234 علوم الحياة | 2016) عام 3العدد( 28مجلة إبن الهيثم للعلوم الصرفة و التطبيقية المجلد Ibn Al-Haitham J. for Pure & Appl. Sci. Vol. 29 (3) 2016 التحري عن انتاج البكتريوسين وتحفيز انتاجه بوساطة مستخلص نبات Brassica rapa هند حسين عبيد جامعة بغداد ,كلية العلوم ,قسم علوم الحياة 2016ايار 29,قبل في: 2016ايار 15استلم في: الخالصة هدفت الدراسة الحالية الى محاولة التوصل الى مواد طبيعية تعمل على تحفيز انتاج البكتريوسينات، فضال" عن ) عزلة بكتيرية سالبة لصبغة كرام تم الحصول عليها من جمع 280الكشف عن العزالت المنتجة بوساطتها. عزلت ( septicemiaوتسمم الدم / Urinary tract infection( التهاب المجاري البولية/ ) عينة مرضية مختلفة، شملت :760( و Escherichia coli ، والبكتيريا المعزولة هي: )/diarrheaواألسهال /Vaginal inflammationوالتهاب المهبل Klebsiella pneumonia و Pseudomonas aeruginosa و Salmonella typhi و Enterobacter cloacae و Acinetobacter baumannii وSerratia liquefaciens وCitrobacter freundii و Serrattia odorifera وProteus mirabilis ) أستخدمت طريقة أقراص األكار .cup assay للكشف عن العزالت ( " ( الوسط الزرعي المغذي الصلب + مستخلص جذور نبات المنتجة للبكتريوسين. حضر الوسط الزرعي المصنع محليا Brassica rapa للكشف عن العزالت المنتجة للبكتريوسين مقارنة " مع الوسط المغذي الصلب. وجد أن العزالت ،( )، في حين وصلت النسبة الى٪28.57) عزلــــة فقط بنسبة (80المنتجة للبكتريوسين في الوسط المغذي الصلب بلغــت ( ) عزلة منتجة عند أستعمال الوسط المحلي. كما أعطى الوسط المحضر مناطق تثبيط نمو وصلت الى 231٪) اي (82.5( ، كما إستعمل مستخلص النبات قيد الدراسة في تحفيز انتاج الكولسين مقارنة مع عقار E. coliملم) في بكتيريا 45( في عمله بل C (Mt-C)-، وجد إنه يضاهي الـمايتومايسين E. coliفي خمس عزالت من بكتيريا C –المايتومايسين وكان أفضل منه في بعض العزالت في كمية البكتريوسين المنتج ومناطق تثبيط النمو والفعالبة. Cup assay ، Brassica rapa ، Bacterocin، mitomycin-c :الكلمات المفتاحية 235 علوم الحياة | 2016م ) عا3العدد( 28مجلة إبن الهيثم للعلوم الصرفة و التطبيقية المجلد Ibn Al-Haitham J. for Pure & Appl. Sci. Vol. 29 (3) 2016 المقدمة البكتريوسينات هي مركبات بروتينية ذات وزن جزيئي عاٍل، مضادة للجراثيم تنتج من البكتريا وتقوم بتثبيط أو قتل ، Archaebacteriaأو الـ Eubacteriaاالنواع القريبة والمشابهـة لها، وهي تنتج من مختلف المجاميع البكتيرية سواء بالحجم وطرائق إفرازها من الخاليا المنتجة وكذلك في طرائق نقلها الى داخل الخاليا تختلف هذه المضادات فيما بينها ، عندما لحظ الباحثون ظاهرة التضاد البكتيري 1877يعود تاريخ اكتشاف البكتريوسينات إلى عام . ]1،2[ الحساسة (antagoniusm) يط نمو بكتيريا أخرى تعود للنوع بين الكائنات المجهرية، إذ تتمكن بعض السالالت البكتيرية من تثب . أما تسمية هذه المضادات فإنها تعتمد أساساً على اسم البكتيريا المنتجة (اسم الجنس والنوع)، فضالً عن وجود ]4[نفسه ان صفة انتاج البكتريوسينات تقع تحت السيطرة البالزميدية بصورة .]4[ تحت أنواع متعددة منها تنتمي إلى النوع الواحد، مثل الـ ، Microcins، ومع ذلك توجد بكتريوسينات يقع انتاجها تحت سيطرة الكروموسوم وباالخص الـ]5[عامة Bacterocin 28b الذي تنتجهSerratia marcescenc الذي تكون جيناته محمولة على الكروموسوم، وقد تم تأكيد سين ويحث في البكتريا التي تمتلك بالزميد خاص إلنتاج يصنع البكتريو .]6[وجماعته Cursinoذلك من قبل الباحث لكن يمكن زيادة انتاج هذه البروتينات عشرات ]7[البكتريوسين فقط، ويكون تصنيعه في الحاالت االعتيادية بكميات قليلة ادات تستعمل بعض المض]، أو C- )Mt-C] (8أو مئات المرات بوساطة استعمال المحفزات مثل مادة المايتومايسين للغرض نفسه. كما قد ] 11[ Ciprofloxacin]، أو 10[ globomycinأو ]Chlormephincol ]9 الحياتية مثل واستعملت األشعة فوق البنفسجية في دراسات ].12[) وبعض انواع االصباغ 2O2Hتستخدم مادة بيروكسيد الهيدروجين ( ) لحث Thymine( فاستعمل الثايمين وجماعتهBures الباحث . أما]8[أخرى لحث االنتاج، كذلك استعملت الحرارة على ]. 14[Pugsley الكولسين ذاتياً، وهذا ما أكده الباحث . من جانب آخر يمكن حث انتاج]13[األنتاج في الزجاج ة التصنيع تحت سيطرة الرغم من تعدد المواد المحفزة سواء أكانت فيزيائية أم كيميائية اال ان مبدأ عملها واحد، إذ تقع عملي )SOS system وقد يسمى (SOS Repair System أوSOS Operon System وهو نظام انزيمي معقد ، عرف القليل عن الوظيفة البيئية للبكتريوسينات وان دورها في الطبيعة ال زال غير واضح ].يُ 15[ مجتمعات البكتيرية أعتماداً على ظروف البيئة لكن بعض الدراسات اشارت الى دوره في التنافس والغزو بين ال]. 1[ والموطن الفسيولوجي الذي يحدث فيه، إذ أن الكائن المجهري يتمكن من حماية نفسه كما يحمي االنسان نفسه منها، ومن ثم ]. 15،16 [ا يوفر ذلك الكائن حماية للبيئة الموجود فيه من النباتات شائعة االكل في العراق ، اذ يؤكل في الشتاء مسلوقاً للحصول على Brassica rapa يعد نبات الشلغم على الشلغم في االصطالح الحديث ومنذ القرن التاسع عشر، اما في المعاجم القديمة فقد Turnip الدفئ. تطلق لفظة اللفت عن الفارسية. كما تختلف تسمية النبات من بلد الشلجم ) , أما الشلغم فهي عن التركية المنقولة –أطلق علية اسم ( السلجم ]. ينتمي 18،17ألخر ، ففي العراق يسمى شلغم ، أما في مصر يطلق عليه أبو ركبة ، في حين يسمى كرنب في الشام [ وهو عشبة حولية أو ثنائية الحول ، جذورها درنية ، من ( Cruciferae Brassicaceae )الشلغم الى العائلة الصليبية بيضاء اللون طرية وقد تحتوي على اللون االرجواني. يحتوي هذا النبات على Flesh Root لنوع المتضخم اللحمي ا ، Mn ، والمنغنيز Na ،والصوديوم K، والبوتاسيوم P ، والفسفور Ca أنواع عدة من األمالح المعدنية : الكالسيوم عد هو النبات الوحيد مع الملفوف الذي يحتوي على عنصرالزرنيخ ، فضالً ، اذ ي A s ، والزرنيخ I ، واليودS والكبريت . كما يحتوي الشلغم على السكريات والبروتين وكميات قليلة من الدهون . وكذلك Cu، والنحاس Fe عن وجود الحديد Thiamine و Riboflavin و Niacin و Ascorbic acid وأثر من β – Carotene زيت بذوره فتحتوي ، اما Brassica ]. كما يحتوي الشلغم كغيره من أنواع هذا الجنس Erucic and Linoleic acid ]19،18كمية كبيرة من المهمة في منع حدوث السرطان، وكذلك في قتل Phytochemicals على مجموعة كبيرة من المركبات الكيميائية النباتية Carcinogenesisة، فضالً عن دورها في الحماية ضد المسرطنات أنواع عدة من الخاليا السرطاني ]. كذلك دوره كعالج للعديد من األمراض Antioxidant ]21،20،19ومكضادات لألكسدة Mutagenesisوالمطفرات ] وغيرها من األستعماالت الصيدالنية 22] وخفض مستوى السكر في الدم[21ومنها خفض نسبة الكلسترول في الدم [ ]. 