المستخلص معالجة مرض تعفن الحضنة األمریكي على نحل العسل بأستعمال الكحولي لنبات الزعتر ومادة الثایمول المستخلصة منھ ضا صكب الجورانير محمد عبد الجلیل الكناني جامعة بغداد/ الزراعةكلیة / ة النباتقسم وقای عالء شریف عباس دادبغ الجامعة /المأمون كلیة 2002آذار 7: ، قبل البحث في 2001تشرین األول 1استلم البحث في : الخالصة Paenibacillus larvaeفي نمو بكتریا L Thymbra spicata لنبات الزعتر أختبر تأثیر المستخلص الكحولي larvae المسببة لمرض تعفن الحضنة األمریكيAmerican Foul Brood(AFB) على نحل العسل وبتراكیز مختلفة مایكروغرام / قرص و 3000ووجد أن التركیز ،التحمیل على األقراص الورقیة والخلط مع الوسط الزرعي وبطریقتي الخام ى التتابع . حددت المادة الفعالة في المستخلصمایكروغرام / مل ھي المثبطة لنمو البكتریا ولكال الطریقتین عل 3000 البكتریا بطریقة في) وأختبر تأثیرھا Thymol() ووجد أنھا مادة الثایمولTLCبطریقة كروماتوكرافي الصفائح الرقیقة ( مایكروغرام / قرص ھو الفعال في قتل البكتریا . أختبر تأثیر 1000التحمیل على األقراص الورقیة ووجد أن التركیز خالیا مصابة بمرض تعفن الحضنة األمریكي عند طریق خلطھ مع فيالمستخلص الكحولي ومادة الثایمول المعزولة منھ ات نتائجوأعطداخل خالیا نحل العسل على األطارات المصابة مایكروغرام / مل ورش 3000،المحلول السكري وبتركیز یوماً 27المعالجة بمادة الثایمول في حین أختفى المرض بعد مرور یوماً من بدء 21على المرض بعد مرور إذ قضيجیدة لنبات الزعتر .من بدء المعالجة بالمستخلص الكحولي .: مرض تعفن الحضنة األمریكي ، الثایمول ، الزعتر الكلمات المفتاحیة 9 | Biology @@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@ÚÓ‘Ój�n€a@Î@Úœäñ€a@‚Ï‹»‹€@·rÓ:a@Âig@Ú‹©@Ü‹1a26@@ÖÜ»€a@I3@‚b«@H2013 Ibn Al-Haitham Jour. for Pure & Appl. Sci. Vol. 26 (3) 2013 المقدمة ویتسبب في ضعف الطوائف یعد مرض تعفن الحضنة األمریكي من أخطر األمراض التي تصیب حضنة نحل العسل وھي بكتریا عصویة موجبة لصبغة كرام ،Paenibacillus larvae larvae ومن ثم موتھا . المسبب لھذا المرض بكتریا عاماً 50طویلة قد تصل إلى مدهكتریا في طوائف نحل العسل وتحافظ على حیویتھا مكونة السبورات . تمكث سبورات الب یدخل المسبب المرضي إلى جسم الیرقة عن طریق الغذاء المقدم لھا من الشغاالت ، . ] 1عند عدم مالئمة الظروف للنمو [ اخل جسم الیرقة وتنتشر في جسمھا وتؤدي حساسة لإلصابة . تتكاثر الخالیا البكتریة د یوم 1-2 وتكون الیرقات التي بعمر ] . 3البكتریا سریعة األنتشار داخل الخلیة وبین الخالیا [ ] . ھذه2وتحویلھا إلى قوام مائي لزج [إلى موتھا وتحلل أنسجتھا ن األجراءات المتبعة لمعالجة ھذا المرض الخطیر في معظم دول العالم ھو حرق الخالیا المصابة بما فیھا من حشرات إ عمل] ، كذلك تست2ھذا المرض تكون كبیرة حتى في حالة المعالجة [ منوأجزاء خشبیة ولھذا فأن الخسارة الناتجة ) لمعالجة المرض إال أن ھذه المضادات ال تقضي Oxytetracyclineاألوكسي تتراسایكلین (السیما المضادات الحیویة و ] . یھدف البحث إلى إیجاد طریقة فعالة في معالجة ھذا 4لبكتریا [لنمو الخالیا الخضریة على السبورات ولكنھا تمنع ن األجراءات المتبعة .