Microsoft Word - 152-163 152 | Biology 2014) عام 3(العدد 27المجلد مجلة إبن الھيثم للعلوم الصرفة و التطبيقية Ibn Al-Haitham Jour. for Pure & Appl. Sci. Vol. 27 (3) 2014 Myrtle (Myrtus communis)الفطريات المستنبتة في نبات اآلس وفعاليتھا األنزيمية الخارج خلوية بتول زينل علي ھدى محمد كاظم جامعة بغداد )/بن الھيثما ( كلية التربية للعلوم الصرفة /قسم علوم الحياة 2014/تشرين الثاني /24, قبل البحث في 2014/ ايلول/ 15استلم البحث في : الخالصة Myrtle (Myrutusاستھدفت ھذه الدراسة عزل وتشخيص الفطريات المستنبتة في أوراق نبات اآلس communis) قطعة أوراق 500الفطريات المستنبتة في ودراسة فعاليتھا األنزيمية الخارج خلوية. أظھرت نتائج عزل نوعاً أو عزلة سادت فيھا 23. تعود ھذه الفطريات إلى %20.4فطراً مستنبتاً وبنسبة استيطان كلية 99الحصول على على ھذه األنواع، A. niger ،A. flavus، وساد النوعان %14) نوعاً بنسبة استيطان Aspergillus )11أنواع جنس ، .Penicillium spp. ،Cladosporium spp. ،Cunninghamella spيات أخرى تعود لألجناس كما عزلت فطر Drechslera sp. ،Alternaria sp. ،Paecilomyces sp. .وفطريات عقيمة أما فعالية ھذه الفطريات في إفراز األنزيمات الخارج خلوية، فقد أظھرت النتائج تباين ھذه الفطريات في إفراز األنزيمات %69.5من ھذه الفطريات قابلية إلفراز أنزيم االميليز ونسبة %91.3وأظھرت نسبة ،في الوسط الصلب نوعاً وفعالية قابلية إلفراز السليوليز، %13و %73.9و %82.6إلفراز البكتينيز، وأظھرت نسبة %86.9منھا إلفراز اليبيز كذلك البروتييز والالكيز على التوالي. وقد أظھرت بعض العزالت فعالية عالية إلفراز بعض ھذه األنزيمات مما يعطي إشارة إلى إمكانية استغالل أنزيمات ھذه الفطريات في تطبيقات عديدة بعد فصلھا وتوصيفھا. .Myrtleة االنزيمية ونبات اآلس الفطريات المستنبتة والفعاليكلمات مفتاحية: ال 153 | Biology 2014) عام 3(العدد 27المجلد مجلة إبن الھيثم للعلوم الصرفة و التطبيقية Ibn Al-Haitham Jour. for Pure & Appl. Sci. Vol. 27 (3) 2014 المقدمة الفطريات المستنبتة ھي الفطريات التي تغزو األنسجة الحية للنبات من دون إحداث أي ظاھرة مرضية لھا، وقد أشير إلى أن جميع النباتات ]. 2، 1وتتواجد إما داخل أو بين الخاليا بعالقة تكافلية متوازنة بين الفطر والنبات العائل [ نبات تحوي ما ال يقل عن مليون فطر مستنبت 300.000الموجودة على سطح الكرة األرضية التي تقدر بما يزيد على ]3.[ لقيت الفطريات المستنبتة حديثاً الكثير من االھتمام وذلك ألن أغلبيتھا تتصف بإنتاجھا للعديد من المركبات الفعالة احيائياً ، 4لتي تكسب النبات العائل دفاعات اتجاه الممرضات المختلفة فضالً عن جعلھا تتكيف وتقاوم الظروف البيئة المتطرفة [ا ]. وقد وجد أن أغلب ھذه المركبات التي تنتجھا الفطريات المستنبتة تكون مشابھة لما ھي عليه في نباتاتھا العائلة وذلك 5 ]. لذلك أشار العلماء إلى أن الفطريات 7، 6اً بحيث تؤدي إلى انتقال الجينات بينھما [نتيجة تطورھا ومعيشتھا المتبادلة مع المستنبتة قد تكون مصدراً يعتمد عليه في إلنتاج مركبات لھا فعالية دوائية أو صناعية أو تدخل في الزراعة كبدائل ]. وبالرغم من أن أغلب الدراسات عن 8ن [للمركبات والمضادات الصناعية التي تزداد مقاومة األحياء لھا بمرور الزم الفطريات المستنبتة ركزت على فعاليتھا المضادة لألحياء المجھرية واستعمالھا كمصادر ألغراض طبية، إال أن القليل من زيمات ] أن إنتاج األن9ھذه الدراسات اھتمت بالتطبيقات الزراعية والصناعية السيما إنتاج األنزيمات. في ھذا المجال ذكر [ بواسطة الفطريات المستنبتة لألغراض الصناعية يعد من المجاالت غير المكتشفة ويمثل مصدراً حديثاً للحصول على أنزيمات لھا فعاليات مختلفة، ومن المعروف أن الفطريات بصورة عامة تعد مصادر