Microsoft Word - 366-376 علوم الحياة | 366 2016عام ) 1(العدد 29المجلد مجلة إبن الهيثم للعلوم الصرفة و التطبيقية Ibn Al-Haitham J. for Pure & Appl. Sci. Vol. 29 (1) 2016 Pseudomonas aeruginosaفي بكتريا LasBالتسلسل التتابعي لجين المعزولة من بعض الحاالت السريرية رنا مجاهد عبدهللا الشويخ قسم علوم الحياة / كلية التربية ابن الهيثم للعلوم الصرفة/ جامعة بغداد 2015كانون األول 15قبل في 2015تشرين األول 11استلم في: الخالصة عينة جمعت من حاالت 120من اصل Pseudomonas aeruginosaعزلة تعود الى بكتريا 75حصل على .Pفي بكتيريا Elastase )Pseudolysin ( LasBأظهرت نتائج التحري عن جين الضراوة النزيم مرضية مختلفة. aeruginosa زوج قاعدة بعد ترحيله 300% وكان الحجم الجزيئي للجين 84عزلة وبنسبة 63الى وجود هذا الجين في . بينت النتائج ان هنالك طفرات وراثية في دنا P. aeruginosaفي بكتريا LasBحلل التسلسل التتابعي لجين كهربائيا. ، حدثت هذه الطفرات في تسلسل القواعد النتروجينية وكان اغلبها من نوع االستبدال واالضافة والحذف LasBالجين كذلك تبين من مطابقة التسلسل التتابعي للقواعد % مع التسلسل التتابعي للجين االصلي ، 97وكانت نسبة التطابق روجينية المترجمة مع تسلسل الحامض االميني الذي يشفر عن هذا الجين ، لم يكن للطفرات تأثير في نتائج ترجمة النت البروتين وذلك لكونها طفرات صامتة. .LasB التسلسل التتابعي لجين، LasBجين ، P. aeruginosa -الكلمات المفتاحية: علوم الحياة | 367 2016عام ) 1(العدد 29لمجلد ا مجلة إبن الهيثم للعلوم الصرفة و التطبيقية Ibn Al-Haitham J. for Pure & Appl. Sci. Vol. 29 (1) 2016 المقدمة من انواع البكتريا السالبة لصبغة كرام وهي من االنواع البكترية السريرية االنتهازية P. aeruginosaتعد بكتريا Relevant opportunistic تتميز هذه البكتريا بمقاومتها العالية والمتعدده للمضادات الحيوية المختلفة ،Multidrug resistant (MDR) [1] لعديد من االمراض وااللتهابات النواع من الكائنات ومنها تنتشر البكتريا في البيئة وتسبب ا ، تسبب العديد من االصابات Plantsوالنباتات Nematodesوالديدان Insectsوالحشرات Mammalsاللبائن Pneumonia والتهاب ذات الرئة Corneal infectionوالتهاب القرنية Keratitisلالنسان منها التهاب العيون Chronic lungوالتهابات الرئة المزمنة Wound and burn infection [2]تهابات الجروح والحروق وال infection فضال عن انها تودي الى الموت احيانا في حاالت اصابة التليف الرئويCystic fibrosis [1] تسبب . Hospital- acquiredوكذلك العديد من االمراض التي تنتقل عبر المراجعة الى المستشفيات Sepsisحاالت تسمم الدم bacterial infection فضال عن مقاومتها العالية للمضادات الحيوية التي تجعل عالجها صعبا فال يمكن ايجاد عالج ، تسبب اصابات خطيرة لالشخاص المصابين ، [4,3]سريع لها وتكون انواع المضادات التي تستعمل في العالج محدوده Organ Transplant، وتسبب االلتهابات عند نقل االعضاء لالشخاص Immunocompromisedبالكبت المناعي infection [5]ان معظم سالالت بكتريا . P. aeruginosa تنتج سموما وانزيمات خارجية منها Corneal ulcerationيؤدي دورا مهما في العديد من االمراض منهاالذي Proteasesوانزيم Phospholipasesانزيم وتمتلك