Microsoft Word - 387-399 علوم الحياة | 387 2016) عام 1(العدد 29المجلد مجلة إبن الهيثم للعلوم الصرفة و التطبيقية Ibn Al-Haitham J. for Pure & Appl. Sci. Vol. 29 (1) 2016 في األطفال العراقيين المصابين بداء IFN-γ T/A +874التعدد الشكلي للجين النوع األول -السكري أحسان عرفان حسين حازمة موسى خليل أنور عبد ناصر* ابن الهيثم/جامعة بغداد-للعلوم الصرفةقسم علوم الحياة/كلية التربية 2015كانون االول15قبل البحث: 2015تشرين الثاني 1استلم في: الخالصة عينة منها كانت 35سنة, 12-7عينة دم مأخوذة من أطفال تراوح متوسط أعمارهم من 50شملت الدراسة على , إذ كان متوسط أعمارهم Type 1 Diabetes Mellitus (T1D)النوع األول -دم ألطفال مصابين بداء السكري 0.38±10.9عينة دم ألطفال أصحاء التي عدت كعينات قياسية وكان متوسط أعمارهم 15سنة, فضالً عن 9.4±0.34 سنة. أجريت دراسة مناعية وراثية على عينات الدم المأخوذة من األطفال المصابين والعينة القياسية. قُدرت مستويات , إذ بلغ التركيز في مصل دم Elisaباستعمال جهاز األليزا في العينات المدروسة IFN-γي الخلوي للتركيز الحرك بيكوغرام/مليلتر. نتائج التحليل األحصائي 0.921، بينما كان تركيزه في العينة القياسية بيكوغرام/مليلتر 1.575المصابين كاما بين األطفال المصابين -ية في تركيز األنترفيرونود فروق معنوقد أظهر وج Mann-Whitney Uباستعمال اختبار -IFNلجين Genetic polymorphismدرس تعدد األشكال الوراثية .P<0.05والعينة القياسية وتحت مستوى أحتمالية γ T/A +874 نظام الممانعة للتضخيمتقانة في العينات المدروسة باستعمالAmplification refractory mutation system (ARMS-PCR). أظهرت نتائج الترحيل الكهربائي لجينIFN-γ T/A +874 المتضخم بهذه التقانة إلى وجود في Aنسبة أعلى من األليل T، أذ سجل األليل AAو TT ،TAوإلى وجود ثالثة أنماط وراثية هي Aو Tأليلين هما أظهر تكراراً معنوياً لدى المصابين بنسبة أعلى من Aبأن األليل عينة المصابين، وكذلك في العينة القياسية. تبين النتائج ومدة الثقة Odds ratio (OR)النسبة الحرجة , وباالعتماد على Fisher’s testالعينة القياسية باستعمال أختبار فشر Confidence Intervals (CI) ظهر األليلA كأليل مسببEtiological faction (EF) ومرتبط مع المرض, بينما , Fisher’s testتكراراً معنوياً لدى العينة القياسية بنسب أعلى من عينة المصابين باستعمال اختبار فشر Tأظهر األليل IFN-γللجين ARMS-PCR. حللت نتائج تقانةPreventive faction (PF)وظهر هذا األليل كأليل وقائي من المرض T/A +874 واينبرك -ن التوازن هارديباستعمال قانوHardy-Weinberg equilibrium أظهر النمط الوراثي , إذTT وكان هناك أختالفاً معنوياً باستعمال النوع األول، -بالمقارنة مع عينة المصابين بداء السكريلدى العينة القياسية نسبة أعلى كنمط وراثي وقائي من خطر األصابة بداء السكري، بينما أظهر TTكما ظهر النمط الوراثي ، Fisher’s testاختبار فشر نسبة أعلى لدى عينة المصابين بالمقارنة مع العينة القياسية، وبين التحليل االحصائي عند استعمال TAالطراز الوراثي كما ، مع العينة القياسية قد اختلف معنوياً لدى عينة المصابين بالمقارنة TAبأن النمط الوراثي Fisher’s testأختبار فشر لدى نسبة أعلى AAأظهر النمط الوراثي كنمط وراثي مرتبط مع خطر األصابة بداء السكري. TAظهر النمط الوراثي كما ظهر النمط ، ولم يكن هناك أي اختالف معنويالنوع األول بالمقارنة مع العينة القياسية - بداء السكريعينة المصابين .وراثي مرتبط مع خطر األصابة بداء السكري كنمط AAالوراثي IFN-γ T/A +874 ،T1Dالنوع األول، -كاما، داء السكري-أنترفيرونالكلمات المفتاحية: *= البحث مستل من أطروحة الدكتوراه للباحث الثالث علوم الحياة | 388 2016) عام 1(العدد 29لمجلد ا مجلة إبن الهيثم للعلوم الصرفة و التطبيقية Ibn Al-Haitham J. for Pure & Appl. Sci. Vol. 29 (1) 2016 المقدمة يعرف على أنه مجموعة اضطرابات أيضية تنتهي بفرط السكري Diabetes mellitus (DM)داء السكري Hyperglycemiaيحدث داء [1]تج إما من خلل في افراز هرمون األنسولين أو فعالية األنسولين أو كالهما , وتن . كافية أو الموجودة في البنكرياس عن أنتاج مادة األنسولين بكمية β cellsنتيجة عجز خاليا بيتا النوع األول -السكري IDDM (Insulin-dependentتوقفها عن االنتاج بشكل نهائي وهذا يعرف بداء السكري المعتمد على األنسولين ( diabetes mellitusالنوع الثاني غير -, أو عندما يعجز الجسم عن استعمال تلك المادة بشكل فعال وهذا يمثل داء السكري النوع األول هو -. داء السكريNoninsulin-dependent diabetes mellitus (NIDDM)المعتمد على األنسولين مرض وراثي مناعي ذاتي, ويعد من أخطر األنواع ويحدث في مرحلة الطفولة ومع بداية مرحلة المراهقة واألطفال إلى حقن المصابين بهذا النوع يتوقف لديهم أنتاج هرمون األنسولين بسبب تحطم خاليا بيتا في البنكرياس, ويحتاجون . Type1bو Type1aالنوع األول على نوعين هما -. يصنف داء السكري[2]األنسولين كعالج رئيس على مدى الحياة % من الحاالت 90يعود الى تحطم مناعي ذاتي لخاليا بيتا في البنكرياس مسببة نقص االنسولين ويشكل نسبة aالنوع األول النوع األول -% من داء السكري9ويشكل حوالي Idiopathicجهول السبب فيكون م bالمرضية, بينما النوع الثاني T1DM من األمراض النوع األول -, ويعُـد داء السكري[4,3]وال يوجد أي دليل يثبت أرتباطه بأمراض المناعة الذاتية الكاربوهيرات المناعية الوراثية الناتجة من اضطرابات أيضية لفرط الكلوكوز مع اضطرابات في أيض الدهون و وتطور الداء ضد خاليا بيتا, الموجهه Autoantibodiesوالبروتينات, وأن حدوث الداء مرتبط باألجسام المضادة الذاتية األنسولين, عدم أنتاج هرمون يزداد بسبب تحطم خاليا بيتا في البنكرياس المنتجة لهرمون األنسولين مما يسبب نقصاً في األصابة لمدة طويلة . Hyperglycemia [5] فرط السكري التحسس في األستجابة ألفراز األنسولين بصورة طبيعية يسبب والتي تؤدي إلى ضعف في Retinopathyبداء السكري تصاحبها مضاعفات وتطورات خطيرة مثل تلف شبكية العين , Kidney deficitالذي يؤدي الى العجز الكلوي Nephropathy, والمرض الكلوي Blindnessالنظر ثم العمى Charcot jointsوضمور المفاصل Amputationوأمراض عصبية محيطية أو مركزية تؤدي إلى تقرحات القدم والبتر Peripheral vascularووعائي محيطي Cardiovascularالذي قد يصاحبه زيادة خطر االصابة بمرض وعائي قلبي دوراً Cytokines. وتؤدي الحركيات الخلوية [6]مع أضطرابات معوية معدية حادة Cerebrovascularشوكي ووعائي النوع األول, من خالل ميكانيكيات مباشرة أو غير مباشرة تقود إلى