2011) 2( 24مجلة ابن الهیثم للعلوم الصرفة والتطبیقیة المجلد و Bidens tripartita دراسة التاثیر السمي لمستخلصات نبات القنب Ceylon cinnamon و قلف نبات القرفة Panex ginseng الجینسینج الخام في الخط السرطاني لخالیا Citrullus colocynthis ونبات الحنظل غدة الثدي الفاري النعیمي شاكر عدنان حنان بغداد جامعة، العلیا للدراسات االحیائیھ التقنیات و الوراثیة الھندسة معھد 2010، كانون االول، 20:استلم البحث في 2011، نیسان، 18: قبل البحث في الخالصة و الحنظــل بتراكیــز مختلفــة ،وقلــف القرفــة ،و الجینسـینج ، درس التـاثیر الســمي للمستخلصــات النباتیــة لنبــات القنــب ــــایكروغرام 1000و500و250و125 ـــــاري /مـ ــــدي الفـ ـــــدة الثـ ـــرطاني لغـ ــــا الســ ُحَضــــــرتاذ . ملیلتــــــر علـــــى خــــــط الخالیــ رقـم وووجـد ان المستخلصـات ذ ةالمستخلصات بطریقة االستخالص المائي الحار ، و تـم الكشـف عـن مكونـاتهم الكیمیائیـ ســاعة و كانـــت الســمیة واضـــحة ) 72و 48و 24(وتـــم تعــریض المستخلصــات بـــثالث مــدد . هیــدروجیني حامضــي قلـف نبــات القرفـة افضــل فعالیـة ســمیة للخالیــا للمستخلصـات النباتیــة اعتمـادا علــى الوقـت و الجرعــة و كـان لمســتخلص و اخیـرا مسـتخلص ، % 74.39و الحنظـل ،% 86.79و یلیـه مسـتخلص نبـات القنـب ، % 87.33السـرطانیة بنسـبة .على التوالي % 70.71نبات الجینسینج .السرطان،الحنظل ،القرفة ،الجینسینج ، نبات القنب،المستخلص -:الكلمات المفتاحیة ة المقدم الخطیــرة والمهلكـة التـي تتحـدى االنســانیة فـي العصـر الحــدیث ةتعـد االمـراض السـرطانیة احــدى المشـكالت الصـحی فهي تنتشر بشكل كبیر فـي الجسـم لتكـون اهـم اسـباب الوفیـات فـي العـالم ، اذ تـأتي فـي المرتبـة الثانیـة بعـد امـراض القلـب وزارة ( 2000-1999بــین مــدةحالــة لل10888العــراق الــى اكثـر مــن والشـرایین ، وصــلت نســبة االصــابة بالسـرطان فــي وارتفعــت النسـبة فـي الســنوات الالحقـة ،واصــبح بمثابـة الشــبح الـذي یثیــر ) مركـز تســجیل السـرطان فــي العـراق –الصـحة حمیـدة فـي علـى جمیـع انـواع االورام الخبیثـة وال) cancer(ویطلـق مصـطلح . الرعـب بـین الكثیـر مـن النـاس ویهـدد حیـاتهم ].1[یعني التغیرا التي تشترك في نشوء كل انواع االورام الخبیثة carcinogenesisحین ان مصطلح سـرطان الثـدي فـي مقدمـة االمــراض السـرطانیة التـي تصـیب االنـاث فــي جمیـع االعمـار ویـزداد خطـر االصــابة دو یعـ سنة فما فوق مع اتجاه عام في الوقت الحاضر نحو زیادة االصابة به في المجامیع صغیرة العمـر 50بالمرض في عمر sp(او غیـر وراثیـا inherited formان سـرطان الثـدي امـا ان یكـون وراثیـا . سـنة 40تحت سن الـ oradic form ( ان الشــكل المـوروث مـن المــرض سـببه جـین مكتشــف حـدیثاً یسـمى جــین ] . 2[ویظهـر بالصـدفة نتیجــة السـباب مختلفـة BRC A1 لهـذا الجـین لـه عالقـة بسـرطان فضـًال عـنوهنـاك جـین اخـر . 17ویقـع علـى الـذراع الطویـل للكروموسـوم رقـم والشكل غیر الوراثي متعلق بعوامل هرمونیة او فیروسیة ]. 3[ 13وجود على الكروموسوم رقم م BRC A2 الثدي هو 2011) 2( 24مجلة ابن الهیثم للعلوم الصرفة والتطبیقیة المجلد وتنتقــل . ]5[لتعـرض لألشـعاع مثـل ایـة ئاو عوامـل فیزیا] 4[او عوامـل بیئیـة اوالـنمط الحیـاتي والتغـذوي او عوامـل مرضـیة ].6[االورام التي تصیب خالیا الثدي الى العقد اللمفاویة االبطیة والرئة والكبد و الدماغ و العظام وصـار البـاحثون یعـدون العـدة عـن اسـباب الـداء وعالجـه والوقایـة منـه فـاتحین بـذلك عصـراً جدیـداً یبشـر بحـدوث تغیــر ي غمــوض الحیـاة نفســها ، وفــي اسـرار الخلیــة البشــریة یكمــن فالسـرطان مــدفون فــ، جـذري فــي مســیرة عـالج هــذا الــداء المفتاح فیها الذي یعتقد العلم انه سیحل لغز السرطان و اتجهـت االبحـاث العلمیـة الحدیثـة الـى مسـلك جدیـد یختلـف عـن لعـالج نــوع االتجـاه السـابق فـي العـالج