للعديد من األنزيمات التي تدخل في د، واألنسجة، الورق، وغيرھا من الصناعات، كما تعد أنزيمات الفطريات الصناعات الغذائية والمشروبات وصناعة الجلو ]. وأشار عدد من الدراسات أن بإمكان 9أكثر ثباتاً مقارنة بمصادر األنزيمات األخرى (حيوانية، أو نباتية أو بكتيرية) [ ممرضات فضالً عن الحصول على الفطريات المستنبتة إنتاج العديد من األنزيمات الخارج خلوية كميكانيكية لمقاومة ال ]. فضالُ عن ذلك 11، 10الغذاء من العائل، ومن ھذه األنزيمات ھي االميليز، والبكتينيز، والسليوليز، والالكيز والبروتييز [ فإن عمليات التحول الحيوي باعتماد نظام أنزيمات األحياء المجھرية ومنھا الفطريات المستنبتة لقيت اھتماماً كبيراً من لباحثين في الوقت الحاضر مما يعطي إشارة إلى إمكانية استعمال ھذه الفطريات في إزالة السمية مثالً أو في عمليات ا ].11للمخلفات الصناعية والزراعية وغيرھا من المركبات الملوثة للبيئة [ Bioremediationالتحول الحيوي ات من أھمية طبية وسعة انتشار، إذ يستخلص منه زيت طيار يدخل استعملت اوراق نبات اآلس في ھذه الدراسة لما لھذا النب في صناعة العطور، كما يستعمل مستخلص األوراق كمعقم ومضاد لاللتھابات في الطب الشعبي، كما يحوي المستخلص راق على بعض المركبات التي أظھرت فعالية مضادة لألكسدة، ومضادة للخاليا السرطانية. كما يستعمل مستخلص األو والثمار والزيت الطيار في عالج العديد من الحاالت المرضية منھا قرحة المعدة، واإلسھال الديزانتري، والروماتزم ].12وغيرھا من االستعماالت الطبية [ المواد وطرائق العمل متفرقة من : تم جمع أوراق نبات اآلس سليمة وخالية من أي تبقعات أو أعراض مرضية من مناطقعينات نبات اآلس - . جمعت األوراق في أكياس بالستيكية نظيفة ونقلت إلى المختبر 2013كانون األول - بغداد خالل المدة تشرين الثاني لعزل الفطريات المستنبتة فيھا التي تمت في يوم الجمع نفسه. مية كبيرة من ماء ]، إذ تم غسل األوراق بك13اتبعت في ذلك طريقة [عزل الفطريات المستنبتة في أوراق اآلس: - سم، بعدھا عقمت سطحياً بالكحول 1-0.5الحنفية إلزالة األتربة والغبار، ثم قطعت األوراق إلى قطع صغيرة بأبعاد 4لمدة %2.5أوالً لمدة دقيقة واحدة، ثم غمرت بعد ذلك في محلول ھايبوكلورات الصوديوم بتركيز %75االثيلي بالماء المقطر المعقم ثالث مرات، ثانية، ثم غسلت 30لمدة %75الثيلي بتركيز دقائق، بعدھا اعيد غمرھا بالكحول ا المضاف إليه صبغة PDAوجففت القطع بأوراق ترشيح معقمة، ثم زرعت القطع في أطباق بتري حاوية على وسط لوسط بعد التعقيم، لتر) الذي أضيف إلى ا /غم 0.5لتر) قبل التعقيم ومضاد الكلورامفنيكول ( /ملغم 50الروزبنكال ( وحضنت بدرجة Parafilmلكل طبق بأبعاد متجانسة، غلفت األطباق بشريط شمعي 5ووزعت قطع األوراق بعدد أسابيع مع مراقبة نمو المستعمرات يومياً. عزلت المستعمرات النامية من قطع النسيج النباتي 4-3م لمدة °2±25حرارة ، 16، 15، 14ية والمظھرية الدقيقة باالعتماد على المصادر التصنيفية [لتشخيصھا باالعتماد على الصفات المزرع ]، وتم حساب النسبة المئوية لالستيطان باالعتماد على: 17 عدد مستعمرات النوع أوالجنس عدد القطع الكلية % . . تم الكشف عن قابلية الفطريات المستنبتة الكشف عن فعالية الفطريات المعزولة في إنتاج األنزيمات الخارج خلوية: - المعزولة إلنتاج األنزيمات الخارج خلوية على الوسط الصلب بوجود مواد األساس الخاصة بكل أنزيم. ضمت األنزيمات: 154 | Biology 2014) عام 3(العدد 27المجلد مجلة إبن الھيثم للعلوم الصرفة و التطبيقية Ibn Al-Haitham Jour. for Pure & Appl. Sci. Vol. 27 (3) 2014 غم، 0.1غم، ومستخلص خميرة 1(كلوكوز GYPلى الوسط ]، إذ نميت الفطريات ع9: اتبعت طريقة [االميليز -1 نشأ ذائب وضبط اآلس الھيدروجيني إلى %0.2غم، وماء مقطر لتر)، أضيف إليه 16غم، وآكار 0.5وببتون pH=6 