مستفادة من النباتات الطبیعیة التي تنمو محلیاً لتكون بدیالً المرض باال ،مثل بعض الكائنات المجھریة فيألحتوائھ على مواد فینولیة وقلویدیة لھا تأثیر Thmbra spicataأختیر نبات الزعتر ، Rhizoctonia soloniو ، Fusarium monilifromفطر الفطریات الموجودة في التربة والممرضة للنبات مثل وبكتریا ،] Escherichia coli ]5 وبكتریا ،Staphyllococciبكتریا العنقودیات ، مثل وبعض األنواع البكتیریة Melissococcus pluton ] 6المسبب لمرض تعفن الحضنة األوربي على نحل العسل. [ مواد وطرائق العمل األستخالص النایلون تحت فرشت على فرشة منو إلى المختبرنطقة زاویتھ / محافظة دھوك ، و نقلت من مالزعتر نباتات جمعت ستمرار منعاً للتعفن حتى الجفاف ، بعدھا قطعت وسحقت بوساطة طاحونة كھربائیة وغربلت ادرجة حرارة الغرفة وقلبت ب غم 200لتحضیر المستخلص الكحولي إذ وزن ] 7وآخرون [ Gul) ، أستعملت طریقة mesh 50مش ( 50بغرابیل سعة ، % 95مل من الكحول األثیلي تركیز 400مل ثم أضیف 1000عتھ من المسحوق النباتي ووضع في دورق زجاجي س ) Watman No. 2ساعة ثم رشح المستخلص من خالل ورق ترشیح ( 24رج الدورق بوساطة رجاج كھربائي لمدة حفظ ) .Rotary evaporator with vacuumر وركز الراشح بوساطة المبخر الفراغي الدوار (نبأستعمال قمع بوخ الخام في قناني زجاجیة محكمة الغلق وتحت التجمید لحین األستعمال.المستخلص العزالت البكتیریة محافظة بغداد مالزوراء علیھا من منحل تم الحصول P. larvae larvaeلبكتریا أستعملت عزالت بكتیریة محلیة جامعة بغداد. –كلیة الزراعة –قسم وقایة النبات وعزلت وشخصت في أختبار تأثیر المستخلص الكحولي الخام على البكتریا مختبریاً مختبریاً بأستعمال طریقة التحمیل على األقراص المستخلص الكحولي الخام لنبات الزعتر على البكتریا أختبرت فعالیة مایكروغرام / قرص . زرعت البكتریا (وھي 3000، 1250، 1000، 500الورقیة ، أذ حملت ھذه األقراص بالتراكیز Brain Heartالزرعي المناسب لنموھا والمسمى ثم على الوسط Nutrient brothعلى شكل معلق) أوالً على الوسط Infusion Thiamin (BHIT) بطریقة النشر . وضعت األقراص الورقیة المحملة بالتراكیز أعاله على األطباق ساعة ثم قیست أقطار 48ْم لمدة 35طبق لكل تركیز . حضنت األطباق بدرجة حرارة 2قرص في كل طبق) وبواقع 3( لتحدید التركیز الفعال . كذلك أختبر تأثیر المستخلص بطریقة الخلط ) Inhibition zoneمناطق التثبیط حول األقراص ( 250) حیث حضرت التراكیز Plate dilution technique( مع الوسط الزرعي ، إذ أستعملت طریقة التخفیف باألطباق ، وخلط كل تركیز على حده مع الوسط الزرعي الصلب بعد تعقیمھمایكروغرام / مل 3000و 1250، 1000، 500، . حضنت األطباق بدرجة فضال"عن معاملة المقارنةطبق لكل تركیز 2زرعت البكتریا في األطباق بطریقة النشر بواقع و ساعة وحسبت النسبة المئویة للنمو مقارنة مع أطباق السیطرة وحدد التركیز الفعال على أساس عدم 48ْم لمدة 35حرارة ] .4ظھور أي مستعمرة وعدم حصول نمو البكتریا [ تحدید المادة الفعالة المؤثرة في نمو البكتریا ، إذ أشارت البحوث السابقة إلى وجود مادة اد على نسبة وجودھا في المستخلص الكحوليحددت المادة الفعالة باألعتم Abo – Basha et] . أستعملت طریقة 6% مع الزیوت العطریة [55الثایمول وھي مادة فینولیة وتوجد بنسبة تصل إلى al. (1995) ]8 أستعملت رقائق بالستیكیة نوع (] لتشخیص وتنقیة الثایمول في المستخلص الكحولي الخام ، إذEmerck, F254 مطلیة بطبقة من أوكسید األلمنیوم مع مادة مضیئة عند تعرضھا لألشعة فوق البنفسجیة . وضع مستخلص الزعتر ( من سم 2ومادة الثایمول القیاسیة (تم الحصول علیھا من الھیئة العامة لوقایة المزروعات / وزارة الزراعة) على مسافة 10 | Biology @@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@ÚÓ‘Ój�n€a@Î@Úœäñ€a@‚Ï‹»‹€@·rÓ:a@Âig@Ú‹©@Ü‹1a26@@ÖÜ»€a@I3@‚b«@H2013 Ibn Al-Haitham Jour. for Pure & Appl. Sci. Vol. 26 (3) 2013 . ترك محلول 1: 1وبنسبة Isopropyl ether : Benzeneة السفلیة للرقیقة ، وأستعمل محلول الفصل المكون من الحاف فحصت تحت مصدر لألشعة فوق البنفسجیة بطول .