تحطم خاليا بيتا -مهماً في حث أو تفاقم داء السكري ، لكن دورها غير المباشر يكون من خالل Tcلية الخاليا السمية المنتجة لألنسولين, ويكون دورها المباشر من خالل فعا . كما Inflammatory cellsوالخاليا األلتهابية Proinflammatory cellsفعالية ووظيفة الخاليا المؤثرة قبل األلتهابية المناعية يعتمد على عوامل عدة تؤدي الحركيات الخلوية دوراً وسطياً في تنظيم االستجابة المناعية وانتاجها من قبل الخاليا وله عالقة بظاهرة تعدد Hormonal effects، تأثير الهرمونات Inflammation، األلتهاب Infectionمثل األصابة على Interferon-gamma (IFN-γ)كاما -. يعرف األنترفيرونGene polymorphism [7]األشكال للجين الواحد م كوحدة كاملة في 1965, وميز ألول مرة عام [8]كيلو دالتون 25-17اوح بين أنه بروتين سكري ذو وزن جزئي يتر IFN-γ inducing factor, ويسمى عامل الحث Macrophagesوالخاليا البلعمية Murine kupffer cellخاليا (IGIF) [9]، ويعرف أيضاً بأنترفيرون النوع الثانيType II interferon أو عامل تفعيل الملتهمات الكبيرة Macrophage-activating factor (MAF)كاما يدعم الجهاز المناعي لغرض انجاز التحلل الخلوي -. األنترفيرون كاما -. يحفز انتاج االنترفيرون[10]النوع األول -للخاليا المستهدفة وكذلك وثق بأنه يزداد في مرضى داء السكري Cytotoxic Tوخاليا NK cell, كما تنتج بوساطة خاليا CD8+وخاليا CD4+ لفعالة وخالياا Th1بوساطة خاليا cells (CTLs) وأيضاً يحث انتاجه بوساطةIL-12 وIL-18 [11] أن األمراضية .Pathogenesis لداء السكري لها من التي تنتج الوسائط Th2مع خلية ، بينما الحماية من هذا المرض فله عالقةTh1المنتج من قبل IFN-γعالقة بالوسيط Interleukin-10 (IL-10)واألنترلوكين العاشر Interleukin-4 (IL-4)الحركيات الخلوية مثل األنترلوكين الرابع والذي يعرف أيضاً بأنترفيرون النوع Interferon-gamma (IFN-γ)كاما -يعد بروتين األنترفيرون. [14,13,12] من Macrophage-activating factor (MAF)أو عامل تفعيل الملتهمات الكبيرة Type II interferonالثاني والذي يدعم الجهاز المناعي Type 1 helper cells (TH1)المساعدة النوع األول Tالحركيات الخلوية الناتجة من خاليا يؤدي مستضد البيضاويات . [10]ى داء السكري النجاز التحلل الخلوي للخاليا المستهدفة وكذلك وثق بأنه يزداد في مرض Human Leukocyte Antigen (HLA) المكافئ لمعقد التوافق النسيجي)MHC(Major histocompatibility complex النوع األول مع وجود عالقة للخلفية الوراثية للمصابين بهذا الداء, وأن -دوراً رئيسياَ في وراثة داء السكري الذي يكون مكافئاً لمعقد التوافق النسيجي الواقع على الذراع القصير HLAداء تكون مرتبطة مع معقدخطورة وتطور ال . أظهرت الدراسات الوراثية بأن الجين المسؤول عن السيطرة الوراثية [15] 21.1-21.3بمسافة 6لكروموسوم رقم لظاهرة تعدد األشكال . 12q15 [16]في الموقع 12يقع على الذراع الطويل للكروموسوم IFN-γكاما -لألنترفيرون للجين دوراً في تنظيم تعبير الحركيات الخلوية، ويعتقد من خالل دراسة تعدد األشكال Polymorphismالمظهرية . Immune diseases [17]لمناعية , له القابلية في التأثير في األمراض اIFN-γكاما -المظهرية أن جين األنترفيرون بأن له القابلية في للتأثير في مرض المعقد المناعي IFN-γلجين Intron-1تعدد األشكال المظهرية في األنترون األول Immune complex disease والذي شخص بوساطة عدم التوازن في أنظمة التنظيم المناعي ،Immunoregulatory systems [17]ات الوراثية في العراق قليلة نوعاً ما السيما في جانب تعدد األشكال المظهرية . الدراسPolymorphism علوم الحياة | 389 2016) عام 1(العدد 29لمجلد ا مجلة إبن الهيثم للعلوم الصرفة و التطبيقية Ibn Al-Haitham J. for Pure & Appl. Sci. Vol. 29 (1) 2016 ، وألجل أجراء هذه الدراسة Autoimmune diseasesللجينات المسببة لألمراض الوراثية وأمراض المناعة الذاتية -Amplification refractory mutation system (ARMS نظام الممانعة للتضخيمأستعملت في الدراسة تقانة PCR) لتحليل تعدد االشكال للطراز الوراثي للفرد باستعمال بادئات خاصة ويتم من خاللها تحديد األليل مع حساب هو Cytokinesتعيين تركيز بروتين الحركي الخلوي وتهدف الدراسة إلى [18]تكراراتها في الجين للعينات المدروسة IFN-γ المتزاز المناعي المرتبط باألنزيم باستعمال طريقة اEnzyme linked immunosorbent assay (ELISA) باستعمال نظام IFN-γ T/A +874 بعد فصل المصل من دم العينات المدروسة, ومعرفة تعدد االشكال المظهرية للجين من العينات المدروسة لمعرفة مدى عالقتها بذلك الداء. DNAبعد عزل الدنا ARMS-PCRالممانعة للتضاعف بتقانة المواد وطرائق العمل النوع األول- جمع عينات دم المرضى المصابين بداء السكري عينة من األطفال األصحاء 15النوع األول و -عينة دم من األطفال المصابين بداء السكري 35جمعت العراق للمدة من تموز من عام -المركزي ومركز مرضى السكري في بغداد(المجموعة القياسية) من مستشفيات الطفل سنة. جمع الدم في أنابيب خاصة بجمع الدم 12-7ولغاية تشرين األول من العام نفسه وتتراوح أعمار األطفال من 2014 وفي أنابيب ELISAهاز مليلتر بدون مانع للتخثر والتي أستعملت في دراسات تعيين تركيز الحركيات الخلوية بج 5بحجم ، وشخصت العينات من DNAكمانع لتخثر الدم والتي أستعملت في استخالص الدنا EDTAمليلتر حاوية على 2.5بحجم قبل المختصين في وحدة السكري في مستشفى الطفل المركزي وفي مركز مرضى السكري. نضمت أستمارة خاصة جمعت اء. فيها معلومات عن األطفال المرضى واألصح Interleukins kitsعدة تشخيص الحركيات الخلوية Interferon gammaكاما -استعملت عدة عدد تشخيصية خاصة بالكشف عن الحركي الخلوي األنترفيرون mini ELISA development kit (IFN-γ) والمصنعة من قبل شركةPeprotech .األميركية PCR mixخليط تفاعل أنزيم البلمرة المتسلسل -ARMSفي تجارب نظام الممانعة للتضاعف بتقانة Go Taq® Green Master Mix (2X)استعمل الخليط PCR وبحسب النشرة المرفقة من قبل شركة ،Promega .األميركية Primersالبادئات IFN-γالكندية وبحسب الطلب في الكشف عن جين Alpha DNAصنعت ثالث من البادئات الخاصة في شركة T/A +874 البادئ [19]وبحسب المصدر .Specific A 5تسلسله النيكلوتيدي هو`- TTCTTACAACACAAAATCAAATCA-3` والبادئSpecific T 5تسلسله النيكلوتيدي هو`- TTCTTACAACACAAAATCAAATCT-3` بينما البادئ ،Antisense 5تسلسله النيكلوتيدي هو` - TCAACAAAGCTGATACTCCA-3`. البادئات في أعاله باستعمال الماء الخالي من أنزيم النيوكليز أذيبت جميع Nuclease-Free water .