زرعت األطباق بعد تعقيمھا وتصلبھا بأقراص مأخوذة من حافة مزارع الفطريات النامية على وسط . PDA ة أٌقراص في كل طبق بمسافة متجانسة وعدت كمكررات. حضنت األطباق بدرج 3أيام، بعدد 7بعمر دقيقة، ثم سكب 20-15أيام، بعدھا أخرجت األطباق من الحاضنة وغمرت بمحلول اليود لمدة 5-3م لمدة 27° يم االميليز. تم قياس قطر المحلول الزائد، إن ظھور ھالة شفافة حول المستعمرة النامية دليل على إنتاج أنز المستعمرة الفطرية وحدھا، كما قيس قطر المستعمرة مع منطقة التحلل لتحديد النسبة المئوية للتحلل عن طريق المعادلة: ملم قطر المستعمرة الفطرية لوحدھا منطقة التحلل قطر المستعمرة الفطرية النسبة المئوية للتحلل فتكون العزالت 0.69وأكبر من 1ت غير قادرة على إفراز األنزيم، وإذا كانت أقل من فيعني أن العزال 1إذا كانت القيمة فيعني أنھا جيدة لإلنتاج، وإذا كانت القيمة 0.3وأكبر من 0.69منخفضة اإلنتاج لھذا األنزيم، أما إذا كانت القيمة أقل من ].18فتكون القابلية عالية جداً [ 0.3أٌقل من ] في ذلك، إذ نميت عزالت الفطريات بصورة أقراص مقلوبة حاوية على النمو 3بعت طريقة [: اتأنزيم الالبيز -2 غم، NaCl 5غم، كلوريد الصوديوم 10الفطري بالطريقة نفسھا لألنزيم السابق على وسط الببتون آكار (ببتون كمصدر للدھن الذي عقم وحده، وتم تعديل قيمة Tween 20غم، ولتر ماء مقطر) الذي أضيف إليه 16وآكار . حضنت األطباق بالطريقة السابقة نفسھا، بعد الحضانة النتيجة الموجبة pH=6الرقم الھيدروجيني للوسط إلى إلفراز األنزيم تظھر بصورة ھالة من ترسبات ملحية محيطة بالمستعمرة بصورة ترسبات بلورية تمثل أمالح ]. حسبت نسبة التحلل باالعتماد على المعادلة السابقة نفسھا آخذين Lauric acid ]19الكالسيوم لحامض بالحسبان األمور نفسھا في األنزيم السابق. غم، مستخلص 5]، إذ نميت العزالت بصورة أقراص على وسط البكتين (بكتين 9اتبعت طريقة [أنزيم البكتينيز: -3 ، بعد مدة الحضانة pH=5ھا تم ضبط الرقم الھيدروجيني إلى غم، وماء مقطر لتر) بعد 6غم، وآكار 1خميرة دقيقة ثم 30- 20لمدة Hexadecyl trimethyl ammonium bromideغمرت األطباق بالمحلول المائي سكب الفائض في المحلول. يدل ظھور ھالة شفافة حول المستعمرات النامية على إيجابية إفراز ھذا األنزيم التي ل كما ذكر آنفاً.قدرت نسبة التحل من %5المضاف اليه GYP]، إذ نميت أقراص الفطريات على وسط 9اتبعت طريقة [: Laccaseأنزيم الالكيز -4 . بعد مدة الحضانة فحصت األطباق. تدل إيجابية إفراز pH=6، وعدل الرقم الھيدروجيني إلى L-naphtholمادة أزرق بنفسجي نتيجة أكسدة النافثول بواسطة ھذا األنزيم.ھذا األنزيم على ظھور منطقة تحيط بالمستعمرة بلون من مركب %0.5المضاف اليه GYP]، إذ نميت العزالت على وسط 3اتبعت طريقة [أنزيم السليوليز: -5 (CMC) Carboxy methyl cellulose أيام غمرت األطباق 5- 3كمصدر للسليليوز، وبعد مدة الحضانة ) لعدة دقائق، ثم سكب المحلول، وغمرت Cango red )0.2%أحمر الكونكو الحاوية على المستعمرات بمحلول لعدة دقائق ثم سكب المحلول الزائد. إن ظھور ھالة NaCl (1M)األطباق مرة ثانية بمحلول كلوريد الصوديوم شفافة بلون أخضر فاتح حول المستعمرات النامية مقارنة باللون الوردي للوسط الزرعي داللة على فعالية األنزيم المفرز. جيالتين %0.4الحاوي على GYP] إذ نميت العزالت الفطرية على وسط 3اتبعت طريقة [أنزيم البروتييز: -6 ، وبعد مدة الحضانة pH=6ر للبروتين الذي عقم وحده في المؤصدة، وعدل الرقم الھيدروجيني للوسط إلى كمصد دقيقة، ثم سكب 30-15أيام) غمرت األطباق بمحلول مشبع من كبريتات األمونيوم لمدة 5-3للفطريات النامية ( فراز األنزيم بواسطة الفطر. الفائض، دل ظھور منطقة شفافة حول المستعمرات النامية على إيجابية إ النتائج والمناقشة أشارت العديد من الدراسات إلى أھمية عزل الفطريات المستنبتة في