ايضا Chronic pulmonary colonizationوااللتهاب الرئوي المزمن Burn infectionواصابات الحروق Mucoid ) المسؤول عن تكوينAlginate )Exopolysaccharideوامتالكها لطبقة Pyocyaninصبغات منها phenotype [6] الموجودة ضمن جدار الخلية . Extracellularالعديد من االنزيمات المحللة للبروتين الخارجي P. aeruginosaتنتج السالالت المختلفة من بكتريا proteolytic enzyme التي عوامل ضراوة للبكتريا وتكون هذه االنزيمات على انواع متعدده تتضمنProtease IV و Alkaline protease ( aeruginolysin) المشفر من قبل الجينaprA gene وانزيمElastase الذي يكون على المشفر من Pseudolysin (LasB)وانزيم LasA geneالمشفر من قبل الجين LasA ( Staphylolysinنوعين( ، تتطور االنزيمات LasBيا ولكنه مهم في فعالية واطئا في الخال LasAويكون انتاج االنزيم LasB geneقبل الجين LasB Elastaseويعد انزيم [2,7]المحللة للبروتين حسب نوع االصابة بالمضيف وتتداخل مع النظام المناعي للمضيف من عوامل الضراوة لهذه البكتريا وله دور في امراضية البكتريا ، اذ يعمل على تحطيم انسجة المضيف وتعطيل تقاطعات بين الخاليا الظهارية للرئة وتدهور للجهاز المناعي وبينت دراسات عدبدة ان حدوث طفرات وراثية في الجينات ال . [8]المشفرة لهذا االنزيم يؤثر في ضراوة البكتريا المواد وطرائق العمل عينة من حاالت مرضية مختلفة تضمنت التهابات الجروح والحروق 120جمعت -عزل وتشخيص البكتريا : . ومن عدة مستشفيات في 2014 /30/11لغاية 2014 /1/9والمجاري البولية و االذن الوسطى وعينات الدم للمدة من ي ومستشفى الصدر ومستشفى ابن البلدينة االمامين الكاظمين الطبية بغداد مثل مستشفى الطفل المركزي و مستشفى مد ومستشفى الحروق والمختبرات التعليمية / مدينه الطب ، شخصت العزالت البكتيرية باستعمال االختبارات المجهرية وحسب تعليمات الشركة API20Eكما تم تاكيد التشخيص باستعمال نظام [9]والزرعية والبايوكيميائية المعتمدة من قبل المصنعة له. دنا باستعمال عده خاصة في استخالص الدنا من عزالت البكتريا والمصنعة من قبل شركة عزل ال -: DNAعزل Geneaid Biotech kit system , UK . وحسب النشره المرفقة مع عدة االستخالص بيكومول/ مايكروليتر بعد اذابتها في الماء الخالي من 10حضرت البوادئ بتركيز -: LasBالكشف عن جين مايكروليترا من الماء الخالي من النيكلويز ومزج 90 مايكروليترات من البادئ واضيف له 10 ز وبعد ذلك أخذالنيكلوي مع مراعاة مزج البادئ بعد اخراجه من الثلج م° 20 –جيدآ وحفظ البادئ في درجة الحرارة Vortexبوساطة الهزاز .]6[لمجانسته قبل االستعمال Vortexبأستعمال الهزاز [6]وتم التحوير بالبرنامج ليصبح بالظروف التفاعلية الموضحة في الجدول ادناه PCRوباستعمال تفاعل البلمرة المتسلسل :- علوم الحياة | 368 2016عام ) 1(العدد 29لمجلد ا مجلة إبن الهيثم للعلوم الصرفة و التطبيقية Ibn Al-Haitham J. for Pure & Appl. Sci. Vol. 29 (1) 2016 PCR condition Product size ( bp) Primer sequence 3 ́ 5 ́ primer 94 ˚C 3min 94 ˚C 30sec 55 ˚C 1min For 30 cycles 72 ˚C 1min 72 ˚C 5 min 300 GGAATGAACGAAGCGTTCTC GGTCCAGTAGTAGCGGTTGG LasB F LasB R Eithidiumمايكرولترات من صبغة 5% الحاوي على 1.5فصلت نتواتج التفاعل باستعمال االكاروز