وبحسب النشرة المرفقة من قبل الشركة المصنعة DNA molecular weight markersمعلمات الوزن الجزيئي للدنا كيلو قاعدة 1.5بحجم كلي Promegaالمصنع من قبل شركة Molecular markerاستعمل المعلم الجزيئي زوج قاعدة. 100زوج قاعدة) وبدرجات 1500( ELISAباستعمال جهاز IFN-γتعيين تركيز بروتين الحركي الخلوي . عزل المصل من العينات المدروسة 1 مليلتر من كل عينة دم مسحوبة حديثاً في األنابيب الخالية من المادة المانعة لتخثر الدم ونبذت مركزياً 2.5وضع من جميع األطفال المصابين بداء Serumدقائق. عزل المصل 10دورة/دقيقة ولمدة 1500بجهاز النبذ المركزي وبسرعة لقياسية) المشمولين بالدراسة, ووضع المصل في أنابيب نظيفة وجديدة النوع األول واألطفال األصحاء (العينة ا-السكري م لحين األستعمال. º -20محكمة الغلق وخزن تحت درجة في مصل المصابين IFN-γ. قياس تركيز الحركي الخلوي 2 ، واتبعت طريقة العمل المعتمدة على المعايرة ELISAباستعمال جهاز IFN-γعين تركيز الحركي الخلوي االمريكية وبحسب النشرة المرفقة مع العدة. قبل اجراء عملية تعيين تراكيز Biotechالقياسية المجهز من قبل شركة دقيقة قبل بدء القياس بجهاز 30م ولمدة º 25وضعت المحاليل والعينات بدرجة حرارة الغرفة IFN-γالحركي الخلوي ELISA حصل على الكثافة البصرية .Optical density (O.D) للحركي الخلويIFN-γ المدروس في أمصال عينة , وسجلت نتائج العينات المدروسة بوساطة ELISAالنوع األول والعينة القياسية باستعمال جهاز -المصابين بداء السكري المشمولة بهذه الدراسة، ويبين IFN-γاستخراج تركيز لغرض Standard curveتسقيط القراءات على المنحنى القياسي .IFN-γ) المنحنى القياسي ومعدالته المستعملة الستخراج تراكيز الحركي الخلوي 1الشكل ( علوم الحياة | 390 2016) عام 1(العدد 29لمجلد ا مجلة إبن الهيثم للعلوم الصرفة و التطبيقية Ibn Al-Haitham J. for Pure & Appl. Sci. Vol. 29 (1) 2016 النوع األول والعينة القياسية-استخالص الدنا الكلي من دم عينات المرضى المصابين بداء السكري النوع األول والعينة القياسية باستعمال -عزل الدنا من عينات الدم المأخوذة من األطفال المصابين بداء السكري والمصنعة من قبل شركة DNAوالخاصة بعزل الدنا Blood gDNA Miniprep System TMReliaPrepالعدة Promega ا باستعمال جهاز األميريكية وبحسب النشرة المرفقة. عين تركيز ونقاوة الدنNanodrop باستخراج نسبة 280A/260A حفظت العينات بعد ذلك تحت حرارة ]20[ 0.1±1.8وأن الدنا النقي تكون قيمة نسبة االمتصاص له هي .- 20 º.م لحين االستعمال IFN-γ T/A +874الكشف عن جين حضر الخليط األساسي . IFN-γ +874جين في الكشف عن ARMS-PCRاستعملت في هذه الدراسة طريقة Master Mix استعمل . مع بعض التحوير[19] وبحسب طريقة للبوادئ المستعملةGo Taq® Green Master Mix مايكرولتر 1بحجم Primerوالبادئ 1Xوبتركيز مايكرولتر 12.5األميركية بحجم Promegaالمزود من شركة نانوغرام وكان الحجم 100مايكرولتر وبتركيز 2بحجم DNA templateمايكرومولر ولكل بادئ وقالب الدنا 1وبتركيز Specific Tوالبادئان Aللكشف عن األليل Antisenseو Specific Aمايكرولتراً. أستعمل البادئان 25الكلي للتفاعل لغرض تضخيم الدنا Thermocycler. وضعت العينات في جهاز التدوير الحراري Tللكشف عن األليل Antisenseو بدرجة حرارة Denature templateالقالب األول مرحلة مسخ. وضبط برنامج الجهاز للحصول على ظروف التفاعل 95 º دقائق والمسخ األبتدائي األول 3م ولمدةFirst initial denaturation 95بدرجة حرارة º ثانية والتحام 15م لمدة بدرجة First extensionثانية واالستطالة األولى 50م ولمدة º 65رجة حرارة بد First annealingالبادئ األول دورات. والمسخ 10ثانية وكانت مراحل المسخ األبتدائي وألتحام البادئ واألستطالة األولى كانت لـ 40م لمدة º 72حرارة Secondنية والتحام البادئ الثاني ثا 50م لمدة º 95بدرجة حرارة Second initial denaturationاألبتدائي الثاني annealing 55بدرجة حرارة º ثانية واألستطالة الثانية 50م ولمدةSecond extension 72بدرجة حرارة º 50م لمدة Finalدورة. األستطالة النهائية 20ثانية وكانت مراحل المسخ األبتدائي وألتحام البادئ واألستطالة الثانية كانت لـ extension 72بدرجة حرارة º دقائق. حملت نواتج تضخيم الدنا الناتج من استعمال البادئات أعاله لعينات الدنا 7م لمدة % 1.5النوع األول والعينة القياسية في المكان المخصص لها في هالم اآلكاروز بتركيز -لألطفال المصابين بداء السكري بتركيز Tris-borate buffer (TBE)مليلتر من دارئ 40ن اآلكاروز في غرام م 0.6(حضر هالم اآلكاروز بأذابة 1X 60. سخن الخليط عند درجة حرارة º م بأستعمال الصفيحة الساخنةHot plate وحتى ذوبان الخليط وصب في حوض اعدة. أضيفت كيلو ق 1.5الترحيل المخصص). حمل الواصم الجزيئي الوراثي بحسب النشرة المرفقة معه الذي كان بحجم 3في كل عينة بحجم Bromophenol blueصبغة التحميل البروموفينول األزرق الخاصة بالترحيل الكهربائي مليلتر من الماء 6.7في مليغرام من صبغة البروموفينول األزرق 25حضرت صبغة التحميل بأذابة مايكرومليلتر ( ليصبح الحجم Glycerolمليلتر من الكليسرول 3.3و Xylene cyanol FFمليغرام من صبغة 25المقطر. أضيف رحلت العينات كهربائياً من لغرض االستعمال الطويل األمد). ° م 20-مليلترات. حفضت الصبغة تحت درجة 10النهائي دارئ ساعات وباستعمال 4-3فولتاً ولمدة من 75القطب األسود السالب باتجاه القطب األحمر الموجب تحت جهد كهربائي Tris-borate buffer (TBE) 10(حضرX من هذا الدارئ لغرض استعماله في عملية الترحيل الكهربائي وذلك بأذابة Etheleneمليليتراً من مادة 40و Boric acidغراماً من حامض البوريك 55و Tris baseغرام من مادة 108 diamine tetra acetic acid (EDTA) أضيف الماء المقطر المعقم وصوالً إلى لتر واحد مع موالري. 