20لكثيرة[ا ذه هدف البحث : اءت ه ذا ج ة ل ارب المختبري نظرا" ألهمية البكتريوسينات وانتاجها في البيئة المعوية أو في حقل التج الدراسة للتحري عن إنتاجية البكتريوسين من العزالت البكتيرية بأختالف انواعها المعزولة من حاالت مرضية سريرية وثم تخد ة باس ن األنتاجي ف ع ات الكش تخلص نب تعمل مس را" اس ا" ، وأخي نع محلي ي مص ط زرع ي Brassica rapaام وس ف .C –تحفيز البكتيريا على األنتاج بدل المايتومايسين المواد وطرائق العمل العزل والتشخيص وتسمم Urinary tract infection) عينة مرضية من حاالت مختلفة هي ( التهاب المجاري البولية/ 760تم جمع ( )، شملت عينات : ( األدرار و /diarrheaواألسهال /Vaginal inflammationوالتهاب المهبل septicemiaالدم / الدم و مسحات المهبل والبراز ) على الترتيب، للتحري عن البكتيريا السالبة لصبغة كرام وذلك حسب الطرائق التشخيصية 236 علوم الحياة | 2016م ) عا3العدد( 28مجلة إبن الهيثم للعلوم الصرفة و التطبيقية المجلد Ibn Al-Haitham J. for Pure & Appl. Sci. Vol. 29 (3) 2016 وحسب تعليمات الشركة Api 20-E، أكد تشخيص العزالت البكتيرية باستعمال نظام ]23[التقليدية المتبعة من قبل المصنعة. الكشف عن العزالت البكتيرية المنتجة للبكتريوسين.  التحري عن العزالت البكتيرية المنتجة للبكتريوسين باستعمال الوسط الزرعي المغذي الصلب )Nutriernt agarكوسط إختباري ( م ين، ت ة للبكتريوس زالت المنتج ن الع ري ع رض التح ة أوالً، ولغ ذه الدراس ي ه ة ف ة والمشخص ا المعزول رقيم البكتيري ت ة زالت منتج ض الع دت بع ُع (Producing cells) ة ة أو حساس ر دال ها اآلخ ارةً (Indicator or sensitive cells)وبعض س ت ق العك م ُطب ارةً، ث ت .]24[، (Cup assay)التحري فهي: طريقة أقراص األكار اخرى.أما الطريقة المتبعة في التحري عن العزالت البكتيرية المنتجة للبكتريوسين باستعمال وسط زرعي مصنع محليا". تحضير الوسط الزرعي المحلي: - حضر الوسط الزرعي المحلي ( مستخلص نبات جذور الشلغم + وسط األكار المغذي ) بالطريقة اآلتية :  تم الحصول على نبات الشلغم من السوق المحلية ، وأختيرت الجذور ذات الحجم المتوسط والكبير الممتلئة الجديدة ، ذات :باتجمع الن الجلد اللماع والسليم . نظفت جيداً من األتربة أن وجدت بوساطة غسلها بماء الحنفية مع ازالة االجزاء غير المرغوب فيها.  :غم من جذور النبات، قطعت الى شرائح خفيفة السمك ثم 100مستخلص نبات جذور الشلغم بأخذ حضرتحضير المستخلص النباتي مل الماء المقطر ، ترك لمدة ثالثة أيام في درجة حرارة الغرفة ثم رشح المستخلص عبر الشاش وبعدها طرد مركزيا" 100إضيف إليه م لحين األستعمال.4ئب، حفظ الراشح في درجة حرارة دقائق ) للتخلص من كل الشوا 10دورة/ دقيقة لمدة 5000(  2.8: حضر الوسط الزرعي المحلي لغرض إستخدامه في الكشف عن العزالت البكتيرية المنتجة للبكتريوسين، بوزن (تحضير الوسط ( ( بعد ان ضبط مل من المستخلص المحضرأعاله 100) ثم إضيف اليه Difco/USAغم من وسط األكار المغذي الصلب ( شركة م / تحت ضغط 121)، ذوب الوسط بالطريقة المعتادة ثم عقم بالموصدة ( بدرجة حرارة 7.2 – 7اإلس الهيدروجيني مابين ( م ) 4دقيقة). صب الوسط المحضر في خمسة أطباق زرعية، وترك ليبرد، حفظت األطباق في الثالجة ( 20/ لمدة 2باوند / إنج 15 عمال.لحين اإلست الكشف عن العزالت المنتجة للبكتريوسين: - )، بإستعمال الوسط المصنع Cup assayإجريت التجربة بالطريقة نفسها المتبعة في الكشف عن البكتيريا المنتجة في الوسط العادي ( أعاله بدال" من األكار المغذي لوحده، وذلك بزراعة العزلة الدالة عليه للكشف عن العزالت المنتجة للبكتريوسين ومنها التي اظهرت نتائج سالبة في األختبار األول. : بأستعمال مستخلص نبات الشلغم E.coliتحفيز انتاج البكتريوسين في بكتيريا  استخالص البكتريوسين من بكترياE.coli المنتجة: احثين ة الب ى طريق اداً عل ابقة واعتم ائج الس ى النت اء" عل ا بن م اختياره وءة ت ة كف زالت منتج ن ع ين م تخلص الكولس اس Herschman و Helinski ] 25[ :وتضمن اآلتي ى (5تم زرع ( .1 ا عل ل منه ط ال2.5) أنابيب اختبار يحوي ك ن وس ل م ائل ) م ب الس د (B.H.I brothدماغ والقل م، فق ) المعق ) ساعة. 18)ْم لمدة (37لقحت بالعزالت المنتجة الخمس وحضنت بدرجة حرارة ( ط ( .2 ر وس ه ( B.H.Iحض افاً الي ائل مض دل (%5الس م بمع بة الحج رة دوارق مناس رول) ووزع بعش ل 100) كليس ل لك ) م دقيقة) وترك ليبرد. 20لمدة /2اون/انجب 15م/ تحت ضغط 121ْدورق ثم ُعقمت بالموصدة ( نت .3 م حض والي، ث في اليوم التالي تم تلقيح كل وسط في الخطوة السابقة بأنبوبة اللقاح المحضرة في الخطوة االولى وعلى الت والي 37بدرجة حرارة ( (Shaking incubator)الدوارق العشرة الملقحة في حاضنة هزازة ا ح )ْم حتى وصل عدد الخالي د 8 10×3( ة/مل [بع رعة 14) خلي ن] وبس اعة حض س ) دورة/ دقيقة. 150-200( بعد انتهاء مدة الحضن: تم توزيع المزروع البكتيري الى دورقين: بواقع خمسين مل لكل دورق لكل عزلة بكتيرية، ثم: .4 237 علوم الحياة | 2016م ) عا3العدد( 28مجلة إبن الهيثم للعلوم الصرفة و التطبيقية المجلد Ibn Al-Haitham J. for Pure & Appl. Sci. Vol. 29 (3) 2016 ين - ادة المايتومايس يفت م داره ( -Cأض ائي مق ز نه ين بتركي اج البكتريوس ى إنت زة عل دورق األول 2المحف ى ال ل إل ) مكغم/م ) ساعات اخرى.3(سيطرة موجبة)، ثم أعيدت إلى الحاضنة الهزازة لمدة ( ين - اج البكتريوس ز إنت تخلص أضيف مستخلص نبات الشلغم المحضرلغرض أختبار قدرته على تحفي ن المس ل م ع ( ام بواق يح 10لكل طة الترش اتي بواس تخلص النب مل من المزروع البكتيري المحضر حسب الطريقة االساس)، علما" تم تعقيم المس ) ساعات اخرى.3إلى الدورق الثاني، ثم أعيدت إلى الحاضنة الهزازة لمدة () µ 0.22باستعمال المرشحات الغشائية ( ا ً .5 زروع مركزي ذ الم رارة (نب ة ح رد بدرج زي المب رد المرك از الط رعة 4 بجه )ْم وبس )ْم لحين االستعمال. 4) دقيقة، ثم حفظت بدرجة حرارة (30دورة/ دقيقة) ولمدة ( 7000( ين .6 ة الكولس ت فعالي ة وقيس ل عزل ح لك ن الراش ات م ذت عين ر (Colicin activity)أخ ة الحف تعمال طريق Wellsبأس assay) /(]26[، ي ا ق روتين كم ز الب ور (Protein determination)س تركي ة ل ب طريق ك حس ح وذل ].27[يللرواش النتائج عزل وتشخيص البكتيريا  ) عينة مرضية مختلفة من حالت: ( االسهال والتسمم الدموي والتهاب المجاري البولية والتهاب المهبل) 760جمعت ( ) عزلة بكتيرية. شخصت حسب الطرائق التشخيصية 280للتحري عن البكتيريا السالبة لصبغة كرام. تم الحصول على ( Escherichiaتم الحصول على األنواع البكتيرية اآلتية: ، ومنهاAP E20فضال" عن التشخيص بنظام ،]23[المعتمدة coli و Klebsiella pneumonia و Pseudomonas aeruginosa و Salmonella typhi و Enterobacter cloacae و Acinetobacter baumannii وSerratia liquefaciens وCitrobacter freundii و Serrattia odorifera وProteus mirabilis ) فقد كانت أعلى نسبة 1, حسب ماموضح في جدول ،( Escherichia coli). سجلت بكتيريا ٪35) عزلة بكتيرية مختلفة بنسبة (98عزل من حالة التهاب المجاري البولية ( Serrattiaنت بكتيريا ). أما أقلها عزال" فكا٪41.79) عزلة بنسبة ( 117أكثر عزال" بين األنواع األخرى ( odorifera )1 ) 0.36) بنسبة٪ .