أوراق نبات اآلس وتشخيصھا: - التحري عان الفطريات المستنبتة في النباتات الطبية التي تعد مصادر مھمة لھذه الفطريات، إذ يمكن أن تنتج مركبات لتلك الموجودة في عائالتھا النباتية، ويمكن أن تكون بديلة عنھا. أظھرت نتائج عزل الفطريات المستنبتة فعالة مشابھة فطراً مستنبتاً 99قطعة أوراق، الحصول على عدد كلي للعزالت بواقع 500في أوراق نبات اآلس ومن مجموع ) سادت فيھا أنواع جنس 1نوعاً او عزلة (جدول 23، تنتمي ھذه الفطريات إلى %20.4وبنسبة استيطان كلية بلغت Aspergillus )11 وساد فيھا النوعان %14نوعاً) بشدة استيطان كلية ألنواع ھذا الجنس بلغتA. niger ،A. 155 | Biology 2014) عام 3(العدد 27المجلد مجلة إبن الھيثم للعلوم الصرفة و التطبيقية Ibn Al-Haitham Jour. for Pure & Appl. Sci. Vol. 27 (3) 2014 flavus 0.2للنوعين على التوالي، وظھرت بقية األنواع بنسب تراوحت بين %3و %7.4بشدة استيطان% - ونوع واحد أو أكثر لكل من Penicillium. كما أمكن الحصول على عدة عزالت من جنس 1.6% Cladosporium ،Cunninghamella، Drechslera ،Alternaria ،Paecilomyces بنسب استيطان دراسات ، بصورة عامة تعد شدة االستيطان العامة منخفضة نسبياً لكنھا تتفق مع نتائج %2 – 0.2تراوحت بين ] قد تعزى إلى عدد من العوامل منھا احتواء النبات 22، 21، 20أخرى عن الفطريات المستنبتة في نباتات أخرى [ على مركبات مضادة للفطريات، كما يتأثر تنوع وكثافة الفطريات المستنبتة بطبيعة الغطاء النباتي القريب منھا فضالً فعال في ذلك، إذ إن األجزاء القديمة من النبات تحوي مجاميع أكثر من عن توافر الرطوبة وأن عمر النبات له دور ]. إن أغلب الفطريات 23الفطريات مقارنة باألجزاء الفتية كما أن لتلوث الھواء تأثيراً سلبياً في وجود ھذه الفطريات [ طريات مستنبتة في قد تم عزلھا في دراسات أخرى كف Aspegillusالمعزولة في ھذه الدراسة ومنھا أنواع جنس ].26، 25، 24، 20نباتات طبيبة اخرى [ أظھرت نتائج الكشف عن قابلية : األنزيمات المفرزة بواسطة الفطريات المعزولة في الوسط الصلب - الفطريات المعزولة إلفراز األنزيمات الخارج خلوية التي ضمت أنزيمات االميليز، والاليبيز، والبكتينيز، والالكيز، منھا %69.3من ھذه الفطريات أفرزت أنزيم االميليز ونسبة %91.3). إن نسبة 2والسليوليز والبروتييز (جدول أنزيم البروتييز، %73.9أنزيم السليوليز ونسبة %82.6أفرزت أنزيم البكتنيز و %86.9أفرزت أنزيم الاليبيز كذلك .D) كذلك الفعالية الضعيفة للفطر 2يالحظ من الجدول ( فقط قابلية إلنتاج أنزيم الالكيز. %13كما اظھرت نسبة australiensis في إنتاج األنزيمات كافة تحت االختبار بالمقابل الفعالية العالية لبعض ھذه الفطريات ومنھا A. niger ،A. glaucus ،Pen. sp.2 ،Mycelia sterilia hyaline في إنتاج اغلب األنزيمات، أما الفطرA. terreus .فقد تميز في إفراز أنزيم الاليبيز بكفاءة عالية وبالرجوع إلى النسب المئوية لتحليل ھذه األنزيمات وفعالية كل أنزيم التي تؤكد تباين الفطريات في نسب تحليلھا ن أضعفھا )، فقد تراوحت نسبة التحلل ألنزيم االميليز الكلية للفطريات بي6-1لمواد األساس الخاصة بكل أنزيم (األشكال أ)، 1أ، صورة 1) (شكل %0.44) إلى أعالھا فعالية (النسبة المئوية للتحلل %0.97قابلية (النسبة المئوية للتحلل > 0.69 <قابلية جيدة إلفراز ھذا األنزيم (نسبة التحلل Pen. sp.2 ،A.candidus ،A.wentii وأظھرت العزالت ] أن فعالية أنزيم االميليز للفطريات المستنبتة تساعد على تحطيم النشأ الموجود في النبات العائل عند 9وقد ذكر [ )،0.3% الشيخوخة . ب) فقد تراوحت النسبة المئوية للتحلل الكلية له من قبل جميع الفطريات 1ب، صورة 1أما أنزيم الاليبيز (شكل .A) والتي مثلتھا عزلة الفطر %0.27) إلى أعالھا فاعلية (نسبة التحلل %0.98حلل المنتجة بين أقلھا فاعلية (نسبة الت terreus ،] 