الكیمیــائي للسـرطان الـذي اعتمـد فــي االسـاس علـى انتخـاب مركــب كیمیـائي مـا فهي تدمر الخالیا الطبیعیة الـى نفسه سرطاني معین ولسوء الحظ فأن غالبیة هذه المركبات لها عیب العالج االشعاعي ویمیل عالج السرطان حدیثاً نحو الطبیعة االم التي اتحفنا بها الخالق عز وجل وبما وهبنـا ، جانب الخالیا السرطانیة على الكثیر من المواد الكیمیائیة التي تؤلف مجموعهـا كمـا هـائالً مـن االسـرار التـي من نباتات واعشاب طبیعیة حاویة ) القنـب و القرفـة و الجینسـینج والحنظـل ( مستخلصـات مائیـة حـارة لنباتـات عملت ال نعرف عنها سوى القلیل لذا است ةمـن شـأنها ان تـؤدي الـى تثبـیط قـدرة الخلیـة یـداذ ان لهذه المركبات الیات عد، الختبار سمیتها على الخالیا السرطانیة ] .7[السرطانیة على النمو او االنتشار او القتل المواد وطرائق العمل ).و القرفة والحنظل ،و الجینسینج ،القنب( تحضیر المستخلصات المائیة الخام لنباتات * -:على النحو االتي ] 8[المستخلص المائي الخام حضر ملیلتـرمن المـاء المقطـر اغلقـت 250لكل من مساحیق النباتات في دوارق حجمیة واضیف لكل منها غرام 50وضع . طة مـازج مغناطیسـي اطة فلینة ووضعت على سخان صفیحي مغناطیسي وتـرك لیمتـزج جیـدا بوسـافتحات الدوارق بوس ). 1(م ورق الترشـیح واتمـان رقـم بعـدها رشـح المحلـول بأسـتعمال الشـاش الطبـي اوالُ ثـ.درجة مئویة 45وبدرجة حرارة م 40لحین الحصول على راشح عدیم اللـون جفـف الراشـح بأسـتعمال جهـاز المبخـر الـدوار وعلـى درجـة حـرارة ال تتعـدى اعیــدت الخطــوات التالیــة لكــل مــن المستخلصــات المــذكورة اعــاله لحــین الحصــول علــى راشــح مجفــف للمستخلصـــات . .غرام من مساحیق النباتات 50ت الخام الناتجة من اعاله واستخرجت اوزان المستخلصا .تيیأامك] 9[تم الكشف وفقاً لما جاء عن -: تحضیر الكشوفات الكیمیائیة للمستخلصات الخام* -: (Glycosides)الكشف عن الكالیكوسیدات -1 مـدة النبـات ثـم تـرك فـي حمـام مـائي مغلـي المستخلص المائي لمسحوق و مزج جزءان متساویان من كاشف فهلنك . . بظهور راسب احمرالكالیكوسیدات دقائق واستدل على إیجابیة الفحص من خالل وجود 10 یؤكد ظهـور راسـب اذ،من كاشف بندكت لترمل 5من المستخلص المائي إلى لترمل 1 من هذه النتیجة أضیف ثبتللت . . لكالیكوسیدات احمر على وجود ا مـاء مقطـر رشـح لتـرمل 50 م مـن المسـحوق النبـاتي فـي راغـ 10غلیـت -:( Tannins)التانینـات ف عن الكش -2 خـالت الرصـاص لالســتدالل % 1وتـرك الراشـح یبـرد، ثـم أضـیف ) Ederol No.2 ( ورقـة الترشـیح عمالالمحلـول باسـت .ات بظهور راسب هالمي القوام نعلى وجود التانی 2011) 2( 24الصرفة والتطبیقیة المجلدمجلة ابن الهیثم للعلوم مـاء مقطـر رشـح لترمل 50 م من المسحوق النباتي في راغ 10 غلیت -: (Phenols)الكشف عن الفینوالت - 3 یـدل ظهـور اذكلوریـد الحدیـدیك %1وتـرك الراشـح یبـرد، ثـم أضـیف ) Ederol No.2 ( ورقـة الترشـیح عمالالمحلـول باسـت . اللون األخضر المزرق على وجود الفینوالت Saponins)( الكشف عن الصابونینات -4 :تم الكشف بطریقتین A- ات بظهـور رغـوة كثیفـة نرج المحلول المائي لمسحوق النباتات بشدة فـي أنبوبـة اختبـار واسـتدل علـى وجـود الصـابونی .طویلة مدةتبقى B- شـیر یمـن محلـول كلوریـد الزئبقیـك لتـرمل) 3 - 1(من المستخلص المائي لمسحوق النباتات إلـى لترمل 5 اضیف .بیض إلى إیجابیة الفحصاالراسب الظهور -: (Resins)الكشف عن الراتنجات - 5 م مـن المســحوق النبـاتي وبعــد ان تـرك فــي حمــام راغــ 5 إلـى % 95 مـن الكحــول االثیلـي بتركیــز لتــرمل 50 اضـیف مـاء مقطـر مسـتحمض بحـامض لتـرمل 10 ثـم اضـیف للراشـح (Ederol No.2 )مائي یغلي مـدة دقیقتـین رشـح بورقـة .هور عكارة ظب ةالهیدروكلوریك و یستدل على وجود المواد الراتنجی -:(Alkaloids)الكشف عن القلویدات -6 ثـم مـن حـامض الهیـدروكلوریك% 4 ماء مقطـر مسـتحمض لترمل 50 غرام من المسحوق النباتي مع 10 غلي Watch )من الراشح في زجاجـة سـاعة لترمل 0.5 بعد تبریده واختبر (Ederol No.2 )رشح المحلول بورقة ترشیح glass) كل على انفراد تیةمع كل من الكواشف اال : .