( التحري عن العزالت البكتيرية المنتجة للبكتريوسينات باستعمال الوسط المغذي الصلب )Nutriernt agarكوسط إختباري ( للبكتريوسين باستعمال الوسط في التحري عن العزالت البكتيرية المنتجة (Cup assay)استعملت طريقة أقراص األكار % كليسرول) كوسط 5المزود بـ B.H.I. agar) كوسط اختبار والوسط (Nutriernt agarالزرعي المغذي الصلب ( ) 280) عزلة بكتيرية منتجة من بين المجموع الكلي للعزالت الـ (80تنمية للعزلة المنتجة، وقد أظهرت النتائج أن هناك ( ) عزلة من العدد الكلي 24نسبة للعزالت المنتجة ظهرت في إصابات التهابات المجاري البولية (). أعلى ٪28.57وبنسبة ( ) بنسبة 280من 36فسجلت أعلى نسبة إنتاجية للبكتريوسين ( Escherichia coli)، أما ٪12.14) بنسبة (280( Serratiaو Salmonella typhi)، في حين ظهرت ثالث أنواع بكتيرية غير منتجة للبكتريوسين وهي 12.85٪( liquefaciens و Serrattia odorifera) في بكتيريا ٪7.14، وتراوحت نسب األنتاج لألنواع األخرى مابين ( Klebsiella pneumonia ) في بكتريا ٪0.36الى ( Enterobacter cloacae وCitrobacter freundii . ). 2( جدول )، فقد سجلت بكتيريا 3يا المنتجة للبكتريوسين ونسبها في كل نوع بكتيري، موضحة في جدول (أما أعداد البكتير Acinetobacter baumannii ) عزالت منتجة، تلتها ٪80نسبة (Proteus mirabilis ) عزالت ٪45.83نسبة ( Citrobacter ثم ،Pyocin ) عزالت منتجة للـ ٪35بنسبة ( Pseudomonas aeruginosaثم ، Proticinمنتجة للـ freundii ) ثم ٪33.33بنسبة ،(Escherichia coli ) عزالت منتجة للـ ٪30.77بنسبة ( Colicin ثم ،Klebsiella pneumonia منتجة للـKlebocin ) وأخيرا" ٪26.67بنسبة ،(Enterobacter cloacae ) منتجة للـ ٪12.5بنسبة ( Cloacinبيط النمو التي أعطتها البكتريوسينات باستعمال الوسط المغذي الصلب كوسط إختباري، . أما أقطار مناطق تث والبكتريا المنتجة للبايوسين Escherichia coli) ملم ، للبكتريا المنتجة للكولسين وهي 11 - 20فهي تراوحت مابين ( بوسين والبروتسين والبكتريوسين على الترتيب. في حين إشترك كل من الكلي Pseudomonas aeruginosaوهي ملم)، 15( Cloacin) ملم، والـ 17بقطر تثبيط النمو نفسه ( Ainetobacter baumanniiالمنتج من بكتيريا ).4ملم). جدول ( Citrobacter freundii )12واخيرا" البكتريوسين المنتج من 238 علوم الحياة | 2016م ) عا3العدد( 28مجلة إبن الهيثم للعلوم الصرفة و التطبيقية المجلد Ibn Al-Haitham J. for Pure & Appl. Sci. Vol. 29 (3) 2016 ات باستعمال الوسط الزرعي المحضر محليا" كوسط التحري عن العزالت البكتيرية المنتجة للبكتريوسين إختباري )، فقد تم Inhibition Zoneنظرا" لصعوبة الكشف عن العزالت المنتجة وقلة عددها وصغر مناطق تثبيط النمو فيها( تحضير وسط زرعي محلي مكون من ( مستخلص جذور نبات الشلغم مع وسط األكار المغذي) ليستعمل كوسط إختباري . وفعال" أعطى الوسط المحضرمحليا" Mullerhinton agarأو N. agarوسط للتحري عن إنتاجية العزالت بدال" من عزلة من 231) اي ٪82.5عزالت منتجة بنسبة بلغت ( (Cup assay)وبالطريقة نفسها المستخدمة وهي أقراص األكار ). النتائج التفصيلة 5) في الوسط االعتيادي (جدول 280من مجموع 80( ٪28.57، في حين كانت النسبة 280مجموع زالت المنتجة في إطارها العام كانت مشابهة لنتائج العزالت المنتجة على الوسط المغذي الصلب، فقد ظهرت أعلى نسبة للع Escherichia coli)، وكذلك الـ ٪32.5) بنسبة ( 280) عزلة من العدد الكلي (91في التهابات المجاري البولية : ( و Salmonella typhi)، وتأكد عدم إنتاجية العزالت ٪39.29) بنسبة (280من 110أعطت أعلى نسبة إنتاجية ( Serratia liquefaciens و Serrattia odorifera للبكتريوسين بأستخدام الوسط المحلي،إذا لم تظهر اي منها مناطق تثبيط نمو. ) أعداد البكتيريا المنتجة للبكتريوسين ونسبها في كل نوع بكتيري بأستخدام الوسط الزرعي المحلي. 6يوضح الجدول ( )، تلتها ٪100نسبة إنتاجية ( أعطت Citrobacter freundiiوبكتيريا Acinetobacter baumanniiبكتيريا Escherichia coli ) ثم ) عزالت منتجة للكولسين، ٪94.02بنسبة ،Klebsiella pneumonia وPseudomonas aeruginosa ) على الترتيب، ثم بكتيريا ٪ )90و 90.67منتجة للكليبوسين والبايوسين بنسب Proteus mirabilis .Cloacin) منتجة للـ ٪75بنسبة ( Enterobacter cloacae، وأخيرا" Proticinة للـ ) عزالت منتج٪87.5بنسبة ( أقطار مناطق تثبيط النمو التي أعطتها البكتريوسينات باستخدام وسط الشلغم المحضر كوسط إختباري كانت أكبر بكثير من المنتجة للكولسين Escherichia coli). فقد أعطت بكتيريا 7تلك التي اعطتها البكتريا على الوسط العادي، جدول ( عالية فقد كانت منطقة واضحة جدا. أما البروتسين المنتج من بكتيريا ملم)، وبكفاءة 45منطقة تثبيط نمو مقدارها ( Proteus mirabilis ) وأشترك الـ ملم )، 40فقد أعطى منطقة تثبيط نمو مقدارها Klebocin و Pyocin ملم) 30ملم)، وأخيرا" ( 35بقطر تثبيط نمو واحد ( Acinetobacter baumannii والبكتريوسين المنتج من بكتيريا Citrobacter و Enterobacter cloacaeهو قطر منطقة التثبيط التي أعطتها البكتريوسينات المنتجة من قبل بكتيريا freundii. بأستعمال مستخلص نبات الشلغم : E.coliتحفيز انتاج البكتريوسين في بكتيريا ، اختيرت خمس عزالت كفوءة األنتاج من خالل اإلعتماد على النتائج E. coliهذا األختبار على عزالت بكتيريا إجري ) وثباتية األنتاج عند تكرار التجربة لمرات عدة. أظهرت النتائج وجود كفاءة عالية في I.Zالسابقة لقطر منطقة منع النمو ( المدروسة وهي ال تقل كفاءة عن مادة E. coli البكتريوسين من بكتيريا مستخلص جذور نبات الشلغم في تحفيز إنتاج ) يوضح مناطق 8المحفزة على األنتاج بل تتفوق عليها في التأثير في بعض العزالت البكتيرية.جدول ( C-المايتومايسين مايتومايسين. يلحظ أن منطقة تثبيط تثبيط النمو وتركيز البروتين للبكتريوسين المحفزوفعاليته بوساطة المستخلص النباتي وال )، بينما ترتفع في العزالت االخرى بالنسبة لمستخلصات البكتريوسين المحفزة E10النمو متساوية في الحالتين للعزلة رقم ( اوية في بالمستخلص النباتي. أما تركيز البروتين فأنه ارتفع في كل العزالت عندالمعاملة بالنبات. بالنسبة للفعالية فكانت متس وحدة/مل في حين ارتفعت عند المعاملة بالنبات في العزالت البكتيرية االخرى. 320)، فقد بلغت E95 و E41العزلتين ( المناقشة هدفت الدراسة الحالية الى محاولة التوصل الى مواد طبيعية تعمل على تحفيز إنتاج البكتريوسينات، تكون متوفرة مطفرة وغير مسرطنة، وبالوقت نفسه هي مواد مضادة للسرطان، وهي دراسة أولية إجريت خارج ورخيصة الثمن وغير لغرض استعمالها مستقبال" في تحفيز الفلورا الطبيعية ) للحصول على نتائج أولية،In vitro الجسم الحي ( )Microflora) داخل الجسم الحي ( In vivo ( سرطانية واعدة من جانب، وذات إلنتاج البكتريوسينات التي تعد مضادات .]29،30،31، 28[ وظائف عالجية كبيرة جدا" من جانب آخر، فضال" عن دور هذا المستخلص نفسه كمضاد للسرطان لتحقيق هدف الدراسة، تم جمع أكبر عدد ممكن من البكتيريا من حاالت مرضية مختلفة، عزلت فقط البكتيريا السالبة لصبغة Escherichia coli) عينة مرضية، فقد تم الحصول على عشرة أنواع بكتيرية وهي 760لة من () عز280كرام وهي ( Enterobacter و Salmonella typhi و Pseudomonas aeruginosa و Klebsiella pneumonia و cloacae و Acinetobacter baumannii وSerratia liquefaciens وCitrobacter freundii و Serrattia odorifera وProteus mirabilis. )، وجد إنها شكلت نسبة Cup assayالبكتيريا المنتجة للبكتريوسين بطريقة أقراص األكار ( من خالل التحري عن ) كوسط إختباري. N. agar)، فقد إستخدم هنا الوسط الزرعي ( 1) عزلة، كما موضح في جدول(80٪) وهي (28.57( 239 علوم الحياة | 2016م ) عا3العدد( 28مجلة إبن الهيثم للعلوم الصرفة و التطبيقية المجلد Ibn Al-Haitham J. for Pure & Appl. Sci. Vol. 29 (3) 2016 تعد هذه النسب قليلة، والتوجد دراسة عالمية أو محلية تطرقت إلجراء مسح للعزالت المنتجة من الحاالت المرضية وانما توجد على أنواع معينة من البكتيريا وبأعداد قليلة وهي كنسب مئوية مقاربة لنتائج هذه الدراسة التي وضحت في جدول )2.