بتركيز bromide وباستعمالDNA ladder )100 باستعمال جهاز فولتا لمدة ساعة وصورت 75) وبفرق جهد زوج قاعدة .UV transilluminator [10] التوثيق LasBلجين DNAارسلت عينات -: LasB Sequencing of LasB genesالتسلسل التتابعي لجين Geneticاالمريكية وباستعمال جهاز التحليل الوراثي NICEMالى شركة Primer , R Primer Fمع البوادئ analyser قرئت النتائج حسب برنامج ،Bioedit لتحديد عدد النيوكليوتيدات ولمعرفة الطفرات ، ومن ثم عمل ترجمة .[11]لمواقع التغيير في االحماض االمينية النتائج والمناقشة عينة جمعت من حاالت مرضية مختلفة. 120من اصل P. aeruginosaعزلة تعود الى بكتريا 75حصل على عزلة بنسبة 63، أظهرت النتائج وجود هذا الجين في P. aeruginosaفي بكتيريا LasB للتحري عن جين الضراوة عد ترحيله زوج قاعدة ب 300) . كان الحجم الجزيئي للجين 1% في العزالت قيد الدراسة ، كما موضح في الشكل (84 ) .2كهربائيا كما موضح بالشكل ( كانت تمتلك P. aeruginosaالذين بينوا ان جميع عزالت بكتريا [13,12]وكانت هذه النتائج مقاربة مع كل من % ويعد انزيم البروتييز من االنزيمات المهمة في ضراوة هذه اليكتريا الذي يعمل على تحطيم 100وينسبة LasBالجين و Hemolysinسيج المضيف ويساعد البكتريا على اختراق االنسجة وتحطيمها وبمساعدة كل من انزيمات ن Cytotoxin وLasB Elastase [14] وجود هذا االنزيم بوثر في تكوين الغشاء الحياتي .Biofilm في البكتريا ، فقد يوثر Las B Elastaseان حصول طفرات في الجين المسؤول عن انتاج انزيم وجماعتة Yuوجد في دراسة للباحث Garallaوتوصلت الباحثة P. aeruginosa .[8]في بكتريا Biofilmبشكل سلبي في تكوبن طبقة الغشاء الحياتي كانت منتجة النزيم% فقط من عزالتها المعزولة من حاالت التليف الحوصلي 30.76ان في دراسة محلية الى 2015عام LasB [15] . باستعمال جهاز التحليل الوراثي وقورنت مع P. aeruginosaفي بكتريا LasBلجين حلل التسلسل التتابعي ) P. aeruginosa PAO1 تحت الرقم NCBIوالموجود في موقع Refseqالتسلسل التتابعي للجين نفسه ID:NC002516.21) بينت النتائج ان هنالك طفرات وراثية في .DNA لجينLasB لبكترياP. aeruginosa . حدثت هذه الطفرات في تسلسل القواعد النتروجينية وكانت اغلبها Ear infectionالمعزولة من التهابات االذن الوسطى طفره للعزلة الثالثة 12رات للعزله الثانية وطف 3طفرات للعزله االولى و 6من نوع االستبدال واالضافة والحذف اذ كانت واستبدلت القاعدة Sbjct 4169373للثماله 4169362في الموقع Thymine ، وتم حذف القاعدة النتروجينية الثايمين Sbjctعند الثماله 4169304في الموقع Thymine بالقاعدة النتروجينية الثايمين Cytosineالنتروجينية السايتوسين .في حين استبدلت القاعدة النتروجينية الثايمين Sbjct 4169253عند الثماله 4169263وفي الموقع 4169313 Thymineبالقاعدة النتروجينية السايتوسين Cytosine في الثماله 4169187في الموقعSbjct 4169193 واستبدلت. 