الصرفة والتطبیقیة المجلد 2009) 4 (22مجلة ابن الھیثم للعلوم النفط الخام من بعض الفطریات المعزولة من التربةتأثیر واستغالل شیماء نغیمش مزعل ، شذى علي شفیق ة العلوم ، قسم علوم الحیاة الجامعة المستنصریة، كلی الخالصة ر الحالیة الدراسةاستهدفت Penicillium sp Aspergillus , Aspergillus الفطریاتأنواع بعض في النفط الخام تأثی niger , Aspergillus terreus, Aspergillus flavus fumigatusها قي التي تم عزل دور هذه ىالضوء علمن التربة لنل ة الكائنا یئي في الترب طریةعدادأا واضحا في النتائج تباینأظهرت ،ت في التوازن الب حیث كانت ، اذ ونسب انتشار العزالت الف % 32.47(بنسبة تردد Aspergillus fumigatus السیادة للفطر ز ، النفط الخام تأثیر وفیما یخص .) فلم توثر التراكی بقیة إماصلب للفطریات المعزولة على الوسط ال) معدل قطر المستعمرة( في النمو الخضري همن )%0.1,0.05(الواطئة تجربة تأثیرا أظهرتفقد )% 1,0.5(التراكیز نمو خالل مدة ال ر الفطر ، سمیا تدریجیا في ال Aspergillus fumigatusواظه ةحساسیة عالیة تجاه التراكیز طریات األربع ت المعزولة النتائج تباین أظهرت .األخرى من النفط الخام مقارنة بالف قدرة الفطریا والطاقة باختالف التركیز ومدة للكربون "ا وحید"اى استغالل النفط الخام على الوسط الملحي الصلب مصدرمن التربة عل .التعریض ونوع الفطر المقدمة ئة وتظهر جانب سلبي على جمالیاألراضي انسكاب المركبات النفطیة على نا المناظر ة تسبب مخاطر كبیرة على البی تحسی هوض بجمالیة المواقع ةالزراعی األراضين واستصالح لذلك اهتم علماء البیئة ب فتم استعمال ، التلوث منها ٕوازالة والن ارنة بالبكتریا بسبب قدرة ضمنها ومن المجهریة بصورة عامةاألحیاء مق على الخیوط الفطریةالفطریات في تحلیل النفط الخام نیة إلى عن" فضالسطح النفط طبقة غزیرة على النمو بشكل .[1]نموها تحت ظروف بیئیة قاسیة إمكا یرة و من الهیدروكاربونات المرتبطة مع مواد عضویة"ا معقد"االنفط الخام خلیط یعد یات صغ الف یحتوي على إذبكم أ یائیة المختلفة ربونات االلیفاتیة األخرىالمركبات الكیم االلكیناتAlkanes , المتضمنة االلكاناتAliphatic وتشكل الهیدروكا Alkenes وااللكایناتAlkynes ، الهیدروكاربونات الحلقیةCyclic ات االروماتیة عن" فضال Aromatic والهیدروكاربون للنفط .[2] وكمیات ضئیلة من المعادن واألوكسجیننتروجین لوجود مركبات غیر هیدروكاربونیه حاویة على عناصر الكبریت وا عدید من هیدروكاربونیة الفطریاتالخام تأثیرات ایجابیة وسلبیة في ال فقد ،وتعتمد سمیة النفط الخام على محتواه من المركبات ال خام من قـوج غالل النفط ال نمو واست ثیرات محفزة في تأ لباحثین Papulaspora sp بل الفطریاتـد عدد من ا Drechslera sp, Fusarium lateritium, ماالمعزولة من صحراء الكویت ، [3] املي الحرارة والملوحة بوجود عوالسی ا ] 4 [بالمقابل وجد ل تباین ائي أنواع ةثالثفي تحل ركیب الكیمی بین سالالت من الفطر من النفط الخام المختلفة الت Pseudallescheria boydii مجاري مخلفات ال خام ومن ة بالنفط ال تربة ملوث األجناس سیادة [5] واظهر . المعزولة من Aspergillus , Pencilliumتقاته " كأحیاء یلی القدرة اختبرت كما، مستغلة للنفط الخام ومش للفطریات المعزولة من تربة ةالتحل ة والناقصةإلىغنیة بالنفط الخام ومعظمها تعود ة والبازیدی الفطریات الكیسی الصرفة والتطبیقیة المجلد 2009) 4 (22مجلة ابن الھیثم للعلوم ة للحرارة وضحتأ و[6] حاویة أوساط على النمو في Thermophilic العدید من الدراسات قابلیة الفطریات المحب ة للكربون "امصدروي على الكلوكوز تحتأوساط مقارنة مع نموها في للكربون وحید "اعلى مركبات نفطیة كمصدر [8,7]. والطاق طرائق العمل .