( في التحري دوٌر لعزالت المنتجة أثناء إجراء األختبار، إذ أن للطريقة المستعملة تتحكم العديد من الظروف في إنتاجية ا المستعملة هي من أنجح وأفضل الطرائق في الكشف عن أكبر (Cup assay)كبير، فبالرغم من إن طريقة أقراص األكار ألكار الذي قد يعيق انتشار عدد ممكن من العزالت المنتجة، إال إنها التخلو من بعض العيوب، ومنها سمك طبقة ا . وعلى العموم يعدّ الوسط الصلب أفضل بكثير من الوسط السائل عند التحري ]32[البكتريوسين المنتج، والتظهر فعاليته .فضال" عن ذلك فأن للوسط الذي تجري فيه ]6[عن اإلنتاج، فهو يعتمد بصورة أساس على تحفيز التضاد بين العزلتين. تحري دوراً مميزاً ومهماً في إظهار العزالت المنتجة والعزالت الدالة لها، إذ إن لنوع وتركيز وعمق طبقة عملية اختبار ال ) خلية/مل إذ يتمكن 6 10 – 5 10األكار أهمية بالغة في ذلك، كما تراعى كثافة العزلة الدالة فمن المفضل أن التزيد عن ( . أما فيما يتعلق بالكائن المجهري نفسه ، فان له ]33[إظهار فعله القاتل من -وإن كان بكميات قليلة -البكتريوسين المنتج دورا" كبيرا" في إظهار العزالت المنتجة للبكتريوسين، فهناك عزالت تتمكن من إنتاج أكثر من نوعٍ واحٍد من أخرى تحمل جينات البكتريوسينات مثل الكولسينات، وهي بذلك تكون مقاومة ألكثر من نوعٍ منها، كما وتوجد عزالت ) من عزالت بكتيريا ٪70أن ( ]Riley ]1لعدة أنواع من الكولسينات، فقد وجدت الباحثة (Immunity genes)مناعية E.coli ) تمتلك مقاومة مشتركة لثالثة أو أكثر منها. فضالً عن ذلك، فقد تكون ٪30المنتجة تمتلك مقاومة مفردة بينما ( معين من البكتريوسين، لكن عدم إظهار الفعالية القاتلة يعزى إلى افتقارها للمستقبالت الخاصة العزلة الدالة متحسسة لنوع ، وقد ينتج البكتريوسين ]6[، أو حدوث تحوير بتلك المستقبالت نتيجة حدوث طفرات فتكون العزالت مقاومة] 34[بنقله لذلك النوع أو الكميات القليلة التي (Tolerance)متحملة لكن بكميات قليلة التتمكن من قتل الخلية الحساسة، أو إنها تكون تنتج منه، واكتساب هذه الصفة يكون بسبب حدوث تغيرات في المستقبالت السطحية الخلوية أو في صفات الغشاء ، لكن قد ، وهناك احتمال آخر، فقد تكون العزلة البكتيرية منتجة، والعزلة الدالة حساسة لذلك النوع] 35[السايتوبالزمي يتحلل هذا النوع المنتج عند اإلفراز أو بعده فيما توجد أنواع أخرى يعاد إدمصاصها إلى الخلية المنتجة نفسها بعد اإلفراز، وذلك المتالك بعض البكتيريا ]، 36[ اك عوامل هن ].37،14[ مستقبالت متخصصة لنوع البكتريوسين الذي تنتجه، وهذا يقود إلى عدم ظهور فعاليته القاتلة أخرى تؤثر في إظهار فعالية هذه المضادات البروتينية وهي وجود بعض العناصر الغذائية بكميات كبيرة بوسط فهي تثبط فعل البكتريوسين من خالل تنافسها معه لالرتباط بالمستقبالت siderophoraseو 12V.Bمثل ]38[االختبار فعاليتهعلى سطح الخلية الحساسة، وبذلك تمنعه من إظهار فإنه يزيد من فعالية الكولسين، إذ يعدّ كحامل لتلك )2Ca+(، أما وجود آيونات الكالسيوم ثنائية الشحنة ]40،39،26[ ].41،37[الجزيئة، يشترك في نقله الى مكان عمله ) عزلة، هي غير منتجة وأن فقط 200لذلك ولجميع األسباب التي ذكرت أعاله فانه ال يعني جزما" أن العزالت المتبقية ( ) عزلة هي المنتجة، فربما تكون غير منتجة أو قد تكون منتجة ولم تظهر إنتاجيتها. لذلك تم التقصي عن إنتاجية 80( ) الذي N. agarعي وهو جذور نبات الشلغم الذي حضر مع وسط ( العزالت بتحضير وسط محلي مكون من مستخلص طبي ) ٪82.5)عزلة وبنسبة (280) من مجموع (231أعطى نتائج مذهلة ومميزة، إذ بلغت عدد العزالت المنتجة للبكتريوسين ( حت مابين )، اذ تراو6). كذلك إرتفعت نسبة األنتاج لكل نوع بكتيري كما يوضح جدول (5كناتج كلي للعزالت ( جدول )، ( جدول N. agar، في حين أن العزالت غير المنتجة التي ظهرت في الوسط األختباري األعتيادي ( ٪ )100 – 75( و Salmonella typhiالـ ) وهي 6)، ظهرت كذلك في الوسط الزرعي المحضر محليا" غير منتجة ( جدول 2 Serratia liquefaciens و Serrattia odorifera ا دليل على أنها غير حاملة لبالزميد إنتاج البكتريوسين أو وهذ Salmonellaالى ان نسبة عزالت الـ Joshو Patankarيوجد سبب آخر الزال مبهما" علميا". إذ توصل الباحثان serotype Bعزلة، وكانت تابعة الى 377) اي خمسة عزالت فقط من بين ٪ 1.04المنتجة للبكتريوسين هي ( Salmonella ]42[ في حين لم تتوفر ادبيات تدعم ماتم التوصل اليه حول عدم امكانية عزالت بكتيريا .Serratia liquefaciens و Serrattia odorifera على انتاج البكتريوسينات بينما تنتج بكتيريا Serrattia marcescenc .]28B]6 البكتريوسين دراسة محلية أو عالمية استعملت النباتات أو غيرها أو جذور الشلغم خصيصا" في من الجدير بالذكر، إنه التوجد C-الكشف عن إنتاج البكتريوسينات. لغرض فهم آلية التحفيز، فأن كل أنواع المحفزات ( المواد الحاثة) سواء المايتومايسين وايقاف الفعاليات الحيوية الكروموسومي DNAأو الحرارة أو المضادات الحياتية أو غيرها فأنها تعمل على تحطيم الـ ) بعملية االصالح النقاذ الخلية باللحظات االخيرة من SOS regulator genesللخلية البكتيرية جميعها، ويبدأ مباشرة ( أن ]، 38، 15[خالل تحفيز العديد من الجينات خالل آليات خاصة إلصالح الخطأ الحاصل بفعل تأثير تلك المادة المطفرة وهذا االخير يعمل على Rec A Proteaseوبدوره يصنع بروتيناً انزيمياً Rec A geneاحد الجينات الذي يتحفز هو ، فعند تقطيع وكبح هذه البروتينات من قبل االنزيم Lex A protiensأهداف خاصة وهي بروتينات تصنع كروموسومياً ) في بالزميد البكتريوسين بالعمل، إذ تبدأ عملية استنساخ Structural geneالمذكور مباشرة يبدأ الجين التركيبي ( الجينات، وتزداد عدد نسخ هذا البالزميد وبالتالي يزداد األنتاج، وفي الوقت نفسه يتم استنساخ وتصنيع البروتين المناعي . ]40[والبروتين المحلل الى جانب بروتين البكتريوسين نفسه 240 علوم الحياة | 2016م ) عا3العدد( 28مجلة إبن الهيثم للعلوم الصرفة و التطبيقية المجلد Ibn Al-Haitham J. for Pure & Appl. Sci. Vol. 29 (3) 2016 خلص جذور الشلغم عمل بالطريقة نفسها المتبعة من قبل المواد المحفزة أو الحاثة، أذ أن هناك لذلك فأن من المؤكد أن مست إهتمام كبير عالميا في الوقت الحاضر بهذا النبات لما يحويه من مركبات كيميائية فعالة كثيرة جدا" ومتنوعة التي تعمل -thion(goitrin)- 5 -2و hydroxy-methyl-indole-3و Isothiocyanateومن هذِه المركبات DNAعلى الـ vinyl-oxazolidine وRhadanides وAnthocyanin وRapine وMachrolysin وBrasicasterol و Sinigrin وGlucosinolates ]19،20[ ، إذ أن تأثير هذه المركبات على الخاليا الحيوانية ومنها السرطانية مثبت خاليا البكتيريا أو بدائية النواة فال توجد أدبيات علمية تدعم الموضوع. فقد وجد أن DNAعلميا" ، لكن تأثيره على human lymph node carcinoma of (LNCaP)يوقف