0.5بتركيز Ethidium bromide (EtBr)). صبغ هالم اآلكاروز بصبغة األثيديوم برومايد 8إلى pHتعديل األس الهايدروجيني مليغرام/مليلتر 10دقيقة (حضرت صبغة األيثديوم برومايد من المحلول الخزين للصبغة الذي يكون بتركيز 15لمدة مايكروغرام/مليلتر). شوهدت وصورت قطع الدنا المتضخمة 0.5رت بأذابتها في الماء المقطر للحصول على تركيز وحض المزود بكاميرا خاصة. Gel documentation systemبوساطة جهاز توثيق الهالم التحليالت األحصائية ، Statistical Package for Social Sciences (SPSS)حللت البيانات باستعمال البرنامج االحصائي تحت مستوى Fisher’sفشرو Mann-Whitney Uوقورنت الفروق المعنوية بين المتوسطات باستعمال اختبارات ومدة الثقة Odds ratio (OR). حللت تكرارات األنماط الوراثية وأليالتها والنسبة الحرجة P<0.05أحتمالية Confidence Intervals (CI) باستعمال البرنامجCompare 2 Ver.3.04 والمصنع من قبلJ. H. Abramson عام وبحسب Hardy-Weinberg equilibriumواينبرك -، وكما حللت النتائج باستعمال قانون التوازن هاردي2003-2013 .6www.had2know.comالبرنامج الموجود في الموقع األلكتروني علوم الحياة | 391 2016) عام 1(العدد 29لمجلد ا مجلة إبن الهيثم للعلوم الصرفة و التطبيقية Ibn Al-Haitham J. for Pure & Appl. Sci. Vol. 29 (1) 2016 النتائج والمناقشة عينات المصابين بداء السكري النوع األول والعينة القياسية سنة, وشملت الدراسة على 12-7عينة دم مأخوذة من أطفال تراوح متوسط أعمارهم من 50شملت الدراسة على 0.34±9.4توسط أعمارهم النوع األول, إذ كان م -من األناث), ألطفال مصابين بداء السكري 17ذكراً و 18عينة دم ( 35 من األناث) ألطفال أصحاء ظاهرياً التي عدت كعينات قياسية وكان 6ذكور و 9عينة دم ( 15سنة, كما شملت الدراسة على سنة. أجريت دراسة مناعية ووراثية على عينات الدم المأخوذة من األطفال المصابين 0.38±10.9متوسط أعمارهم .واألصحاء (العينة القياسية) Interferon-gamma (IFN-γ)كاما -تعيين تركيز األنترفيرون . يبين Elisaباستعمال جهاز األليزا في العينات المدروسة IFN-γقُدرت مستويات تركيز الحركي الخلوي كاما في مصل المصابين بالمقارنة مع العينة القياسية (األصحاء), إذ -) أرتفاعاً ملحوظاً في تركيز األنترفيرون1الجدول ( بيكوغرام/مليلتر 0.921، بينما كان تركيزه في العينة القياسية بيكوغرام/مليلتر 1.575بلغ التركيز في مصل دم المصابين ود فروق معنوية في تركيز قد أظهر وج Mann-Whitney U). نتائج التحليل االحصائي بأستعمال أختبار 2(الشكل ، إذ P<0.05النوع األول والعينة القياسية وتحت مستوى أحتمالية -كاما بين األطفال المصابين بداء السكري -لألنترفيرون لدى كاما-وضح نتائج هذه الدراسة التي بينت وجود مستويات عالية في تركيز األنترفيرونت .0.035بلغت قيمة االحتمالية النوع -في تحطم خاليا بيتا في األطفال المصابين بداء السكريالنوع األول مدى الدور الذي يؤدي -المصابين بداء السكري على تراكيز عالية من ، إذ حصلوا [24,23,22,21]تتوافق مع النتائج التي حصل عليها كل من األول, وهذه النتائج كاما لدى عينات المرضى بالمقارنة مع العينات القياسية (األصحاء). هناك العديد من الدراسات التي تدعم هذه -األنترفيرون -ILلتهاب مثل النتائج وتبين مفهوماً واضحاً في أن خلية بيتا المتحطمة مرتبطة مع زيادة تعبيير الحركيات الخلوية بادئة اال 12 ،IL-2 ،IL-1 ،TNF-β ،TNF- α ،IFN-γ وINF- α [25] كما تبين الدراسات أن هناك حركيات خلوية معينة , ، وتسبب هذه الحركيات الخلوية IL-1و TNF-β ،IFN-γيكون دورها الوظيفي دوراً سمياً لخاليا بيتا في البنكرياس مثل لخاليا الجزيرات في البنكرياس مثل تثبيط صناعة األنسولين وأفرازه, لكن إذا تم التخلص Cytostaticالركود الخلوي وأزالة هذه الحركيات الخلوية فأن الوظائف المؤثرة في خاليا الجزيرات سوف تزال, فضالً عن أن هذه الحركيات الخلوية البنكرياس، مما ينتج عنه تحطماً لخاليا بيتا عند لخاليا بيتا في جزيرات Cytocidalممكن أن تؤدي دوراً خلوياً قاتالً . [26]النوع األول -األطفال المصابين بداء السكري النوع -تعمل على حث وتعجيل تحطم خاليا بيتا في داء السكري كاما-الحركيات الخلوية ومن ضمنها األنترفيرون Th1رة. ميكانيكية التحطم المباشر تحث حركيات الخلوية األول, وتكون ميكانيكية التحطيم أما بصورة مباشرة أو غير مباش مما يؤدي Macrophageالتي تظهر تأثيراتها أما بصورة أولية عند خاليا البلعمية الكبيرة كاما -والمتضمنة األنترفيرون تحرير أوكسيد إلى زيادة ترشيح هذه الخاليا في مواقع خاليا جزيرات البنكرياس مسرعة من تحطم خاليا بيتا من خالل T +CD8, أو من خالل زيادة حث ترشيح خاليا ]Oxygen radicals ]27وجذور األوكسجين Nitric oxideالنتريك cell ينظم تعبير كاما-داخل نسيج البنكرياس, وأن األنترفيرونMHC calls I الذي يميز للقتل الذي تتوسطه خاليا +TCD8 يسرع ]29,28[المتفعلة ضد الذات التي تؤدي إلى تحطم نسيجي حاد لخاليا بيتا في األنسان .γ-IFN من تحطم تأثيرات في الخاليا IFN-γمن ضمنها Th1خاليا بيتا بآلية مباشرة أو غير مباشرة. في اآللية المباشرة تظهر وسائط يرات البنكرياس، إذ سوف يسرع من تدمير خاليا بيتا من خالل ويحثها على الترشيح في خاليا جز Microphageالبلعمية الوسائط المصنعة في المسلك الجديد مثل جذور األوكسجين الحرة وأوكسيد النتريك، أو يستحث الخاليا التائية لتميز مما يؤدي TNFو IFN-γحصراً، ونظراً لزيادة تعبير الوسائط CD8وتميز من قبل خاليا MCHIالجزيرات الحاملة للـ . وهناك عدة آليات تشترك في تثبيط مستوى [30]إلى زيادة التدمير في النسيج لخاليا بيتا في كل من اإلنسان والفئران وذلك من خالل زيادة أعداد الخاليا التائية المفعلة ضد الذات وتثبط منتوج الوسائط المضادة لفعل Th2منتوج وفعالية IFN-γ وذلك لعدم [24]. هذه النتائج لم تتوافق مع [31]هذا الوسيط الخلوي المدمر لخاليا بيتا مما يزيد التعبير عن وقد أوضح الباحث , النوع األول -كاما لدى المصابين بداء السكري-حصوله على فروق معنوية في تركيز األنترفيرون النوع األول. -ضى داء السكرييكون تركيزه غير متغير في مر كاما-وجماعته بأن الحركي الخلوي األنترفيرون Interferon-gamma (IFN-γ)كاما -التعدد الشكلي لجين األنترفيرون في المرضى المصابين بداء السكري IFN-γ لجين Genetic polymorphismدرس تعدد األشكال الوراثية أظهرت نتائج الترحيل .ARMS-PCRاألول ومقارنتها بعينات األصحاء (العينات القياسية) باستعمال تقانة -النوع وإلى وجود ثالثة أنماط وراثية Aو Tالمتضخم بهذه التقانة إلى وجود أليلين هما IFN-γ T/A +874الكهربائي لجين النوع األول والعينة القياسية، فعند ظهور حزمة واحدة في المجال -في عينة المصابين بداء السكري AAو TT ،TAهي T وعدم وجودها في المجالA فيكون النمط الوراثي هوTT وفي حالة ظهور حزمة في المجالA وعدم ظهورها في ، وكما في TAفيكون النمط الوراثي Aو Tوعند ظهور حزمتين في كال المجالين AAفيكون النمط الوراثي Tالمجال على التوالي، ولم نضع جميع األشكال لعينات المصابين والعينات القياسية لكثرتها وتشابهها ونكتفي بوضع 4و 3الشكلين ت شكل واحد لكل من عينات المصابين والعينات القياسية لغرض توضيح كيفية تعيين الألليالت واألنماط الوراثية في العينا -باستعمال قانون التوازن هارديو IFN-γ T/A +874لجين Aو Tالمدروسة. أظهرت نتائج التوزيع التكراري لألليلين علوم الحياة | 392 2016) عام 1(العدد 29لمجلد ا مجلة إبن الهيثم للعلوم الصرفة و التطبيقية