سم ، ثم رفعت الرقائق وتركت لتجف في الھواء 17الفصل یرتفع إلى للمركب RFللمركبات المفصولة وقورنت بقیم RF یر لتحدید البقع المفصولة ، حسبت قیمتنانوم300 – 245موجي القیاسي . الثایمول أستخالص RFمقاربة لقیم RF) والتي أعطت قیم TLCقیقة (رأستخلص الثایمول من خالل البقع المفصولة على ألواح الطبقة ال للثایمول القیاس ، جمع ما تم قشطھ في أنبوبة أختبار وأضیف إلیھ كلوروفورم لغرض إذابتھ وفصلھ عن المسحوق ، رجت ر األنبوبة بعملیة الطرد المركزي . بخر الكلوروفورم عاألنبوبة برجاج كھربائي لمدة نصف ساعة ثم رسب المسحوق في ق فراغي الدوار الحصول على الثایمول النقي .أختبر الثایمول المستخلص ال بخرجھاز الم بوساطة(الحاوي على الثایمول) 1250، 1000، 500، 250األقراص الورقیة بالتراكیز على العزالت البكتیریة مختبریاً بطریقة التحمیل على مایكروغرام / قرص للتأكد من تأثیره على نمو البكتریا . نحل المصابة بالمرضایمول على خالیا الأختبار مستخلص الزعتر الخام ومادة الث خالیا ، مع خلیة مصابة أخرى 3مجموعة مكونة من جموعتین من الخالیا المصابة ، كلأجرى األختبار على م ماء مخلوط معھ مستخلص 1 سكر : 2تركت بدون معاملة كخلیة مقارنة ، رشت المجموعة األولى بمحلول سكري تركیزه مل 500مایكروغرام / مل (وھو التركیز الذي أعطى فعالیة في المختبر) .رشت كل خلیة بـ 3000الزعتر الخام بتركیز منھ شمل الرش وجھي كل أطار وقاعدة الخلیة والمتبقي رش على الحشرات العالقة الموجودة داخل الخلیة وذلك لضمان أیام . في حین رشت المجموعة الثانیة 5مرات بین مرة وأخرى 3د الطائفة . كررت العملیة وصول العالج إلى جمیع أفرا مایكروغرام/ مل . تركت خلیة المقارنة 1000بنفس الطریقة بمحلول سكري حامل لمادة الثایمول المستخلصة بتركیز نجات المربعة التي فیھا األصابة والمأخوذة بدون معالجة لمقارنة تأثیر ذلك على الخالیا المعاملة من خالل حساب عدد األ ) . سجلت البیانات والمالحظات وإنخفاض Frame countعشوائیاً بأستخدام األطاري الزجاجي المقسم إلى أنجات مربعة ( نسب اإلصابة كل ثالثة أیام رافق ذلك أخذ عینات من الیرقات والعسل واألغطیة الشمعیة وزراعتھا مختبریاً للكشف عن وجود المسبب المرضي . والمناقشةالنتائج الزعتر الخام ومادة الثایمول القیاسیة على البكتریا مختبریاً فعالیة مستخلص أختبار أختبار التحمیل على األقراص الورقیة –أ مایكروغرام/ قرص 1000 و500 لم یكن لھ تأثیر تثبیطي معنوي بالتراكیز خاممستخلص الالأن )1جدول (أظھرت النتائج على البكتریا ، إذ لم تظھر أیة منطقة تثبیط حول األقراص الحاملة لھذه التراكیز ، بینما ظھر التأثیر في التركیزین .ظھر من خالل التحلیل الترتیب ملم على 16 و 9مایكروغرام / قرص فقد كان قطر منطقة التثبیط 3000و1250 ھذا مایكروغرام / قرص ، ولذا یعد 3000 و 1250بین التركیزین 0.05معنوي على مستوى األحصائي وجود فرق مایكروغرام / قرص وبدأ 250أما في أختبار الثایمول فلم یظھر تأثیر بالتركیز ، التركیز ھو الفعال ضد ھذه البكتریا ملم ، وإزداد تأثیر ھذه المادة 20قة التثبیط مایكروغرام / قرص حیث كان قطر منط 500التأثیر التثبیطي یظھر بالتركیز ملم على 33 و 32مایكروغرام / قرص 1250 و1000 بأزدیاد التركیز حیث كانت أقطار مناطق التثبیط للتركیزین مایكروغرام / 1000و 500بین التركیز 0.05.