1ج، صورة 1]. أما أنزيم البكتينيز [شكل 21وھذا يشير إلى قابلية ھذا الفطر الستعمال الدھون كمصادر طاقة اوح معدل نسب التحلل للفطريات اجمعھا بين ج] فقد أظھرت النتائج كذلك اختالف العزالت في إنتاجھا لھذا األنزيم، وتر ] أن فعالية أنزيم 9، وقد ذكر [C. cladosporoidesأظھرھا الفطر %0.41وأعالھا نسبة %0.96أوطئھا نسبة تحلل فضالً البكتنيز يعد مھماً للعملية اإلمراضية للفطريات اتجاه النباتات كذلك في عملية التكافل بين النباتات واألحياء المجھرية، ] أنه في حالة أن الفطر المستنبت ثبتت قابليته على إنتاج ھذا 27عن أھميته في تحليل مخلفات النباتات الميتة، وذكر العالم [ األنزيم؛ يدل على أن ھذا الفطر يمكن أن يكون ممرضاً كامناً. فة إلنتاجه تمثلت ) قابلية ضعي%13( 23عزالت فقط من مجموع 3) فأظھرت 2أما أنزيم الالكيز (جدول ولم تنُم بقية الفطريات على الوسط الغذائي الخاص بھذا D. austraiensis ،P. variotii ،Mycelia steriliaباألنواع األنزيم. وتتفق ھذه النتيجة مع العديد من الدراسات التي أشارت إلى أن الفطريات بطبيعتھا تكون فاقدة لھذا األنزيم إذ أنه ]. 28، 9دي إلى ھالك النبات العائل [يمكن أن يضر ويؤ د) فقد ظھرت نسبة التحلل الكلية للفطريات بين أضعفھا قابلية (نسبة 1د، صورة 1أما أنزيم السليوليز (شكل ) التي أظھرتھا عزلة الفطر العقيم الشفاف كذلك أظھرت العزلة %0.42) إلى أعالھا فاعلية (نسبة التحلل %0.94التحلل A. terreus وقد أشير إلى أن الفطر المستنبت الذي له قدرة جيدة %0.45قابلية جيدة إلفراز ھذا األنزيم (نسبة التحلل .( إلفراز ھذا األنزيم مع أنزيم البكتنيز يدل على أن الفطر له القدرة الجيدة على اختراق خاليا العائل الحية فضالً عن قابليته ].9على تحليل المكونات الميتة [ من الفطريات المختبرة فعالية ضعيفة إلى %52ھـ) فأظھرت نسبة 1ھـ، صورة 1زيم البروتييز (شكل أما أن من ھذه الفطريات فعالية جيدة %21.8) بالمقابل أظھرت نسبة %0.69 > 1 <متوسطة إلفراز ھذا األنزيم (نسبة التحلل ، Alternaria raphani ،Pen sp.1و Pen. sp.4) وضمت العزالت %0.3 > 0.69 <إلفراز األنزيم (نسبة التحلل P. variotii ،A. niger تؤدي أنزيمات البروتييز دوراً فعاالً في إمراضية الفطريات، إذ تعمل على تحليل البروتينات . روتين الموجودة في األنسجة الحية كما تساعد الفطريات المستنبتة في التغلغل داخل أنسجة العائل وذلك بتحطيم الكاليكوب في الجدار الخلوي. Fibrous glycoproteinالليفي تشير نتائج الكشف عن األنزيمات المفرزة من الفطريات المستنبتة في أوراق اآلس إلى الفعالية العالية لبعض ھذه الفطريات في إفراز أنزيمات لھا أھمية اقتصادية يمكن أن تستغل في تطبيقات عديدة بعد فصلھا وتوصيفھا. 156 | Biology 2014) عام 3(العدد 27المجلد مجلة إبن الھيثم للعلوم الصرفة و التطبيقية Ibn Al-Haitham Jour. for Pure & Appl. Sci. Vol. 27 (3) 2014 صادرالم 1-Kogle, K. H.; Franken, P. & Hückelhoven, R. (2006). Endophyte or paratsite -what decides? Current opinion in plant biology., 9(4): 358-363. 2-Li, E.; Tian, R.; Liu, S.; Chen, X.; Guo, L. & Che, Y. (2008). Pestalothelos A-D, Bioactive metabolites from the plant endophytic fungus Pestalotiopsis theae. J. Nat. Prod., 71(4): 644- 668. 3-Amirita, A.; Sindhu, P.; Swetha, J.; Vasanthi, N. S. & Kannan, K. P. (2012). Enumeration of endophytic fungi from medicinal plants and screening of extracellular enzymes. World. J. Sci. & Technol., 2(2): 13-19. 