Ibn Al-Haitham J. for Pure & Appl. Sci. Vol. 29 (1) 2016 النوع األول والعينة - نتائج متغايرة مابين عينة المصابين بداء السكري Hardy-Weinberg equilibriumواينبرك %، بينما سجل 48.6الذي سجل نسبة A% بالمقارنة مع األليل 51.4في عينة المصابين نسبة Tالقياسية, أذ سجل األليل ). كذلك يبين الجدول 5% (الشكل 26.7الذي سجل نسبة A% بالمقارنة مع األليل 73.3في العينة القياسية نسبة Tاألليل أظهر تكراراً Aة القياسية, وتبين النتائج بأن األليل ) أن التوزيع التكراري قد أختلف معنوياً بين عينة المصابين والعين2( Oddsالنسبة الحرجة , وكانتFisher’s testمعنوياً لدى المصابين بنسبة أعلى من العينة القياسية باستعمال اختبار فشر ratio (OR) مع فترة ثقة 2.60 هيConfidence Intervals (CI) 6.53-1.03% قيمة تراوحت بين 95تحت نسبة, (عندما تكون النسبة الحرجة أكثر من واحد) ومرتبط مع المرض Etiological faction (EF)وكانت نسبته كأليل مسبب تكراراً معنوياً لدى العينة القياسية بنسب أعلى من عينة المصابين بأستعمال أختبار T, بينما أظهر األليل 0.299بلغت تحت نسبة Confidence Intervalsمع مدة ثقة 0.39 هي Odds ratioالنسبة الحرجة , وكانتFisher’s testفشر (عندما تكون Preventive faction (PF)، وكانت نسبته كأليل وقائي من المرض 0.97- 0.15% قيمة تراوحت بين 95 من حيث [34,33,32,19]تتفق هذه النتائج مع ما حصل عليها كل من . 0.451النسبة الحرجة أقل من واحد) بلغت كان أعلى لدى المرضى بالمقارنة مع Aحصولهم على نتائج متوافقة مع نتائج الدراسة الحالية التي تظهر أن نسبة األليل وبصورة معنوية لدى Aنسبة أعلى لدى العينة القياسية. أن التكرار العالي لألليل Tالعينة القياسية, بينما أظهر األليل النوع األول, بينما أنخفاض تكرار -الكبير الذي يؤديه هذا األليل مع خطر األصابة بداء السكريالمصابين يبين مدى الدور لدى المصابين وأرتفاعه لدى العينة القياسية يبين مدى أهمية هذا األليل كعامل وقائي من خطر األصابة بهذا الداء. Tاألليل ربما يكون مؤشراً مهماً في خطر تطور المرض Aين بأن األليل أن هذه النتائج قد أكدتها العديد من الدراسات التي تب النوع األول وأنما يمكن أن -ربما ليس مهماً مع تطور داء السكري Tوتحطم خاليا بيتا, واقترح أن التعدد الشكلي لألليل IFN-γللجين . دراسة أخرى أهتمت بمدى ارتباط التعدد الشكلي[34]يكون كمؤشر وقائي من خطر األصابة بالمرض T/A +874 وجود تكرار معنوي لألليل أظهرت النوع األول -مع داء السكريA وارتباطه مع خطر األصابة بداء وأقترح أن يكون هذا األليل كأليل وقائي من في العينة القياسية، Tالسكري, بينما أظهرت تلك الدراسة تكراراً عالياً لألليل الذين يبينوا أن [36]ال تتفق هذه النتائج مع نتائج الدراسة التي قام بها أراببابادي وآخرون . [35]خطر األصابة بهذا الداء يكون مرتبطاً مع الجانب الوقائي من Aالنوع األول, واألليل -ربما يرتبط مع خطر األصابة بداء السكري Tتكرار األليل -في داء السكري IFN-γ T/A +874ي أجريت على جين داء السكري، لكن هذه النتائج ال تتفق مع أغلب الدراسات الت النوع األول. , وبأستعمال قانون IFN-γ T/A +874للجين ARMS-PCRأظهرت نتائج التحليل الوراثي لنتائج تقانة - ثالثة أنماط وراثية لدى عينة المصابين بداء السكري Hardy-Weinberg equilibriumواينبرك -التوازن هاردي بينت النتائج وجود تباين في تكرار األنماط الوراثية ما بين عينة . AAو TT ،TAالنوع األول والعينة القياسية وهي بالمقارنة القياسية لدى العينةنسبة أعلى TTأظهر النمط الوراثي النوع األول والعينة القياسية, إذ - المصابين بداء السكري وكان هناك اختالفاً معنوياً % وعلى التوالي، 22.9% و 60النوع األول وكانت النسب -مع عينة المصابين بداء السكري 0.20كانت قيمة النسبة الحرجة . Fisher’s testباستعمال اختبار فشر P<0.05عند مستوى احتمالية 0.014بلغت قيمته كنمط وراثي وقائي من خطر األصابة بداء السكري، TTكما ظهر النمط الوراثي ، 0.70-0.06بين كانت قيمتهاومدة الثقة نسبة أعلى لدى عينة المصابين بالمقارنة مع العينة القياسية وكانت TA. أظهر الطراز الوراثي 0.481إذ بلغت قيمته بأن النمط Fisher’s testعمال اختبار فشروعلى التوالي، وبين التحليل األحصائي عند است 26.7%و 57.1%النسب وكانت P<0.05قد أختلف معنوياً لدى عينة المصابين بالمقارنة مع العينة القياسية وعند مستوى احتمالية TAالوراثي TAكما ظهر النمط الوراثي ، 13.29-1.01كانت قيمتها بين ومدة الثقة 3.67كانت قيمة النسبة الحرجة . 0.047قيمته لدى نسبة أعلى AAأظهر النمط الوراثي . 0.416مط وراثي مرتبط مع خطر األصابة بداء السكري، إذ بلغت قيمته كن ولم % وعلى التوالي، 13.3% و 20النوع األول بالمقارنة مع العينة القياسية وكانت النسب -بداء السكريعينة المصابين كما ظهر النمط ، 8.49-0.31كانت قيمتها بين ومدة الثقة 1.63رجة كانت قيمة النسبة الحيكن هناك أي أختالف معنوي. ) والجدول 6، كما في الشكل (0.770كنمط وراثي مرتبط مع خطر األصابة بداء السكري، إذ بلغت قيمته AAالوراثي )3.( AAوالطراز الوراثي متماثل الزيجة TAمن خالل النتائج أعاله يتبين أن الطراز الوراثي متباين الزيجة TAالنوع األول لدى عينة المصابين, ولكن نسبة أرتباط الطراز الوراثي -يرتبطان مع خطر وتطور األصابة بداء السكري مع هذا الداء, لذا يتبين أن الطراز AAمع خطر األصابة بداء السكري كانت أعلى من نسبة أرتباط الطراز الوراثي يمكن أن يعتمد عليه كمؤشر مع خطر األصابة بالداء, وهذه النتائج ربما تكون مرتبطة مع النتائج المناعية TAالوراثي النوع األول المدروسة -في مصل دم عينات المصابين بداء السكري IFN-γ للمستويات العالية والمعنوية لمستوى تركيز مع خطر تطور األصابة IFN-γلوراثية والمناعية مدى أهمية جين مقارنة بالعينة القياسية, وبصورة عامة تبين النتائج ا يكون أقل Homozygoteالمتماثل الزيجة TTأن النمط الوراثي ويتبين من النتائج أيضاً ,النوع األول -بداء السكري كنمط وراثي وقائي من TTهذه النتائج تدل على أهمية دور الطراز الوراثي النوع األول, و -خطورة في مرضى السكري . هذه الذي أظهر كنمط وراثي مرتبط مع خطورة األصابة بالداء TAاألصابة بداء السكري, بالمقارنة مع النمط الوراثي من حيث حصولهم على نسب [34,33]النتائج جاءت لتؤكدها العديد من الدراسات وتتتفق معها، إذ أتفقت مع نتائج كل من لدى TTلدى عينة المصابين بالمقارنة مع العينة القياسية, وأن تكرار النمط الوراثي TAو AAاثية عالية من األنماط الور علوم الحياة | 393 2016) عام 1(العدد 29لمجلد ا مجلة إبن الهيثم للعلوم الصرفة و التطبيقية Ibn