ب بني یشیر إلى وجود القلویدات ظهور راس: نركاشف واك . ظهور راسب ابیض یشیر إلى وجود القلویدات: كاشف مایر . ظهور راسب اصفر یشیر الى وجود القلویدات: حامض البكریك . ظهور راسب برتقالي یشیر الى وجود القلویدات: كاشف دراكندروف -: (Coumarins)الكشف عن الكومارینات -7 غطیـت فوهـة األنبوبـة بورقـة ترشـیح مرطبـة ،ذیبت كمیة قلیلة من المستخلص النباتي في الكحـول فـي أنبوبـة اختبـار المخفـف ووضـعت فـي حمـام مـائي مغلـي لبضـع دقـائق ، ثـم عرضـت الورقــة (NaOH )بمحلـول هیدروكسـید الصـودیوم مخضـر بـراق –ان ظهـور لـون اصـفر مترنـانو 336بطـول مـوجي ( U.V )لالشـعة فـوق البنفسـجیة باسـتخدام جهـاز .ینر داللة على وجود الكوما -: (Flavones)فونات الكشف عن الفال -8 ثـم % 95 مـن الكحـول االثیلـي بتركیـز لتـرمل 5 م مـن المسـحوق النبـاتي فـي راغ 10 بإذابة ) A(حضر المحلول . (Ederol No.2 )رشح المحلول بورقة ترشیح وعنــد مـزج كمیــات متسـاویة مــن كــال %50مـن الكحــول االثیلــي بتركیـز لتــرمل 10 بإضـافة ) B(المحلــول حضـر .المحلولین یدل ظهور اللون األصفر على وجود الفالفونات  ة خطـوط الخالیـا الســرطانیة لغـدة الثـدي الـفـأري تهیـأ)AMN-3( م هـذا الخـط مــن المركـز العراقـي لبحــوث سـلَ ت الخطوات الخاصة بالزرع النسیجي تحـت ظـروف معقمـة اجریتالجامعة المستنصریة \السرطان والوراثة الطبیة .تي یأاموك] 10[ 2011) 2( 24مجلة ابن الهیثم للعلوم الصرفة والتطبیقیة المجلد PBSمـل 370لتـر فرسـین و 10مـل تربسـین مـع 20بأضـافة ( فرسـین المحضـر/ مل مـن محلـول التربسـین 2اضیف سـم 50الـى صـفیحة الـزرع النسـیجي حجـم . مئویـة اتدرجـ 4مزجت المحالیل اعاله في ظروف معقمة وحفظـت فـي .تيیأامالمعقم و المحضر ك PBSالحاوي على الخالیا بعد تفریغها من الوسط الزرعي و غسلها بمحلول 8gm NaCl +0.2gkCl + 0.15g Na2HPO4 +0.20gKH2PO4+1000ml distilled water ثـم حركـت .م 4ثـم حفظـت بدرجـة pH 7.2دقیقـة و قـیس 15م مـدة 121عقمت المحالیل بالموصدة بدرجة حـرارة دقیقــة لتفكیـــك الخالیــا الملتصــقة و كــذلك خلخلـــة 15م مــدة 37الصــفیحة برفــق و حفظــت فــي حاضـــنة بدرجــة حــرارة .التصاقها بجدار الوعاء للحصول قدر االمكان على خالیا احادیة مفردة ــة حـــــوالي ــــاء الحـــــاوي علــــى الخالیـــــا المفككـــ ـــد 15اضــــیف الـــــى الوعـ ــــو جدیــ ــــط نمـ ـــل مـــــن وسـ ) RPMI-1640(مـ )sigma,USA (Ross well park memorial Institute RPMI-1640 with hepes buffer , L –glutamin 10.4 gr +Sodiumو المحضر Bicarbonate 4.4% + Pencillin o.5 ml +Streptomycin 0.5%ml+Bovine calf serum 10%. ثقـوب يثـم عقـم بمرشـح ذ/ اكمل الحجـم الـى لتـر باضـافة المـاء المقطـر مـزدوج التقطیـر . }مایكرون 0.22بقطر الوعاء جیـدا و بعـدها افرغـت محتویـات الوعـاء الحـاوي علـى الوسـط الغـذائي الجدیـد مـع الخالیـا الـى وعـاء أخـر ُحَركو .جدید بحیث یكون مستوى الوسط الزرعي مع الخالیا و تسمى هذا العملیة بالمزرعة الثانویة و ان الخالیـا ،د خلوهـا مـن اي تلـوث یكأیأ لتایام و تمت متابعة القناني یوم 3م مدة 37حضنت االوعیة بدرجة حرارة و عنـدما تصـبح الخالیـا ذا نمــو Inverted microscope طة المجهـر المقلـوب ابحالـة جیـدة و ذلـك لفحصـها بوســ .تكون بذلك الخالیا جاهزة لألستعمال over growthمن الخالیا عدیده جدید متمثل بتكوین طبقات Viable cell countعد الخالیا الحیة * والمحضــرة ) Trypan blue(لكـل نــوع مـن الخالیـا بأســتعمال صـبغة التریبـان الزرقــاء ] 10[عـدت الخالیـا الحیــة وفقـا .