أظھرت نتائج التحلیل األحصائي وجود فروق معنویة على مستوى الترتیب مایكروغرام/ 1000مایكروغرام / قرص وأن التركیز 1250 و 1000قرص وعدم وجود فروق معنویة بین التركیزین ص ھو التركیز الفعال ضد البكتریا .قر أختبار إضافة تراكیز مختلفة من المستخلص الخام إلى الوسط الزرعي –ب مایكروغرام / مل لیس لھ تأثیر تثبیطي حیث ظھر على سطح الطبق 250) أن التركیز 2جدول (أظھرت النتائج % مقارنة مع طبق المقارنة وھي نسبة عالیة جداً مما یدل على 50.1مستعمرة أي بنسبة نمو 2757الحامل لھذا التركیز مایكروغرام / مل 500یز عدم وجود أي تأثیر تثبیطي لھذا التركیز على البكتریا . في حین كان عدد المستعمرات في الترك % وھي أیضاً نسبة عالیة إال أنھا أقل من التركیز األول ومن ھذا التركیز بدأ 16.7مستعمرة وبنسبة مئویة للنمو 921 مستعمرة 275مایكروغرام / مل فقد ظھرت 1000یظھر التأثیر التثبیطي للمستخلص على النمو البكتري . أما في التركیز % . في حین لم تظھر 2.05مستعمریة وبنسبة نمو 113یكروغرام / مل ظھرت ما 1250التركیز % وفي5وبنسبة نمو مایكروغرام / مل ولجمیع األطباق الحاملة لھذا التركیز مما یدل على أن تركیز مستخلص 3000أي مستعمرة بالتركیز مایكروغرام / مل . 3000الزعتر المثبط للبكتریا ھو ة الخالیا المصابة بالمرض بمستخلص الزعتر الخام ومادة الثایمول أختبار معالج -جـ أن مادة الثایمول أعطت نتائج إیجابیة وسریعة في القضاء على المرض ، حیث أنتھى المرض )1شكل (أظھرت النتائج المسبب المرضي في یوم من بدأ المعالجة ، إذ أختفت األعراض المرضیة ولم یعزل 21من الخالیا المصابة بعد مرور یوم عند 27بعد مرور في حین أختفى المرض من الخالیا ،ات المأخوذة من ھذه الخالیا عینالفحص المختبري األخیر من ال 11 | Biology @@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@ÚÓ‘Ój�n€a@Î@Úœäñ€a@‚Ï‹»‹€@·rÓ:a@Âig@Ú‹©@Ü‹1a26@@ÖÜ»€a@I3@‚b«@H2013 Ibn Al-Haitham Jour. for Pure & Appl. Sci. Vol. 26 (3) 2013 ، وأن ،ریھذا المرض الخط في معالجة فعال وسریع تأثیرلثایمول لمعاملتھا بمستخلص التركیز الخام . ومن ھذا یتضح أن األبتعاد عن أستعمال فضآل" عن من الخسائر األقتصادیة المتسببة عن أحراق الخالیا المصابة قلیلتأستعمالھ سیؤدي إلى ال المضادات الحیویة التي لھا تأثیر سلبي على المستھلك عند تناولھ لمنتجات النحل الحاویة على بقایا المضادات الحیویة ] .7[ بل أیقافھ مؤقتا"ضاء على ھذا المرض المستعملة في المعالجة ، كما أنھا طریقة غیر فعالة في الق المصادر 1 – Ellis . J . D. and Munn . P . A .(2005) The World wide health status bees . Bee world 4. 88 – 101 . 2 – Evans . J . D .(2004) Transcription immune responses by honey bee lorvae during invasion by the bacterial pathogen Paenibacillus larvae .J. Invertebr Pathd . 85. 105 – 111 . 3 – Generch .E.; Forsgren .E.; pentikainen .J.; Ashiralieva .A.; Rauch .S.; Kilwinski .J.and Fries ,I. (2006) Reclassification of Paenibacillus larvae subsp. Palvitaciens and Peanibacillus larvae subsp larvae as Paenibacillus larvae without subspecies differentiation .Int.J. sys. Evol. Microbial . 56. 501 – 511 . 4 – Forsgren .E. ;Olofsson .T.C. ;Vasques .A. and Fries .I. 2009. Novel lactic acid bacteria inhibiting Paenibacillus larvae in honey bee larvae . Apidologic 41. 99 – 108 . 