Al-Haitham J. for Pure & Appl. Sci. Vol. 29 (1) 2016 في المصابين بداء IFN-γالعينة القياسية أعلى من عينة المصابين, وأن العديد من الدراسات تبين أن زيادة تعبير جين الذاتية في خاليا بيتا المستهدفة بواسطة الخاليا البلعمية النوع األول يعمل على زيادة تقدم وظهور المستضدات -السكري . كذلك هناك دراسات أخرى أظهرت أن الحركيات الخلوية بادئة DCs [37]والخاليا المتفرعة Macrophagesالكبيرة يرها تمتلك استجابة مناعية موجهة ضد خاليا بيتا في البنكرياس وزيادة تعب TNF-αو IFN-γ ،IL-1βااللتهاب مثل يكون IFN-γ. وكذلك تظهر البيانات في دراسات أخرى أن زيادة التعبير لجين [39,38]يعمل على تفاقم موت خاليا بيتا . هناك أدلة كثيرة تدعم هذه الدراسات, فإذا تم غلق تعبير [40]النوع األول -له دور كبير في أحداث وتطور داء السكري IFN-γ. وفي دراسة أخرى لجين [41]فأن خطر األصابة بالداء سوف يقل IFN-γمن خالل غلق مستقبالت IFN-γجين النوع األول, وجد أن التعدد الشكلي لهذا -في المرضى األيرانيين المصابين بداء السكري UTR +5644عند الموقع النوع األول -ن داء السكريالموقع الجيني يمتلك ارتباطاً سلبياً مع الداء, ويعد هذا الموقع كمؤشر وقائي في المقاومة م النوع األول يكون له فعالية -في المصابين بداء السكري IFN-γ. لكن أظهرت دراسات أخرى أن زيادة تعبير أنتاج [42] لغرض تحطيم خاليا Macrophageعلى تنشيط الخاليا البلعمية IFN-γويعمل IL-2سمية لخاليا بيتا, كذلك حث أنتاج .[43]بيتا المصادر 1. American Diabetes Association. (2010). Diagnosis and classification of diabetes mellitus. Diabetes care.33 supplement.1.S062. 2. Cernea, S. and Herold, K. C. (2010). Monitoring of antigen-specific CD8 T cells in patients with type 1 diabetes treated with anti-CD3 monoclonal antibodies. Clin. Immunol.134: 121-129. 3. Betterle, C. and Zanette, F. (1984). Clinical and subclinical organ-specific autoimmune manifestations in type1 (insulin-dependent) diabetic patient and their fist-degree relatives. Diabetology. 26(6):431-436. 4. Atkinson, M. A. and Maclaren, N. K. (1994). The pathogenesis of insulin-dependent diabetes. Diabetes/metabolism reviews. 14(1):31-67. 5. American Diabetes Association. (2008). Diagnosis and classification of diabetes mellitus. Diabetes care.27 supplement. 1.S60. 6. Cooke, D. W. and Plotnick, L. (2008). Type 1 diabetes mellitus in pediatrics. Pediatr. Rev. 29:374-385. 7. Daneshamandi, S. ; Pourfathollah, A. ; Arababadi, M. K. ; Hassanshahi, G. ; Razaeian, M. and Asiabanha, M. (2008). Evaluation of relation between IL-4 and IFN- γ polymorphism and type 2 diabetes. J. Maz. Univ. Med. Sci. 18:35-41. 8. Curfs, J. ; Meis, J. F. and Korstanje, J. A. (1997). A primer on cytokines: Sources, receptors, effects, and inducers. Clini. Microbiol. Revi. 10(2):742-780. 9. Feghali, C. A. and Wright, M. (1997). Cytokines in acute and chronic inflammation. Frontiers in Biosci. J. 2(1):12-26. 10. Stalenhoef, J. E., Alisjahbana, B., Nelwan, E. J., van der Ven-Jongekrijg, J., Ottenhoff, T. H. ; van der Meer, J. W. ; Nelwan, R. H. ; Netea, M. G. and van Crevel, R. (2008). The role of interferon-gamma in the increased tuberculosis risk in type 2 diabetes mellitus. Eur. J. Clin. Microbiol. Infect Dis. 27:97-103. 11. Schroder, K. ; Hertzog, P. ; Ravasi, T. and Hume, D. (2004). Interferon-y: an overview of signals, mechanism and functions. J. Leukocyte Biol. 75:163-189. 12. Pauza, M. E. ; Neal, H. ; Hagenbaugh, A. ; Cheroutre, H. and Lo, D. (1999). T-cell production of an inducible interleukin-10 transgene provides limited protection from autoimmune diabetes. Diabetes.48:1948–1953. 13. Phillips, J. M. ; Parish, N. M. ; Drage, M. and Cooke, A. (2001). Cutting edge: interactions through the IL-10 receptor regulate autoimmune diabetes. J. Immunol.167:6087–6091. علوم الحياة | 394 2016) عام 1(العدد 29لمجلد ا مجلة إبن الهيثم للعلوم الصرفة و التطبيقية Ibn Al-Haitham J. for Pure & Appl. Sci. Vol. 29 (1) 2016 14. Sharif, S. ; Arreaza, G. A. ; Zucker, P. and Delovitch, T. L. (2002). Regulatory natural killer T cells protect against spontaneous and recurrent type 1 diabetes. Ann. NY Acad. Sci.958:77–88. 15. Noble, J. A. and Valdes, A. M. (2011). Genetics of the HLA Region in the prediction of Type I Diabetes . Curr. Diabetes Reports. 11(6):533-542. 16. Hardy, M. P. ; Owczarek, C. ; Jermiin, L. ; Ejdeback, M. and Hertzog, P. (2004). Characterization of the type1 interferon locus and identification of novel genes. J. Genomics. 84(2):331-345. 17. Cantor, M. J. ; Nickerson, P. and Bernstein, C. N. (2005). The role of cytokine gene polymorphisms in determining disease susceptibility and phenotype in inflammatory bowel disease. Am. J. Gastroenterol.100:1134–1142. 18. Duta-Cornescu, G. ; Simon-Gruita, A. ; Constantin, N. ; Stanciu, F. ; Dobre, M. ; Banica, D. ; Tuduce, R. ; Cristea, P. and Stoian,V. (2009). A comparative study of ARMS-PCR and RFLP-PCR as methods for rapid SNP identification. Biotechnological. 14(6):4845- 4850. 19. Elsaid, A. ; Helaly, M. A. ; Hatata, E. ; Fouda, E. Z. and Settin, A. (2012). TNF-a -308 and IFN-γ +874 gene polymorphisms in relation to susceptibility and severity of type 2 diabetes mellitus among Egyptian cases. J. Gen. Med. 9(3):173-177. 20. Clark, M. S. (1997). In: Plant Molecular Biology - A Laboratory Manual, pp 305-328, Springer-Verlog Berlin Heidelberg, New York. 21. Findan, I. ; Yuksel, S. ; Kalkanci, A. ; Imir, T. and Kustimus, S. (2005). Evaluation of cytokines in rats with type1 diabetes mellitus. Med. Microbiol. 100(8):883-887. 