ةعزل وتشخیص الفطریات من الترب 1- تخافیف) 10(جمعت ع طریقة ال من تربة زراعیة في مدینة بغداد وبإتبا الفطریات في تعزل ،[9] عینات بصورة عشوائیة كار حاویة على الوسط الغذائي أطباق روزالمعقم أ طا الدكست األطباق وحضنت جمیع potato dextrose agar (PDA) البطا تصنیفیة م وباالعتماد على )2± 25( بدرجة ة لتردد [11,10] المفاتیح ال تم تشخیص العزالت الفطریة ثم حساب النسبة المئوی .Frequency% [12]كل فطر نفط الخام في النمو 2- .المعزولة للفطریات) معدل قطر المستعمرة ( القطري دراسة تأثیر ال %) 0.05 , 0.1 , 0.5, 1 (تيأمایك من النفط الخام یدةعد تراكیز استعملت حجم من الوسط الغذائي المعقم / حجم (PDA)نفط الخام في ، 13] [ باالعتماد على طریقة تراكیز مختلفة من ال ى بتري أطباقصب الوسط الغذائي الحاوي عل عة افة مزرـسم من ح) 0.7(وبعد تصلب الوسط الغذائي أخذت قطعة دائریة الشكل یبلغ قطرها سم9)(زجاجیة معقمة بقطر ثاقب فلین معقم ونقلت ) 5( بعمر stock culture أصلیة ثم احكم إلىأیام باستخدام قالالص بالشریط إغالقه وسط الطبق ة بدرجة حرارة األطباقوحضنت عملت ثالث مكررات لكل . حافة الطبق منب قطر المستعمرة م حست، م (28) في الحاضن . معاملة السیطرة عن" فضالمعاملة اراخت3- قدرة الفطریات على استغالل النفط الخامب م العزالت الفطریة لمعرفة مدى اختبرت ط الخا غالل النف ا على است میتها في للكربون "ا وحید"امصدرقدرته تن ة خالل والطاق لنفط الخام األمالحوسط الوسط بعد حذف وقد استخدم هذا ، [14] المعدني الصلب المحضر والحاوي على تراكیز مختلفة من ا اتبعت لذلك الطریقة السابقة الذكر في حساب قطر ، تراكیز من النفط الخام ٕواضافة) الكلوكوز ( منه الكربونمصدر معاملة السیطرة عن" فضالعملت ثالث مكررات لكل معاملة، ت لكل نوع من الفطریا . PDAالمستعمرات على وسط ة . م(0.05 ) الیة اقل من ـي وعند مستوى احتم للتحلیل اإلحصائANOVAاستعملت طریق SPSSباستخدام نظا Statistical Packages For Social Sciences . والمناقشةالنتائج , Rhizopus sp Aspergillus fumigatusاتـطریـ الففرتربة تواـن الـحص العینات مـائج فــ نتحتـأوض Aspergillus terreus , Aspergillus niger , Aspergillus flavus , وPenicillium sp ذ فیها وبنسب مختلفة ا فطر أعلىكانت تتفق نتائج ، ) 1( كما موضح في الجدول 32.47% بلغت النسبة المئویة إذ A. Fumigatus نسبة تردد لل ین نتائج العدید من الباحث انت اذ العزل هذه مع ابعة لجنس اأكثر ك ما تتمیز إلى ویعزى ذلك Aspergillusلفطریات انتشارا الت ابلیة أنواعبه مختلفة وق ة نمو في مدیات بیئیة بقیة أنزیمیة هذا الجنس من قابلی تمكنها من السیادة على ألجناس عالیة [15] ا لمعزولة من التربة وعلى الوسط ) 2(كما یبین