4169133للتماله 4169325بالموقع Adenineلنتروجينية االدنين بالقاعدة ا Thymineالقاعدة النتروجينية الثايمين Sbjct حصل اضافة القاعدة النتروجينية االدنين ،Adenine 4169133للثماله 4169320بالموقع Sbjct وكانت . الثايمين ). وحذفت القاعدة النتروجينية 3%. كما في الشكل (NCBI 97نسبة التطابق مع الجين االصلي مع بيانات Thymine 4169371للثماله 4169364بالموقع Sbjct واستبدلت القاعدة النتروجينية السايتوسين .Cytosine للتماله 4169344وبالموقع Sbjct 4169371للتماله 4169353في الموقع Adenineبالقاعدة النتروجينية االدنين 4169371 Sbjct الصلي مع بيانات وكانت نسبة التطابق مع الجين اNCBI 99 ) حذفت القاعدة 4%. كما في الشكل .( وحذفت القاعدة النتروجينية الثايمين Sbjct 4169381للثمالة 4169377في الموقع Guanine النتروجينية الكوانين علوم الحياة | 369 2016عام ) 1(العدد 29لمجلد ا مجلة إبن الهيثم للعلوم الصرفة و التطبيقية Ibn Al-Haitham J. for Pure & Appl. Sci. Vol. 29 (1) 2016 Thymine 4169381للثماله 4169364في الموقع Sbjct السايتوسين؛ واستبدلت القاعدة النتروجينيةCytosine واستبدلت القاعدة النتروجينية Sbjct 4169381 للثماله 4169372بالموقع Adenineبالقاعدة النتروجينية االدنين Cytosineالسايتوسينوكذالك استبدلت 4169112في الموقع Adenineالى القاعدة النتروجينية Guanineالكوانين 4169081للثماله 4169062وفي الموقع Sbjct 4169141عند الثماله 4169110قع بالمو Adenineباالدنين Sbjct السايتوسين . في حين استبدلت القاعدة النتروجينية Cytosine بالقاعدة النتروجينية بالثايمينThymine في بالقاعدة Cytosineسايتوسين. واستبدلت القاعدة النتروجينية ال Sbjct 4169021 في الثماله 4168970الموقع بالموقع Guanineبالقاعدة الكوانين Thymineواستبدلت الثايمين 4168920بالموقع Thymineالنتروجينية الثايمين بالقاعدة النتروجينية الثايمين Guanine. واستبدلت القاعدة النتروجينية الكوانين Sbjct 4168961للثماله 4168938 Thymine 4168961للثماله 4168938بالموقع Sbjct واستبدلت القاعدة النتروجينية الكوانين .Guanine بالقاعدة . واضيفت القاعدة النتروجينية الكوانينSbjct 4168901للثماله 4168898بالموقع Thymineالنتروجينية الثايمين Guanine 4168901للثماله 4168892بالموقع Sbjct نسبة التطابق مع الجين االصلي في بيانات ، وكانتNCBI ).5% كما في الشكل ( 98 المسؤول LasAو LasBان هنالك العديد من الطفرات الوراثية في جيني وجماعته Cowellوبينت دراسة الباحث على زيادة غزو البكتريا وان هذه الطفرات قسم منها يؤثر في امراضية البكتريا ، اذ يعمل Proteaseعن تكوين انزيم Invsion في حين كان هنالك طفرات للجين نفسه 15للمضيف وتكون زيادة االمراضبة عند حصول طفرات بنسية % . وبينت العديد من الدراسات ان انواع طفرات [7]ولكنها لم تحدث اية فعالية اضافية او تاثير في الخاليا وطفرات الحذف DNA) الناتجة من اضافة نيوكليوتيدة واحدة او اكثر لشريط ال (المقتحمة اوالحشر Insertionاالضافة Deletion التي يتم ازالة نيوكليوتيدة واحدة او اكثر وكال النوعين من هذه الطفرات يطلق عليها طفرات االزاحة Frameshift mutation [16]قد التؤثر في وظيفة وترجمة البروتين . التي Silent mutationجميع الطفرات التي وجدت كانت من نوع الطفرات الصامته بينت نتائج تحليل الطفرات ان تنتج الحامض االميني نفسه ، وعند اجراء ترجمة للحامض االميني لهذا الجين مقارنة مع ترجمة الحامض االميني االصلي نتائج تحليل ترجمة االحماض االمينية ) الذي يبين 6روتين كما موضح بالشكل (وجد ان هذه الطفرات لم تؤثر في ترجمة الب . مقارنة مع الحامض االميني االصلي (العزلة االولى) P. aeruginosaفي بكتريا LasBلجين المصادر 1. Jeukens, J. ; Boyle, B. ; Bianconi, I. ; Kukavica-Ibrulj, I. ; Tümmler,B. ; Bragonzi, A. and Levesque , R.C. (2013). Complete Genome Sequence of Persistent Cystic Fibrosis Isolate Pseudomonas aeruginosa Strain RP73. Genome Announcements. 