4-Yu, H.; Zhang, L.; Li, L.; Zheng, C.; Guo, L.; Li, W.; Sun, P. & Qin, L. (2010). Recent developments and future prospects of antimicrobial metabolites produced by endophytes. Microbiol. Res., 165(6): 437-449 5-Ramesha, A. & Srinivas, C. (2014). Antimicrobial activity and phytochemical analysis of crude extracts of endophytic fungi isolates from Plumeria acuminta L. and Plumeria obtusifolia L. Eurp. J. Experental. Biol., 4(2): 35-43. 6-Prabavathy, D. & Nachiyar ,V. (2013). Cytotoxic potential and phytochemical analysis of Justucia bedomei and its endophytic Aspergillus sp. Asian J. pharma & Clinic. Res., 6(5): 159-161. 7-Selvi, K. B.; & Balagengatharathilagam, P. (2014). Isolation and screening of endophytic fungi from medicinal plants of virudhunagar district for antimicrobial activity. Inter. J. Sci. & Nat., 5(1): 147-155. 8-Sadrati, N.; Daoud, H.; Zerroug, A.; Dahamna, S. & Bouharati, S. (2013). Screening of antimicrobial and antioxidant secondary metabolites from endophytic fungi isolated from wheat Triticum durum. J. plant. Port. Res., 53(2): 128-136. 9-Sunitha, V. H.; Nirmala, D. & Srinivas, C. (2013). Extracellular Enzymatic Activity of endophtic fungi strains isolated from medicinal plants. World J. Agric. Sci., 9(1): 1-9. 10-Selim, K. A.; El-Beih, A. A.; Abdel-Rahman, T. M. & El-Diwany, A. I. (2012). Biology of endophytic Fungi. Curr. Res. Environ. & Appl. Mycol., 2(1): 31-82. 11-Sathish, L.; Pavithra, N. & Ananda, K. (2012). Antimicrobial activity and biodegrading enzymes of endophytic fungi from Eucolyptus. Inter. J. Pharmac. Sci. & Res., 3(8): 2574- 2583. 12-Sumbul, S.; Ahmed, M. A.; Asif, M.; & Akhtar, M. (2011). Myrtus communis Linn. a review. Ind. J. Nat. Prod. & Resorc., 2(4): 395-402. 13-Al-Mahi, I. M.; Al-Tahir, I. & Idris, E. (2013). Antibacterial activity of endophytic fungi extracts from medicinal plant Kigelia africana Egypt. Acad. J. Biol. Sci., 5(1): 1-9. 14-Raper, K. B. & Fennel, D. I. (1965). The genus Aspergillus. Baltimore: Williams & Wikins. 15-Barnett, H. L. & Hunter, B. B. (1970). Illustrated genera of imperfect fungi: 3rd ed., Burgess. Publ. Co. Minnesota. 16-Ellis, M. B. (1971). Dematiaceous hyphomycites. Comman wealth Mycological institute, England. 17-Samson, R. A.; Noonim, P.; Merjer, M.; Houbraken, J.; Frisvad, J. C. & Varga, J. (2007). Diagnostic tools to identify black aspergillai. Stud. Mycol., 59:129-145. 18-Price, M. F.; Wilkinson, I. D. & Gentry, L. (1982). Plate method for detection of phospher lipase activity in Candida albican. Sabouraudia., 20: 7-14. 19-Maria, G. L.; Sridhar, K. R. & Raviraja, N. S. (2005). Antimicrobial and enzyme activity of mangrove endophytic fungi of southwest coast of India. J. Agric. Technol., 1: 67-80. 20-Khan, R.; Shahzad, S.; Choudhary, M. I.; Khan, S. A. & Ahmed, A. (2010). Communities of endophytic fungi in medicinal plant Withania somnifera. Pak. J. Bot., 42(2): 1281-1287. 157 | Biology 2014) عام 3(العدد 27المجلد مجلة إبن الھيثم للعلوم الصرفة و التطبيقية Ibn Al-Haitham Jour. for Pure & Appl. Sci. Vol. 27 (3) 2014 21-Anitha, D.; Vijaya, T.; Pragathi, D.; Reddy, N. V.; Mouli, K. C.; Venkateswarulu, N. & Bhargav, D. S. (2013). Isolation and characterization of endophytic fungi from endemic medicinal plants of Tirnmala hills. Int. J. Life Sci. Bt. & Pharm. Res. 2(3): 367-373. 