الجدول . ب نتائج معاملة الفطریات ا ئي الصل عدم وجود اختالفات PDA الغذا كل من وومعاملة السیطرة ) % 0.05 , 0.1 ,0.5 ,1(معنویة بین التراكیز في الیوم الثاني ل الصرفة والتطبیقیة المجلد 2009) 4 (22مجلة ابن الھیثم للعلوم با لمعاملة Penicillium sp , A. terrues , A. flavus , A. nigerالفطریات مساو تقری بحیث كان معدل قطر المستعمرة ز عدا ما%0.0السیطرة بینما اظهر ) (P<0.05 عند مستوى "ا معنوی"ا اظهر اختالفاذ Penicillium spللفطر % 1 تركی طرة A.fumigatusالفطر عاملة السی تراكیز األربعة وم بع لم تظ، اختالفات معنویة بین ال یوم الرا هر اختالفات معنویة وفي ال اختالفات معنویة عند ) % (0.1, 0.5 , 1یة ـالـتراكیز العـالهرت ـأظنما ـ بی،عة ـتراكیز األربـد الـعن A. terruesبالنسبة للفطر ن ، A. flavus و Penicillium spللفطر ،)(P<0.05مستوى مستعمرة عند الفطری وتباینت معدالت قطر ال A.fumigatus و A. niger . االختالفات المعنویة بزیادة التركیز للفطر أظهرتوفي الیوم السادس Penicillium sp عند , 0.5 )عند التركیزینA. flavus وللفطر A. terruesللفطر % 0.5 عند التركیز "اكان االختالف معنوی بینما ،التراكیز العالیة تركیزین كانت ا A.fumigatusفقط وفیما یخص الفطر % (0.1 ولم تظهر أي % (0.1 ,1)الختالفات معنویة عند ال عض الفطریات المعزولة ،قد یعزى زیادة سمیة النفط الخام ، A. nigerاختالفات معنویة للفطر كیز في ب بزیادة الترا إلى ربونیة مع نسب مختلفة إذ یمثلالطبیعة الكیمیائیة للنفط الخام من الكبریت الالعضوي والماء خلیط معقد من المركبات الهیدروكا معا یكون له نا ذا ،واألمالح د تواجد كل هذه الموا قتص ، [2] سلبي في النمو تأثیر م التأثیر روال ی السمي والمثبط للنفط الخا تركیبه یما ونیة وال س وجود مركبات غیر هیدروكاربإلى كذلكقد یعودف على نوع ونسب المركبات الهیدروكاربونیة الداخلة في ثالثةالكبریت المتوافر یعد في تركیب هذه المركبات ال و .[16] فطري من وجوده مبید لنمو الفطریات وال یخلو أي "ا مثبط، اذ م كمصدرةقدر) 3(الجدول یظهر عزولة على استغالل النفط الخا ة على الوسط للكربون "ا وحید"ا جمیع الفطریات الم والطاق فطر قدرةالالملحي الصلب وتباینت هذه باختالف التركیز ومدة التعریض ونوع ال في Penicillium sp اظهر الفطر فقد، ركیزین الیوم الثاني بینما اظهر ) (P<0.05 عند مستوى احتمالیة % )1,0.5( اختالف معنوي عند الت ة بمعاملة السیطرة مقارن الف A. terreusالفطر ات إما، فقط %0.5تركیز في استغالل النفط الخام عند ال"ا معنوی"ااخت ،A.flavus بقیة الفطری A.fumigatus و A. niger عة بین التراكیز ا معنویفاتالخ اأظهرتفقد ةاألرب ت المعزول 0.0ومعاملة السیطرة لكل من الفطریا میة على الوسط الملحي الصلب مضاف% دس لم یظهر وفي الی، للكربون"امصدر الكلوكوز إلیه "ا التي تمثل الفطریات النا وم السا في حین A. terreus و Penicillium spلكل من الفطرین ) (P<0.05 عند مستوى "ا معنوی"ا اختالف %0.05التركیز كیز تركیز األربعكانت االختالفات معنویة عند الترا م إذ A.fumigatus للفطر % 0.1 في بقیة الفطریات المعزولة ما عدا ال ل على عملیة تكوین ا واضحاتأثیر %)1,0.5( التراكیز العالیة أظهرتكما ، ) (P<0.05 ند مستوىعیظهر أي اختالف معنوي واغ ـكوین االبـملیة تـ عرتـتأخ إذ A.fumigatus و Penicillium sp ، A.flavus االبواغ والسیما للفطریات اآلتیة sporogenesisة بمعاملة السإلى تجربة مقارن خالل [17,4,5] عدیدة تتفق هذه النتائج مع بحوث. یطرة الیوم العاشر من ال تحلیلیة للنفط الخام لقدرة ال هم حول ا ت مصدرأودراست ة وكان الجنس للكربون "ا مشتقاته من الفطریا و Aspergillus والطاق Penicillium المهمة في استغالل النفط الخام األجناس من . المصادر 1-Boonchan , S. ; Britz , M . L. and Staniey , G. A. ( 2000). Degradation and mineralization of high molecular weight polycyclic aromatic hydrocarbons by defined fungal – bacterial co cultures , Appli. Environ. M icrobiol . 66(3):1007-1019 2-Okolo , J. C. ; Amadi , E. N.and Odu , C. T . I. ( 2005) . Effects of soil treatments containing p oultry manure on crude oil degradation in a sandy loam soil . Applied ecology and environmental research 3(1) : 47-53. الصرفة والتطبیقیة المجلدمجلة ابن ا 2009) 4 (22لھیثم للعلوم 3-Badrudeen , A. M. ; Al- Saleh , E. and M ulder ,J. L .( 2005) . Growth and hydrocarbon degradation by three desert fungi under condition of simultaneous temperature and salt stress. International bio- deterioration and b iodegradation , 56 (4) : 197-205. 4- April, T.M . ; Abbott, S.P. ; Foght, J.M. and Currah, R. S. (1998) . Degradation of hydrocarbons in crude oil by the ascomycete Pseudallescheria boydii (M icroascaceae ) . Can . j . Microbiol. 44 (3) : 270-278. 5- Solarzanolemos , J. L. ; Rizzo, A.C. ; M illioli , V. S. : Soriono , A. U. (2000). Petroleum degradation by filamentous fungi. Applied Environ. M icrobiol. 44 (3) : 270-278. 6- Boldu , F. X. P. ; Kuhn , A. ; Luykx, D.M. ; Van, J. W. (2001). Isolation and characterization of fungi growing on volatile aromatic hydrocarbons as their sole carbon and energy source . Mycological research . 105 : 477-484. 7- Adekunle , A.A. , Oluyode , T. F. 2005. biodegradation of crude petroleum and petroleum products by fungi isolated from two oil seeds (melon and soy bean ) . J. Environ. Biol.26(1); 37-42 . 8-Ijah , U. J. And Ndana , M . 2004.Stimulated biodegradation of crude oil in soil amended with p eriwinkle shells . The environmentalist . 23 (3) : 249-254. 9 –Burnette, J. H . 1976. Fundementals of mycology . second edition , Edward Arnold , England . 673pp. 10- Samson , R. A. ; Hockstra, E. S. and Vanoorschot, C. A . N. 1984. Introduction of food borne fungi . second edition ,Inst itute of the Royal Netherlands Academy of arts and sciences.523 p p. 11-Robert,A.S.;Ellen, S.H.;and Connie, A.N. (1984). Introduction of food borne – fungi contamination . second edition , Drukker .J. Van Gestol and Zn.B.v.laren NH: 1-205. 