1 (4): e00568-13. 2. Andrejko, M; Zdybicka-Barabas, A.; Janczarek, M. and Cytryńska, M. (2013).Three Pseudomonas aeruginosa strains with different protease profiles. Acta Biochemical Polonica. 60(1) 83–90. 3. Overhage J.; Bains, M.; Brazas, M. D. and Hancock, R. E. W. (2008). Swarming of Pseudomonas aeruginosa is a Complex Adaptation Leading to Increased Production of Virulence Factors and Antibiotic Resistance. J. Bacteriol. 190(8): 2671–2679. 4. Ortiz-Severín, J.; Varas, M.; Bravo-Toncio, C. Guiliani, N. and Chávez, F. (2015). Multiple antibiotic susceptibility of polyphosphate kinase mutants (ppk1 and ppk2) from Pseudomonas aeruginosa PAO1 as revealed by global phenotypic analysis. Biological Res. 22-48: 1-6.  Pseudomonas ). دراسة مقاومة بكتريا 2015دلول ؛ رياض عبدالحسين و محمود ؛ االء محمد ( .5 aeruginosa . 6-1):2( 11لمضادات الكوينولونات. مجلة ديالى للعلوم الصرفة .  علوم الحياة | 370 2016عام ) 1(العدد 29لمجلد ا مجلة إبن الهيثم للعلوم الصرفة و التطبيقية Ibn Al-Haitham J. for Pure & Appl. Sci. Vol. 29 (1) 2016 6. Sonbol, F. I; Khalil, M. A. E.; Mohamed, A.B. and Ali, S.S. (2015). Correlation between antibiotic resistance and virulence of Pseudomonas aeruginosa clinical isolates. Turkish J. of Med. Sci. 45: 568-577. 7. Cowell , B. A.; Twining, S. S. ; Hobden, J. A.; Kwong, M. S. F.and Fleiszig, S.M. J. (2003). Mutation of lasA and lasB reduces Pseudomonas aeruginosa invasion of epithelial cells. Microbiology. 149: 2291–2299. 8. Yu,H.; He, X.; Xie, W.; Xiong, J., Sheng, H.; Guo,S.; Huang, C.; Zhang,D. and Zhang, K. (2014). Elastase LasB of Pseudomonas aeruginosa promotes biofilm formation partly through rhamnolipid-mediated regulation. Can. J. Microbiol. 60: 227–235.  9. Baron, E. J., Finegold, S. M. and Peterson, I. L. R. (2007).Bailey and Scott،s Diagnostic Microbiology. 9th ed. Mosby Company. Missouri.  10. Sambrook, J. and Rusell, D. W. (2001). Molecular cloning a laboratory manual. Cold spring Harbor, NY: cold spring Harbor Laboratory press. 11. Hall, T. A. (1999). Bioedit: a user –friendly biological sequence alignment editor and analysis program windows 95/98/ N. Nucl. Acids. Symp. Ser. 41:95-98. 12. Mitov, I. M.; Tanya, S. and Boyka, M. (2010). Prevlence of virulence gene among Bulgarian nosocomial and cystic fibrosis isolates of Pseudomonas aeruginosa. J. Microbiol. 41(3): 588-595.  