22-Selvanathan, S.; Indrakumar, I. M. & Johnpaw. (2011). Biodiversity of endophytic fungi isolated from Calotropis gigantea (L.). Rec. Res. Sci & Tchenol., 3(4) : 94-100. 23-Arnold, A. E.; Mejia, L. C.; Kyllo, D.; Rojas, E. I.; Maynard, Z.; Robbins, N. & E. A. Herre (2003). Fungal endophytes limit pathogen damage in a tropical tree. Proc. Nat. Acad. Sci., 100(26): 15649-15654. 24-Pharamat, T.; Palaga, T.; Piapukiew, J.; Whalley, A. J. S. & Sihanonth, P. (2013). Antimicrobial and anticancer activities of endophytic fungi from Mitrajyna javanica. Koord & Val. Afr. J. Microbiol. Res., 7(49): 5565-5572. 25-Darbha, N. S.; & Tikole, S. S. (2013). Studies on endophytic fungi of ayurvedic medicinal plant Gymnema sylvestre. Int. J. Curr. Sci., 7: 118-127. 26-Goveas, S. W.; Madtha, R.; Nivas, S. K. & Souza, L. D. (2011). Isolation of endophytic fungi from a red listed endangered medicinal plant. Eur. Asian J. Biosci. 5: 48-53. 27-Choi, Y. W.; Hodgkiss, I. J. & Hyde, K. D. (2005). Enzyme production by endephytes of Brucea javanica. J. Agric. Technol., 1: 55-66. 28-Devi, N. N; Prabakaran, J. J. & Wahab, F. (2012). Phytochemical analysis and enzyme analysis of endophytic fungi from Centella asiatica. Asian Pac. J. Trop. Biomed., 2(3): 1280- 1284. 158 | Biology 2014) عام 3(العدد 27المجلد مجلة إبن الھيثم للعلوم الصرفة و التطبيقية Ibn Al-Haitham Jour. for Pure & Appl. Sci. Vol. 27 (3) 2014 والنسب المئوية الستيطانها M. communis): الفطريات المستنبتة المعزولة من أوراق نبات اآلس 1(رقم جدول عدد المستعمراتالفطريات المستنبتة النسبة المئوية لالستيطان C.F% Alternaria raphani1 0.2 Aspergillus spp.70 14 A. candidus2 0.4 A. clavatus1 0.2 A. flavus15 3 A. glaucus1 0.2 A. niger37 7.4 A. ornatus1 0.2 A. parvulus8 1.6 A. raperi1 0.2 A. sclerotioniger1 0.2 A. terreus1 0.2 A. wentii1 0.2 Cladosporium sp.10 2 Cladosporium cladosporoides2 0.4 Cunnighamella sp.1 0.2 Drechslera australiensis1 0.2 Paecilomyces variotii3 0.6 Penicillium spp.8 1.6 Pen 12 0.4 Pen 22 0.4 Pen 32 0.4 Pen 42 0.4 Mycelia sterilia3 0.6 Mycelia sterilia (hyaline)1 0.2 Mycalia sterilia (white)2 0.4 20.4 99العدد الكلي  6.226** قيمة مربع كاي **)0.01 ≤  P( 159 | Biology 2014) عام 3(العدد 27المجلد مجلة إبن الھيثم للعلوم الصرفة و التطبيقية Ibn Al-Haitham Jour. for Pure & Appl. Sci. Vol. 27 (3) 2014 المستنبتة على الوسط الصلب.): الفعالية األنزيمية للفطريات 2(رقم جدول البروتييز السليوليز الالكيز بكتيزالالبيز اإلميليز الفطريات المستنبتة Alternaria raphani- - + - ++ ++ Aspergillus candidus++ - + - - + A. clavatus+ ++ + - - + A. flavus+ + + - - - A. glaucus+ ++ + - + + A. niger+ ++ + - + ++ A. ornatus+ + + - ++ + A. parvulus+ - + - + + A. raperi+ + + - + + A. sclerotioniger+ ++ + - + + A. terreus+ +++ + - ++ - A. wentii++ ++ ++ - ++ - Cladosporium sp.+ + - - ++ - C. cladosporoides+ ++ ++ - + - Cunnighamella sp.