتريا ربما يكون السبب المجموعتين المتجاورتين المقدرة على تكوين معقدات ) 7,8في اعاقة عمل ھذه األنزيمات في البكتريا وبالتالي موتھا.( وھنك آلية اخرى ربما تكون السبب في الفعالية المضادة للميكروبات وھي أن ھذه المركبات باحتوائھا على مجاميع ) جيدة يمكنھا االرتباط مع أيونات المعادن الموجودة في جدران Ligand سلوك مرتبطة (ھيدروكسي متجاورة تسلك )9,10البكتريا مما يسبب تكسير جدران خالياھا ونضوح مكوناتھا مما يؤدي إلى موتھا. ( المصادر 1- Anesini, C. and perez, C.(1993) . Screening of plants used in Argentin folk fedicine for antimicrobial activity. J . Ethnopharma . , 39(20): 119-128. ed . Ministry ndRawi ,A . and Chakravart, H,L,. (1988) . Medicinal plants of Iraq . 2-AL -2 of Agriculture and Irrigation , Baghdad . 3- Aborziza. M, Sarkis. J,(2004) " Extraction And Identificatio of Anthocyanins From The Orang Fruit "Hasna"" MSc Thesis, Almargheb University. 4-. Majumdir D.R.D.R , (2009) " The study of the methanol extract plantago major against gram (-) &(+) pathogens , Dep, of micro Abeda Inamdar senior collage , pane. w .j of micro& bio , 1322-1317(6-7)21. 5- Mosoke,Betty,E(2002) . " The Uses of plant colors Anthocyanine pigments and methods to Isolate them from plants ,"world woman congress .Department ofChemistry .Markere Univ , kampala – Uganda. 113 | Biology 2014) عام 3(العدد 27المجلد مجلة إبن الھيثم للعلوم الصرفة و التطبيقية Ibn Al-Haitham Jour. for Pure & Appl. Sci. Vol. 27 (3) 2014 ed , the C.V. thBaron ,E.J. and Finegold ,S .M .(1994). Diagnostic Microbiology .9 -6 Mosby Co .,USA. 7- Reynolds , S.J,. Black ,D.W.; Borin , S.S ., Breuer , G.; Burmeister , l.f.; Fuortes, L.G.; Smith , T.F .; Stein , M.A.; Subramanian , P.; Thorne , P.S . and whitten , p .(2001) . Indoor environmental quality in six commercial office buildings in the Midwest United States . Apple . Occup . Inviron . HYg., 16 : 10650-10677 8- Reed ,J.D. (1995) . Nutritional toxicology of tannins related Polyphenols in forage Legumes . J. Ani.Soc., 73:1516-1528. 9-Hande, Toshio and Saito Norio (2002)"Rrevent progress in the chemisry of polyacelated Anthocyanines AS Flower color . Helerocycles, 56, 633-699 Pigments 10- Varel , I. and Vincent ,H .(2002) . Carvacrol and thymol reduce swim waste odor and pathogens : stapility of oils . curr . Microbiol ., 44:38-43. تأثير مستخلص االنثوسيانينات :)2( رقم تأثير مستخلص االنثوسيانينات جدول :)1(ل رقم جدو ) E.coliفي نمو البكتيريا األشريكية القولونية في نمو البكتيريا المكورات العنقودية الذھبية ( )Staphylococcus aureus ( معدل قطر دائرة تركيز المستخلص التثبيط الخالية من النمو/ملم معدل قطر دائرة تركيز المستخلص التثبيط الخالية من النمو/ملم المستخلص (25%E)   E( 10%25المستخلص ( 12 المستخلص )50%E(  E  ( 9%50المستخلص (10 المستخلص )25%M(  M( 8%25المستخلص ( 8 المستخلص )50%M(  M( 4%50المستخلص (6 القيم المذكورة في الجدول ھي معدل القيم المذكورة في الجدول ھي معدل ± ) 0.1لتجربتين ( ± ) 0.1لتجربتين ( *M,E تمثل المستخلص األول والثاني على التوالي 114 | Biology 2014) عام 3(العدد 27المجلد مجلة إبن الھيثم للعلوم الصرفة و التطبيقية Ibn Al-Haitham Jour. for Pure & Appl. Sci. Vol. 27 (3) 2014 حساسية بكتيريا المكورات :)4( رقم جدول حساسية بكتيريا االشريكية :) 3( رقم جدول العنقودية الذھبية لمضادات) لبعض ا E.Coliالقولونية ( ) Staphylococcus aureus( الحيوية معدل قطر دائرة الحيوي المضاد التثبيط الخالية من النمو/ملم معدل قطر دائرة المضاد الحيوي التثبيط الخالية من النمو/ملم  12 ستربتومايسين16 ستربتومايسين  10 نيومايسين12 نيومايسين  16 سيفالوكسين6 سيفالوكسين القيم المذكورة في الجدول ھي معدل لتجربتين القيم المذكورة في الجدول ھي معدل ±) 0.1لتجربتين ( ± ) 0.1( E.coliفي نمو البكتيريا (M,E)تأثير مستخلص االنثوسيانينات : ) 1(رقم شكل 12 10 8 6 0 2 4 6 8 10 12 14 1 2 3 4 ط بي تث ال رة دائ ر ا ط ق ل ـد عـ م ) م مل ( المستخلص 115 | Biology 2014) عام 3(العدد 27المجلد مجلة إبن الھيثم للعلوم الصرفة و التطبيقية Ibn Al-Haitham Jour. for Pure & Appl. Sci. Vol. 27 (3) 2014 Staphylococcus aureusفي نمو البكتيريا (M,E)تأثير مستخلص االنثوسيانينات : ) 2( رقم شكل E.coliبكتيريا tdتأثير بعض المضادات الحيوية : ) 3( رقم شكل 10 9 8 4 0 2 4 6 8 10 12 1 2 3 4 ط بي تث ال رة دائ ر ط ق دل مع ) م مل ( المستخـلص 16 12 6 0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 1 2 3 0 ط بي تث ال رة دائ ر ط ق دل عـ م ) م مل ( سيفالوكسين نيومايسين ستربتومايسين 116 | Biology 2014) عام 3(العدد 27المجلد مجلة إبن الھيثم للعلوم الصرفة و التطبيقية Ibn Al-Haitham Jour. for Pure & Appl. Sci. Vol. 27 (3) 2014 Staphylococcus aureus) تأثير بعض المضادات الحيوية في بكتيريا 4( رقم شكل 12 10 16 0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 1 2 3 0 ط بي تث ال رة دائ ر ط ق دل عـ م ) م مل ( سيفالوكسين نيومايسين ستربتومايسين 117 | Biology 2014) عام 3(العدد 27المجلد مجلة إبن الھيثم للعلوم الصرفة و التطبيقية Ibn Al-Haitham Jour. for Pure & Appl. Sci. Vol. 27 (3) 2014 Biological Effect of Anthocyanin Extracted From the orange Fruit on Some Types of Pathological Bacteria Saeed H. lMohommed Dept.of Biology / College of Basic Education/ University of Diyala Receivd in:5/March/2014, Accepted in :24/November/2014 Abstract This research includes study of the effect of two kinds of Anthocyanin extracted , from extracted orange fruit ( Anthocyanin Evolvulus ,Methiola Violet ) on two types of pathological bacteria E.coli , staphylococcus aureus. The result shows that two kinds of extraction have nearly similar effect , and there is Inhibition zone of no growth between 10-12mm ,and the extraction (1) that has concentration of 10-3 mol./L is more effective.. Key word: Anthocyanin, E.coli , Staphylo coccus aureus