13. Cotar, A. I.; Chifiriuc, M. C.; Dinu, S.; Bucur, M.; Iordache C.; Banu, O.; Dracea, O.; Larion, C. and Lazar, V. (2010). Screening of Molecular Virulence Markers in Staphylococcus aureus and Pseudomonas aeruginosa Strains Isolated from Clinical Infections. Department of Microbiology, Faculty of Biology, University of Bucharest. Int. J. Mol. Sci. 1:5273-5291. 14. Hua, Y.; He, X.; Xie, W.; Xiong, J.; Sheng, H.; Guo, S.; Huang, C.; Zhang, D. and Zhanga, K. (2014). Elastase LasB of Pseudomonas aeruginosa promotes biofilm formation partly through rhamnolipid-mediated regulation. Can. J. Microbiol. 60 (4):227-235. 15. Garalla, E.T. (2015). Molecular analysis of some virulence gene of Pseudomonas aeruginosa isolated from cystic fibrosis and non-cystic fibrosis sources. Thesis University of Mustanslriyah , College of Science. 16. Lmhof, M. and Schlotterer, C. (2001). Fitness effects of advantageous mutation in evolving Escherichia coli populations. Proc. Natl. Acad. Sci. USA.98 (3).1112-1128. علوم الحياة | 371 2016عام ) 1(العدد 29لمجلد ا مجلة إبن الهيثم للعلوم الصرفة و التطبيقية Ibn Al-Haitham J. for Pure & Appl. Sci. Vol. 29 (1) 2016   .LasBلجين Pseudomonas aeruginosa) : النسية المئوية المتالك بكتريا 1شكل (   فولت 75% من االكاروز وبفرق جهد 1.5باستعمال P. aeruginosaفي بكتريا LasB) : الترحيل الكهربائي لجين 2شكل (  العزالت . 17- 1: السيطرة ؛ C ؛ M (100-2000) bp :Markerلمدة ساعة . 84 % 16% Las Bالعزالت التي تمتلك جين Las Bالعزالت التي التمتلك جين 300 2000 1000 800 600 500 100 400 200 700 900 300 bp M C 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 1 1 12 13 14 علوم الحياة | 372 2016عام ) 1(العدد 29لمجلد ا مجلة إبن الهيثم للعلوم الصرفة و التطبيقية Ibn Al-Haitham J. for Pure & Appl. Sci. Vol. 29 (1) 2016 Query 12 GCCGAGTTCTA-ATGCGCGGCAAGAACGACTTCCTGATCGGCTACGACATCAAGAAGGGC 70 ||||||||||| |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct 4169373 GCCGAGTTCTATATGCGCGGCAAGAACGACTTCCTGATCGGCTACGACATCAAGAAGGGC 4169314 Query 71 AGCGGTGCGTTGCGCTACATGGACCAGCCCAGCCGCGACGGGCGATCCATCGACAACGCC 130 ||||||||| ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct 4169313 AGCGGTGCGCTGCGCTACATGGACCAGCCCAGCCGCGACGGGCGATCCATCGACAACGCG 4169254 Query 131 TCGCAGTACTACAACGGTATCGACGTGCACCACTCCAGCGGCGTGTACAACCGTGCGTTC 190 ||||||||||||||||| |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct 4169253 TCGCAGTACTACAACGGCATCGACGTGCACCACTCCAGCGGCGTGTACAACCGTGCGTTC 4169194 Query 191 TACCTGCTGGCCAACTCGCCGGGCTGGGATACCCGCAAGGCCTTCGAGGTGTTCGTCGAC 250 |||||| ||||||| ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct 4169193 TACCTGTTGGCCAATTCGCCGGGCTGGGATACCCGCAAGGCCTTCGAGGTGTTCGTCGAC 4169134 Query 251 GCCAACCGCAACAAACTGGACC 272 ||||||||| || | ||||||| Sbjct 4169133 GCCAACCGCTACTA-CTGGACC 4169113 مقارنة مع الجين االصلي العزلة االولى ) ( P. aeruginosaفي بكتريا LasB): التسلسل التتابعي لجين 3شكل ( ID:NC002516.21) لبكتريا (Pseudomonas aeruginosa PAO10 الموجود في الموقعwww.Ncbi.nlm.gov علوم الحياة | 373 2016عام ) 1(العدد 29لمجلد ا مجلة إبن الهيثم للعلوم الصرفة و التطبيقية Ibn Al-Haitham J. for Pure & Appl. Sci. Vol. 29 (1) 2016 Query 16 CGAGTTC-ATATGCGCGGAAAGAACGAATTCCTGATCGGCTACGACATCAAGAAGGGCAG 74 ||||||| |||||||||| |||||||| |||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct 4169371 CGAGTTCTATATGCGCGGCAAGAACGACTTCCTGATCGGCTACGACATCAAGAAGGGCAG 4169312 Query 75 CGGTGCGCTGCGCTACATGGACCAGCCCAGCCGCGACGGGCGATCCATCGACAACGCGTC 134 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct 4169311 CGGTGCGCTGCGCTACATGGACCAGCCCAGCCGCGACGGGCGATCCATCGACAACGCGTC 4169252 Query 135 GCAGTACTACAACGGCATCGACGTGCACCACTCCAGCGGCGTGTACAACCGTGCGTTCTA 194 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct 4169251 GCAGTACTACAACGGCATCGACGTGCACCACTCCAGCGGCGTGTACAACCGTGCGTTCTA 4169192 Query 195 CCTGTTGGCCAATTCGCCGGGCTGGGATACCCGCAAGGCCTTCGAGGTGTTCGTCGACGC 254 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct 4169191 CCTGTTGGCCAATTCGCCGGGCTGGGATACCCGCAAGGCCTTCGAGGTGTTCGTCGACGC 4169132 Query 255 CAACCGCTACTACTGGACC 273 ||||||||||||||||||| Sbjct 4169131 CAACCGCTACTACTGGACC 4169113 مقارنة مع الجين االصلي الثانية ) العزلة ( P. aeruginosaفي بكتريا LasB): التسلسل التتابعي لجين 4شكل ( ID:NC002516.21) لبكتريا (Pseudomonas aeruginosa PAO10 الموجود في الموقعwww.Ncbi.nlm.gov علوم الحياة | 374 2016عام ) 1(العدد 29لمجلد ا مجلة إبن الهيثم للعلوم الصرفة و التطبيقية Ibn Al-Haitham J. for Pure & Appl. Sci. Vol. 29 (1) 2016 Query 5 GCGA-GCTGACGAGTTC-ATATGCGCGGCAAGAACGACTTCCTGATCGGCTACGACATCA 62 |||| |||| ||||||| |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct 4169381 GCGAGGCTGCCGAGTTCTATATGCGCGGCAAGAACGACTTCCTGATCGGCTACGACATCA 4169322 Query 63 AGAAGGGCAGCGGTGCGCTGCGCTACATGGACCAGCCCAGCCGCGACGGGCGATCCATCG 122 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct 4169321 AGAAGGGCAGCGGTGCGCTGCGCTACATGGACCAGCCCAGCCGCGACGGGCGATCCATCG 4169262 Query 123 ACAACGCGTCGCAGTACTACAACGGCATCGACGTGCACCACTCCAGCGGCGTGTACAACC 182 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct 4169261 ACAACGCGTCGCAGTACTACAACGGCATCGACGTGCACCACTCCAGCGGCGTGTACAACC 4169202 Query 183 GTGCGTTCTACCTGTTGGCCAATTCGCCGGGCTGGGATACCCGCAAGGCCTTCGAGGTGT 242 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct 4169201 GTGCGTTCTACCTGTTGGCCAATTCGCCGGGCTGGGATACCCGCAAGGCCTTCGAGGTGT 4169142 Query 243 TCGTCGACGCCAACCGCTACTACTGGACCACAACCAGCAACTACAACAGCGGCGCCTGCG 302 ||||||||||||||||||||||||||||| | |||||||||||||||||||||||||||| Sbjct 