نمو خاليا Indole-3-carbinol (I3C)المركب prostate ل في طور اG1 من الدورة الخلوية اِذ يكون التأثير على مستقبل االندروجين(AR) Androgen Receptor ل ا expressionو بالتالي تثبيط تعبير mRNAالذي يتوسط عملية تكاثر وتمايز هذِه الخاليا من خالل تثبيط مستوى (AR) ]43[ . اما مركبIsothiocyanate (ITC) الذي ُيعد أحد المركبات الفعالة بايولوجياً في نبات الشلغم ، فانه يسبب HT-29وذلك عند معاملة خاليا سرطان القولون بِه Caspase-3وتحفيز DNA (DNA-Fragmentation)ل تقطيع ا و االنقسام اعتماداً على التركيز المستخدم في خاليا DNAل يوقف عملية صنع ا DIMل فضالً عن ذلك فان ا، ]44[ DNAو DNATopoisomeras П alpha من خالل تثبيط انزيمي Hep-G2سرطان الكبد البشري Topoisomerase Ị and П beta ]45 [. ومما يثبت تحفيز إنتاج البكتريوسينات بالوسط المحلي المحضر هو زيادة قطر منطقة تثبيط النمو بصورة ملحوظة جدا" و Enterobacter cloacae) ملم في كل من 30الى ( E. coli) ملم في بكتيريا 45)، اذ تراوح مابين (7(جدول Citrobacter freundii)ملم بأستخدام الوسط الزرعي المغذي االعتيادي 20، في حين لم يتجاوز قطر منطقة منع النمو ( ).4(جدول E. coliوظهر هذا في بكتيريا أما الذي يدعم النتائج السابقة كلها، هو إستخدام جذور نبات الشلغم في تحفيز إنتاج البكتريوسين بصورة مباشرة في الوسط كنموذج للتحفيز E. coli. إختيرت هنا الـ Mt-Cالسائل ومقارنة النتائج مع المادة المحفزة المعتمدة عالميا" وهي الزرعي ) ان هناك تقارب كبير في بعض 8ألنها أعطت أكبر مناطق تثبيط نمو مقارنة" بالبكتيريا األخرى. إذ يوضح جدول ( وتين البكتريوسين الناتج وفعاليته عند إستخدام المستخلص النباتي العزالت في قطر منطقة تثبيط النمو وكذلك تركيز بر في بعض العزالت البكتيرية، في حين وجد هناك إرتفاع كبير في كل هذه المعامالت عند استعمال Mt-Cمقارنة" مع الـ ).8( جدول E73و E63مستخلص جذور الشلغم كما في العزالت وهي من المواد الشائعة االستعمال في هذا في حث إنتاج البكتريوسينات DNAـ المحطمة لل Mt-Cتستعمل مادة الـ ، اما التراكيز الواطئة E.coli) مكغم/مل، إذ يُعد هو التركيز األمثل لحث معظم سالالت بكتيريا 2المجال وبتركيز قدره ( وقد أثبتت الدراسات أن للمايتومايسين دوراً .]46[ منه قد تسبب تكوين كتلة خلوية خيطية كبيرة دون زيادة إنتاجية العزالت فعاالً في حث إنتاج الكولسين من جهة، ومضاعفة ذلك االنتاج إلى كميات غزيرة من جهة أخرى، فوجد إنه يضاعف إنتاج وممكن ان تصل الزيادة إلى ،]48[) مرة 100أنه يمكن أن يزداد (الى . وتوصل آخرون ]47[ ) مرات8) إلى (7كولسين ( . ]49[) مرة 1000( يعود سبب استعمال مواد حاثة لزيادة إنتاج الكولسين إلى أن الخاليا البكتيرية الحاملة لبالزميد الكولسين تنتج الكولسين ا الحاملة لذلك ) فقط من الخالي٪1بكميات قليلة جداً في الحاالت االعتيادية وبدون استعمال المواد الحاثة، فقد وجد أن ( 1E) من البكتيريا تصبح منتجة لكولسين ٪55فإن ( C-البالزميد تستطيع إنتاج الكولسين، لكن عند استعمال المايتومايسين يكبح في الحاالت االعتيادية الجينات الخاصة بصنع A-Lex. ويعود ذلك لكون بروتين ]2E ]50 ) تنتج كولسين٪83و( ويمنعه من العمل، لكن باستعمال المواد الحاثة سوف يعمل نظام (Colicin Structural Genes)الكولسين (SOS-system) ويصنع بروتين(Rec A Protease) الذي يحطمLex-A وبالتالي تتمكن الخلية البكتيرية من استنساخ ، ة، وأساس هذه العملية جينات الكولسين بأعداد كبيرة، فضالً عن تكاثر وتضاعف البالزميد نفسه وإنتاج الكولسين بغزار مما يؤدي إلى توقف إنقسام (DNA metabolisms)يعتمد على تثبيط األفعال الحيوية للمادة الوراثية الكروموسومية المستعمل سوف -Cالخلية البكتيرية، وبما أن عملية اإلنقسام الخلوي تسيطر عليها مجموعة من الجينات فإن المايتومايسين هذا من جانب، من جانب آخر يبدأ تضاعف بالزميد الكولسين مع ] 51،52[ ويسبب توقف ذلك االنقساميثبط تلك الجينات، الكروموسومي بمختلف الوسائل اعتماداً على DNAمحاولة إصالح الـ (SOS Repair System)47[، أي إن عملية إنتاج الكولسين تقع تحت سيطرة نظام انزيمي داخلي متخصص[ . هذه النتائج نجد أن مستخلص جذور نبات الشلغم، يعد من العالجات الواعدة في محاربة السرطان من لذلك ومن خالل السام والمطفر Mt-Cجانب وأكدت ذلك العديد من البحوث العالمية والمحلية.أذ يمكن إستعماله كبديل عن عقار الـ من السرطانات. فضال" عن استعمال هذا المستخلص والمسرطن للخاليا الطبيعية والمستخدم حاليا" في عالج أنواعا" عدة لتحفيز إنتاج البكتريوسينات داخل الجسم الحي كعالج ضد مختلف أنواع األمراض والسرطانات، وكذلك إستعماله مختبريا" طبيعية كما لتحفيز إنتاج البكتريوسينات كونه آمن االستعمال ورخيص الثمن وال يؤثر في المادة الوراثية لخاليا االنسان ال المطفر عالي الخطورة. Mt-C] مقارنة" بالـ 53وجماعته [ Obaidتم التوصل اليه من قبل 241 علوم الحياة | 2016م ) عا3العدد( 28مجلة إبن الهيثم للعلوم الصرفة و التطبيقية المجلد Ibn Al-Haitham J. for Pure & Appl. Sci. Vol. 29 (3) 2016 المصادر 1- Riley, M. A. (2002). Bacteriocin-Mediated Competitive Interactions of Bacterial Populations and Communities in " Prokaryotic Antimicrobial Peptides:From Genes to Applications "Drider, D. and Rebuffat, S. (eds.), Springer Scienc. 2- Ridley, H. and Lakey, J. H. (2015). Antibacterial toxin colicin N and phage protein G3p compete with TolB for a binding site on TolA. Microbiology,161:503-15. 3- Waters, V. L. and crosa, J. H. (1991). Colicin Virulence Plasmids. Microb. Rev., 55: 437- 50. 4- Vidotto, M. C.; Furlaneto, M. C. and Perugini, M. R. E. (1991). Virulence Factors of Escherichia coli in Urinary Isolates. Brazilian J. Med Biol. Res., 24: 365- 73. 5-Harry,C.O. and Walker,D.(2013). Cytotoxic activity of colicin E1, E3 and E9 against E.coli BW25113 in the planktonic and biofilm states.Int.J.Curr.Res.Aca.Rev.1 (2):55-71. 6-Cursino, L.; Smarda, J.; Chartone, E. and Nascimento, A. (2002). Recent Updated aspects of Colicins of Enterobacteriaceae. Braz. J. Microbiol., 33: 196-217. 7-Pugsley, A. P. and Schwartz, M. (1983). Agenetic Approach to the Study of Mitomycin- Induced Lysis of E. coli K-12 Strains Which Produce Colicin E2. Mol. Gen. Genet., 190: 366- 72. 8- Cascales, E.; Buchanan, S.K.; Duche, D.; Kleanthous, C.; Lloubes, R.; Postle, K., Riley, M.; Slatin, S. and Cavard, D. (2007). Colicin biology. Microbiology and molecular biology reviews : MMBR, 71, (1): 158-229, ISSN 1092-2172. 9- Pugsley, A. P. and Schwartz, M. (1984). Colicin E2 Release: Lysis, Leakage or Secretion? Possible Role of Aphospholipase. The EMBO J., 3: 2393- 7. 10- Cavard, D.; Baty, D.; Howard, S. P.; Verheij, H. M. and Lazdunski, C. (1987). Lipoprotein Nature of the Colicin A lysis Protein: Effect of Amino acid Substitutions at the Site of Modification and Processing. J. of Bacteriology, 169: 2187- 94. 