+ + + - + - D. australiensis+ - - + - + P. variotii+ + - + - ++ ++ Pen 1+ + + - + ++ Pen 2++ + + - ++ + Pen 3+ - + - + + Pen 4+ - ++ - + ++ Mycelia sterilia (hyaline)- + ++ + ++ + Mycelia sterilia (white)+ - + - ++ + %73.91 %82.6 %13 %86.9 %69.5 %91.3 النسبة المئوية ضعيف إلى متوسط =+ جيد ++ = عالٍ =+++ غير قادر على اإلنتاج =- 160 | Biology 2014) عام 3(العدد 27المجلد مجلة إبن الھيثم للعلوم الصرفة و التطبيقية Ibn Al-Haitham Jour. for Pure & Appl. Sci. Vol. 27 (3) 2014 أ ب ج 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1 1.2 ل حل لت ة ل وي مئ ال بة س لن ا % 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1 1.2 ل حل لت ة ل وي مئ ال بة س لن ا % 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1 1.2 ل حل لت ة ل وي مئ ال بة س لن ا % الوسط ): الفعالية االنزيمية الخارج خلوية للفطريات المستنبتة المعزولة من أوراق نبات اآلس على1(رقم شكل الصلب 161 | Biology 2014) عام 3(العدد 27المجلد مجلة إبن الھيثم للعلوم الصرفة و التطبيقية Ibn Al-Haitham Jour. for Pure & Appl. Sci. Vol. 27 (3) 2014 د ھـ ): الفعالية االنزيمية الخارج خلوية للفطريات المستنبتة المعزولة من أوراق نبات اآلس على الوسط الصلب 2(رقمشكل انزيم السليوليز - د انزيم البروتيز -ھـ 0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.7 0.8 0.9 1 ل حل لت ة ل وي مئ ال بة س لن ا % 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1 1.2 ل حل لت ة ل وي مئ ال بة س لن ا % 162 | Biology 2014) عام 3(العدد 27المجلد مجلة إبن الھيثم للعلوم الصرفة و التطبيقية Ibn Al-Haitham Jour. for Pure & Appl. Sci. Vol. 27 (3) 2014 ): الفعالية االنزيمية الخارج خلوية للفطريات المستنبتة المعزولة من أوراق نبات اآلس على الوسط 1صورة ( -أ انزيم البروتيز. -انزيم السليوليز ھـ -انزيم البكتينيز، د -انزيم الاليبيز، جـ - انزيم االميليز، ب- الصلب أ ب أ د ج ه 163 | Biology 2014) عام 3(العدد 27المجلد مجلة إبن الھيثم للعلوم الصرفة و التطبيقية Ibn Al-Haitham Jour. for Pure & Appl. Sci. Vol. 27 (3) 2014 Endophytic Fungi of Myrtle (Myrtus communis) and their Extracellular Enzyme Activity Batool Z. Ali Huda M. Kadhoam Dpet. of Biology/ College of Education for Pure Science (Ibn Al-Haitham)/ University of Baghdad. Receivd in:15/September/2014, Accepted in :24/November/2014 Abstract The study was aimed to isolate and identify endophytic fungi from myrtle (Mrtus communis) leaves and study their extracellular enzymes activity. Results revealed isolation of 99 species or ioslated of endophytic fungi obtained from 500 leaves fragment, which represented colonization frequency (CF) of 20.4%. Those fungi were related to 23 species or isolates, Aspergilli were dominated over all species (11 species) with CF 14%. Moreover A. niger and A. flavus showed the higtest CF values over all. Other isolated fungi were related to the genera: Penicillium spp., Cladosporium sp., Cunninghamella sp., Derchslera sp., Alternaria sp. Paecilomyces sp. and sterile fungi (mycelia sterilia). Extracelluar enzymes activity showed varation in type and activity of secreting these enzymes in solid media. The percentage of 91.3% of these fungi were able to secrete anylase, while 69.5% produced lipase and 86.9% produced pectinase, as well as 82.6%, 73.9% and 13% were able to secrete cellulase, protease and laccase respectively. Some isolated showed a high affinity to secret some of tested enzymes which give indication of the possibility of using these enzymes in many applications after isolation and characterization . Key words: Endophytic fungi, Enzyme activity, myrtle.