4169141 TCGTCGACGCCAACCGCTACTACTGGACCGCCACCAGCAACTACAACAGCGGCGCCTGCG 4169082 Query 303 GGGTGATTCGCTCGGCGCAAAACCGCAACTACTCGGCGGCTGACGTCACCCGGGCGTTCA 362 ||||||||||||||||||| |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct 4169081 GGGTGATTCGCTCGGCGCAGAACCGCAACTACTCGGCGGCTGACGTCACCCGGGCGTTCA 4169022 Query 363 GCACCGTCGGCGTGACCTGCCCGAGCGCGTTGTAAGCTCGGTGGTCCCGGCTGGCACTCC 422 ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| |||||||| Sbjct 4169021 GCACCGTCGGCGTGACCTGCCCGAGCGCGTTGTAAGCTCGGTGGTCCCGGCCGGCACTCC 4168962 Query 423 AGGAAGGAATGCCGGTCGGGGTCTCTCAAGCCGGCTTCCGCTAGGAGGGCGGCTGCTTTA 482 ||||||||||||||||||||||| ||||||||| ||||||| |||||||||||||||||| Sbjct 4168961 AGGAAGGAATGCCGGTCGGGGTCGCTCAAGCCGTCTTCCGCCAGGAGGGCGGCTGCTTTA 4168902 Query 483 TGTCTCTTGGTGCCGTTGGCCTC 505 |||| ||||| |||||||||||| Sbjct 4168901 TGTCGCTTGG-GCCGTTGGCCTC 4168880 مقارنة مع الجين االصلي العزلة الثالثة) ( P. aeruginosaفي بكتريا LasB): التسلسل التتابعي لجين 5شكل ( ID:NC002516.21) لبكتريا (Pseudomonas aeruginosa PAO10 الموجود في الموقعwww.Ncbi.nlm.gov علوم الحياة | 375 2016عام ) 1(العدد 29لمجلد ا مجلة إبن الهيثم للعلوم الصرفة و التطبيقية Ibn Al-Haitham J. for Pure & Appl. Sci. Vol. 29 (1) 2016 Query 1 SGALRYMDQPSRDGRSIDNASQYYNGIDVHHSSGVYNRAFYLLANSPGWDTRKAFEVFVD Subject 1 SGALRYMDQPSRDGRSIDNASQYYNGIDVHHSSGVYNRAFYLLANSPGWDTRKAFEVFVD مقارنة مع الحامض (العزلة االولى) P. aeruginosaفي بكتريا LasB): نتائج تحليل ترجمة االحماض االمينية لجين 6شكل ( االميني االصلي. علوم الحياة | 376 2016عام ) 1(العدد 29لمجلد ا مجلة إبن الهيثم للعلوم الصرفة و التطبيقية Ibn Al-Haitham J. for Pure & Appl. Sci. Vol. 29 (1) 2016 DNA Sequences of LasB Gene in Pseudomonas aeruginosa Isolated from Some Clinical Cases Rana M. A. Al-Shwaikh *Dept. of Biology, College of Education For Pure Science Ibn-Al Haitham, University of Baghdad Received in :11October 2015 Accepted in :15December2015 Abstract Out of 120 isolates from different clinical cases, only 75 were found and confirmed that they belong to the Pseudomonas aeruginosa bacteria. The result revealed that the LasB virulent gene was present in 63 isolates with 63% percentage. The gel electrophoresis showed that the molecular weight of LasB gene was 300 bp. DNA sequences of LasB gene was done, and the results showed the presence of some gene mutations like substitution, addition and deletion with 97% identity with the Refseq gene. From the other side, the results of identities of translated nucleotides sequence with the original sequence of amino acids revealed that there are no effects of gene mutations on translation of the product protein. Key word: - Pseudomonas aeruginosa, LasB gene, Sequencing.