5 – Aladin .A.S.; Awan Yousif , Z. and Abou, M.B.ch. (1993 ) Quide to chemo theropy laxis in bacterial in fections Non – Communicable Disease. Eastern Mediterranean Regional office , Alexanderia . Egypt. دراسة مرض الحضنة األوربي على نحل العسل في العراق ومكافحتھ بأستخدام )2000 (الكناني ، محمد عبد الجلیل – 6 المستخلصات النباتیة . أطروحة دكتوراه . كلیة الزراعة . جامعة بغداد . 7 – Gul, H.; Choudhry , M.l.; Farooq M.and Jan, R. (1988) Prelimirory studies on antimicrobio of common wood of pakiston and their extractive . Pakistan J. Forestry . 38 (3) : 167 – 173 . 8 – Abou – Basha , L.I.; Rashid , M.S. and Aboul – Enein, H.Y. (1995) The assay of Thymoquinone in black seed oil (Nigello Sativa L) and identification of dithymoquinone and Thymol .J. Liquid chromatography . 18 (1) : 105 – 115 . 9 – Clouse ,E.P.; Tyler , V.E. and Brady, L.P. (1970) The laboratory diagncosis of honey bee disease . Amer . bee .J. 129 : 128 – 138 . التحمیل على األقراص بطریقة نمو البكتریا فيومادة الثایمول الخام ستخلصة للملالمختلفتأثیر التراكیز : )1ول (جد الورقیة المادة التركیز مایكروغرام / قرص 250 500 1000 1250 3000 16 9 0 0 - الخاممستخلص ال - 33 32 20 0 الثایمول LSD 0.05 2.81لمادة الثایمول .1.78 الخام لمستخلصل بكتریاالنمو في المضافة إلى الوسط الزرعي الخام لمستخلصالمختلفة لتأثیر التراكیز : ) 2جدول ( مایكروغرام/قرص 500 مایكروغرام/قرص 250 1000 مایكروغرام/قرص 1250 مایكروغرام/قرص 3000 Control مایكروغرام/قرص عدد % للنمو المستعمرات عدد % للنمو المستعمرات عدد % للنمو المستعمرات عدد % للنمو المستعمرات عدد المستعمرات % للنمو 2757 50.1% 921 16.5% 275 65.0% 113 2.05% 0 0% 5500 12 | Biology @@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@ÚÓ‘Ój�n€a@Î@Úœäñ€a@‚Ï‹»‹€@·rÓ:a@Âig@Ú‹©@Ü‹1a26@@ÖÜ»€a@I3@‚b«@H2013 Ibn Al-Haitham Jour. for Pure & Appl. Sci. Vol. 26 (3) 2013 .تأثیر المعالجة بأستعمال المستخلص الخام ومادة الثایمول على الخالیة المصابة بالمرض: ) 1شكل ( ة صاب لال ة وي مئ ال بة نس ال % ايام/ الوقت الثایمول الزعتر السيطرة 13 | Biology @@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@ÚÓ‘Ój�n€a@Î@Úœäñ€a@‚Ï‹»‹€@·rÓ:a@Âig@Ú‹©@Ü‹1a26@@ÖÜ»€a@I3@‚b«@H2013 Ibn Al-Haitham Jour. for Pure & Appl. Sci. Vol. 26 (3) 2013 Control of American Foul Brood Disease (AFB) in Honey Bee Using Thyme Extracts and Thymol Ridha S. AL – Jorany Mohammed A.J. AL – Kinani Department of plant protection/ Collage of Agriculture/University of Baghdad Alaa S. Abbas AL – Ma'mmon University Collage Received in : 1 October 2001, Accepted in : 7 March 2002 Abstract Ethanolic extracts of Thyme (Thymbra spicata) were tested for their inhibitory action on Paenibacillus larvae the causative agent of American foul brood with different concentration by using disc assay and mixed with culture media . Results showd that 3000mg / disc and 3000 mg / ml was the effective concentroation for the both methods .Thymol was isolated by using TLC technique . The effective concentration of thymol on growth of bacteria was 1000 mg / disc . Thymol and crude extracts of thyme 3000 mg / ml were tested on infected hives by mixed with