تي یأامك وحفـظ بدرجــة ، 1مللیلتـر محلـول هـانكس ثـم رشـح بـورق واتمـان رقـم 100مـن مسـحوق الصـبغة فـي غـرام 1اذیـب ( )بأستعمال محلول هانكس مباشرة 10: 1درجة مئویة الى حین االستعمال وحینها خفف بنسبة 4حرارة ملیلتـر مـن 0.2یـتم ذلـك بمـزج اذ تأخذ الخالیا الحیه الصبغة ببضع ثوان مما یجعلها سهلة التمییز عن الخالیـا المیتـه و ثـم تحسـب الخالیـا بأسـتعمال شـریحة ، المحضـر سـابقاً PBSملیلتـر مـن 1.6ملیلتر مـن الصـبغة مـع 0.2الخالیا و .العد التفریقي علـى نمـو الخطـوط الخلویــة ) القنـب و الجینســینج و الحنظـل والقرفـة ( اختبـار سـمیة المستخلصـات الخـام لنباتـات * -:السرطانیة بـدون اضـافة مصـل عجـل PRMIمـل وسـط 0.9(ملیلتـر مـن المـذیب 10غـم مـن المسـتخلص الخـام فـي 0.02اذیـب ) + SFM Dimethyl sulfoxide (DMSO) %0.001البقر ویسمى 2011) 2( 24مجلة ابن الهیثم للعلوم الصرفة والتطبیقیة المجلد ) 1000و500و 250و 125(تراكیـز وهـي 4مـایكرون وحضـرت منـه 0.22ثقـوب بقطـر يثم عقم بأستعمال مرشح ذ جمیـع التراكیــز المحضـرة مباشــرة بعـد اكمــال عملیـة التحضــیر عملتاســت. ملیلتــر وتحـت ظــروف معقمـة / مـایكروغرام ]. 12[و] 11[ م اضـیف لـــه فرسـین ثـ/ بمحلـول التربسـین 2سـم 25جهـز عـالق الخالیـا عـن طریـق معاملـة قنینـة الـزرع النســیجي حجـم وسـط( مایـأتيوالمحضـر ك Serum Free Media) SFM(ملیلتر من الوسط الزرعي الجدید الخالي من المصل 20 RPMI- 1640 ملیلتـر بعـد كـل 0.2ثـم مـزج عـالق الخالیـا جیـداً وتـم نقـل) ولكـن بـدون اضـافة مصـل عجـل البقـر بحیــث ، سـطح بأســتعمال ماصــة اوتوماتیكیـة دقیقــة القعــر الم يمزجـة جیــدة الــى حفـر طبــق معــایرة الـزرع النســیجي ذ 10(احتوت كل حفرة على عدد معلوم من الخالیا الحیة 5 x1 / طة امـن المیتـه بوسـ ةبعد ان تم عد الخالیـا الحیـ، حفرة سـاعة الـى حــین 18 – 12م مـدة تتـراوح بــین 37تـرك الطبـق فــي الحاضـنة بدرجـة حــرارة Trypan blue.صـبغة ملیلتـر مـن التراكیـز 0.2في الحفرة وبعدها تـم الـتخلص مـن الوسـط الزرعـي القـدیم فـي الحفـر وتـم اضـافة التصاق الخالیا مكـررات لكـل مـن السـیطرة ةكمـا تـم عمـل ثالثـ. مكـررات لكـل تركیـز 3المحضرة سابقاً لكل من المستخلصات وبواقع م فــي 37وحضــنت االطبــاق بدرجــة حــرارة ) خالیــا فقــط (والســیطرة الســالبة ) DMSOخالیــا مضــافاً الیهــا (الموجبـة اخـرج الطبـق مـن الحاضـنة واضـیف ، بعد مرور مدة التعریض المحددة للحضن CO2من غاز % 5حاضنة مزودة بـ بعــدها ، مــایكرولتر مـن محلــول صـبغة االحمــر المتعـادل واعیــد الطبـق ثانیــة الـى الحاضــنة لیحضـن ســاعتین 50الیـه ــبغة الزائـــدة PBSوغســـلت الخالیـــا بمحلــول اخــرج الطبـــق وازیلـــت محتویاتــه اذ ان ، المحضـــر ســـابقاً لحــین زوال الصـ مـایكرولیتر مـن محلـول داريء 50بعـد ذلـك اضـیف لكـل حفـرة .الخالیا الحیة تأخذ الصبغة اما الخالیا المیتة فال تأخذها د امـا المزرعـة الطبیعیـة فقــ) . محلـول اسـتخالص الصـبغة ( 1:1الفوسـفات الملحـي المحمـض باالیثـانول المطلـق بنسـبة نـانومتر ووجـد الــ 492قرأت النتائج بأستخذام جهاز االلیزا بطول موجي . انفسها استعملت المستخلصات االربعه الخام Cytotoxic Concentration 10[وفقاً لما جاء في. [ یز المختلفـة مـن تـاثیرالتراك ةكمـا تـم تحلیـل البیانـات اعتمـادا علـى التصـمیم العشـوائي الكامـل لدراسـ -:التحلیل االحصائي و نفـذ التحلیـل باسـتعمال % 5و بمسـتوى احتمـال T-testالمستخلصات و جرى مقارنة المتوسطات باسـتعمال اختبـار . ] 13[البرنامج االحصائي النتائج و المناقشة % 3,5، %6,2والحنظـل نسـبة الـى اوزانهـا الجافـة ،و القرفـة ،و الجینسـینج ،بلغت نسبة المستخلص المـائي لنبـات القنـب علـى التـوالي وتلــون مسـتخلص نبــات القنـب بلــون بنـي مخضــر ، أمـا مســتخلص الجینسـینج والحنظــل % 4,1و% 8,3، باللون البني الغامق وهـذا یعـود الـى المركبـات الكیمیائیـة " ظهرا بلون اصفر مخضر ، بینما كان مستخلص القرفة متمیزا .)1(المتواجدة في كل مستخلص كما موضحة في الجدول رفة والتطبیقیة المجلد 20) 2( 24مجلة ابن الهیثم للعلوم الص 11 بعـد ان عومـل AMN-3كما تم