11- Jerman, B.; Butala, M. and Zgur-Bertok, D. (2005). Sublethal concentrations of ciprofloxacin induce bacteriocin synthesis in Escherichia coli. Antimicrob Agents Chemother., 49: 3087-90. 12- Bradley, D. E. (1967). Ultrastracture of Phages and Bacteriocins. Bacteriol. Rev., 31: 231- 314. 13- Bures, J.; Horak, V.; Fixa, B.; Komarkova, O.; Zaydlar, K.; Lonsky, V. and Masurka, V. (1986). Colicinogeny in Colorectal Cancer. Neoplasma, 33: 233- 37. 14- Pugsley, A. P. (1983 ). Autoinduced Synthesis of Colicin E2. Mol. Gen. Genet., 190: 379- 83. 15- Mader, A., ; Bronk, B. ; Ewald, B. ; Kesel , S; Schnetz, K. ; Frey, E. and Opitz, M. (2015). Amount of Colicin Release in Escherichia coli Is Regulated by Lysis Gene Expression of the Colicin E2 Operon. journal.pone,9:1-17. 16- Ghoul, M. ; West, S. A. ; Johansen, H. K. ; Molin, S. ; Harrison, O. B. ; Maiden, M. C. J. ; Jelsbak, L. ; Bruce, J.B. and Griffin, A. S. (2015). Bacteriocin mediated competition in cystic fibrosis lung infections. Proc. R. Soc.B 282:20150972. , معجم الشهابي في مصطحات العلوم الزراعية ، مكتبة لبنان.1982، احمد شفيق, الخطيب -17 , قاموس الغذاء والتداوي بالنبات، موسوعة غذائية وصحية عامة. دار النفائس. بيروت.1985قدامة ، أحمد, -18 19- Farag, M. A. and Abdel Motaal,A.(2010). Sulforaphane composition, cytotoxic and antioxidant activity of crucifer vegetables. Journal of Advanced Research,1:65–70. 20- Mazumder, A.; Dwivedi, A. and Plessis, D. ( 2016). Sinigrin and Its Therapeutic Benefits(Review). Molecules, 21:416- 26. 242 علوم الحياة | 2016م ) عا3العدد( 28مجلة إبن الهيثم للعلوم الصرفة و التطبيقية المجلد Ibn Al-Haitham J. for Pure & Appl. Sci. Vol. 29 (3) 2016 21- Vafaeinejad, S. ; Serki, E. ; Hassanpour Fard, M. and Hosseini, M. (2015). Hypolipidemic Activity of Aqueous Extract of Turnip (Brassica rapa) Root in Hyperlipidemic Rats .Quarterly of the Horizon of Medical Sciences, 21(1):45-51. 22- Berdja, S.; Smail, L. ; Saka, B.; Abbas, T. Neggazi, S. ; Haffaf , E. ; Benazzoug, Y. ; Kacimi, G. ; Boudarene , L. and Bouguerra, S. A. (2016). Glucotoxicity Induced Oxidative Stress and Inflammation In Vivo and In Vitro in Psammomys obesus: Involvement of Aqueous Extract of Brassica rapa rapifera. Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine, 2016. 23- Brenner, D. J.; Krieg, N. R. and Staley, J. T. (2005). (Eds.) Bergey's Manual of Systematic Bacteriology, Volume Two: The Proteobacteria. Part B: The Gammaproteobacteria. 2nd Ed. Springer Science+ Business Media, LLC, 233 Spring Street, New York, NY 10013, USA. 24- Al-Qassab, A.O. and Al-Khafaji, Z.M. (1992). Effect of different conditions on inhibition activity of enteric lactobacilli against diarrhea-causing enteric bacteria. J. Agric. Sci. 3(1): 18-26.( Arabic). 25- Herschman, H. R. and Helinski, D. R. (1967). Purification and Characterization of Colicin E2 and Colicin E3. The J. of Biological Chemistry, 242: 5360- 8. 26- Smajs, D.; Pilsl, H. and Braun, v. (1997) Colicin U, Anovel Colicin Produced by Shigella boydii. J. of Bacteriol., 179: 4919- 28. 27- Lowry, O. H.; Rosebrough, N. J.; Farr, A. L. and Randall, R. J. (1951). Protien Measurement with the Folin Phenol Reagent. J. Biol. Chemical., 193: 265- 75. 28- Obaid, H. H. ; Yaseen, N.Y. and Essa, R.H. ( 2009). Study the toxic effect of non-bound colicins extracted from Escherichia coil on transplanted Murine adenocarcinoma (AM3). Biotechnology Research Center (special edition), 3(2):53-62. 29- Obaid, H. H. ; Essa, R.H. and Yaseen, N.Y. ( 2010). Cytotoxicity of non-bound colicins extracted from Escherichia coil on normal with blood cells and myeloblast isolated from Acute Myeloid Leukemia blood patients. Iraqi Journal of Science, 5(4):528-38. 30- Dobson, A; Cotter, P.D. ; Ross, R. P.and Hillb, C.( 2012). Bacteriocin Production: a Probiotic Trait? Applied and Environmental Microbiology,78(1):1-6. 31- Yang,S. ; Lin, C. ; Sung, C. T. and Fang, J. ( 2014). Antibacterial activities of bacteriocins:application in foods and pharmaceuticals.Food Microbiology, 5 : 1-10. 32- Cabo, M.L.; Murado, M.A.; Gonzalez, M.P. and Pastoriza, L. (1999). A method for bacteriocin quantification. Journal of Applied Microbiology, 87: 907-14. 33- Richardson, H.; Emslie-smith, A. H. and Senior, B. W. (1968). Agar Diffusion Method for the Assay of Colicins. App. Microb., 16: 1468- 1474. 34- Tagg, J. R.; Dajani, A. S. and Wamamaker, L. W. (1976). Bacteriocins of Gram- Positive Bacteria. Bacteriol Rev. 40: 722- 56. 35- Cardelli, J. and Konisky, J. (1974). Isolation and Characterization of an Escherichia coli Mutant Tolerant to Colicins Ia and Ib. J. of Bacteriology, 119: 379- 85. 36- Cavard, D. and Lazdunski, C. (1990). Colicin Cleavage by OmpT Protease During both Entry into and Release from E. coli Cells. J. of Bacteriology, 172: 648- 52. 37- Harkness, R. E. and Braun, V. (1990). Colicin M is only Bactericidal when Provided from Outside the Cell. Mol. Gen. Genet., 222: 37- 40. 38- Hol, F. J. ; Voges, M.J. ; Dekker, C. and Keymer, J. E. (2014). Nutrient-responsive regulation determines biodiversity in a colicin-mediated bacterial community.BMC Biology, 12:68-81. 243 علوم الحياة | 2016م ) عا3العدد( 28مجلة إبن الهيثم للعلوم الصرفة و التطبيقية المجلد Ibn Al-Haitham J. for Pure & Appl. Sci. Vol. 29 (3) 2016 39- Housden, N.; Loftus, S.; Moore, G. and Kleanthous, C. (2005). Cell entry mechanism of enzymatic bacterial colicins: porin recruitment and the thermodynamics of receptor binding. Proc. Natl. Aced. Sci. USA. 102: 13849-54. 40- Calcuttawala, F. ; Hariharan, C. ; Pazhani, G.P. ; Ghosh, S. and Ramamurthy, T. (2015). '' Activity spectrum of colicins produced by Shigella sonnei and genetic mechanism of colicin resistance in conspecific S. sonnei strains and Escherichia coli. Antimicrob Agents Chemother, 59(1):152-8. 41- Braun, V.; Gaisser, S.; Glaser, C.; Harkness, R.; Ölschäger, T. and Mende, J. (1992). Import and Export of Colicin M. Nato ASI Series H65: 226- 42. 42- Patankar, C. V. and Joshi, L. M.