sugar solution . The symptoms of AFB disease was full disappearance within 21 , 27 days after treatment with thymol and thyme extracts respectively . Key wordes : AFB , Thyme , Thymol , Paenibacillus larvae 14 | Biology @@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@ÚÓ‘Ój�n€a@Î@Úœäñ€a@‚Ï‹»‹€@·rÓ:a@Âig@Ú‹©@Ü‹1a26@@ÖÜ»€a@I3@‚b«@H2013 Ibn Al-Haitham Jour. for Pure & Appl. Sci. Vol. 26 (3) 2013 << /ASCII85EncodePages false /AllowTransparency false /AutoPositionEPSFiles true /AutoRotatePages /None /Binding /Left /CalGrayProfile (Dot Gain 20%) /CalRGBProfile (sRGB IEC61966-2.1) /CalCMYKProfile (U.S. Web Coated \050SWOP\051 v2) /sRGBProfile (sRGB IEC61966-2.1) /CannotEmbedFontPolicy /Error /CompatibilityLevel 1.4 /CompressObjects /Tags /CompressPages true /ConvertImagesToIndexed true /PassThroughJPEGImages true /CreateJobTicket false /DefaultRenderingIntent /Default /DetectBlends true /DetectCurves 0.0000 /ColorConversionStrategy /CMYK /DoThumbnails false /EmbedAllFonts true /EmbedOpenType false /ParseICCProfilesInComments true /EmbedJobOptions true /DSCReportingLevel 0 /EmitDSCWarnings false /EndPage -1 /ImageMemory 1048576 /LockDistillerParams false /MaxSubsetPct 100 /Optimize true /OPM 1 /ParseDSCComments true /ParseDSCCommentsForDocInfo true /PreserveCopyPage true /PreserveDICMYKValues true /PreserveEPSInfo true /PreserveFlatness true /PreserveHalftoneInfo false /PreserveOPIComments true /PreserveOverprintSettings true /StartPage 1 /SubsetFonts true /TransferFunctionInfo /Apply /UCRandBGInfo /Preserve /UsePrologue false /ColorSettingsFile () /AlwaysEmbed [ true ] /NeverEmbed [ true ] /AntiAliasColorImages false /CropColorImages true /ColorImageMinResolution 300 /ColorImageMinResolutionPolicy /OK /DownsampleColorImages true /ColorImageDownsampleType /Bicubic /ColorImageResolution 300 /ColorImageDepth -1 /ColorImageMinDownsampleDepth 1 /ColorImageDownsampleThreshold 1.50000 /EncodeColorImages true /ColorImageFilter /DCTEncode /AutoFilterColorImages true /ColorImageAutoFilterStrategy /JPEG /ColorACSImageDict << /QFactor 0.15 /HSamples [1 1 1 1] /VSamples [1 1 1 1] >> /ColorImageDict << /QFactor 0.15 /HSamples [1 1 1 1] /VSamples [1 1 1 1] >> /JPEG2000ColorACSImageDict << /TileWidth 256 /TileHeight 256 /Quality 30 >> /JPEG2000ColorImageDict << /TileWidth 256 /TileHeight 256 /Quality 30 >> /AntiAliasGrayImages false /CropGrayImages true /GrayImageMinResolution 300 /GrayImageMinResolutionPolicy /OK /DownsampleGrayImages true /GrayImageDownsampleType /Bicubic /GrayImageResolution 300 /GrayImageDepth -1 /GrayImageMinDownsampleDepth 2 /GrayImageDownsampleThreshold 1.50000 /EncodeGrayImages true /GrayImageFilter /DCTEncode /AutoFilterGrayImages true /GrayImageAutoFilterStrategy /JPEG /GrayACSImageDict << /QFactor 0.15 /HSamples [1 1 1 1] /VSamples [1 1 1 1] >> /GrayImageDict << /QFactor 0.15 /HSamples [1 1 1 1] /VSamples [1 1 1 1] >> /JPEG2000GrayACSImageDict << /TileWidth 256 /TileHeight 256 /Quality 30 >> /JPEG2000GrayImageDict << /TileWidth 256 /TileHeight 256 /Quality 30 >> /AntiAliasMonoImages false /CropMonoImages true /MonoImageMinResolution 1200 /MonoImageMinResolutionPolicy /OK /DownsampleMonoImages true /MonoImageDownsampleType /Bicubic /MonoImageResolution 1200 /MonoImageDepth -1 /MonoImageDownsampleThreshold 1.50000 /EncodeMonoImages true /MonoImageFilter /CCITTFaxEncode /MonoImageDict << /K -1 >> /AllowPSXObjects false /CheckCompliance [ /None ] /PDFX1aCheck false /PDFX3Check false /PDFXCompliantPDFOnly false /PDFXNoTrimBoxError true /PDFXTrimBoxToMediaBoxOffset [ 0.00000 0.00000 0.00000 0.00000 ] /PDFXSetBleedBoxToMediaBox true /PDFXBleedBoxToTrimBoxOffset [ 0.00000 0.00000 0.00000 0.00000 ] /PDFXOutputIntentProfile () /PDFXOutputConditionIdentifier () /PDFXOutputCondition () /PDFXRegistryName () /PDFXTrapped /False /CreateJDFFile false /Description << /ARA /BGR /CHS /CHT /CZE /DAN /DEU /ESP /ETI /FRA /GRE /HEB /HRV (Za stvaranje Adobe PDF dokumenata najpogodnijih za visokokvalitetni ispis prije tiskanja koristite ove postavke. Stvoreni PDF dokumenti mogu se otvoriti Acrobat i Adobe Reader 5.0 i kasnijim verzijama.) /HUN /ITA /JPN /KOR /LTH /LVI /NLD (Gebruik deze instellingen om Adobe PDF-documenten te maken die zijn geoptimaliseerd voor prepress-afdrukken van hoge kwaliteit. De gemaakte PDF-documenten kunnen worden geopend met Acrobat en Adobe Reader 5.0 en hoger.) /NOR /POL /PTB /RUM /RUS /SKY /SLV /SUO /SVE /TUR /UKR /ENU (Use these settings to create Adobe PDF documents best suited for high-quality prepress printing. Created PDF documents can be opened with Acrobat and Adobe Reader 5.0 and later.) >> /Namespace [ (Adobe) (Common) (1.0) ] /OtherNamespaces [ << /AsReaderSpreads false /CropImagesToFrames true /ErrorControl /WarnAndContinue /FlattenerIgnoreSpreadOverrides false /IncludeGuidesGrids false /IncludeNonPrinting false /IncludeSlug false /Namespace [ (Adobe) (InDesign) (4.0) ] /OmitPlacedBitmaps false /OmitPlacedEPS false /OmitPlacedPDF false /SimulateOverprint /Legacy >> << /AddBleedMarks false /AddColorBars false /AddCropMarks false /AddPageInfo false /AddRegMarks false /ConvertColors /ConvertToCMYK /DestinationProfileName () /DestinationProfileSelector /DocumentCMYK /Downsample16BitImages true /FlattenerPreset << /PresetSelector /MediumResolution >> /FormElements false /GenerateStructure false /IncludeBookmarks false /IncludeHyperlinks false /IncludeInteractive false /IncludeLayers false /IncludeProfiles false /MultimediaHandling /UseObjectSettings /Namespace [ (Adobe) (CreativeSuite) (2.0) ] /PDFXOutputIntentProfileSelector /DocumentCMYK /PreserveEditing true /UntaggedCMYKHandling /LeaveUntagged /UntaggedRGBHandling /UseDocumentProfile /UseDocumentBleed false >> ] >> setdistillerparams << /HWResolution [2400 2400] /PageSize [612.000 792.000] >> setpagedevice