معرفة التأثیر السمي للمستخلصات الخام في خط الخالیا السرطاني لغـدة الثـدي الفـأري ملیلتــر وخــالل ثـالث مــدد مــن التعــریض /مــایكروغرام 125،250،500،1000الخـط الســرطاني بأربعــة تراكیــز وهـي فكانت النتائج االحصائیة المستحصلة تشیر الى نبات القنب ونبات قلف. ساعة على التوالي 72، 24،48 سـاعة ،بینمـا مسـتخلص نبـات الجینسـینج فكـان 24ملیلتر خـالل / مایكروغرام 125القرفة بدء التركیز المعنوي المؤثر 500السـاعة امــا مســتخلص نبــات الحنظــل فكــان التركیــز 24ملیلتــر خــالل \ایكروغرام مــ 250التركیـز المعنــوي هــو ).2(ساعة كما مبین في الجدول 24ملیلتر هو التركیز المعنوي المؤثر خالل \مایكروغرام ولكن بتراكیز مختلفـة بالنسـبة لمسـتخلص نبـات هانفسالمستخلصات ل 0.05كما كانت هناك اختالفات معنویة بمستوى مستخلص نبات الجینسینج فلم تظهر الفروقات المعنویـة بـین التراكیـز الثالثـة ماعـدا فـرق الى القنب والحنظل اما بالنسبة مسـتخلص نبـات الـى بالنسـبة >0.05pملیلتـر وظهـر فـرق معنـوي /مـایكروغرام 1000في التراكیـز >p 0.05معنوي مـــایكروغرام 500و 1000ملیلتـــر والتوجـــد فـــروق معنویـــة بـــین التراكیـــز \مـــایكروغرام 250و125القرفـــة بـــین تراكیـــز احـدهما الحساسـة واالخـرى المقاومـة وتسـمى انفسـها ةلمعلخطـوط المسـتلوذلك لوجـود نـوعین مـن الخالیـا العائـدة . ملیلتر/ . Biphasic curveهذه الظاهرة ب بما یعود السبب في وجود النسبة القلیلة التـي ظهـرت فـي الخالیـا السـرطانیة المقاومـة للفعـل العالجـي هـو ان المـادة ور الـذي فحـص بشـكل شـامل ] 14[الوراثیة للخالیا السـرطانیة تكـون فـي العـادة غیـر طبیعیـه ومشـوهه وهـذا مااثبتـه الباحـث هـذا التشـوه ربمـا یـؤدي الـى حصـول طفـرات التـي قـد تســتحث السـرطاني وان Hep 2الكروموسـومات فـي خـط الخالیـا المستخلصات النباتیة دورا اساسیا في سمیة الخالیا السرطانیة خارج ؤدياذ ت.لفعل العالجات الكیمیائیه ةجینات مقاوم ها ومركبـات الفینــوالت المتعـددة ومــن ضــمن Cالحتوائهـا علــى فیتــامین ) 3(الجسـم الحــي كمـا موضــح فــي الجـدول رقــم فــي تاثیرهـا علـى الخالیــا (Antioxidant) مركبـات الفالفونیـدات التـي تعمــل بوصـفها مركبـات مضــادة لالكسـدة عـن طریـق ایقــاف Hep-2فـي نمـو خالیـا الخـط السـرطاني اً شـدید اً تثبیطیـ اً إذ ان لهـذه المركبـات تـاثیر ]. 15[السـرطانیة BCL-2االلیة السرطانیة من خالل تثبیط فعالیة الجـین فيكذلك تؤثر هذه المركبات ]DNA ]16عملیة تضاعف ال ونتیجــة للخلــل الحاصــل فــي هــذاالجین تــدخل الخلیــة الســرطانیة فــي مرحلــة المــوت المبــرمج وذلــك لقابلیتهــا علــى كـــنس الجـذور الحـرة المتولـدة عنــد تحـول الخالیـا الطبیعیــة الـى خالیـا ســرطانیة الحتوائهـا علـى مجموعــة الهیدروكسـیل ومـن ثــم فضــال عـن نفاذیـة اغشــیة الخالیـا السـرطانیة تكــون متغیـرة نتیجــة ].17[توجـه الخلیـة للــدخول فـي مرحلـة المــوت المبـرمج و بشـكل عشــوائي ةاالمـر الـذي یسـهل دخـول المركبــات الـى داخـل الخلیـ، ةلتحـول الخالیـا الطبیعیـة الـى خالیـا ســرطانی یكـون هنالـك نظـام صـارم ومسـیطرعلیه لـدخول وخـروج المـواد فـي حـین ةالسـرطانی ةالخلیـ فـيغیر منتظم مما یؤثر سلبا فـي الخالیـا السـرطانیة بشـكل منبسـط و الجزیئـة ككـل DNAكمـایكون شـریطا ال] .18[الطبیعیة ةمن والى داخل الخلی غیـر مســتقرة بســبب تباعداالواصــر الهیدروجینیــه التـي تــربط شــریطا الــدنا االمــر الـذي یســهل عملیــة ارتبــاط المركبــات مرصوصــــا بشـــكل قــــوي و االواصــــر ةفــــي حـــین یكــــون دنـــا الخلیــــة الطبیعیـــ DNAالداخلـــة او الخارجــــة بسلســـلتي ال كما سجل التركیز السمي القاتل ] .19[الهیدروجینیه غیر متباعدة وهذا یعیق ارتباط المركبات المختلفة و التاثیر فیها 2011) 2( 24المجلد مجلة ابن الهیثم للعلوم الصرفة والتطبیقیة بعــد اسـتخراج النســبة المئویــة المتصاصـیة العینــة فــي CC50 Cytotoxic Concentrationلنصـف عــدد الخالیـا ). 