(1985). Bacteriocin production in Salmonella. Postgrad Med., 31: 46-51. 43- HSU , J . C ; Zhang , J ; Dev , A. ; Wing , A ; Bjeldanes , L .F and firestone , G .L ., (2005) . Inoble 3 – carbinol inhibition of androgen receptor expression and downregulation of androgen response – veness in human prostate cencer cells . Carcinogenesis 26 : 1896 – 1904. 44- Mas, S.; Crescenti, A.; Gasso, P.; Deulofeu, R.; Molina, R.; Ballesta, A.; Kensler, T.w. and hafuente, A. ( 2007). Induction of Apoptosis in HT- 29 cells by extracts from isothiocyanates- rich varieties of Biassica oleracea .Nutr . Cancer. 58(1): 107- 114. .45- Gong, Y.; Firestone , G.L. and Bjeldanes, L.F. ( 2006 ). 3, 3- diindolylmethane is anovel topoisomerase II alpha catalytic inhibitor that induces S- phase retardation and mitotic delay in human hepatoma (HepG2) cells.Mol. Pharmacol. 69(4): 1320- 1327. 46- Nakazawa, A.; Suzuki, N. and Tamada, T. (1977). Requirements of Glucose and Incubation Under Static Conditions for Optimal Colicin E1 Induction. Antimicrobial Agents and Chemotherapy, 11: 219- 224. 47- Tigvi, Z.; Kispal, G. and Pal, T. (2005). Identification of the plasmid and the structural gene of colicin type 7 of Shigella sonnei. Acta. Biol. Hung., 56: 359-73. 48- Kock, J.; OlschlAger, T.; Kamp, R. M. and Braun, V. (1987). Primary Structure of Colicin M on Inhibitor of Murein Biosynthesis. J. of Bacteriol., 169: 3358- 61. 49- Schramm, E.; Mende, J. Braun, V. and Kamp, R. M. (1987). Nucleotide Sequence of the Colicin B Activity Gene Cba: Consensus Penta- Peptide Among Ton B. Dependent Colicins and Receptors. J. of Bacteriol., 169: 3350- 7. 50- Durkacz, B. W.; Kennedy, C. K. and Sherratt, D. J. (1974). Plasmid Replication and the Induced Synthesis of Colicins E1 and E2 in Escherichia coli. J. of Bacteriol., 117: 940-6. 51-Butala, M.; Klose, D.; Hodnik, V.; Rems, A.; Podlesek, Z.; Klare, J.P.; et al.(2011). Interconversion between bound and free conformations of LexA orchestrates the bacterial SOS response. Nucleic Acids Res .39(15):6546–57. 52- Bano,S.;Vankemma beke, M.;Penfold, C.N. and James, R.(2014).Detection of induced synthesis of colicin E9 using ColE9P: gfpmut2 based reporter system.World J.Microbiol.Biotechnol.30(7):2091-9. 53- Cytogenetics toxicity effects of Brassica rapa roots on humane proliferated lympgocyte in vitro. (2008).The 9th Scientific Conference of Medical and Health Specialties, 23-24 march. 244 علوم الحياة | 2016م ) عا3العدد( 28مجلة إبن الهيثم للعلوم الصرفة و التطبيقية المجلد Ibn Al-Haitham J. for Pure & Appl. Sci. Vol. 29 (3) 2016 األعداد والنسب المئوية لألنواع البكتيرية السالبة لصبغة كرام المعزولة من حالت مرضية سريرية مختلفة )1جدول ( األعداد والنسب المئوية للبكتريا المنتجة للبكتريوسين من بين أعداد البكتيريا السالبة لصبغة كرام المعزولة )2جدول ( سريرية مختلفة باستخدام الوسط الزرعي المغذي الصلب كوسط إختباريمن حالت مرضية المجموع ( النسبة المئوية) األسهال diarrhea التهاب المجاري البولية Urinary tract infection التهاب المهبل Vaginal inflammation تسمم الدم septicemia الحالة المرضية المنتجة للبكتريوسين/ من العدد الكلي لكل نوع بكتيريعدد البكتيريا نوع البكتيريا 36 )117( )12.85٪( 3 )14( 17 )56( 13 )36( 3 )11( Escherichia coli 20 )75( )7.14٪( .............. 4 )12( 14 )48( 2 )15( Klebsiella pneumonia 7 )20( )2.5 ٪ ( .............. 2 )6( 1 )5( 4 )9( Pseudomonas aeruginosa صفر )24( )0٪ ( صفر )15( .............. .............. صفر )9( Salmonella typhi 1 )8( )0.36٪ ( .............. .............. .............. 1 )8( Enterobacter cloacae 4 )5( )1.43٪ ( .............. .............. .............. 4 )5( Acinetobacter baumannii صفر )3( )0٪ ( .............. .............. .............. صفر )3( Serratia liquefaciens 1 )3( )0.36٪ ( .............. .............. 1 )3( ............ Citrobacter freundii صفر )1( )0٪ ( .............. .............. صفر )1( ............. Serrattia odorifera 11 )24( )3.93٪ ( .............. 11 )24( .............. .............. Proteus mirabilis 80 )280( )28.57٪ ( 3 )29( )1.07٪( 34 )98( )12.14٪( 29 )93( )10.36٪( 14 )60( )5٪ ( المجموع المئوية)( النسبة )280** النسب المئوية محسوبة نسبة الى العدد الكلي لجميع انواع البكتيريا المعزولة ( المجموع النسبة ( المئوية) األسهال diarrhea التهاب المجاري البولية Urinary tract infection التهاب المهبل Vaginal inflammation تسمم الدم Septicemia المرضيةالحالة نوع البكتيريا 117 )41.79٪( 14 56 36 11 Escherichia coli 75 )26.79٪( .............. 12 48 15 Klebsiella pneumonia 20 )7.14 ٪ ( .............. 6 5 9 Pseudomonas aeruginosa 24 )8.57٪ ( 15 .............. .............. 9 Salmonella typhi 8 )2.86٪ ( .............. .............. .............. 8 Enterobacter cloacae 5 )1.79٪ ( .............. .............. .............. 5 Acinetobacter baumannii 3 )1.07٪ ( .............. .............. .............. 3 Serratia liquefaciens 3 )1.07٪ ( .............. .............. 3 ............ Citrobacter freundii 1 )0.36٪ ( .............. .............. 1 ............. Serrattia odorifera 24 )8.57٪ ( .............. 24 .............. .............. Proteus mirabilis 280 )100٪ ( 29 )10.36٪( 98 )35٪( 93 )33.21٪( 60 )21.43٪ ( المجموع ( النسبة المئوية) 245 علوم الحياة | 2016م ) عا3العدد( 28مجلة إبن الهيثم للعلوم الصرفة و التطبيقية المجلد Ibn Al-Haitham J. for Pure & Appl. Sci. Vol. 29 (3) 2016 األعداد والنسب المئوية للبكتريا المنتجة للبكتريوسين لكل نوع بكتيري باستخدام الوسط الزرعي المغذي )3جدول ( الصلب كوسط إختباري النسبة المئوية للعزالت المنتجة لكل نوع عدد العزالت المنتجة لكل نوع عدد العزالت البكتيرية لكل نوع إسم البكتريوسين المنتج نوع البكتيريا 30.77٪ 36 117 Colicin Escherichia coli 26.67٪ 20 75 Klebocin Klebsiella pneumonia 35٪ 7 20 Pyocin Pseudomonas aeruginosa Bacteriocin Salmonella typhi 24 صفر 0٪ 12.5٪ 1 8 Cloacin Enterobacter cloacae 80٪ 4 5 Bacteriocin Acinetobacter baumannii Bacteriocin Serratia liquefaciens 3 صفر 0٪ 33.33٪ 1 3 Colicin A Citrobacter freundii Bacteriocin Serrattia odorifera 1 صفر 0٪ 45.83٪ 11 24 Proticin Proteus mirabilis المجموع ............... 