12-Pitt , J. I. ; Hocking , A. D. and Glenn, D. R. 1983 . An improved medium for detection of Aspergillus flavus and Aspergillus parasiticus . J. Appl. Bacteriol. , 54 : 109-114. 13-Al-Rekabi , S. A. W. ;Ali , b. Z. ;Shafik, Sh. A. 2002.Effect and utilization of crude oil , gasoline and kerosene on the vegetative growth of Achlya conspicua and Saprolegnia diclina. the second conference and exhibition on biotechnology and genetic engineering 4 : 23-27. 14-Prenafeta-boldu, F.X. ; Kuhn, A. ; Luykx,D .M.A., Groenestlin, J.W. and debont , J.A.M.2001.Isolation and characterization of fungi growing on volatile aromatic hydrocarbons as their sole carbon and energy source .M ycological research.105(9): 477-484. 15-Karaoglu , S. A. ; Ulker , S. (2006). Isolation , identification and seasonal distribution of soilborne fungi in tea growing areas of lyidere- ikizdere vicinity (Rize – Turkey ) . j. of basic microbiol. 46(3): 208-218. 16- Panda , H. (2000). the complete technology book on pesticides , insecticides , fungicides and herbicides industrial research . New Delhi, India. 706pp. 17-Elshafie , A. ; Alkindi , A. ; Al-Busaidi , S. And Albahry ,S. N. ( 2007). Biodegradation of crude oil and N-alkanes by fungi isolated from Oman . M ar. pollut .bull. 54 (11): 1692- 1606. الصرفة والتطبیقیة المجلد 2009) 4 (22مجلة ابن الھیثم للعلوم لتردد )1(جدول لعزالت الفطریة من عینات (% frequency)النسبة المئویة لتربة ا ا %النسبة المئویة للتردد األجناس واألنواع Penicillium sp Aspergillus flavus Aspergillus niger Aspergillus terreus Aspergillus fumigatus 23.13 8.24 11.85 24.22 32.47 للفطریات المعزولة) معدل قطر المستعمرة(تأثیر النفط الخام في النمو الخضري :)2(جدول م األیا العزالت الفطریة كیز 6 4 2 الترا Penicillium sp 0.0 0.05 0.1 0.5 1.0 0.45±1.60 1.00±1.40 0.20±1.55 0.00±1.30 0.11±0.35* 0.25±3.05 0.10±2.35 0.15±1.75* 0.17±1.45* 0.11±1.40* 0.10±3.80 0.00±2.60 0.20±1.90* 0.11±1.85* 0.00±1.50* A. terreus 0.0 0.05 0.1 0.5 1.0 0.25±2.25 0.32±2.45 0.70±2.15 0.15±2.15 0.15±2.30 0.37±2.70 0.20±3.20 0.23±3.15 0.00±3.50 0.32±3.60 0.20±4.30 0.15±4.95 0.25±3.55 0.00±5.45* 0.20±4.75 A.flavus 0.0 0.05 0.1 0.5 1.0 0.10±2.55 0.25±2.75 0.20±2.10 0.10±3.00 0.20±4.10 0.26±4.30 0.20±3.10* 0.11±2.90* 0.00±3.00* 0.15±4.10 0.22±5.20 0.25±4.25 0.15±3.05* 0.00±3.30* 0.15±5.10 A.fumigatus 0.0 0.05 0.1 0.5 1.00 1.00±1.50 0.15±1.00* 0.00±0.90* 0.00±0.90* 0.16±0.80* 0.28±1.50 0.40±1.40 0.11±0.90 0.00±1.00* 0.00±0.90 0.17±1.70 0.25±2.10 0.22±1.20* 0.15±1.40 0.00±0.90* A. niger 0.0 0.05 0.1 0.5 1.00 0.25±3.25 0.55±3.55 0.00±2.95 0.23±3.10 0.00±3.00 0.25±5.55 0.10±3.80* 0.22±5.69 0.15±3.10* 