1(والشكل رقم ) 4(الحفرة كما في الجدول رقم ســاعة مــن الخـط الخلــوى الســرطاني اذ تعــد72وهـذا التــاثیر الســمي كـان اكثــر وضــوحا وبدرجـة كبیــرة عنــد مــدة تعـریض Dose) الجرعة اوالتركیز مع الوقت الظاهرة االساسـیة فـي شـدة التـاثیر السـمي للمستخلصـات الخـام وتسـمى هـذه الظـاهرة and time dependant phenomena) ]20.[بـین تـاثیر المستخلصـات الخـام " ومـن الجـدیر بالـذكر ان هنـاك تباینـا والسـبب قـد یعـود الـى طبیعـة المركبـات الموجـودة فـي المسـخلص الخـام AMN-3بینها على الخط الخلوي السرطاني فیما قــي للعالقــة بــین تراكیــز المستخلصــات اذ ان الشــكل الحقی] 21[وتفاعلهـا مــع الطبیعــة االیضــیة للخــط الخلــوي السـرطاني الخــام واالعــداد الســـرطانیة هــي عالقــة طردیـــة ولیســت عكســیة اي ان شـــدة التــاثیر الســمي للمستخلصـــات الخــام تـــزداد معتمــدا AMN3بازدیـاد التراكیـز وهـذه النتیجـة تـدعم فكـرة التـاثیر السـمي للمستخلصـات الخـام فـي الخـط الخلـوي السـرطاني وبصـورة عامـة ان الخالیـا السـرطانیة تمتلـك خاصـیة مقاومـة متعـددة لالدویـة وهـذه ] .22[او التركیـز اساسـا علـى الجرعـة الخاصــیة تعــد مــن المعوقــات التــي تمنــع تــاثیر العالجـــات او االدویــة علــى الخالیــا الســرطانیة بشــكل عــام لــذلك یمكـــن دویـة فــي اثنـاء اعطــاء او تجریـب مركــب الـتخلص منهــا عـن طریــق معاملـة الخالیــا مـع معــدالت للمقاومـة المتعــددة لال ــائج المستحصـــلة كانــــت مطابقــــة لمااشـــار الیــــه ]. 23[مـــا ـــل ] 24[ولهــــذا ان النتــ ـــانوي مثـ ـــي ان مركبـــات االیــــض الثـ فـ الفالفونیـدات الموجـودة فـي المستخلصــات الخـام تمتلـك القـدرة علــى تحفیـز المناعـة الخلویـة و احــداث تـاثیر معـدل منــاعي Immunomodulatory Effect النـواع معینـة ةفضال عن التحفیز على انتاج االنترفیرون نوع كامـا و القـدرة التثبیطیـ و یســتنتج مــن الدراســـة ان للمستخلصــات المائیـــة الخــام لنبــات القنـــب و الجینســینج و القرفـــة و .مــن الخالیــا الســـرطانیة خـارج الجسـم الحـي اعتمـادا علـى التركیـز و AMN-3في نمو خالیا الخط الخلـوي السـرطاني اً واضح اً سمی اً الحنظل تاثیر . هم على المركبات الكیمیائیة التي لها اهمیة من الناحیة العالجیهئالوقت و احتوا المصادر 1.Al-Saleem,T.; Al Habboby , N. and Farman , N. A. (1973). Review Of Cancer Frequency in The Teaching hosp ital Baghdad Iraq . J . Faculty M ed. 15: 1-2. 2 . Brown, P.(1997).Breast Cancer: a lethal inheritance . New Scientist., 1891: 34-38. 3. National Cancer Inst itut e . National Inst itut es Of Health(1995).Breast Cancer and BRCA1.Gene.: Questions and Answers . Cancer Net:2-3. 4. Kelsey, J. L.(1983). Epidemiology of breast cancer in women In:Dorsi,C.J.and Wilson,R.E.(eds).Carcinoma of the breast :Diagnosis and Treatment USA:1-32. 5. Oncolink Team(1994). Risk Factors and breast cancer .University of Pennsy lvania . Cancer Center. 2011) 2( 24 للعلوم الصرفة والتطبیقیة المجلدمجلة ابن الهیثم 6. Noruz inia, M .; Coup ier, L. and Pujol, P. (2005). Is BRCA1 `/BRCA2- related breast 124.-: 123.23 Cercinogenesis Estrogen dependant . Cancer 7. M ori, T. ; Ohnishi, M . ; Komiy ama, M .; Tsutsui, A.; Yabushita, H. and Okada, H. (2002) Growth inhibitory effect of Paradicsom paprika in cancer Cell Lines . Oncology Reports , 9:807-810. 8. Harborn, J. B.; M abray ,T.j . and mabray, H. (1975) p hy siology and function of flavonoids. Academic press ,New York, 970 ت) .2005( حنان عدنان شاكر،النعیمي . 