280 80 28.58٪ ** النسب المئوية محسوبة نسبة الى العدد الكلي لكل نوع بكتيري .)mmمعدل أقطار تثبيط النمو للعزالت البكتيرية المنتجة للبكتريوسينات مقاسة بالميليمتر( )4جدول ( الصلب كوسط إختباريباستخدام الوسط الزرعي المغذي معدل قطر تثبيط النمو )mm( إسم البكتريوسين المنتج نوع البكتيريا 20 Colicin Escherichia coli 17 Klebocin Klebsiella pneumonia 11 Pyocin Pseudomonas aeruginosa ........ Bacteriocin Salmonella typhi 15 Cloacin Enterobacter cloacae 17 Bacteriocin Ainetobacter baumannii ........ Bacteriocin Serratia liquefaciens 12 Colicin A Citrobacter freundii ....... Bacteriocin Serrattia odorifera 17 Proticin Proteus mirabilis 246 علوم الحياة | 2016م ) عا3العدد( 28مجلة إبن الهيثم للعلوم الصرفة و التطبيقية المجلد Ibn Al-Haitham J. for Pure & Appl. Sci. Vol. 29 (3) 2016 األعداد والنسب المئوية للبكتريا المنتجة للبكتريوسين من بين أعداد البكتيريا السالبة لصبغة كرام المعزولة )5جدول ( من حالت مرضية سريرية مختلفة باستخدام الوسط الزرعي المحضر محليا" كوسط إختباري المجموع ( النسبة المئوية) األسهال diarrhea التهاب المجاري البولية Urinary tract infection التهاب المهبل Vaginal inflammation تسمم الدم Septicemia الحالة المرضية نوع البكتيريا عدد البكتيريا المنتجة للبكتريوسين/ من العدد الكلي لكل نوع بكتيري 110 )117( )39.29٪( 13 )14( 54 )56( 34 )36( 9 )11( Escherichia coli 68 )75( )24.29٪( .............. 10 )12( 44 )48( 14 )15( Klebsiella pneumonia 18 )20( )6.43 ٪ ( .............. 6 )6( 5 )5( 7 )9( Pseudomonas aeruginosa صفر )24( )0٪ ( صفر )15( .............. .............. صفر )9( Salmonella typhi 6 )8( )2.14٪ ( .............. .............. .............. 6 )8( Enterobacter cloacae 5 )5( )1.79٪ ( .............. .............. .............. 5 )5( Acinetobacter baumannii صفر )3( )0٪ ( .............. .............. .............. صفر )3( Serratia liquefaciens 3 )3( )1.07٪ ( .............. .............. 3 )3( ............ Citrobacter freundii صفر )1( )0٪ ( .............. .............. صفر )1( ............. Serrattia odorifera 21 )24( )7.5٪ ( .............. 21 )24( .............. .............. Proteus mirabilis 231 )280( )82.5٪ ( 13 )29( )4.64٪( 91 )98( )32.5٪( 86 )93( )30.71٪( 41 )60( )14.64٪ ( المجموع ( النسبة المئوية) )280** النسب المئوية محسوبة نسبة الى العدد الكلي لجميع انواع البكتيريا المعزولة ( والنسب المئوية للبكتريا المنتجة للبكتريوسين لكل نوع بكتيري باستخدام الوسط الزرعي المحضر األعداد )6جدول ( محليا" كوسط إختباري النسبة المئوية للعزالت المنتجة لكل نوع عدد العزالت المنتجة لكل نوع عدد العزالت البكتيرية لكل نوع إسم البكتريوسين المنتج نوع البكتيريا 94.02٪ 110 117 Colicin Escherichia coli 90.67٪ 68 75 Klebocin Klebsiella pneumonia 90٪ 18 20 Pyocin Pseudomonas aeruginosa Bacteriocin Salmonella typhi 24 صفر ٪ 0 75٪ 6 8 Cloacin Enterobacter cloacae 100٪ 5 5 Bacteriocin Acinetobacter baumannii Bacteriocin Serratia liquefaciens 3 صفر 0٪ 100٪ 3 3 Colicin A Citrobacter freundii Bacteriocin Serrattia odorifera 1 صفر 0٪ 87.5٪ 21 24 Proticin Proteus mirabilis المجموع ............... 280 231 82.5٪ بكتيري** النسب المئوية محسوبة نسبة الى العدد الكلي لكل نوع 247 علوم الحياة | 2016م ) عا3العدد( 28مجلة إبن الهيثم للعلوم الصرفة و التطبيقية المجلد Ibn Al-Haitham J. for Pure & Appl. Sci. Vol. 29 (3) 2016 ) mmمعدل أقطار تثبيط النمو للعزالت البكتيرية المنتجة للبكتريوسينات مقاسة بالميليمتر( )7جدول ( باستخدام الوسط الزرعي المحضر محليا" كوسط إختباري معدل قطر تثبيط النمو )mm( نوع البكتيريا إسم البكتريوسين المنتج 45 Colicin   Escherichia  coli 35 Klebocin Klebsiella pneumonia 35 Pyocin Pseudomonas aeruginosa ........ Bacteriocin Salmonella typhi 30 Cloacin Enterobacter cloacae 35 Bacteriocin Acinetobacter baumannii ........ Bacteriocin Serratia liquefaciens 30 Colicin A Citrobacter freundii ....... Bacteriocin Serrattia odorifera 40 Proticin Proteus mirabilis مقارنة فعالية وتركيز البروتين وقطر منطقة منع النمو للبكتريوسينات المحفزة بوساطة )8جدول ( ومستخلص جذور الشلغم C- المايتومايسين البكتريوسين المحفز بمستخلص جذور الشلغم C -البكتريوسين المحفز بالمايتومايسين ت العزلة المنتجة الفعالية (وحدة/مل) تركيز البروتين (مكغم/مل) قطر منطقة منع النمو (ملم) الفعالية (وحدة/مل) تركيز البروتين (مكغم/مل) قطر منطقة منع النمو (ملم) 320 940 15 160 725 15 E10 1  320 850 25 320 845 15 E41 2  1280 2100 25 640 1110 20 E63 3  1280 2350 30 640 975 22 E73 4  320 640 20 320 625 15 E95 5  248 علوم الحياة | 2016م ) عا3العدد( 28مجلة إبن الهيثم للعلوم الصرفة و التطبيقية المجلد Ibn Al-Haitham J. for Pure & Appl. Sci. Vol. 29 (3) 2016 Detection of Bacteriocin Production and Induction by Brassica rapa extract Hind Hussein Obaid ,University of Baghdadf Biology , College of Science, Dep. o Received in :15 May 2016 ,Accepted in: 29 May 2016 Abstract The present study aimed to try to find natural substances stimulate the production of bacteriocin, as well as "for detection of bacteriocin producing isolates. Two hundred and eighty ( 280) bacterial isolates, gram negative only, were collected from 760 different pathogenic samples, consist: (Urinary tract infection, septicemia, Vaginal inflammation and diarrhea). The isolated bacteria are: Escherichia coli, Klebsiella pneumonia Pseudomonas aeruginosa,, Salmonella typhi, Enterobacter cloacae, Acinetobacter baumannii, Serratia liquefaciens, Citrobacter freundii, Proteus mirabilis and Serrattia odorifera. Cup assay method was used to detect bacteriocin production. Locally media prepared ( Nutriernt agar + Brassica rapa roots extract ) to detect bacterial bacteriocin production, compared with ( N. agar ) only. The results showed, the percentage of bacteria production of bacteriocin were (28.57%)/(80) isolates only on N. agar, while the ratio reached to (82.5%)/ (231) isolates by local media.Also this media gave (45 mm) in dimeter of inhibition zone in E. coli. Brassica rapa roots extract was used to stimulate bacteriocin production compared with mitomycin-c (Mt-c ) in five isolates of the E. coli. It was found the extract emulate Mt-, in dimeter of inhibition zone , protein concentration and activity. But it was better than Mt-c in some isolates. Key words: Cup assay , Brassica rapa , Bacterocin, mitomycin-c