22. Khazai, M. H. ; Afshari, B. ; Khazai, J. ; Akbarzadeh, J. ; Khazai, L. ; Abbaszadegan, M. R. and Khadivizand, F. (2007). IL-4 and interferon gamma in recently diagnosed type I diabetes, a cases-control study. Atherosclerosis J. 3(1):1-7. 23. Jasem, M. A. (2013). Autoantibodies and cytokines levels in type1 diabetes patients. Iraqi Postgrad. Med. J. 12(3):351-358. 24. Kikodze, N. ; Pantsulaia, I. ; Rekhviashvili, K. ; Iobadze, M. and JAkhutashvili, N. (2014). Cytokines and T regulatory cell in the pathogenesis of type1 diabetes. Georgian Med. News J. 222:29-35. 25. Hussain, M. J. ; Peakman, M. and Gallat, H.(1996). Elevated serum levels of macrophage-derived cytokines precede and accompany the onset of IDDM. J. Diabetologia. 39:60-69. 26. Foulis, A. K. ; McGill, M. and Farquharson, M. A. (1991). Insulitis in type 1 (insulin- dependent) diabetes mellitus in man: Macrophages, lymphocytes, and interferon-γ containing cells. J. Pathol. 165: 97-103. 27. Karlson, A. E. ; Pavlovic, D. and Nielsen, K. (2000). Interferon-γ induce interleukin-1 converting enzyme expression in pancreatic islets by an interferon regulatory factor-1 dependent mechanism. J. Clini. Endocrinol. Metabolism. 85: 830-836. 28. Kukreja, A. and Maclaren, N. (1999). Autoimmunity and diabetes. J. Clinical. Endocrinol. Metabolism. 84: 4371-4378. 29. Seewaldt, S. ; Thomas, H. S. and Ejrnaes, M. (2000). Virus induced autoimmune diabetes. Most β-cells die through inflammatory cytokines and not perforin from autoreactive (anti-viral) cytotoxic T-lymphocytes. J. Diabetes. 49: 1801-1809. علوم الحياة | 395 2016) عام 1(العدد 29لمجلد ا مجلة إبن الهيثم للعلوم الصرفة و التطبيقية Ibn Al-Haitham J. for Pure & Appl. Sci. Vol. 29 (1) 2016 30. Amrani, A. ; Verdaguer, J. ; Thiessen, S. ; Bon, S. and Santamaria, P. (2000). IL-1α; IL- 1β and IFN-γ mark beta cells for Fas-dependent destruction by diabetogenic CD4+ T- lymphocytes. J. Clin. Invest. 105: 459-468. 31. Faust, A. ; Rothe, H. ; Schade, U. ; Lampeter, E. and Kolb, H. (1996). Primary non function of islet grafts in autoimmune diabetic nonobese diabetic mice is prevented by treatment with interleukin-4 and interleukin-10.J. Transplantation. 62: 648-652. 32. Rafinejed, A. ; Niknam, M. H. ; Amirzargar, A. A. ; Khosravi, F. and Larijani, B. (2004). Association of IFN-γ gene polymorphism with type1 diabetes in Iranian patients. Med. Sci. 1(2):130-132. 33. Javor, J. ; Ferencik, S. ; Bucova, M. ; Stuchlikova, M. ; Martinka, E. ; Barak, L. ; Strbova, L. ; Grosse-Wilde, H. and Bue, M. (2010). Polymorphisms in the genes encoding TGF-β1, TNF-α, and IL-6 Show association with Type 1 diabetes mellitus in the Slovak population. J. Immunol. 58:385-393. 34. Bazzaz, J. T. ; Amoli, M. M. ; Taheri, Z. ; Larijan, B. ; Pravica, V. and Hutchinson, I. V. (2014). TGF-β1 and IGF-I gene variation and genetic susceptibility in type 1 diabetes and its microangiopathic complications. J. Diabetes and Metabolic Disorders. 13(46):45-53. 35. Jahromi, M. ; Millward, A. and Demaine, A. (2000). A CA repeat polymorphism of the IFN gamma gene is associated with susceptibility to type 1 diabetes. J. Interferon Cytokine Res. 20:187–190. 36. Arababadi, M. K. ; Pourfathollah, A. ; Daneeshmandi, S. ; Hassanshi, G. ; Rezazadeh, E. ; Shamsizadeh, A. ; Rezaei, M. and Eigder, S. (2009). Evaluation of relation between IL-4 and IFN-γ polymorphism and type2 diabetes. Iranian J. 12(2):100-104. 37. Campbell, L. ; Wong, G. H. ; Schrader, J. W. and Harrison, L. C. (1985). Interferon- gamma enhances the expression of the major histocompatibility class I antigens on mouse pancreatic beta cells. J. Diabetes. 34:1205–1209. 38. Eizirik, D. L. and Mandrup-Poulsen, T. (2001). A choice of death: the signal- transduction of immune-mediated beta-cell apoptosis. J. Diabetol. 44:2115–2133. 39. Eizirik, D. L. ; Colli, M. L. and Ortis, F. (2009). The role of inflammation in insulitis and betacell loss in type 1 diabetes. Nat Rev Endocrinol. 5:219–226. 40. Emamaullee, J. A. ; Davis, J. ; Merani, S. ; Toso, C. ; Elliott J. F., et al. (2009). Inhibition of Th17 cells regulates autoimmune diabetes in NOD mice. J. Diabetes. 58: 1302–1311. 41. Cope, A. P. ; Liblau, R. S. ; Yang, X. D. ; Congia, M. ; Laudanna, C. ; Schreiber, R. D. ; Probert, L. ; Kollias, G. and Mcdevitt, H. O. (1997). Chronic tumor necrosis factor alters T cell responses by attenuating T cell receptor signaling. J. Exp. Med. 185:1573–1584. 42. Akalin, E. and Murphy, B.(2001). Gene polymorphisms and transplantation.J. Curr. Opin. Immunol. 13(5):572-6. 43. Siekiera, U. ; Jarosz-Chobot, P. and Janusz, J. (2002). Polymorphism of TNF-alpha (308 A/G), IL-10 (1082 A/G, 819 C/T 592 A/C), IL-6 (174 G/C), and IFN-gamma (874 A/T); genetically conditioned cytokine synthesis level in children with diabetes type 1. Endokrynol. Diabetol. Chor. Przemiany Materii Wieku Rozw. 8(1):29-34. علوم الحياة | 396 2016) عام 1(العدد 29لمجلد ا مجلة إبن الهيثم للعلوم الصرفة و التطبيقية Ibn Al-Haitham J. for Pure & Appl. Sci. Vol. 29 (1) 2016 في مصل العينات المدروسة IFN-γ): تركيز 1جدول ( الحركي الخلوي العينة المرضية الخطأ ±المتوسط القياسي بيكوغرام/مليلتر حدود الثقة العينة القياسية الخطأ ±المتوسط القياسي بيكوغرام/مليلتر حدود الثقة األحتمالية P أقل قيمة أعلى قيمة أقل قيمة أعلى قيمة IFN-γ0.179±1.5751.076 1.778 ±0.9210.178 0.4051.102 0.035* Mann-Whitney Uبأستعمال أختبار 0.05* = أختالف معنوي عند مستوى أحتمالية أقل من النوع -في عينة المصابين بداء السكري IFN-γ T/A +874للجين Aو T): تكرارات األليلين 2جدول ( األول والعينة القياسية الجين األليل عينة المصابين العدد (%) العينة القياسية العدد (%) (95%CI) OR P value IFN-γ T/A +874 T 36 )51.4(%22 )73.3(%0.39 )CI=0.15-0.97( *0.034 P.F 0.451 A 34 )48.6(%8 )26.7(% 2.60 )CI=1.03-6.53( E.F 0.299 OR =Odds ratio ،(النسبة الحرجة)CI =Confidence Intervals ،(فترة الثقة)P.F =Preventive faction ،(نسبة الجزء الوقائي) E.F =Etiological faction ) ،(أختالف معنوي عند مستوى أحتمال أقل من نسبة الجزء المسبب =*P<0.05 بأستعمال أختبار فشر و Fisher’s test. النوع األول والعينة -في عينات المصابين بداء السكري IFN-γ T/A +874): األنماط الوراثية للجين 3جدول ( القياسية الجين النمط الوراثي عينة المصابين العدد (%) العينة القياسية (%) العدد (95%CI) OR P value IFN-γ T/A +874 TT 8)22.9(% 9)60(% 0.20 )CI=0.06-0.70( 0.014* P.F 0.481 TA 20)57.1(%4)26.7(% 3.67 )CI=1.01-13.29( 0.047* E.F 0.416 AA 7)20(% 2)13.3(% 1.63 )CI=0.31-8.49( 0.45 E.F 0.770 OR =Odds ratio ،(النسبة الحرجة)CI =Confidence Intervals ،(فترة الثقة)P.F =Preventive faction ،(نسبة الجزء الوقائي) E.F =Etiological faction ) ،(أختالف معنوي عند مستوى أحتمال أقل من نسبة الجزء المسبب =*P<0.05 بأستعمال أختبار فشر و Fisher’s test علوم الحياة | 397 2016) عام 1(العدد 29لمجلد ا مجلة إبن الهيثم للعلوم الصرفة و التطبيقية Ibn Al-Haitham J. for Pure & Appl. Sci. Vol. 29 (1) 2016 ل ( یز 1ش اس تر ق اسي الخاص IFN-γ): المنحنى الق في مصل العينات المدروسة IFN-γ): متوسط تركيز 2شكل ( -المصابين بداء السكري ةفي عين Aو Tمبيناً فيه األليلين IFN-γ T/A +874): الترحيل الكهربائي لجين 3شكل ( النوع األول 0 0.5 1 1.5 2 MeanMean االصحاءالمصابين 0.921 يز رك لت ا C o n ce n tr a ti o n IFN-γ 1 575 وغرام/ملیلتر یز ب التر O.D Y^IFN-γ = 0.180 + 0.101 Xi R2=0.86 علوم الحياة | 398 2016) عام 1(العدد 29لمجلد ا مجلة إبن الهيثم للعلوم الصرفة و التطبيقية Ibn Al-Haitham J. for Pure & Appl. Sci. Vol. 29 (1) 2016 القياسية ةفي العين Aو Tمبيناً فيه األليلين IFN-γ T/A +874): الترحيل الكهربائي لجين 4شكل ( القياسية ةالنوع األول والعين -في عينة المصابين بداء السكري Aو T): تكرارات األليلين 5شكل ( ةالنوع األول والعين -في عينة المصابين بداء السكري IFN-γ T/A +874): تكرارات األنماط الوراثية للجين 6شكل ( القياسية 26.7 % 13.3 %60.0 % TT TA AA نماط الوراثية لجين األ العينة القياسية في IFN-γ 22.9% 57.1% 20.0% األنماط الوراثية للجين IFN-γ في عينة المصابين TT TA AA 73. 3% 26. 7% التكرار األليلي في العينة IFN-γلجين القياسية 51. 4% 48. 6% التكرار األليلي لجين IFN-γ في عينة المصابين علوم الحياة | 399 2016) عام 1(العدد 29لمجلد ا مجلة إبن الهيثم للعلوم الصرفة و التطبيقية Ibn Al-Haitham J. for Pure & Appl. Sci. Vol. 29 (1) 2016 IFN-γ T/A +874 Gene Polymorphism in Type 1 Diabetes Mellitus of Iraqi Children Ihsan A. Hussein Hazima M. AL-Abassi Anwar A. Nasser* Dept. of Biology, College of Education for Pure Science (Ibn - Al-Haithim), University of Baghdad Received in :1November 2015 Accepted in :15 December 2015 Abstract This study included 50 blood samples collected from children with mean age 8-12 years. Thirty five blood samples were collected from children with Type 1 Diabetes Mellitus (T1D) with mean age 9.4±0.34 years, and 15 blood samples collected from healthy children as a control sample with mean age 10.9±0.38 years. Immunogenetic study was done on collected blood samples. Concentrations of IFN-γ were estimated from T1D patient and control samples by using Elisa instrument. The concentration of this interferon was 1.575 pg/ml in T1D patient sample in comparison with 0.921 pg/ml in control sample. Significant differences of this interferon concentration were found between T1D patient and control samples when Mann-Whitney U test was used. Gene polymorphism of IFN-γ T/A +874 gene was studied by using Amplification refractory mutation system (ARMS-PCR) technique. The results of gel electrophoresis for IFN-γ T/A +874 gene revealed the presence of two alleles, A and T and three genotypes TT, TA and AA. The percentage frequency of T allele was higher from the A allele in T1D patient sample, whereas the percentage frequency of T allele was higher from A allele in control sample. The frequencies of A allele in T1D patient sample was significantly different with the same allele in control sample when Fisher’s test was used. The odds ratio (OR) and confidence Intervals (CI) values showed that the A allele was etiological faction (EF) and correlated with the disease, whereas the T allele was significantly different in control sample in comparison with T1D patient sample when Fisher’s test was used and become as preventive faction (PF). The results of ARMS-PCR technique for the IFN-γ T/A +874 gene were analyzed by using Hardy-Weinberg equilibrium. The TT genotype percentage in control sample was higher in comparison with the T1D patient sample and significant difference was found by using Fisher’s test. The TT genotype revealed as preventive faction from the disease, whereas the TA genotype percentage was significantly different in T1D patient sample in comparison with control sample. The TA genotype also revealed as etiological faction and correlated with the disease. The percentage of AA genotype in T1D patient sample was higher in comparison with control sample with no significant differences and this genotype revealed as etiological faction and correlated with the disease. Keywords: Interferon-gamma, Type 1 Diabetes Mellitus (), IFN-γ T/A +874, T1D *= This work is a part of Ph.D thesis for the third researcher.