9 تخلصا الموجبة ةعلى نمو البكتیریا المرضی ةالنباتی تقویم فعالیة بعض المس الت التھاب البلعوم و اللوزتین الھ .الصبغھ المعزولھ من حا ةوالتقان ةالوراثی ةماجستیرمقدمة الى معھد الھندسرس علیا ةاالحیائی . جامعة بغداد /للدراسات ال 10. Freshney , R. I. (2000). Culture of animal cells : A manual for basic technique (4 th ed). Wiley-_liss, A John Wiley and Sons,Inc. Publication, New York .566. 11. Abdul-M ajeed, M . R. (2000) .induction and characterizatian of su.99 p lasmacy cell line and its effect on mice immune resp onse Ph.D thesis , College of Science .Nahr ain University . 12. M ahony , D. E.; Gilliatt , E.; Dawson, S.; Stockdale, E. and lee,S. H. S. (1989).Vero cell assay for rapid detection of Clostridium perfringins enterotoxin App l. Environ 2143.-;214155.M icrobiol ., 13-Sas,Inst itut e,Inc.(2000)Users Guide,Version6.12Gary,NC.USA. ا) . 2004.( امال محمد ،علي .14 رسالة ماجستیر ؛ HEP_2سرطان الحنجرة دراسة وراثیة خلویة ومناعیة لخط خالی جامعة بغداد \كلیة العلوم 15. Lopez_lazaro, M . (2002).flavonoids as anticancer agents;structure – activity relationship st udy .Curr .M ed .Chem ., 2: 691-714. 16. Elangovan ,V.; Ramamorthy , N.; Balasubrambia, S.; Sekar ,N. and Govindsany , (1994). Studies on the antiprolifrative effect of some naturally occurring bioflavonoidal comp ounds against human carcinoma of lary nx and sarcoma-180 cell Lines . Indian J. Pharm ., 26:266- 269 17 . Pellech ia ,M . and reed ,J.C.(2004).Inhidition of anti _ap optotic Bcl-2 family p roteins dy cancer chemo prevention and chemo therap y . Curr . Pharm . Res ., 10 :1387-1398. 18 .Gratton , J. P.; Lin , M . I. ; y u, J.; Weiss , E. D.; Jiang, Z. L. ;Fairchild, T. A.; Iwakiri,Y.; Groszmann, R., Clafley , K.P.; Cheng. Y.C. and Sessa,W. C.(2003). Selective inhibition of Tumor microvascular p remeability by cavtratin blocks t umor p rogression in mice . cancer cell. 4 :1-39. 2011) 2( 24لمجلدمجلة ابن الهیثم للعلوم الصرفة والتطبیقیة ا 19. Belijanski, M . (2002) .the anti cancer agent PB_ 100 Selectivity active M alignant cell inhibits M ultip licat.o of sixteen malignant cell lines , even M ultidrug 235. -:22423resistant.Genet.M ol.Biol. 20. Huang , S. T. ; Yang, R.C ; Chen , M .Y. and Pang, J. H. (2004). Phy llanthus Urinaria induces The Fas Receptor/ Ligand Exp ression and Ceramide M ediated Ap optosis in Hl-60 Cells .Lif e Sci, 75:339-351 . 21. Shoieb, A. M .; Elgayy aur, M .; Dudrick, P.; Bell, E. and Titnol ,P. K.(2003) Inhibition of Growth and induction of Ap optosis in Cancer Cell Lines by Thimoquinol .Int.Oncology 22:107-113. 22. Lupi, M .; M atera, G.; Bbbrandurdi , D.; Incalci, M . and Ubezio , P. (2004) Cy tost atic and Cytotoxic effects of T op otecan Decoded by a Novel M athematical Simulation approach .Cancer Res., 64:2825-2832- 23. Coker, H.A; Tiffin , N.; Pritchard-Jones, K.; Pinkerton, C. R. and Kelland, L. R. (2001) In vitro Prevntion of the Emergency of M ultidrug Resistance in Pediatric Rhabdomy – Osarcoma Cell lin e Clin- Cancer Res., 7:3193- 3198. 