0.00±4.90 0.00±8 0.00±8 0.00±8 0.00±8 0.00±8 ابي حس وسط ال قراءة تمثل ال االنحراف المعیاري±كل  معنوي عند مستوى احتمالیةP<0.05)( الصرفة والتطبیقیة المجلدمجلة ا 2009) 4 (22بن الھیثم للعلوم الل النفط الخام كمصدروحید للكربون والطاقة:)3(جدول على استغ لفطریات )النمو القطري( اختبار قدرة ا األیام العزالت الفطریة 6 4 2 التراكیز Penicillium sp 0.0 0.05 0.1 0.5 1.00 0.15 ± 1.35 0.17±1.20 0.15±1.10 0.11±1. 00* 0.0±1.00* 0.17±2.70 0.10±2.10* 0.15±2.10* 0.20±1.80* 0.0±1.80* 0.30±3.50 0.15±3.10* 0.23±2.80* 0.11±2.15* 0.00±2.25* A. terreus 0.0 0.05 0.1 0.5 1.00 1.00±1.80 0.77±1.90 0.70±1.50 0.11±1.20* 0.15±1.50 0.11±4.5 0.0±3.95* 0.10±4.05* 0.20±3.10* 0.35±3.75* 0.0±8.00 0.15±7.10 0.11±6.50* 0.26±5.25* 0.35±6.65* A.flavus 0.0 0.05 0.1 0.5 1.00 0.10±3.10 0.15±1.90* 0.00±1.95* 0.15±1.75* 0.20±1.70* 0.00±8.00 0.15±4.10* 0.11±2.80* 0.00±3.60* 0.50±4.20* 0.00±8.00 0.32±6.30* 0.15±6.20* 0.15±5.80* 0.00±6.10 A.fumigatus 0.0 0.05 0.1 0.5 1.00 0.20±1.20 0.00±0.90* 0.20±0.80* 0.11±0.80* 0.00±0.80* 0.20±2.1 0.15±1.2* 0.40±1.6 0.00±0.8* 0.00±0.8* 0.11±2.60 0.00±1.25* 0.28±2.25 0.00±0.90* 0.10±1.45* A. niger 0.0 0.05 0.1 0.5 1.00 0.28± 2.75 0.00±1.70* 0.11±1.65* 0.10±1.95* 0.15±1.80* 0.15±6.10 0.25±3.10* 0.00±2.90* 0.10±2.40* 0.10±3.00* 0.11±8.00 0.00±5.00* 0.00±4.55* 0.15±3.55* 0.11±4.20* ابي حس قراءة تمثل الوسط ال یاري±كل االنحراف المع یة * توى احتمال )(P<0.05 معنوي عند مس IBN AL- HAITHAM J. FOR PURE & APPL. S CI. VOL.22 (4) 2009 Effect and UtilIzation of Crude oil on Some of Fungi Isolated From Soil Sh. A. Shafiq , S. N. Mizil Department of Biology, College of sciences, University of AL-Mustansiriya Abstract The present study was conducted to reveal the effect of crude oil on some fungal sp ecies isolation from soil in order to evaluate the role of these fungi in environmental balance of soil . The results showed a variation in numbers and percentage of the fungal isolates Aspergillus fumigatus dominated over all isolates with a frequency of (32.47) . In respect of the effect of different concentrations of the crude oil, low concentrations (0.05, 0.1) % showed no effect on radial growth ( mean colony diameter) of the isolated fungi grown on solid media , whereas other concentrations (5.10)% showed gradual toxic effect on these fungi . The fungus Aspergillus fumigatus reveal higher sensitivity against all concentrations of the crude oil compared to others sp ecies , The results showed also variation of these fungi in utilization of the crude oil on solid mineral media used as a sole carbon and energy source with the different concentrations of the crude oil , exposing time and kind of species.