24. Chian g , L.; Ch ian g , W.; Chan g , M . and lin, C. (2003) In vitro Cy totoxic, antiviral and Immunodulatory effect of Plantago magor and plantago . Am.J. Chin Med., 29:245-257. ات نبات الفنب و الجینسینج و القرفة و الحنظلالكشف الكیمیائي لبعض المكونات االساسیة لمستخلص) 1(جدول مستخلص نبات مستخلص نبات القنب المواد الفعالة الجینسینج مستخلص نبات قلف القرفة مستخلص نبات الحنظل - + - + + الراتنجات + + + + التانینات - + - + الكالیكوسیدات + + - + القلویدات - - -+ + الصابونینات رینات - + -+ - الكوما + + + + الفینوالت + + + + الفالفونات ي روجین 6.9 6.8 6.9 6.5 الرقم الهید قلیلة بكمیة الفعالة المادة وجود - +، الفعالة المادة وجود عدم_، الفعالة المادة وجود+ 2011) 2( 24للعلوم الصرفة والتطبیقیة المجلدمجلة ابن الهیثم .التركیزالمعنوي المؤثر للمستخلصات النباتیة ) 2(جدول .ملیلتر \بدء التركیز المعنوي المؤثرمایكروغرام متوسط عدد الخالیا السرطانیة المعاملة بالمستخلصات النباتیة الخام مقاسة بجھاز االلیزا عند طول موجي ) 3(جدول .نانومتر 492 0.05تشیر الى وجود اختالفات معنویة بمستوى ) ,a,b,c,d(الحروف المختلفة ویة المتصاصیة العینة في الحفرة النسبه المئ) 4(جدول ص نوع ة 24 المستخل ة 48 ساع ة 72 ساع ساع 125 125 125 .القنب نبات مستخلص 125 125 250 الجینسینج نبات مستخلص 125 125 125 القرفة نبات مستخلص ل نبات مستخلص 125 250 500 الحنظ التركیز ملیلتر/مایكروغرام متوسط عدد الخالیا السرطانیة المعاملة بمستخلص نبات القنب الخطأ القیاسي± متوسط عدد الخالیا السرطانیة المعاملة بمستخلص نبات الخطأ القیاسي± الجینسینج متوسط عدد الخالیا السرطانیة المعاملة ± بمستخلص نبات القرفة الخطأ القیاسي متوسط عدد الخالیا السرطانیة ± حنظل المعاملة بمستخلص نبات ال الخطأ القیاسي السیطرة 0.37±0.03 a 0.37±0.03 a 0.37 ±0.03 a 0.37±0.03 a 125 b 0.01 ±0.15 a0.003± 0.26 b 0.01 ± 0.14 ab0.04±0.28 250 bc 0.03±0.11 0.002±0.23 a 0.002 ± 0.057 c bc 0.006 ± 020 500 c 0.009 ± 0.06 a 0.006±0.22 c 0.001 ± 0.05 cd 0.01± 0.15 1000 c0.001 ± 0.049 b 0.03 ± 0.11 c 0.003 ± 0.047 d 0.001 ± 0.095 LSD 0.0744 0.0704 0.051 0.0905 قیمة المستخلص نوع 125 التركیز ملیلتر/مایكروغرام 250 التركیز ملیلتر/مایكروغرام 500التركیز ملیلتر/مایكروغرام 1000 التركیز ملیلتر/مایكروغرام %86.79 %83.82 %70.35 %59.29 القنب نبات مستخلص %70.71 %40.97 %36.92 %29.64 الجنیسینج نبات مستخلص %87.33 %86.52 %84.63 %61.18 القرفة نبات مستخلص %74.39 %58.76 %46.09 %18.86 الحنظل نبات مستخلص 2011) 2( 24مجلة ابن الهیثم للعلوم الصرفة والتطبیقیة المجلد االمتصاصیة ند ول ع ط 492 موجي نانومتر ملیلتر / مایكروغرام قاتل السمي التركیز) 1( الشكل Cytotoxic Concentration الخالیا عدد لنصف ال IBN AL- HAITHAM J. FO R PURE & APPL. SC I. VO L.24 ( 2) 2011 Study o f Cytotoxic Effect of Crude Extracts of Bidens Tripartita,Panex Ginseng,Ceylon Cinnamon and Citrullus Colocynthis on Mice Mammary Adenocarcinoma Cell line H. A. Sh. Al-Naemi Genetic Engineering and Biotechnology Institute for Post Graduated Studies, Unive rsity of Baghdad Received in: 20, December, 2010 Accepte d in: 18, April, 2011 Abstract The cytotoxic effect of different concentrations of Crude extracts of Bidens tripartita , Panex ginseng , Ceylon cinnamon and Citrullus colocynthis on mice mammary adenocarcinoma cell line were st udied . The concentration used were 125 , 250, 500, 1000 Microgram/militer . The exracts were p repared by using hot water method . The p reliminary chemical test s revealed acidic p H of all extracts. The time of exp osure used were 24, 48 and 72 hrs.T he results showed a clear toxic effect of all extracts depending on the time of exp osure and the dose . The Ceylon cinnamon had the highest effect on adenocarcinoma 87.33% , followed by Bidens tripartita 86.79%, Citrullus colocynthis 74.39% and the lowest effect was by Panex ginseng extract 70.71%. Key word: Extract,Bidens tripatita,Panex ginseng ,Ceylon cinnamon ,Citrullus colocynthis,Cancer.